自身抗體檢測項目及臨床意義.docx

1、一、抗核抗體抗核抗體（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。ANA的性質(zhì)主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。ANA可以與不同來源的細胞核起反應(yīng)，無器官特異性和種屬特異性。ANA主要存在于血清中，也可存在于其他體液如滑膜液、胸水和尿液中。 ANA在SIE患者的滴度較高，但也出現(xiàn)在其他許多自身免疫病中，在許多研究報告中，都將檢出ANA作為自身免疫甚至自身免疫病存在的依據(jù)。這種現(xiàn)象的機制尚未明了，有待于進一步研究。（一）ANA的類型及意義 由于細胞核成分的復(fù)雜性，不同成分的抗原性也不同；因此就會有多種不同的ANA。 1

2、抗核蛋白抗體核蛋白抗原（DNP）由DNA和組蛋白組成。由于DNP抗原存在不溶性和可溶性兩個部分，可分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。不溶性DNP抗體通常不完全被DNA和組蛋白所吸收，它是形成狼瘡細胞的因子；可溶性抗原存在于各種關(guān)節(jié)炎病人的滑膜液中，其相應(yīng)抗體也出現(xiàn)于RA病人的滑膜液中。 2抗DNA抗體可以分為兩大類：抗天然DNA（nDNA）抗體，或稱抗雙鏈DNA（dsDNA）抗體；抗變性DNA抗體，或稱抗單鏈DNA（ssDNA）抗體?？筪sDNA抗體對SLE有較高的特異性，7090的活動期SLE病人該抗體陽性，效價較高，并與病情有關(guān)。抗ssDNA抗體可見于多種疾病中，特異性較差。 3抗ENA抗體可提取性核抗

3、原（ENA）多從動物的胸腺中提取。先將胸腺勻漿并破碎細胞，分離出細胞核；再經(jīng)鹽水或磷酸鹽緩沖液處理后，很容易從胞核中提取出來。ENA不含DNA，對核糖核酸酶敏感。近年來的研究表明，ENA可分為十幾種，現(xiàn)僅介紹幾種主要的ENA及其相應(yīng)抗體。 （1）抗PNP抗體：PNA即核糖核蛋白，對核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加熱561h變性。抗PNP抗體多見于混合性結(jié)締組織病。高效價的抗PNP抗體對混合性結(jié)締組織病有診斷意義，而低效價的抗PNP抗體可在SIE患者中發(fā)現(xiàn)。 （2）抗Sm抗體：該抗體在一名Smith姓的患者血中首次發(fā)現(xiàn)，便以其名字的前兩個字母命名。Sm抗原系非核酸性糖蛋白，對DNase及RNase均

4、不敏感，但經(jīng)碘酸鹽及胰蛋白酶處理后可被水解?？筍m抗體是SLE的特異性標志之一，但陽性率偏低，約為304；可能是SIE的一種回憶性抗體，故在非活動期亦可檢出。若將抗dsDNA和抗Sm抗體同時檢測，可提高SLE的診斷率。 （3）抗SS-A抗體：SS-A為干燥綜合征（SS）的A抗原，可從動物胸腺的胞漿中提取?？筍S-A抗體主要見于SS，但也可見于其他自身免疫病如SLE中。 （4）抗SS-B抗體：SS-B為SS的B抗原，亦可從動物胸腺或小鼠肝細胞漿中提取，可被胰蛋白酶、輕度加熱或改變?nèi)芤簆H而破壞。13的SLE及30的SS患者有抗SS-B抗體。 （5）抗組蛋白抗體（AHA）：組蛋白是一種堿性蛋白質(zhì)，

5、含有大量的賴氨酸及精氨酸。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)組蛋白抗原可分為5個亞單位：H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4?？菇M蛋白抗體及其抗亞單位抗體見于SLE及藥物誘發(fā)的LE。SLE病人血清中的抗組蛋白亞單位抗體檢出率順序為：抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A及抗H-4，以抗H-2B和抗H-1為主，并與SLE的活動性有關(guān)。（二）ANA的檢測方法 由于ANA的復(fù)雜性及多樣性，故測定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術(shù)等。 1免疫熒光法檢測血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質(zhì)，結(jié)果比較穩(wěn)定可靠

6、，在熒光顯微鏡下見到的細胞核有熒光著色為陽性反應(yīng)。如將患者血清先進行不同比例的稀釋，可以做大致的定量試驗，在1:80稀釋仍然雖陽性時，對SLE的診斷有較大的參考價值。在油鏡下觀察結(jié)果，可以將ANA陽性的熒光現(xiàn)象分成4種主要的熒光核型，核型的確定對臨床診斷有進一步的參考價值。周邊型表示抗DNA抗體存在；均質(zhì)型表示有抗DNP抗體；斑點（顆粒）型多為抗ENA抗體；核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現(xiàn)周邊型、勻質(zhì)型或混合型，斑點型多見于混合結(jié)締組織病，而硬皮病多為核仁型；周邊型對SLE有較高的特異性。近年有人用錐蟲或血鞭毛蟲（例如綠蠅短膜蟲試驗）作基質(zhì)測定抗dsDNA抗體，因為這些血寄生蟲的動基體

7、內(nèi)含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾；在陽性結(jié)果時，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優(yōu)點。另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來源方便，值得推廣。 2放射免疫法常用檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。Farr法的原理為用同位素標記DNA，被標記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結(jié)合，經(jīng)50硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結(jié)合活性，一般結(jié)合率大于20為陽性。過濾法是在分離結(jié)合物時用纖維素酯薄膜濾器（孔徑為0.45m）進行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結(jié)合的復(fù)合物被阻留在濾膜上。 3ELISA

8、臨床上主要是應(yīng)用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重復(fù)性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。目前已有試劑盒供應(yīng)。 4免疫印跡（immunoblotting）先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然將這些帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，最后用酸標抗體或放射性同位素標記抗體進行檢測和分析。由于該試驗不需純化的單個抗原，可在同一固相上作多項分析檢測，靈敏度高，特異性強。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。 另外，還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結(jié)合試驗等。 這些試驗要求的實驗條件比較低，

9、但敏感性也比較低。二、類風(fēng)濕因子類風(fēng)濕因子（RF）是抗變性IgG的自身抗體，主要為19S的IgM，也可見7S的IgG及IgA。它能與人或動物的變性IgG結(jié)合，而不與正常IgG發(fā)生凝集反應(yīng)。RF主要出現(xiàn)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，約7090的血清中和約60的滑漠液中可檢出IgG類RF，這很可能是自身IgG變性所引起的一種自身免疫應(yīng)答的表現(xiàn)。 IgG是感染等原因誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答中的主干抗體，這些抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合時會發(fā)生變性；此外，在炎癥等病理條件下滑漠或其他部位可能產(chǎn)生不正常的IgG；這些變性IgG就構(gòu)成自身抗原，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生各種抗IgG抗體?；ひ褐械腎gG類RF與變性IgG結(jié)合而形成中等大小的免

10、疫復(fù)合物，比血清中的IgM類RF更具有致病意義，因為這一類免疫復(fù)合物易于沉積在關(guān)節(jié)滑膜等部位，可激活補體，形成慢性漸進性免疫炎癥性損傷。 RF的檢測最初是用致敏綿羊紅細胞凝集試驗（Rose-Waaler法）進行檢測，目前最常采用IgG吸附的膠乳顆粒凝集試驗；但此法的靈敏度和特異性均不高，而且只能檢出血清中的IgM類RF。IgG類和IgA類RF則需要用RIA或ELISA等方法檢測。 RF在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中的檢出率很高，RF陽性支持早期RA的傾向性診斷，如對年輕女性應(yīng)進行RA和風(fēng)濕熱間的鑒別；而對非活動期RA的診斷，需參考病史。但RF也象ANA一樣，并不是RA獨有的特異性抗體。在SLE病人均有

11、50RF陽性，在其他結(jié)締組織病如SS、硬皮病、慢性活動性肝炎及老年人中均可有不同程度的陽性率。三、其他自身抗體（一）抗甲狀腺球蛋白及微粒體抗體 這類抗體可以針對甲狀腺的多種成分，以甲狀腺球蛋白和微粒體為代表?？贵w主要是IgG，可以介導(dǎo)ADCC活性，引起慢性淋巴細胞性甲狀腺炎，又稱喬本（Hashimoto）甲狀腺炎。檢測方法多用免疫熒光技術(shù)，以甲狀腺組織的冰凍切片作基質(zhì)。也可用RIA、ESISA等方法進行檢查。強陽性反應(yīng)或高滴度抗體對喬本甲狀腺炎和原發(fā)性甲狀腺功能減退癥有診斷意義，抗體變化對于疾病治療轉(zhuǎn)歸的評價甚為重要，對喬本甲狀腺炎與甲狀腺功能亢進的鑒別診斷也有較大價值。正常人血清中很少檢出甲

12、狀腺抗體，或僅有510無疾病癥狀人群有低度反應(yīng)；女性和年齡較大的人群檢出率較高。檢出該抗體可提示既往患過自身病，也可能是自身免疫病的早期指標。 在甲狀腺功能亢進(Graves病)患者的血清中存在甲狀腺刺激抗體(TSAb)，包括長效甲狀腺刺激素(LATS)和LATS者(LATS-P)。這些抗體作用于甲狀腺細胞表面的TSH受體，使受體活化并促進甲狀腺素的釋放；過多的甲狀腺素引起機體的代謝亢進。（二）抗乙酰膽堿受體抗體 抗乙酰膽堿受體（AchR）抗體可結(jié)合到橫紋肌細胞的乙酰膽堿受體上，引起運動終板的破壞，使神經(jīng)肌肉之間的信號傳導(dǎo)發(fā)生障礙，導(dǎo)致骨髓肌運動無力，稱為重癥肌無力（myastherniagr

13、avis，MG）。疾病可發(fā)于任何年齡，最先出現(xiàn)的癥狀常是眼肌無力，進而累及其他部位，常呈進行性加重。 抗AchR抗體多用較敏感的方法進行檢測。ELISA法：以-銀環(huán)蛇毒素包被酶標板，并與骨骼肌勻漿（含AchR）作用，再加入待測血清和對照血清，最后加酶標抗體。試驗的正常結(jié)果為陰性或0.03mmol/L。放免法：將放射性同位素標記的-銀環(huán)蛇毒素與骨骼勻漿結(jié)合，再加入患者血清和抗人IgG使之沉淀，檢測沉淀物的放射性。 抗AchR抗體的檢測對MG具有診斷意義，且特異性和敏感性較高，大約90的MG患者陽性；伴有眼肌癥狀的病人，抗體效價低于普通癥狀的病人；同時還用來監(jiān)測對該疾病免疫抑制治療的效果。肌萎縮側(cè)

14、索硬化癥患者用蛇毒治療后可出現(xiàn)假陽性。（三）抗平滑肌抗體 抗平滑肌抗體（ASMA）產(chǎn)生機制不明，但與肝和膽管的自身免疫疾病有關(guān)，尤其是慢性活動性肝炎（狼瘡性肝炎）和原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）。該類疾病的發(fā)生與自身免疫性密切相關(guān)，試驗結(jié)果有助于診斷以及與其他肝病的鑒別診斷。 ASMA的檢測用間接免疫熒光法，用大鼠胃大彎或小彎的冰凍切片作基質(zhì)；正常結(jié)果為陰性或1:20。檢出陽性率較高的疾病有慢性活動性肝炎和PBC；而在肝外性膽汁阻塞、藥物誘發(fā)性肝病、急性病毒性肝炎及肝細胞癌等時ASMA的檢出率極低。（四）抗心肌抗體 在心肌受損（例如手術(shù)、感染或梗塞等）時，心肌細胞內(nèi)的物質(zhì)釋出，作為隱蔽抗原刺激機

15、體產(chǎn)生抗體。這些抗體與心臟結(jié)合可導(dǎo)致新的免疫性損傷，例如心包切開綜合征、風(fēng)濕性心臟病等。 抗心肌抗體的檢測用胎兒或大鼠心肌的冰凍切片作抗原基質(zhì)，進行免疫熒光檢測，正常值為陰性。陽性結(jié)果相關(guān)的疾病有：心臟術(shù)后綜合征、心肌梗塞后綜合征和風(fēng)濕性心臟病等。（五）抗線粒體抗體（AMA）檢測 抗線粒體抗體（AMA）所針對的抗原是內(nèi)層線粒體膜，無器官特異性和種屬特異性。該抗體主要是IgG，與PBC相關(guān)，但對肝細胞或膽管沒有直接的損傷效應(yīng)，在疾病中的作用尚不明確。 AMA用免疫熒光法進行檢測，用大鼠腎的冰凍切片作基質(zhì)；也可用補體結(jié)合試驗來檢測。正常結(jié)果為陰性或效價在1:5以下。PBC患者可有7994為陽性反應(yīng)

16、或效價1:160；長期持續(xù)性肝阻塞、慢性活動性肝炎；、原因不明性肝硬化等也可呈陽性反應(yīng)。但是肝外性黃疸為陰性。（六）抗胃壁細胞抗體 抗胃壁細胞抗體（APA）可以破壞胃粘膜的壁細胞，使內(nèi)因子產(chǎn)生障礙，有時也可發(fā)現(xiàn)抗內(nèi)因子抗體而使其功能受阻，從而導(dǎo)致惡性貧血的發(fā)生?；颊呖蔁o前驅(qū)癥狀或患有胃炎。 APA常以間接免疫熒光法檢測，用人或家兔的胃冰凍切片作抗原基質(zhì)，正常成人為陰性反應(yīng)，正常兒童可有220的檢出率。惡性貧血患者能檢出抗胃壁細胞或抗內(nèi)因子抗體。而其他各種貧血患者不能檢出其中任何一種抗體。胃潰瘍或胃癌等極少該抗體陽性。（七）抗胰島素抗體 抗胰島素抗體在體內(nèi)可與胰島素結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，使胰島

17、素的活性明顯降低甚至無效；從而導(dǎo)致胰島素依賴性糖尿病，必需注入大量胰島素才能有療效。該抗體主要為IgG，其他4類Ig也存在；其中IgE類抗體可引起病人的變應(yīng)性反應(yīng)，IgM類可能引起胰島素耐受。 檢測抗胰島素抗體及其免疫球蛋白類別可用各種瓊脂擴散試驗、間接血凝和ELISA等方法，試驗結(jié)果會有助于糖尿病的分型診斷及適當治療。此外，還可用于監(jiān)測病人的胰島素耐量。（八）抗腎小球基底膜抗體 抗腎小球基底膜（GBM）抗體多產(chǎn)生在鏈球菌感染后，為共同抗原交叉誘導(dǎo)產(chǎn)生?？笹BM抗體可引起GBM損傷，導(dǎo)致腎小球腎炎的發(fā)生。 抗GBM抗體的檢測也是用熒光或酶免疫組化法，用動物或人的腎組織冰凍切片作抗原基質(zhì)。陽性反

18、應(yīng)可見與腎小球血管走行相一致的熒光染色或酶底物染色；這與免疫復(fù)合物時斑塊狀分布的染色現(xiàn)象完全不同。試驗正常值為陰性。該試驗主要用于腎小球腎炎的分型診斷與鑒別診斷。約5的腎小球腎炎由抗GBM抗體引發(fā)，為自身免疫性。（九）抗精子抗體 正常情況下精細胞是隱蔽抗原，但當外傷、手術(shù)或感染時，精子可與免疫系統(tǒng)接觸，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗精子抗體。高滴度的抗精子抗體可使精細胞的活力下降甚至數(shù)量減少，是導(dǎo)致男子不育癥的原因之一。在部分女性也可檢出抗精子抗體，可能與不孕癥相關(guān)。 抗精子抗體的檢測方法很多，例如精子制動試驗、精子凝集試驗、免疫熒光法、ELISA法和免疫珠結(jié)合法等?？咕涌贵w陽性相關(guān)的疾病有實驗性輸精管阻塞和輸精管切斷等，一部分婦女和孕婦也可檢出抗精子抗體。（十）抗血細胞抗體 抗紅細胞抗體主要涉及ABO的Rh血型抗體及自身免疫性抗體，與輸血、新生兒溶血癥和自身免疫性溶血性貧血等相關(guān)。抗血小板和抗白細胞抗體等均與自身免疫性血液病相關(guān)。四、