無(wú)創(chuàng)定量超聲積分與肝纖維化程度關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減無(wú)創(chuàng)定量超聲積分與肝纖維化程度關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究（作者：?jiǎn)挝唬亨]編：）【摘要】 目的：建立健康SD雄性大鼠肝纖維化模型，探討 超聲對(duì)肝纖維化無(wú)創(chuàng)定量診斷的價(jià)值。方法：于0周、2周、4周分別對(duì)以復(fù)合因子所建立27只健康SD雄性大鼠肝纖維化模型進(jìn)行肝組 織病理檢查、超聲檢查及血清纖維化指標(biāo)檢查，以病理診斷結(jié)果為標(biāo) 準(zhǔn)，探討應(yīng)用超聲積分對(duì)肝纖維化無(wú)創(chuàng)定量診斷的價(jià)值。結(jié)果：以復(fù)合因子法成功建立了鼠肝纖維化模型，實(shí)驗(yàn)表明，超聲積分與病理 學(xué)肝纖維化分期相關(guān)性良好，超聲總積分與血清肝纖維化指標(biāo)聯(lián)合應(yīng) 用，可使早期肝硬化診斷靈敏度及特異度提高。結(jié)論：超聲積分及超聲與血清肝纖維

2、化指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)肝纖維化無(wú)創(chuàng)定量診斷有較高 的價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】 肝纖維化；病理檢查；超聲檢查；積分方案肝臟活體組織學(xué)檢查被公認(rèn)為確定肝纖維化程度的金標(biāo)準(zhǔn)，目 前，常規(guī)實(shí)施肝穿刺活檢尚有相當(dāng)難度， 尋找無(wú)創(chuàng)定量診斷肝纖維化 程度的有效方法在肝纖維化研究中倍受矚目1-2 。本實(shí)驗(yàn)以肝纖維化模型大鼠為研究對(duì)象，探討超聲對(duì)肝纖維化無(wú)創(chuàng)定量診斷的價(jià)值。1對(duì)象與方法1.1動(dòng)物準(zhǔn)備 健康雄性SD大鼠35只，重150220g,平均180g, 隨機(jī)分五組，以復(fù)合因子致纖維化模型方法，建立鼠肝纖維化模型。 造模方法：（1）以79.5%純玉米粉加20%豬油、0.5%膽固醇制成低蛋 白高脂肪高膽固醇混合飼料喂飼實(shí)驗(yàn)大

3、鼠；（2）以10%乙醇（經(jīng)白酒 勾兌而成）為唯一飲用水喂飼實(shí)驗(yàn)大鼠；（3）第一次皮下注射40%CCI4 植物油溶液0.5mL/100g，以后每隔3天0.3mL/100g重復(fù)皮下注射 40%CCI4植物油溶液，為期4周。按2000年制定的肝纖維化程度分 期標(biāo)準(zhǔn)，以肝病理檢查結(jié)果作為判斷肝纖維化及劃分肝纖維化程度的 標(biāo)準(zhǔn)3。1.2儀器與方法 在建立肝纖維化模型前、2周、4周分別進(jìn)行超 聲檢查、血清纖維化指標(biāo)檢查及肝組織病理檢查。（1）超聲檢查：每次超聲檢查前用8%硫化鈉脫去肝區(qū)體毛，以2%戊巴比妥那 4.5mg/100g腹腔注射，麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。采用 Hp 5500型及IU22型彩 色電腦超聲診斷儀

4、，成像頻率2.04.0MHz由同一操作者熟練測(cè)量 各超聲指標(biāo)，計(jì)6個(gè)：肝實(shí)質(zhì)回聲、肝包膜回聲、肝臟邊緣、門靜脈 血流、脾臟、腹水，結(jié)果以磁光盤保存，脫機(jī)分析，分別計(jì)算每個(gè)實(shí)驗(yàn)鼠每次超聲積分。彩色多普勒超聲診斷實(shí)驗(yàn)鼠肝纖維化綜合評(píng)分標(biāo) 準(zhǔn)重點(diǎn)參考國(guó)內(nèi)外多位學(xué)者研究結(jié)果制訂4,見表1。表1超聲綜合指標(biāo)診斷實(shí)驗(yàn)鼠肝纖維化綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（略）1.3纖維化指標(biāo)檢查 取鼠尾靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附分析法， 測(cè)定血清透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、W型膠原（CIV）、皿型前膠原肽（PCin）o1.4組織病理學(xué)檢查 建立肝纖維化模型前0周、2周在超聲引 導(dǎo)下進(jìn)行肝組織活檢，活檢標(biāo)本至少包含3個(gè)完整匯管區(qū)；

5、在建立肝 纖維化模型4周時(shí)處死動(dòng)物后取肝標(biāo)本。穿刺活檢及肝標(biāo)本均以10%甲醛液固定，石蠟包埋切片，HE染色后常規(guī)病理檢查。肝纖維化的 病理診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2000年西安會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果35只SD大鼠，實(shí)驗(yàn)過程中因耐受不良死亡 8只，共27只 實(shí)驗(yàn)鼠造模成功最終納入統(tǒng)計(jì)處理。實(shí)驗(yàn)鼠肝纖維化的超聲總積分分 布情況見表2。表2實(shí)驗(yàn)鼠肝纖維化的超聲總積分分布情況（略）x 2=25.325 , P0.01，似然比 33.325 , P0.05以肝纖維化病理診斷S4期作為早期肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行 分析，結(jié)果顯示：超聲總積分大于12分，診斷早期肝硬化靈敏度92.3%,特異度91.7%。超聲總積分與血清肝纖維化指

6、標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用， 可使早期肝硬化診斷靈敏度提高至96.5%,特異度提高至95.8%（圖1）。圖1各期肝纖維化鼠血清纖維化指標(biāo)（略）3討論3.1采用復(fù)合因子致肝纖維化模型方法，建立鼠肝纖維化模型 本造模方式中，CCI4是一種選擇性肝細(xì)胞膜毒物，可使肝細(xì)胞發(fā)生 凋亡、脂肪變性乃至壞死，直至肝臟匯管區(qū)和肝小葉內(nèi)纖維組織增生 和沉積，導(dǎo)致肝纖維化，從S1期至S4期逐漸加重；乙醇作為酶誘導(dǎo) 劑，可增加其毒性作用；配以低蛋白、高脂肪、高膽固醇飲食，即可 促使肝發(fā)生纖維化。本造模方式傳統(tǒng)復(fù)合方法協(xié)同作用周期短， 但多 種因素同時(shí)作用，易導(dǎo)致鼠耐受性差，死亡率較高，成模率不高（60%, 我們實(shí)驗(yàn)體會(huì)以10%白酒代

7、替?zhèn)鹘y(tǒng)造模采用的30泣業(yè)用酒精，可降 低死亡率，成模率有所提高（78%，另外體重200g以上的大鼠耐受 力明顯高于低體重（低于 200g）者，死亡率分別為21% 30%成模 率分別為81% 70%故選擇動(dòng)物適應(yīng)以200g左右為宜。3.2初步探討診斷肝纖維化程度的相關(guān)臨床及影像學(xué)診斷指標(biāo) 目前，利用超聲評(píng)價(jià)肝硬變的研究較多且較深入 5-10,但對(duì)于肝 纖維化程度的超聲研究尚未充分展開，相關(guān)報(bào)道不多11-13,對(duì)肝 纖維化超聲診斷價(jià)值及其評(píng)價(jià)指標(biāo)尚存在爭(zhēng)議。目前診斷肝纖維化標(biāo)準(zhǔn)仍是病理學(xué)診斷，但因其有創(chuàng)，可引起潛在并發(fā)癥使其難以成為肝 纖維化常規(guī)診斷方法。建立肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷系統(tǒng)成為臨床研究

8、熱點(diǎn)。本研究初步挑選6項(xiàng)超聲指標(biāo)，將其與病理學(xué)進(jìn)行對(duì)照，評(píng)價(jià) 各超聲指標(biāo)之價(jià)值。以初步挑選的指標(biāo)為基礎(chǔ)，進(jìn)一步對(duì)有用指標(biāo)與 病理分期進(jìn)行判別分析，結(jié)果顯示出判斷肝纖維化程度意義較大的4項(xiàng)獨(dú)立性超聲判別指標(biāo)，表明超聲指標(biāo)可用以初步評(píng)價(jià)肝纖維化的程 度。血清肝纖維化指標(biāo)可在不同程度上反映肝纖維化的進(jìn)程，但尚無(wú)一項(xiàng)指標(biāo)可反映肝纖維化的全貌。 肝纖維化時(shí)，細(xì)胞外基質(zhì)的降解產(chǎn)物和參與肝纖維代謝的酶類釋入血清，血清中這些基質(zhì)成分可作為肝 纖維化的標(biāo)志物。HA是一種大分子葡萄胺多糖，是結(jié)締組織機(jī)制的 重要成分；LN是細(xì)胞外間質(zhì)成分中的糖蛋白。血清肝纖維化標(biāo)志物 可反映肝纖維化活動(dòng)性，其值與肝內(nèi)活動(dòng)性基質(zhì)沉積

9、多少有關(guān)，活動(dòng)性肝纖維化時(shí)血清標(biāo)志物質(zhì)高于靜止性肝纖維化，故不能單純以此作 為依據(jù)反映肝纖維化的全貌?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 Pinzani M, RomboutsK, Colagrande S.Fibrosis in chr onic liver disease: diag no sis and man ageme nt J .Jour nalof Hepatology , 2004, 12(8) : 1-15.2 Meziri M, Pereirn WCAAbdelwahab A,et al.In vitro chr onichepatic diseasecharacterizati onwith

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