第26章移植免疫及其免疫檢測(cè)

1、第二十六章第二十六章 移植免疫及其免疫檢測(cè)移植免疫及其免疫檢測(cè) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 移植（移植（transplantation）是指將健康細(xì)胞、組織）是指將健康細(xì)胞、組織 或器官?gòu)钠湓课灰浦驳阶泽w或異體的一定部位、或器官?gòu)钠湓课灰浦驳阶泽w或異體的一定部位、 用以替代或補(bǔ)償機(jī)體所喪失的結(jié)構(gòu)和（或）功能的用以替代或補(bǔ)償機(jī)體所喪失的結(jié)構(gòu)和（或）功能的 現(xiàn)代醫(yī)療手段。被移植的細(xì)胞、組織或器官稱移植現(xiàn)代醫(yī)療手段。被移植的細(xì)胞、組織或器官稱移植 物（物（graft），提供移植物的個(gè)體稱為供體），提供移植物的個(gè)體稱為供體(donor)， 接受移植物的個(gè)體稱為受體（接受移植物的個(gè)體稱為受體（re

2、cipient）。）。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 自體移植自體移植 同系移植同系移植 同種異體移植同種異體移植 異種移植異種移植 原位移植原位移植 根據(jù)移植部位分類根據(jù)移植部位分類 異位移植異位移植 器官移植器官移植 移植物種類分類移植物種類分類 支架組織移植支架組織移植 細(xì)胞移植細(xì)胞移植 根據(jù)移植物來源分類根據(jù)移植物來源分類 移植的類型移植的類型 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 移植名稱移植名稱 供者、受者關(guān)系供者、受者關(guān)系 舉例舉例 自體移植自體移植 同一個(gè)體同一個(gè)體 自體皮片移植自體皮片移植 同系或同基因移植同系或同基因移植 同系或同基因同系或同基因 人的單卵雙生子間的器官移植人的單卵

3、雙生子間的器官移植 的個(gè)體間的個(gè)體間 同品系小鼠的皮片移植同品系小鼠的皮片移植 同種異基因移植同種異基因移植 同種不同基因同種不同基因 人與人之間的腎移植人與人之間的腎移植 的個(gè)體間的個(gè)體間 不同品系小鼠間的皮片移植不同品系小鼠間的皮片移植 異種移植異種移植 異種動(dòng)物間異種動(dòng)物間 狗的器官移植給猩猩狗的器官移植給猩猩 豬的器官移植給狗豬的器官移植給狗 移植種類和命名移植種類和命名 第一節(jié)第一節(jié) 器官移植與移植免疫的特點(diǎn)器官移植與移植免疫的特點(diǎn) 移植手術(shù)后移植物能否存活取決于：移植手術(shù)后移植物能否存活取決于： 1.移植器官在移植過程中活力的保存；移植器官在移植過程中活力的保存； 2.手術(shù)時(shí)血管吻

4、合和血液循環(huán)重建的質(zhì)量；手術(shù)時(shí)血管吻合和血液循環(huán)重建的質(zhì)量； 3.移植排斥反應(yīng)的控制。移植排斥反應(yīng)的控制。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 一、器官和組織移植的一般規(guī)律一、器官和組織移植的一般規(guī)律 1.移植器官或組織的抗原性異物屬性移植器官或組織的抗原性異物屬性 2.排斥移植物的記憶特性排斥移植物的記憶特性 3.負(fù)向免疫調(diào)節(jié)的必要性負(fù)向免疫調(diào)節(jié)的必要性 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 二、二、HLA是誘導(dǎo)排斥反應(yīng)最強(qiáng)的靶抗原是誘導(dǎo)排斥反應(yīng)最強(qiáng)的靶抗原 主要組織相容性復(fù)合體（主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex,MHC）編碼的人類白細(xì)胞抗原（）編碼的

5、人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen,HLA），是不同個(gè)體間進(jìn)行器官或組織），是不同個(gè)體間進(jìn)行器官或組織 細(xì)胞移植時(shí)發(fā)生排斥反應(yīng)的主要成分，這種代表個(gè)體特異細(xì)胞移植時(shí)發(fā)生排斥反應(yīng)的主要成分，這種代表個(gè)體特異 性的同種抗原又稱組織相容性抗原性的同種抗原又稱組織相容性抗原(histocompatibility)或移或移 植抗原植抗原(transplantation antigen)。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) HLA是人體多態(tài)性最豐富的基因系統(tǒng)。是人體多態(tài)性最豐富的基因系統(tǒng)。 HLA的遺傳特征的遺傳特征 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) HLA分型分型要比要比ABO血型血

6、型復(fù)雜的多，每個(gè)人不是從父母分別得到一個(gè)復(fù)雜的多，每個(gè)人不是從父母分別得到一個(gè) 基因，而是得到一串基因基因，而是得到一串基因(HLA單倍型單倍型)。每人遺傳到二串。每人遺傳到二串“冰糖葫蘆冰糖葫蘆 ，其上的，其上的“紅果紅果”(基因基因)以以A、B、C、D、DR、DQ和和DP為序。為序。 A有有28種種紅果紅果(分別記為分別記為A1、A2、A3、A9.)， B有有61種種(記為記為B5、B7、B8、B12.)， DR有有24種種(記為記為DR1、DR2、DR3、DR4.)等。等。 七彩七彩紅果紅果共有共有164種編號(hào)，如不同遺傳排列的紅果隨機(jī)組合，按理論推種編號(hào)，如不同遺傳排列的紅果隨機(jī)組合，

7、按理論推 算，算，“冰糖葫蘆冰糖葫蘆”有五億多種變化，能組合有五億多種變化，能組合33億多種億多種HLA分型分型。 理論推測(cè)的理論推測(cè)的HLA分型分型數(shù)量巨大，但對(duì)一個(gè)具體的民族來說并非如此。數(shù)量巨大，但對(duì)一個(gè)具體的民族來說并非如此。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 在三類在三類HLA分子中，分子中，、類分子是觸發(fā)移植排斥類分子是觸發(fā)移植排斥 反應(yīng)的首要抗原，尤其是反應(yīng)的首要抗原，尤其是HLA-DR位點(diǎn)的抗原分子位點(diǎn)的抗原分子 HLA的識(shí)別方式：的識(shí)別方式： 直接識(shí)別直接識(shí)別 間接識(shí)別間接識(shí)別 HLA發(fā)揮雙重作用：發(fā)揮雙重作用： 介導(dǎo)宿主抗移植物反應(yīng)介導(dǎo)宿主抗移植物反應(yīng)(HVGR); 參與移植物

8、抗宿主反應(yīng)參與移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR)。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 第第二節(jié)二節(jié) HLA配型與應(yīng)用分析配型與應(yīng)用分析 HLA分型方法的改進(jìn)和不斷完善，使得分型方法的改進(jìn)和不斷完善，使得HLA 復(fù)雜的多態(tài)性更加顯現(xiàn)，亦推動(dòng)了復(fù)雜的多態(tài)性更加顯現(xiàn)，亦推動(dòng)了HLA與群體與群體 及自然選擇關(guān)系的研究，更促進(jìn)了人們對(duì)疾病及自然選擇關(guān)系的研究，更促進(jìn)了人們對(duì)疾病 本質(zhì)的認(rèn)識(shí)。本質(zhì)的認(rèn)識(shí)。 一、HLA配型 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （一）血清學(xué)分型法（一）血清學(xué)分型法 應(yīng)用一系列已知抗應(yīng)用一系列已知抗HLA的特異性標(biāo)準(zhǔn)分的特異性標(biāo)準(zhǔn)分 型血清與待測(cè)淋巴細(xì)胞混合，借助補(bǔ)體的型血清與待測(cè)淋巴細(xì)胞混合

9、，借助補(bǔ)體的 生物學(xué)作用介導(dǎo)細(xì)胞裂解的細(xì)胞毒試驗(yàn)。生物學(xué)作用介導(dǎo)細(xì)胞裂解的細(xì)胞毒試驗(yàn)。 耗時(shí)長(zhǎng)耗時(shí)長(zhǎng) 不同批號(hào)抗血清結(jié)果不同批號(hào)抗血清結(jié)果 常有不同常有不同 操作簡(jiǎn)便易行操作簡(jiǎn)便易行 節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好 無需特殊設(shè)備無需特殊設(shè)備 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 用于用于HLA分型的微量細(xì)胞毒試驗(yàn)分型的微量細(xì)胞毒試驗(yàn) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 死（著染）細(xì)胞（死（著染）細(xì)胞（% %）記分記分結(jié)果判斷結(jié)果判斷 0101陰性陰性 11202可疑陰性可疑陰性 21504弱陽性弱陽性 51806陽性陽性 808強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性 0未試驗(yàn)或不能讀數(shù)未試驗(yàn)或不能讀數(shù) 微量

10、細(xì)胞毒試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)微量細(xì)胞毒試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （二）細(xì)胞學(xué)分型法（二）細(xì)胞學(xué)分型法 以混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（以混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture, MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixed lymphocyte reaction, MLR）為基本技術(shù)的）為基本技術(shù)的HLA分分 型法。能用本法測(cè)定的抗原稱為型法。能用本法測(cè)定的抗原稱為L(zhǎng)D抗原抗原 （lymphocyte defined antigen）,包括包括HLA-D、-DP。 MLC分為單向分為單向MLC和雙向和雙向MLC 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 將已知將

11、已知HLA型別的分型細(xì)胞用絲裂霉素型別的分型細(xì)胞用絲裂霉素C或或X線照射預(yù)處線照射預(yù)處 理，使其失去增殖能力僅作為刺激細(xì)胞；而以具有增殖能力理，使其失去增殖能力僅作為刺激細(xì)胞；而以具有增殖能力 的受檢者外周血單個(gè)核細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞。兩者混合培養(yǎng)時(shí)，的受檢者外周血單個(gè)核細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞。兩者混合培養(yǎng)時(shí)， 反應(yīng)細(xì)胞可對(duì)刺激細(xì)胞發(fā)生應(yīng)答而增殖，用反應(yīng)細(xì)胞可對(duì)刺激細(xì)胞發(fā)生應(yīng)答而增殖，用3H-TdR摻入法摻入法 測(cè)定細(xì)胞增殖強(qiáng)度，從而判斷受檢細(xì)胞的測(cè)定細(xì)胞增殖強(qiáng)度，從而判斷受檢細(xì)胞的HLA型別。型別。 根據(jù)選用的刺激細(xì)胞類型分為：根據(jù)選用的刺激細(xì)胞類型分為： 1 1陰性分型法陰性分型法 2 2陽性分型法陽性

12、分型法 1. 單向單向MLC 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 遺傳型不同的兩個(gè)個(gè)體淋巴細(xì)胞在體外混合培遺傳型不同的兩個(gè)個(gè)體淋巴細(xì)胞在體外混合培 養(yǎng)時(shí)，由于兩者養(yǎng)時(shí)，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對(duì)方淋不同，能相互刺激導(dǎo)致對(duì)方淋 巴細(xì)胞增殖，故稱雙向巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLC。在此試驗(yàn)中，各自的。在此試驗(yàn)中，各自的 淋巴細(xì)胞既是刺激細(xì)胞，又是反應(yīng)細(xì)胞，反應(yīng)后形淋巴細(xì)胞既是刺激細(xì)胞，又是反應(yīng)細(xì)胞，反應(yīng)后形 態(tài)上呈現(xiàn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和分裂現(xiàn)象，可通過形態(tài)法計(jì)態(tài)上呈現(xiàn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和分裂現(xiàn)象，可通過形態(tài)法計(jì) 數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞 。 2. 雙向雙向MLC 本法不能判斷型別，只能說明供、受體本法不能判斷型別，只

13、能說明供、受體HLA抗原配合程度抗原配合程度 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （三）分子生物學(xué)分型法（三）分子生物學(xué)分型法 分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，使得分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，使得HLA的的 DNA分型技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，并在開展分型技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，并在開展DNA限制性片限制性片 段長(zhǎng)度多態(tài)性分析、段長(zhǎng)度多態(tài)性分析、DNA指紋圖、等位基因特異指紋圖、等位基因特異 性寡核苷酸雜交等基礎(chǔ)上，引入多聚酶鏈反應(yīng)技性寡核苷酸雜交等基礎(chǔ)上，引入多聚酶鏈反應(yīng)技 術(shù)，使術(shù)，使HLA分型得以在更精密的水平上進(jìn)行。分型得以在更精密的水平上進(jìn)行。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性（限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性（

14、restriction fragment length polymorphism, RFLP）分析：最早建立）分析：最早建立 的研究的研究HLA多態(tài)性的多態(tài)性的DNA分型技術(shù)分型技術(shù) PCR-RFLP分型法：對(duì)分型法：對(duì)DNA片段進(jìn)行體外擴(kuò)增，片段進(jìn)行體外擴(kuò)增， 然后再用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切分析，可使限然后再用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切分析，可使限 制性長(zhǎng)度分析的敏感度大大增加制性長(zhǎng)度分析的敏感度大大增加 1. RFLP與與PCR-RFLP分型法分型法 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 序列特異性寡核苷酸序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（聚合酶鏈反應(yīng)（PCR- sequen

15、ce specific oligonucleotide, PCR-SSO）是以）是以 PCR為基礎(chǔ)，將凝膠上擴(kuò)增的為基礎(chǔ)，將凝膠上擴(kuò)增的HLA基因基因DNA轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移 至硝酸纖維膜或尼龍膜，進(jìn)而用放射性核素或酶、至硝酸纖維膜或尼龍膜，進(jìn)而用放射性核素或酶、 地高辛等非放射性物質(zhì)標(biāo)記的寡核苷酸探針與之地高辛等非放射性物質(zhì)標(biāo)記的寡核苷酸探針與之 進(jìn)行雜交，從而對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物作出進(jìn)行雜交，從而對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物作出HLA型別判斷。型別判斷。 2. PCR-SSO分型法分型法 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 分類：分類： 斑點(diǎn)或印漬法斑點(diǎn)或印漬法 反向斑點(diǎn)或印漬法反向斑點(diǎn)或印漬法 PCR-SSO是是類類HLA分型應(yīng)用

16、最廣泛的方法，分型應(yīng)用最廣泛的方法， 能夠鑒定所有已知序列的能夠鑒定所有已知序列的HLA-DR、DQ、 DP等位基因等位基因 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 是近年發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)是近年發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù),將其與將其與PCR-SSO結(jié)結(jié) 合應(yīng)用于合應(yīng)用于HLA分型，可使分型趨于規(guī)模化和自動(dòng)化，分型，可使分型趨于規(guī)?；妥詣?dòng)化， 尤其在尤其在HLA多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具 優(yōu)勢(shì)。優(yōu)勢(shì)。HLA的基因芯片分型法，實(shí)際上是的基因芯片分型法，實(shí)際上是PCR- SSO反向斑點(diǎn)或印漬法的微型化。目前，基因芯片反向斑點(diǎn)或印漬法的微型化。目前，基因芯片 在在HLA

17、分型領(lǐng)域的應(yīng)用尚屬起步階段。分型領(lǐng)域的應(yīng)用尚屬起步階段。 基因芯片基因芯片(gene chip) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 原理：應(yīng)用設(shè)計(jì)的一套原理：應(yīng)用設(shè)計(jì)的一套HLA等位基因的序列特異性引等位基因的序列特異性引 物（物（sequence specific primer, SSP）,對(duì)待測(cè)對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，從而獲得擴(kuò)增，從而獲得HLA型別特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物型別特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物 3. PCR-SSP分型法分型法 HLA基因擴(kuò)增的特異性包括：基因擴(kuò)增的特異性包括： 座位特異性（座位特異性（locus-specific），如），如HLA-A、B、-D

18、RB1等；等； 組特異性（組特異性（group-specific），如），如DRB1-01、DRB1-02等；等； 等位基因特異性（等位基因特異性（allele-specific），如），如DRB1*0401、 DRB1*0402等。等。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 4.PCR-SSCP分型法分型法 單鏈構(gòu)象特異性聚合酶鏈反應(yīng)（單鏈構(gòu)象特異性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）是）是 以待測(cè)基因以待測(cè)基因PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)，對(duì)擴(kuò)增的單鏈擴(kuò)增為基礎(chǔ)，對(duì)擴(kuò)增的單鏈DNA （ssDNA）的）的HLA分型方法。分型方法

19、。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 原理：對(duì)原理：對(duì)ssDNA進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳 時(shí)，因其序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致時(shí)，因其序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致 電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異 和檢測(cè)出和檢測(cè)出DNA多態(tài)性或點(diǎn)突變，有助于新的多態(tài)性或點(diǎn)突變，有助于新的HLA 等位基因或突變體的發(fā)現(xiàn)。等位基因或突變體的發(fā)現(xiàn)。 4.PCR-SSCP分型法分型法 特點(diǎn)：特點(diǎn)：PCR-SSCP作為作為PCR-SSO的補(bǔ)充，在區(qū)分純合子和雜的補(bǔ)充，在區(qū)分純合子和雜 合子基因方面有其獨(dú)到之處，有利于

20、排除合子基因方面有其獨(dú)到之處，有利于排除SSO雜交的假性。雜交的假性。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 基本過程：分離待測(cè)細(xì)胞的基本過程：分離待測(cè)細(xì)胞的DNA，應(yīng)用座位、組或，應(yīng)用座位、組或 等位基因特異性引物進(jìn)行等位基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的純擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的純 化和測(cè)序，測(cè)出的基因序列與化和測(cè)序，測(cè)出的基因序列與HLA基因庫(kù)的基因庫(kù)的DNA已已 知序列比較，判斷待測(cè)的知序列比較，判斷待測(cè)的HLA型別。型別。 5. SBT分型法分型法 基于序列的基于序列的HLA分型法（分型法（sequence-based HLA typing,SBT），通過對(duì)擴(kuò)增后的），通過對(duì)擴(kuò)增后的HLA基因

21、片段基因片段 通過核酸序列測(cè)定來判斷通過核酸序列測(cè)定來判斷HLA型別。型別。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 二、二、HLA分型方法的應(yīng)用分型方法的應(yīng)用 （一）（一） HLA配型配型 （二）（二） HLA交叉配型與預(yù)存抗體的檢測(cè)交叉配型與預(yù)存抗體的檢測(cè) （三）（三） 群體性反應(yīng)抗體（群體性反應(yīng)抗體（PRA）的檢測(cè)）的檢測(cè) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （一）（一）HLA配型配型 HLA-A、HLA-B、HLA-C抗原和抗原和 HLA-DQ、DR抗原采用補(bǔ)體依賴的微抗原采用補(bǔ)體依賴的微 量細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測(cè)，量細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測(cè)，HLA-D、HLA- DP等抗原采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法測(cè)等抗原采用混合淋巴細(xì)

22、胞培養(yǎng)法測(cè) 定。近年來，定。近年來，HLA基因分型技術(shù)的應(yīng)基因分型技術(shù)的應(yīng) 用，使得配型更加精確和敏感。用，使得配型更加精確和敏感。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （二）（二）HLA交叉配型與預(yù)存抗體的檢測(cè)交叉配型與預(yù)存抗體的檢測(cè) 移植前如果受者血清中預(yù)先存在抗供者淋巴移植前如果受者血清中預(yù)先存在抗供者淋巴 細(xì)胞的細(xì)胞毒性抗體，移植后細(xì)胞的細(xì)胞毒性抗體，移植后80%發(fā)生超急性排發(fā)生超急性排 斥反應(yīng)，因此必須做斥反應(yīng)，因此必須做HLA交叉配型以檢測(cè)受者體交叉配型以檢測(cè)受者體 內(nèi)抗供者淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性抗體。內(nèi)抗供者淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性抗體。 1.淋巴細(xì)胞交叉配合試驗(yàn)：檢測(cè)受者是否有抗淋巴細(xì)胞交叉配

23、合試驗(yàn)：檢測(cè)受者是否有抗 供者的特異性抗體，供者的特異性抗體，LD抗原的相容程度如何?？乖南嗳莩潭热绾?。 細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性10%，則說明受者體內(nèi)已存在細(xì)胞毒，則說明受者體內(nèi)已存在細(xì)胞毒 性抗體，應(yīng)另選供者；若小于性抗體，應(yīng)另選供者；若小于10%，表明供受者，表明供受者 相配。相配。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 2.還可進(jìn)一步作還可進(jìn)一步作T、B細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型。細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型。 T細(xì)胞交叉配型陽性視為移植的禁忌證。細(xì)胞交叉配型陽性視為移植的禁忌證。B細(xì)胞交叉配細(xì)胞交叉配 型對(duì)于弱型對(duì)于弱類抗體更敏感。類抗體更敏感。 3.流式細(xì)胞法交叉配型，供者淋巴細(xì)胞與受者流式細(xì)胞法交叉

24、配型，供者淋巴細(xì)胞與受者 血清反應(yīng)，與熒光標(biāo)記的抗人血清反應(yīng)，與熒光標(biāo)記的抗人IgG或其或其F（ab）2共育，共育， 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 4.自身交叉配型：受者血清和受者細(xì)胞進(jìn)行細(xì)自身交叉配型：受者血清和受者細(xì)胞進(jìn)行細(xì) 胞毒試驗(yàn)，若陽性可致與供者的交叉配型出現(xiàn)假陽性。胞毒試驗(yàn)，若陽性可致與供者的交叉配型出現(xiàn)假陽性。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 縱上所述，交叉配型陽性表明受者縱上所述，交叉配型陽性表明受者 預(yù)存抗供體的抗體。作受體選擇時(shí)：預(yù)存抗供體的抗體。作受體選擇時(shí)： 組織配型差，交叉配型陰性，仍可移組織配型差，交叉配型陰性，仍可移 植。組織配型好，交叉配型陽性，不植。組織

25、配型好，交叉配型陽性，不 宜移植。交叉配型常用于腎移植，而宜移植。交叉配型常用于腎移植，而 不用于心、肝、肺等。不用于心、肝、肺等。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （三）群體反應(yīng)性抗體（三）群體反應(yīng)性抗體（panel reactive antibodies, PRA） 是指群體反應(yīng)性抗是指群體反應(yīng)性抗HLA-IgG抗體，是各種組織器官移植術(shù)抗體，是各種組織器官移植術(shù) 前篩選致敏受者的重要指標(biāo)，與移植排斥反應(yīng)和存活率密前篩選致敏受者的重要指標(biāo)，與移植排斥反應(yīng)和存活率密 切相關(guān)。如果病人在曾經(jīng)的輸血或者器官移植中接觸過他切相關(guān)。如果病人在曾經(jīng)的輸血或者器官移植中接觸過他 人人HLA（人類白細(xì)胞抗原

26、），則會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的抗性，不利（人類白細(xì)胞抗原），則會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的抗性，不利 于器官移植配型。于器官移植配型。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 第第三節(jié)三節(jié) 常見的組織或器官移植常見的組織或器官移植 臨床器官移植術(shù)的建立至今已有臨床器官移植術(shù)的建立至今已有5050多年的多年的 歷史。從腎臟移植到心肺移植、肝臟移植；歷史。從腎臟移植到心肺移植、肝臟移植； 從完整的器官移植到部分組織器官甚至是細(xì)從完整的器官移植到部分組織器官甚至是細(xì) 胞移植；從單一的器官移植到器官聯(lián)合移植。胞移植；從單一的器官移植到器官聯(lián)合移植。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 一、腎臟移植一、腎臟移植 腎臟移植，創(chuàng)始于腎臟移植，創(chuàng)始于1

27、950年，是臨床開展最早、年，是臨床開展最早、 應(yīng)用最多和效果最佳的一種器官移植。應(yīng)用最多和效果最佳的一種器官移植。 由于免疫抑制藥物的不斷更新和移植技術(shù)的由于免疫抑制藥物的不斷更新和移植技術(shù)的 不斷提高，腎臟移植患者不斷提高，腎臟移植患者1年和年和5年的存活率，分年的存活率，分 別可達(dá)別可達(dá)90% 95%和和80%90%。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 組織配型是腎臟移植前選擇供者的重要手段組織配型是腎臟移植前選擇供者的重要手段 包括：包括：ABO血型配型血型配型 HLA配型配型 交叉配型交叉配型 腎源選擇的原則：以腎源選擇的原則：以ABO血型完全相同者為好，血型完全相同者為好， 至少能夠相

28、容選擇最佳至少能夠相容選擇最佳HLA配型的供者器官配型的供者器官 1. 1. 腎臟移植對(duì)組織配型的要求腎臟移植對(duì)組織配型的要求 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 臨床觀測(cè)項(xiàng)目臨床觀測(cè)項(xiàng)目: T細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值和比值和IL-2及其受體的檢測(cè)，及其受體的檢測(cè)， 判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評(píng)估免疫抑制劑治療效果判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評(píng)估免疫抑制劑治療效果 腎組織活檢，預(yù)測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生腎組織活檢，預(yù)測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生 RIA或者或者HPLC血藥濃度檢測(cè)，指導(dǎo)合理用藥，減血藥濃度檢測(cè)，指導(dǎo)合理用藥，減 少腎毒性少腎毒性 2.腎移植受者的療效檢測(cè)腎移植受者的療效檢測(cè) 療效監(jiān)測(cè)：受者免疫狀態(tài)檢測(cè)療

29、效監(jiān)測(cè)：受者免疫狀態(tài)檢測(cè) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 二、肝臟移植二、肝臟移植 肝臟移植手術(shù)已經(jīng)成為治療原發(fā)性膽道閉肝臟移植手術(shù)已經(jīng)成為治療原發(fā)性膽道閉 鎖、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管鎖、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管 炎、肝炎后肝硬化、酒精性肝病、肝細(xì)胞性肝炎、肝炎后肝硬化、酒精性肝病、肝細(xì)胞性肝 癌、自身免疫性肝病、急性肝功能衰竭以及藥癌、自身免疫性肝病、急性肝功能衰竭以及藥 物誘導(dǎo)的肝臟損傷等疾病，挽救晚期肝病患者物誘導(dǎo)的肝臟損傷等疾病，挽救晚期肝病患者 生命的最有效方法。生命的最有效方法。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 特點(diǎn)：特點(diǎn)： HLA是否匹配與肝臟移植效果無顯著

30、差異是否匹配與肝臟移植效果無顯著差異 機(jī)制：肝臟移植后可出現(xiàn)天然或自發(fā)性免疫耐受機(jī)制：肝臟移植后可出現(xiàn)天然或自發(fā)性免疫耐受 現(xiàn)象，也稱現(xiàn)象，也稱“移植肝臟免疫特惠現(xiàn)象移植肝臟免疫特惠現(xiàn)象”，因，因HLA不不 配僅發(fā)生較弱的排斥反應(yīng)，而免疫抑制劑配僅發(fā)生較弱的排斥反應(yīng)，而免疫抑制劑 的應(yīng)用有的應(yīng)用有 效控制了排斥反應(yīng)的發(fā)生，僅注重效控制了排斥反應(yīng)的發(fā)生，僅注重ABO血型的配合。血型的配合。 肝臟移植時(shí)仍應(yīng)盡可能進(jìn)行肝臟移植時(shí)仍應(yīng)盡可能進(jìn)行HLA配型配型 1. 1. 肝臟移植對(duì)組織配型的要求肝臟移植對(duì)組織配型的要求 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 排斥反應(yīng)發(fā)生幾率：約排斥反應(yīng)發(fā)生幾率：約2/3的肝移

31、植患者出現(xiàn)過排的肝移植患者出現(xiàn)過排 斥反應(yīng)的病理學(xué)改變，也有斥反應(yīng)的病理學(xué)改變，也有8的病例術(shù)后發(fā)生急、的病例術(shù)后發(fā)生急、 慢性排斥反應(yīng)，占肝移植致死原因的慢性排斥反應(yīng)，占肝移植致死原因的10%。 2.肝移植受者的療效檢測(cè)肝移植受者的療效檢測(cè) 組織病理學(xué)特點(diǎn)：肝移植術(shù)后第組織病理學(xué)特點(diǎn)：肝移植術(shù)后第2天，匯管區(qū)出現(xiàn)明天，匯管區(qū)出現(xiàn)明 顯的白細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)和肝竇的白細(xì)胞浸潤(rùn)第顯的白細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)和肝竇的白細(xì)胞浸潤(rùn)第7天天 達(dá)高峰，涉及到達(dá)高峰，涉及到T細(xì)胞、細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性和細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性和 中性粒細(xì)胞。在浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞。在浸潤(rùn)的T細(xì)胞中細(xì)胞中CD8+細(xì)胞高于細(xì)胞高于

32、CD4+ 細(xì)胞，也見有細(xì)胞，也見有IL-2R和和CD25+的活化的活化T細(xì)胞。細(xì)胞。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 三、心臟移植與心肺聯(lián)合移植三、心臟移植與心肺聯(lián)合移植 在世界范圍內(nèi)，約有在世界范圍內(nèi)，約有300多個(gè)心臟中心進(jìn)行心多個(gè)心臟中心進(jìn)行心 臟移植，總例數(shù)已超過臟移植，總例數(shù)已超過7萬，年病例不下萬，年病例不下3000，1 年和年和5年存活率分別為年存活率分別為80%和和70%。心肺聯(lián)合移植。心肺聯(lián)合移植 已成為人們可以接受的治療終末期心肺疾病的一已成為人們可以接受的治療終末期心肺疾病的一 種有效方法。種有效方法。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) ABO血型匹配：避免急性排斥反應(yīng)的首要條

33、件。血型匹配：避免急性排斥反應(yīng)的首要條件。 HLA I、類分子匹配：移植器官長(zhǎng)期存活的重類分子匹配：移植器官長(zhǎng)期存活的重 要因素。要因素。 淋巴細(xì)胞毒交叉配合和群體反應(yīng)性抗體檢測(cè)淋巴細(xì)胞毒交叉配合和群體反應(yīng)性抗體檢測(cè) 1. 心臟和心肺聯(lián)合移植對(duì)組織配型的要求心臟和心肺聯(lián)合移植對(duì)組織配型的要求 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)外周血淋巴細(xì)胞總數(shù) T、B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力 T細(xì)胞亞類百分?jǐn)?shù)及比值細(xì)胞亞類百分?jǐn)?shù)及比值 CTL細(xì)胞毒作用細(xì)胞毒作用 細(xì)胞因子及其受體表達(dá)或轉(zhuǎn)錄水平細(xì)胞因子及其受體表達(dá)或轉(zhuǎn)錄水平 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 NK細(xì)胞數(shù)及其介導(dǎo)的自然殺傷或細(xì)胞數(shù)及其介

34、導(dǎo)的自然殺傷或ADCC效應(yīng)效應(yīng) 粘附分子及其配體在各類細(xì)胞表達(dá)情況粘附分子及其配體在各類細(xì)胞表達(dá)情況 2.心臟及心肺聯(lián)合移植受者的療效檢測(cè)心臟及心肺聯(lián)合移植受者的療效檢測(cè) 免疫監(jiān)測(cè)指標(biāo)免疫監(jiān)測(cè)指標(biāo) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 骨髓和干細(xì)胞移植均系非實(shí)質(zhì)性器官骨髓和干細(xì)胞移植均系非實(shí)質(zhì)性器官 移植，其中骨髓移植開展的較早，而干細(xì)移植，其中骨髓移植開展的較早，而干細(xì) 胞移植正日益受到臨床工作者的重視。胞移植正日益受到臨床工作者的重視。 四、骨髓與其他來源的干細(xì)胞移植四、骨髓與其他來源的干細(xì)胞移植 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 特點(diǎn)：可同時(shí)發(fā)生特點(diǎn)：可同時(shí)發(fā)生HVGR和和GVHR 分類：分類： 自

35、體骨髓移植自體骨髓移植 同基因骨髓移植同基因骨髓移植 同種異基因骨髓移植（多見）同種異基因骨髓移植（多見） 病例較少病例較少 成功率高成功率高 骨髓移植實(shí)際上是造血干細(xì)胞移植，因此，骨骨髓移植實(shí)際上是造血干細(xì)胞移植，因此，骨 髓中造血干細(xì)胞的質(zhì)和量對(duì)移植的成敗致關(guān)重要。髓中造血干細(xì)胞的質(zhì)和量對(duì)移植的成敗致關(guān)重要。 1.1.骨髓移植骨髓移植 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 方法：使用藥物動(dòng)員劑促使造血干細(xì)胞從骨髓釋放到外方法：使用藥物動(dòng)員劑促使造血干細(xì)胞從骨髓釋放到外 周血，從中獲取足量的干細(xì)胞用于移植，可獲得與骨髓移周血，從中獲取足量的干細(xì)胞用于移植，可獲得與骨髓移 植同樣的治療目的植同樣的治療

36、目的 特點(diǎn)：與骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、特點(diǎn)：與骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、 移植后造血恢復(fù)快，移植后造血恢復(fù)快，GVHR發(fā)生率和嚴(yán)重程度不高等優(yōu)點(diǎn)。發(fā)生率和嚴(yán)重程度不高等優(yōu)點(diǎn)。 移植前檢測(cè)：移植前檢測(cè)：HLA和和ABO血型配型、血常規(guī)與骨髓檢驗(yàn)、血型配型、血常規(guī)與骨髓檢驗(yàn)、 性染色體測(cè)定、造血干細(xì)胞鑒定和性染色體測(cè)定、造血干細(xì)胞鑒定和GVHR征象追蹤等征象追蹤等 腫瘤干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，提示人們?cè)谶M(jìn)行干細(xì)胞應(yīng)用時(shí)應(yīng)該注意生物安全性。腫瘤干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，提示人們?cè)谶M(jìn)行干細(xì)胞應(yīng)用時(shí)應(yīng)該注意生物安全性。 2.2.外周血和臍血干細(xì)胞移植外周血和臍血干細(xì)胞移植 第26章移植免疫及

37、其免疫檢測(cè) 第第四節(jié)四節(jié) 排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機(jī)制排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機(jī)制 移植排斥反應(yīng)（移植排斥反應(yīng)（tranlplantation refection）是）是 針對(duì)移植抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致移植物功能針對(duì)移植抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致移植物功能 喪失或受者機(jī)體損害的過程。喪失或受者機(jī)體損害的過程。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 排斥反應(yīng)分類：排斥反應(yīng)分類： 超急性排斥反應(yīng)超急性排斥反應(yīng) 急性排斥反應(yīng)急性排斥反應(yīng) 慢性排斥反應(yīng)慢性排斥反應(yīng) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 預(yù)防措施：預(yù)防措施：ABO血型配型、交叉配型血型配型、交叉配型 一、超急性排斥反應(yīng)一、超急性排斥反應(yīng) 發(fā)生機(jī)制：受者體內(nèi)

38、存有抗供者移植物的預(yù)存抗體，與抗發(fā)生機(jī)制：受者體內(nèi)存有抗供者移植物的預(yù)存抗體，與抗 原結(jié)合，激活補(bǔ)體和凝血系統(tǒng)原結(jié)合，激活補(bǔ)體和凝血系統(tǒng),導(dǎo)致血管內(nèi)凝血。導(dǎo)致血管內(nèi)凝血。 預(yù)存抗體來源預(yù)存抗體來源 ：1、供受者之間、供受者之間ABO 血型不合；血型不合； 2、受者反復(fù)多次輸血、妊娠或既往作過移植、受者反復(fù)多次輸血、妊娠或既往作過移植 處理措施：立即移除移植物處理措施：立即移除移植物 發(fā)生時(shí)間：血循環(huán)恢復(fù)后的數(shù)分鐘至發(fā)生時(shí)間：血循環(huán)恢復(fù)后的數(shù)分鐘至1 12 2天內(nèi)天內(nèi) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 分類：分類： 急性體液性排斥反應(yīng)：抗體激活補(bǔ)體，并有急性體液性排斥反應(yīng)：抗體激活補(bǔ)體，并有CD4+

39、T細(xì)細(xì) 胞參與，導(dǎo)致急性血管炎胞參與，導(dǎo)致急性血管炎 急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)：急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)：CD8+CTL細(xì)胞的細(xì)胞毒作用、細(xì)胞的細(xì)胞毒作用、 CD4+T和巨噬細(xì)胞的作用，導(dǎo)致急性間質(zhì)炎。和巨噬細(xì)胞的作用，導(dǎo)致急性間質(zhì)炎。 二、二、 急性排斥反應(yīng)急性排斥反應(yīng) 發(fā)生時(shí)間：移植后數(shù)周至數(shù)月內(nèi)，是排斥反應(yīng)最常見的類型發(fā)生時(shí)間：移植后數(shù)周至數(shù)月內(nèi)，是排斥反應(yīng)最常見的類型 處理措施：使用免疫抑制劑處理措施：使用免疫抑制劑 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 直接途徑（直接途徑（direct path）:殘留于供者移植物內(nèi)的抗原殘留于供者移植物內(nèi)的抗原 提呈細(xì)胞（過客細(xì)胞）對(duì)受者機(jī)體的免疫系統(tǒng)提供最初的提呈細(xì)

40、胞（過客細(xì)胞）對(duì)受者機(jī)體的免疫系統(tǒng)提供最初的 抗原刺激。這種抗原性刺激，來自移植物中樹突狀細(xì)胞和抗原刺激。這種抗原性刺激，來自移植物中樹突狀細(xì)胞和 單核細(xì)胞等表面富含的單核細(xì)胞等表面富含的HLA-、-類分子類分子 間接途徑間接途徑 （indirect path）:通過受者體內(nèi)的抗原提呈通過受者體內(nèi)的抗原提呈 細(xì)胞對(duì)具有同種異基因細(xì)胞對(duì)具有同種異基因HLA-、-類分子的移植物實(shí)質(zhì)類分子的移植物實(shí)質(zhì) 細(xì)胞的識(shí)別。無論是供者還是受者，其抗原提呈細(xì)胞提供細(xì)胞的識(shí)別。無論是供者還是受者，其抗原提呈細(xì)胞提供 的的IL-1、IL-6等刺激信號(hào)，有助于觸發(fā)淋巴細(xì)胞的活化等刺激信號(hào)，有助于觸發(fā)淋巴細(xì)胞的活化 急

41、性排斥反應(yīng)中的兩條抗原提呈途徑急性排斥反應(yīng)中的兩條抗原提呈途徑 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 同種移植排斥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制同種移植排斥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 三、慢性排斥反應(yīng)三、慢性排斥反應(yīng) 發(fā)生時(shí)間：一般發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年發(fā)生時(shí)間：一般發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年 臨床特征：臨床特征： 對(duì)免疫抑制療法不敏感對(duì)免疫抑制療法不敏感 無特異性治療方法無特異性治療方法 最終需要重新進(jìn)行器官移植最終需要重新進(jìn)行器官移植 病理特點(diǎn)：血管壁細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化和瘢痕形成病理特點(diǎn)：血管壁細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化和瘢痕形成 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)

42、等免疫損傷。細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)等免疫損傷。 B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體活化補(bǔ)體或通過細(xì)胞產(chǎn)生的抗體活化補(bǔ)體或通過ADCC破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞。破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞。 急性排斥反應(yīng)反復(fù)發(fā)作所導(dǎo)致的移植物組織退行性變，此急性排斥反應(yīng)反復(fù)發(fā)作所導(dǎo)致的移植物組織退行性變，此 與細(xì)胞和體液免疫均有關(guān)系。與細(xì)胞和體液免疫均有關(guān)系。 非免疫相關(guān)因素，諸如局部缺血、再灌注損傷、微生物感非免疫相關(guān)因素，諸如局部缺血、再灌注損傷、微生物感 染等。染等。 受者患有高血壓或糖尿病也可促使慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生受者患有高血壓或糖尿病也可促使慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生 引起慢性排斥反應(yīng)的因素引起慢性排斥反應(yīng)的因素 第26章移植免疫及

43、其免疫檢測(cè) 定義：在骨髓移植時(shí)，供者骨髓中的免疫細(xì)胞啟定義：在骨髓移植時(shí)，供者骨髓中的免疫細(xì)胞啟 動(dòng)以受者細(xì)胞為靶抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)，引起攻擊動(dòng)以受者細(xì)胞為靶抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)，引起攻擊 受者的移植物抗宿主反應(yīng)。受者的移植物抗宿主反應(yīng)。GVHD也可見于脾、胸也可見于脾、胸 腺和小腸移植。腺和小腸移植。 四、移植物抗宿主反應(yīng)四、移植物抗宿主反應(yīng) 發(fā)生機(jī)制：發(fā)生機(jī)制：T細(xì)胞起主要作用細(xì)胞起主要作用 IL-2、IL-6、TNF-、IFN-等細(xì)胞因子參與等細(xì)胞因子參與 ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等粘附分子參與等粘附分子參與 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 第五第五節(jié)節(jié) 排斥反應(yīng)的免疫監(jiān)測(cè)

44、排斥反應(yīng)的免疫監(jiān)測(cè) 排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，受者體內(nèi)的免疫應(yīng)答排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，受者體內(nèi)的免疫應(yīng)答 將發(fā)生一系列變化，據(jù)此，檢測(cè)機(jī)體的免疫將發(fā)生一系列變化，據(jù)此，檢測(cè)機(jī)體的免疫 狀態(tài)可幫助診斷或推測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生。狀態(tài)可幫助診斷或推測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 一、體液免疫與細(xì)胞免疫水平檢測(cè)的臨床意義一、體液免疫與細(xì)胞免疫水平檢測(cè)的臨床意義 特異性抗體水平的檢測(cè)特異性抗體水平的檢測(cè) 相關(guān)免疫指標(biāo)：相關(guān)免疫指標(biāo)： ABO等血型和等血型和HLA抗體抗體 抗供者組織細(xì)胞抗體抗供者組織細(xì)胞抗體 血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體 冷凝集素冷凝集素 測(cè)定方法測(cè)定方法: 交叉配型、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒

45、性試驗(yàn)交叉配型、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性試驗(yàn) 血清血清PRA水平水平: 判斷器官移植時(shí)受體對(duì)移植物的敏感程度，基于細(xì)胞毒性試驗(yàn)的判斷器官移植時(shí)受體對(duì)移植物的敏感程度，基于細(xì)胞毒性試驗(yàn)的PRA 測(cè)定，被作為心臟移植前的常規(guī)項(xiàng)目，若測(cè)定，被作為心臟移植前的常規(guī)項(xiàng)目，若PRA超過超過5，則應(yīng)進(jìn)行供者，則應(yīng)進(jìn)行供者 淋巴細(xì)胞與受者血清的交叉配型。淋巴細(xì)胞與受者血清的交叉配型。 （一）體液免疫水平檢測(cè)的臨床意義（一）體液免疫水平檢測(cè)的臨床意義 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 補(bǔ)體水平的檢測(cè)補(bǔ)體水平的檢測(cè) 補(bǔ)體活性與急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)補(bǔ)體活性與急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān) 當(dāng)移植物遭受排斥時(shí)，補(bǔ)體成分的消耗

46、增加當(dāng)移植物遭受排斥時(shí)，補(bǔ)體成分的消耗增加 可采用溶血法或比濁法進(jìn)行檢測(cè)?？刹捎萌苎ɑ虮葷岱ㄟM(jìn)行檢測(cè)。 補(bǔ)體活性的檢測(cè)補(bǔ)體活性的檢測(cè) 補(bǔ)體的裂解產(chǎn)物，如補(bǔ)體的裂解產(chǎn)物，如C3a、C3b等的測(cè)定等的測(cè)定 常用的檢測(cè)方法有免疫電泳、免疫標(biāo)記技術(shù)常用的檢測(cè)方法有免疫電泳、免疫標(biāo)記技術(shù) 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) （二）細(xì)胞免疫水平檢測(cè)的臨床意義（二）細(xì)胞免疫水平檢測(cè)的臨床意義 外周血外周血T細(xì)胞及其亞類的計(jì)數(shù)細(xì)胞及其亞類的計(jì)數(shù) CD4/CD8比值大于比值大于1.20時(shí)時(shí):預(yù)示急性排斥即將發(fā)生，預(yù)示急性排斥即將發(fā)生， CD4/CD8比值小于比值小于1.08時(shí)時(shí):發(fā)生感染的可能性很大。發(fā)生感染的可能

47、性很大。 若進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)急性排斥反應(yīng)和感染具有鑒別診斷若進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)急性排斥反應(yīng)和感染具有鑒別診斷 的意義的意義 NK細(xì)胞活性測(cè)定細(xì)胞活性測(cè)定 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng):刺激細(xì)胞刺激細(xì)胞:滅活的供者的淋巴細(xì)胞滅活的供者的淋巴細(xì)胞 反應(yīng)細(xì)胞反應(yīng)細(xì)胞:受者淋巴細(xì)胞受者淋巴細(xì)胞 結(jié)果顯示的是結(jié)果顯示的是CTL和和NK細(xì)胞共同作用的結(jié)果。細(xì)胞共同作用的結(jié)果。 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)NK細(xì)胞活性則意義更大細(xì)胞活性則意義更大 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 血清細(xì)胞細(xì)胞因子測(cè)定血清細(xì)胞細(xì)胞因子測(cè)定 IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-等細(xì)胞因子的水平均可升高等細(xì)胞因子的水平均可升高 個(gè)

48、體間血清個(gè)體間血清IL-2R的含量差別顯著的含量差別顯著 比較受者接受移植物前后的細(xì)胞因子水平比較受者接受移植物前后的細(xì)胞因子水平 環(huán)孢霉素環(huán)孢霉素A具有腎毒性，血清肌酐值增高，而具有腎毒性，血清肌酐值增高，而IL-2R卻明顯降低卻明顯降低 血清肌酐值和血清肌酐值和IL-2R同時(shí)增高提示急性排斥反應(yīng)的發(fā)生同時(shí)增高提示急性排斥反應(yīng)的發(fā)生 巨細(xì)胞病毒感染時(shí)，巨細(xì)胞病毒感染時(shí)，IL-2R血清含量的升高將更為明顯血清含量的升高將更為明顯 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 粘附分子及其配體的檢測(cè)粘附分子及其配體的檢測(cè) 免疫細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞膜表面粘附分免疫細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞膜表面粘附分 子及

49、其配體的表達(dá)，與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切子及其配體的表達(dá)，與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切 相關(guān)。諸如相關(guān)。諸如ELAM-1、VCAM、ICAM和和HLA分子分子 等等 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 二、尿微量蛋白檢測(cè)的臨床意義二、尿微量蛋白檢測(cè)的臨床意義 尿微量蛋白檢測(cè)意義：尿微量蛋白檢測(cè)意義： 判斷大器官移植、尤其是腎臟移植時(shí)排斥反應(yīng)的發(fā)生判斷大器官移植、尤其是腎臟移植時(shí)排斥反應(yīng)的發(fā)生 檢測(cè)免疫抑制藥的肝腎毒副作用檢測(cè)免疫抑制藥的肝腎毒副作用 1-微球蛋白是能較早反映腎功能損害的指標(biāo)微球蛋白是能較早反映腎功能損害的指標(biāo) 尿尿-1微球蛋白和尿微球蛋白和尿IgG與腎移植受者短期腎功能關(guān)系與腎移植受者短期

50、腎功能關(guān)系 密切密切 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 二、尿微量蛋白檢測(cè)的臨床意義二、尿微量蛋白檢測(cè)的臨床意義 尿微量蛋白種類：尿微量蛋白種類： 血漿蛋白：包括白蛋白（血漿蛋白：包括白蛋白（Aib）、）、IgG、IgA、IgM、輕鏈、輕鏈 （）、）、2-微球蛋白（微球蛋白（2M）、補(bǔ)體）、補(bǔ)體C3、1微球蛋白微球蛋白 （1M）、）、2巨球蛋白（巨球蛋白（2M）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）、游）、游 離血紅蛋白（離血紅蛋白（Hb）、肌紅蛋白（）、肌紅蛋白（Mb）及其他血漿蛋白和）及其他血漿蛋白和 酶酶 非血漿蛋白：腎臟的非血漿蛋白：腎臟的Tamm-Horsfall蛋白（蛋白（THP）、）、S

51、IgA、 腎小球基底膜（腎小球基底膜（GBM）抗原等）抗原等 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 三、急性時(shí)相反應(yīng)物質(zhì)檢測(cè)的臨床意義三、急性時(shí)相反應(yīng)物質(zhì)檢測(cè)的臨床意義 C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)、 IL-1、IL-6、TNF以及以及HSP等炎癥分子，等炎癥分子， 是發(fā)生炎癥反應(yīng)的標(biāo)志性分子，在發(fā)生感染是發(fā)生炎癥反應(yīng)的標(biāo)志性分子，在發(fā)生感染 性疾病和自身免疫性疾病時(shí)均有不同程度的性疾病和自身免疫性疾病時(shí)均有不同程度的 增高。增高。 第26章移植免疫及其免疫檢測(cè) 六、常用免疫抑制藥物濃度及其血藥濃度監(jiān)測(cè)六、常用免疫抑制藥物濃度及其血藥濃度監(jiān)測(cè) 器官移植成功的最大障礙是排斥反應(yīng)。器官移植成功的最大障礙是排斥反應(yīng)。 移植術(shù)后，人工調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)是控制排斥反移植術(shù)后，人工調(diào)節(jié)機(jī)體的免