白細(xì)胞檢驗(yàn)的基本方法

1、第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 白細(xì)胞檢驗(yàn)的基本方法 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 第一節(jié) 白細(xì)胞功能檢驗(yàn) 一、墨汁吞噬試驗(yàn) 二、白細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn) 三、血清溶菌酶活性試驗(yàn) 四、硝基四氮唑藍(lán)還原試驗(yàn) 五、白細(xì)胞趨化性試驗(yàn) 六、吞噬細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 一、墨汁吞噬試驗(yàn) 【原理】 血液中中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞對(duì)細(xì)菌、異物 等具有吞噬作用。在一定量的肝素抗凝血中，加人一定 量的墨汁，經(jīng)37溫育4小時(shí)，涂片染色鏡下觀(guān)察吞噬 細(xì)胞對(duì)墨汁的吞噬情況，并計(jì)算吞噬率及吞噬指數(shù)。 【參考值】 成熟中性粒細(xì)胞吞噬率7415，吞噬 指數(shù) 12660；成熟單核細(xì)

2、胞吞噬率9515，吞噬 指數(shù)313 86。 下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 第一節(jié) 【臨床評(píng)價(jià)】 粒細(xì)胞的吞噬功能僅限于成熟階段，單核細(xì)胞幼稚型和 成熟型都具有吞噬能力。急性單核細(xì)胞白血病M5a為弱陽(yáng) 性，M5b吞噬指數(shù)明顯增高。急性粒細(xì)胞白血病（M2）、 急性淋巴細(xì)胞白血病和急性早幼粒細(xì)胞白血病的原始及幼 稚細(xì)胞多無(wú)吞噬能力，吞噬試驗(yàn)為陰性。急性粒-單核細(xì) 胞白血病呈陽(yáng)性反應(yīng)，對(duì)鑒別有一定價(jià)值。慢性粒細(xì)胞白 血病的成熟中性粒細(xì)胞吞噬能力明顯減低。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) M5骨髓象的墨汁吞噬試驗(yàn) 返回 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回

3、首頁(yè) 二、白細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn) 【原理】 分離白細(xì)胞懸液，將待測(cè)的吞噬細(xì)胞與某種可被吞噬 而又易于查見(jiàn)計(jì)數(shù)的顆粒物質(zhì)如葡萄球菌混合，溫育一 定時(shí)間后，細(xì)菌可被中性粒細(xì)胞吞噬，可在鏡下觀(guān)察中 性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌的情況，根據(jù)吞噬率和吞噬指數(shù)即可 反映吞噬細(xì)胞的吞噬功能。 下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【參考值】 1.吞噬率（）= 吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)200個(gè)（中性 粒細(xì)胞）X 100；正常人為 62 8114 2.吞噬指數(shù) 200各中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)胞總數(shù)200 個(gè)（中性粒細(xì)胞）；正常人為1.060.05 上一頁(yè)下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 吞噬

4、細(xì)胞分大吞噬細(xì)胞和吞噬細(xì)胞兩大類(lèi)。前者包 括組織中的巨噬細(xì)胞和血循環(huán)中的大單核細(xì)胞，后者 主要是中性粒細(xì)胞。本試驗(yàn)可了解中性粒細(xì)胞的吞噬 功能。如吞噬率和吞噬指數(shù)增高，反映中性粒細(xì)胞吞 噬異物功能的增強(qiáng)，常見(jiàn)于細(xì)菌性感染。對(duì)疑有中性 粒細(xì)胞吞噬功能低下者，有幫助確診的價(jià)值。 上一頁(yè) 第一節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 三、血清溶菌酶活性試驗(yàn) 【原理】 溶菌酶能水解革蘭氏陽(yáng)性球菌的細(xì)胞壁乙酰氨基多糖 成分，使細(xì)胞失去細(xì)胞壁而破裂。以對(duì)溶菌酶較敏感的 微球菌懸液為作用底物，根據(jù)微球菌的溶解程度來(lái)檢測(cè) 血清或尿中溶菌酶的活性。 【參考值】 血清（515）mgL 尿（02）mgL（比濁

5、法） 下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 l . 血清溶菌酶含量增高 可見(jiàn)于部分急性髓細(xì)胞白血 病。急性單核細(xì)胞白血病 急性粒-單核細(xì)胞白血病 急性粒細(xì)胞白血病 2血清溶菌酶含量減低 急性淋巴細(xì)胞白血病多數(shù)減 低，少數(shù)正常。慢性粒細(xì)胞白血病血清溶菌酶含量正常， 但急變時(shí)下降。 上一頁(yè) 第一節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 四、硝基四氮唑藍(lán)還原試驗(yàn) 【原理】 硝基四氮唑藍(lán)（NBT）是一種染料，其水溶 性呈淡黃色。當(dāng)被吞入或摻入中性白細(xì)胞后，有產(chǎn)生過(guò) 氧化物酶的作用，可接受葡萄糖中間代謝產(chǎn)物葡萄糖-6- 磷酸在已糖磷酸旁路代謝中NADPH氧化脫下的氫，

6、而被 還原成非水溶性的藍(lán)黑色甲顆粒，呈點(diǎn)狀或片狀沉著在 胞漿內(nèi)有酶活性的部位，可在顯微鏡下觀(guān)察并計(jì)數(shù)陽(yáng)性 細(xì)胞百分比。 【參考值】 正常成人的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10以下。若有 10以上中性粒細(xì)胞能還原NBT，即為NBT還原試驗(yàn)陽(yáng) 性；低于10則為陰性。 下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 1.用于中性粒細(xì)胞吞噬殺菌功能異常的過(guò)篩鑒別和輔助 診斷兒童慢性肉芽腫，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥，髓 過(guò)氧化物酶缺乏癥和 Job綜合征，NBT還原試驗(yàn)陽(yáng)性。 上一頁(yè) 第一節(jié) 2.用于細(xì)菌感染的鑒別 3.器官移植后發(fā)熱的鑒別 4.無(wú)丙種球蛋白血癥、鐮狀細(xì)胞病、惡性營(yíng)養(yǎng)不良等 NBT

7、還原陽(yáng)性細(xì)胞比例可降低。 5新生兒、小兒成骨不全癥、心肌梗死急性期、淋巴 肉瘤、NBT還原陽(yáng)性細(xì)胞比例可增高。 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 五、白細(xì)胞趨化性試驗(yàn) 【原理】 在微孔濾膜的一側(cè)放入粒細(xì)胞，另一側(cè)放入趨化因子 （細(xì)菌毒素、補(bǔ)體 C3a、淋巴因子等），檢測(cè)離體粒細(xì) 胞潛過(guò)濾膜到達(dá)趨化因子這一側(cè)定向移動(dòng)的能力。 【參考值】 趨化指數(shù) 3 .03. 5 下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 趨化性是粒細(xì)胞到達(dá)炎癥局部所必需的。本試驗(yàn)是觀(guān) 察粒細(xì)胞向感染灶運(yùn)動(dòng)能力的一項(xiàng)重要檢測(cè)方法。趨化 功能異?？梢?jiàn)于Wiskot-Aldrich綜合征、幼年型牙

8、周炎、 糖尿病、燒傷、新生兒、慢性皮膚粘膜白色念珠菌病、 高IgE綜合征、先天性魚(yú)鱗病、膜糖蛋白（相對(duì)分子質(zhì)量 11000）缺陷癥、肌動(dòng)蛋白功能不全癥、Chediak-Hisashi 綜合征。 上一頁(yè) 第一節(jié) 下一頁(yè) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) Chediak-Hisashi綜合征 返回 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 六、吞噬細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn) 【原理】 活體巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞在體內(nèi)外均有吞噬 細(xì)菌、異物的功能，在體外將細(xì)胞與異體細(xì)胞或細(xì)菌混 合孵育后，染色觀(guān)測(cè)其吞噬異體細(xì)胞或細(xì)菌的數(shù)量，可 了解其吞噬功能。利用中藥斑螫在人的前臂皮膚上發(fā)皰， 造成非感染性炎癥，誘使單核

9、細(xì)胞游出血管大量聚集于 皰液內(nèi)，抽取皰液則成為天然提純的吞噬細(xì)胞懸液。以 雞紅細(xì)胞為靶細(xì)胞，在體外370C條件下觀(guān)察吞噬細(xì)胞對(duì) 雞紅細(xì)胞的吞噬消化活性，取試管內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行涂片染 色和鏡檢并計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。 下一頁(yè) 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【參考值】 吞噬百分率（62.771.38） 吞噬指數(shù)1.0580.049 【臨床評(píng)價(jià)】 l.吞噬細(xì)胞吞噬功能低下主要見(jiàn)于各種惡性腫瘤，吞噬 率常低于45，手術(shù)切除好轉(zhuǎn)后可以上升，故可作為腫 瘤病人化療、放療、免疫治療療效的參考指標(biāo)。 2.一些免疫功能低下的病人，吞噬率降低，可作為預(yù)測(cè) 感染發(fā)生的概率。并觀(guān)測(cè)療效、判斷預(yù)后的指標(biāo)

10、。 上一頁(yè)返回 第一節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 第二節(jié) 白細(xì)胞代謝及其產(chǎn)物檢驗(yàn) 一、末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶檢測(cè) （一）酶標(biāo)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示法 （二）同位素檢測(cè)法 二、N-堿性磷酸酶檢測(cè) 三、酸性-醋酸酯酶檢測(cè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶（TdT）是一種DNA聚 合酶，它不需要模板的指導(dǎo)，就可以催化細(xì)胞的脫氧核 苷酸，使其轉(zhuǎn)移到低聚核苷酸或多聚核苷酸的3-OH端， 合成單鏈DNA。兔抗牛TdT抗體能和人細(xì)胞的TdT產(chǎn)生交 叉反應(yīng)，可采用免疫熒光技術(shù)或酶標(biāo)免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)， 用辣根過(guò)氧化物酶-抗酶復(fù)合物在細(xì)胞涂片上定位，顯示 細(xì)胞內(nèi)的T

11、dT。 【結(jié)果】 陽(yáng)性反應(yīng)為棕黃色顆粒，定位在細(xì)胞核上。 TdT為早期 T淋巴細(xì)胞的標(biāo)志，在正常情況下不成熟的胸 腺淋巴細(xì)胞出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，正常人外周血細(xì)胞中極少或 無(wú)活性。 下一頁(yè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 95以上急性淋巴細(xì)胞白血病和大約30慢性粒細(xì) 胞白血病急淋變患者外用血細(xì)胞有明顯的TdT活力，病情 緩解后陽(yáng)性率逐漸減弱。在急性淋巴細(xì)胞白血病中，由 于細(xì)胞表面標(biāo)志不同, TdT活性也有變化，T-ALL，早B前 體-ALL細(xì)胞的陽(yáng)性率很高，B-ALL細(xì)胞陰性。當(dāng)外周血 中此酶活性升高，就預(yù)示著血細(xì)胞的惡性變。因此TdT的 測(cè)定對(duì)急性白血病的鑒別和治療都有一

12、定意義。 返回上一頁(yè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 以3H或14C標(biāo)記的脫氧核苷三磷酸等的dXTP為 基質(zhì)，用低聚脫氧核苷（dA）等人工同聚物作為引物， 由于酶反應(yīng)與引物重合，使基質(zhì)不溶于三氯醋酸，可用 玻璃纖維盤(pán)將其吸附，從未被放射性核素標(biāo)記的反應(yīng)基 質(zhì)中分離出反應(yīng)的生成物，計(jì)測(cè)放射活性。除去不加引 物所測(cè)定的內(nèi)源性反應(yīng)所引起的活性之后，可測(cè)算酶的 活性。 【參考值】 正常人骨髓細(xì)胞的活性為dGTP摻入l108個(gè) 細(xì)胞的量為（00.09）mmolL。 下一頁(yè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 1急性淋巴細(xì)胞白血?。˙-ALL除外）可檢出較高

13、的 TdT活性，慢性粒細(xì)胞性白血病急性變時(shí)，約有13的病 例在原始細(xì)胞中能檢出高活性的TdT。 2惡性淋巴瘤中，原始淋巴細(xì)胞性淋巴瘤的淋巴結(jié)細(xì) 胞中能檢出高的TdT活性。 3此酶檢查在研究造血細(xì)胞的分化與白血病的關(guān)系、 白血病細(xì)胞的起源、白血病的治療藥物選擇上都有較重要 的價(jià)值。 上一頁(yè) 第二節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】用P-硝基酚磷酸鹽作為細(xì)胞堿性磷酸酶總活 性檢測(cè)的基質(zhì)，在反應(yīng)中生成P-硝基酚，測(cè)量400nm時(shí)的 吸光密度，借以檢測(cè)出細(xì)胞A-Pase的總活性。此外，可 通過(guò)CASP作為基質(zhì)來(lái)測(cè)定N-堿性磷酸酶的活性。通過(guò)酶 反應(yīng)，生成半胱胺，這是用二硝基苯置換5

14、-硫-硝基酚酸； 檢測(cè)412nm的吸光密度，借以檢測(cè)N-APase的總活性。在 基質(zhì)液中加人用N-丁醇：水（1：3）的混合液提取粗酶 液，室溫下放置60分鐘，記錄酶反應(yīng)，求出酶反應(yīng)的速 度。一般情況下，N-APase的P-NPP與CASP的水解速度 之比（VP-NPPVCASP）在1.12. 0的范圍內(nèi)，平均為 18。因此，N-APase的活性可用 VP-NPP-1.8VCASP求 出，再?gòu)腣P-NPP計(jì)算 N-APase的百分率。 下一頁(yè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【參考值】正常人的粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中不能檢出N- APase的活性。 【臨床評(píng)價(jià)】在A(yíng)ML及CML慢性期、C

15、ML急性變的原 粒細(xì)胞中，均不能檢出N-APase。但在A(yíng)LL和CML急淋變 時(shí)，原始淋巴細(xì)胞能檢出N-APase，且不僅在非T-ALL、 非B-ALL的幼稚細(xì)胞，就是在T-ALL及具有B細(xì)胞標(biāo)記物 的原始細(xì)胞中亦可檢出。因此，認(rèn)為此酶是從未成熟的 白血病性原始淋巴細(xì)胞向T細(xì)胞、B細(xì)胞分化過(guò)程中，未 成熟的淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞標(biāo)志酶。此外，在鼻咽癌、喉癌 等被認(rèn)為是病毒感染的腫瘤細(xì)胞中，以及與EB病毒有關(guān) 的傳染性單核細(xì)胞增多癥、Burkitt淋巴瘤等，均可檢出 此酶。 上一頁(yè) 第二節(jié) 下一頁(yè) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) T細(xì)胞白血病的血象 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【

16、原 理 】 血 細(xì) 胞 中 的 酸 性 - 醋 酸 酯 酶 （ANAE），在弱酸性（pH5.8）條件下能將 基質(zhì)液中的 -醋酸萘酯水解，產(chǎn)生 -萘酚。產(chǎn) 生的 -萘酯酚再與六偶氮副品紅偶聯(lián)形成不溶 性暗紅色偶氮副品紅萘酚沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi) 酶活性處，呈現(xiàn)單一的或散在的紅色點(diǎn)塊狀或 顆粒狀。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【結(jié)果】 酸性-醋酸酯酶（ANAE）主要分布在T細(xì)胞 和單核細(xì)胞內(nèi)；粒細(xì)胞、B細(xì)胞、紅系細(xì)胞、巨 核細(xì)胞和血小板中含量較少。 T細(xì)胞為ANAE陽(yáng)性細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)有大小不等、 數(shù)量不一的紫紅色顆?；虬邏K；B細(xì)胞為ANAE 陰性細(xì)胞，胞質(zhì)呈黃綠色，胞質(zhì)內(nèi)

17、無(wú)紅色斑塊； 單核細(xì)胞為ANAE陽(yáng)性，其胞質(zhì)內(nèi)有細(xì)小紅褐色 顆粒斑塊。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第二節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 酸性磷酸酶染色 上一頁(yè)下一頁(yè) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 l.有助于區(qū)分T細(xì)胞和B細(xì)胞ANAE染色在T細(xì) 胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)點(diǎn)狀顆?；虼髩K局限陽(yáng)性反應(yīng)中細(xì) 胞大多數(shù)為陰性反應(yīng)，偶見(jiàn)稀疏彌散細(xì)小顆粒。 2.鑒別急性白血病類(lèi)型 急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞 為點(diǎn)狀或塊狀陽(yáng)性，局限分布；急性粒細(xì)胞白血 病細(xì)胞ANAE染色大部分呈陰性或弱陽(yáng)性反應(yīng)， 顆粒增多的早幼粒白血病細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)較強(qiáng)，為 彌散性分布；急單呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，胞質(zhì)為均勻一 致的彌散樣淡紅色或深紅色，

18、無(wú)點(diǎn)狀顆粒。 上一頁(yè) 第二節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 第三節(jié) 白細(xì)胞動(dòng)力學(xué)檢驗(yàn) 一、氚標(biāo)記脫氧胸苷測(cè)定 二、潑尼松刺激試驗(yàn) 三、腎上腺素激發(fā)試驗(yàn) 四、二異丙酯氟磷酸鹽標(biāo)記測(cè)定 五、流式細(xì)胞儀檢測(cè)DNA合成及含量 六、粒細(xì)胞抗體檢測(cè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) （一）熒光免疫法檢測(cè) 【原理】 受檢血清中的抗體和粒細(xì)胞結(jié)合后，加標(biāo)記 熒光物質(zhì)的羊抗人 IgG血清，可使粒細(xì)胞膜顯示熒光，然 后在熒光顯微鏡下觀(guān)察陽(yáng)性比率和熒光強(qiáng)度。 【結(jié)果】 陽(yáng)性反應(yīng)表示受檢血清中存在粒細(xì)胞抗體。 【臨床評(píng)價(jià)】 本法敏感性較好，特異性強(qiáng)，臨床上常 作為確診免疫性粒細(xì)胞減少癥的方法

19、。 下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) （二）化學(xué)發(fā)光法檢測(cè) 【原理】 用化學(xué)發(fā)光技術(shù)測(cè)定單個(gè)核細(xì)胞與抗體被覆 的粒細(xì)胞相互作用產(chǎn)生的代謝反應(yīng)，間接測(cè)定抗粒細(xì)胞 抗體。 【結(jié)果】 用發(fā)光儀測(cè)定增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用發(fā)光 指數(shù)表示結(jié)果。 【臨床評(píng)價(jià)】 本法比間接熒光免疫法更靈敏，可用于 確診免疫性粒細(xì)胞減少癥。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) （三）流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè) 【原理】 采用正常人“O”型抗凝血分離出單核細(xì)胞和 粒細(xì)胞，經(jīng)1多聚甲醛固定，二者再等量混合制成細(xì)胞 懸液，加受檢血清孵育，再加結(jié)合異硫氰酸熒光素（FITC） 和抗人F（ab）2IgG，

20、采用流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行分析來(lái)檢 測(cè)同種反應(yīng)性粒細(xì)胞抗體。 【結(jié)果】 熒光強(qiáng)度與粒細(xì)胞抗體量呈線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù) 熒光強(qiáng)度的大小即可得出粒細(xì)胞抗體的量。 【臨床評(píng)價(jià)】 本法不但可對(duì)粒細(xì)胞抗體作半定量測(cè)定， 還可以對(duì)抗體類(lèi)型進(jìn)行分析，以確定是否存在免疫復(fù)合物。 上一頁(yè)返回 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 分離的粒細(xì)胞并在培養(yǎng)過(guò)程中加入 PHA或特異性抗原刺激后，進(jìn)人有絲分裂期，此 時(shí)加入3H-TdR，可被細(xì)胞攝入?yún)⑴cDNA合成，其 摻入量與DNA合成的量以及增殖細(xì)胞數(shù)成正比， 用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定3H-TdR的摻入量，即可判 定粒細(xì)胞的增殖水平。 【參考值】 SI2 下一頁(yè) 第

21、三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】在正常情況下，體內(nèi)粒細(xì)胞在增殖池 （骨髓）、循環(huán)池（血液）及邊緣池（組織）之間處于 平衡狀態(tài)，末梢血中成熟粒細(xì)胞數(shù)為（2.55. 5） 109L。在罹患血液等病理情況下，這種平衡狀態(tài)受到 不同程度的破壞，即可能出現(xiàn)異常。 研究白血病細(xì)胞動(dòng)力學(xué)時(shí)給急性白血病患者連續(xù)靜脈 輸人3H-TdR，810天后觀(guān)察到仍有810的白血病 細(xì)胞未被標(biāo)記，這一小部分白血病細(xì)胞增殖相當(dāng)緩慢。 說(shuō)明白血病細(xì)胞是一群非同步化增殖的細(xì)胞。 上一頁(yè) 第三節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 正常時(shí)骨髓中粒細(xì)胞儲(chǔ)備量大于外周血中 的1015倍，潑尼松

22、具有刺激骨髓中性粒細(xì)胞由儲(chǔ)備池 向外周血釋放的功能。如果受檢者骨髓的粒細(xì)胞儲(chǔ)備池 正常，服用潑尼松后經(jīng)過(guò)一定時(shí)間儲(chǔ)備池大量釋放至血 流而使外周血中性粒細(xì)胞的絕對(duì)值明顯增高。反之，則 無(wú)此作用或作用不明顯?？砷g接測(cè)定骨髓粒細(xì)胞池粒細(xì) 胞的儲(chǔ)備功能。 【參考值】 服藥后中性粒細(xì)胞最高絕對(duì)值20109 L（服藥后5小時(shí)為中性粒細(xì)胞上升到高峰的時(shí)間） 下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 潑尼松試驗(yàn)可反應(yīng)骨髓中性粒細(xì)胞儲(chǔ)備池的容 量。中性粒細(xì)胞減少患者，如服用潑尼松后外周 血中性粒細(xì)胞最高絕對(duì)值20109L，表明 患者中性粒細(xì)胞的儲(chǔ)備池正常，粒細(xì)胞減少可能 是由于骨髓釋放

23、障礙或其他因素所致。這對(duì)于某 些骨髓受損引起粒細(xì)胞減少的輕微病例有一定參 考及診斷價(jià)值。反之，則反映儲(chǔ)備不足。 上一頁(yè) 第三節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 白細(xì)胞（主要是指中性粒細(xì)胞）進(jìn)入血流后， 約半數(shù)進(jìn)入循環(huán)池，半數(shù)粘附于血管壁成為邊緣 池的組成成分。此部分白細(xì)胞在外周血白細(xì)胞計(jì) 數(shù)中不能得到反映。注射腎上腺素后血管收縮， 粘附于血管壁上的白細(xì)胞脫落，從邊緣池進(jìn)入循 環(huán)池，致外用血白細(xì)胞數(shù)增高，其作用持續(xù)時(shí)間 為2030分鐘。分別在注射前和注射后20分鐘 取血，計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞數(shù)。 下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【參考值】 粒細(xì)胞上升值一般低

24、于（1.52） 109L 【臨床意義】 白細(xì)胞減少者，注射腎上腺素 后，如外周血白細(xì)胞能較注射前增加 1倍以上或 粒細(xì)胞上升值超過(guò)（1. 52）109L，表示 患者白細(xì)胞在血管壁粘附增多，提示病人粒細(xì)胞 分布異常，即邊緣池粒細(xì)胞增多，如無(wú)牌大，可 考慮為“假性”粒細(xì)胞減少。如果增高低于上述 值，則應(yīng)進(jìn)行其他檢查，進(jìn)一步確定白細(xì)胞減少 的病因。 上一頁(yè) 第三節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 二異丙酯氟磷酸鹽標(biāo)記（DF32P）是 利用含有放射性磷的二異丙酯氟磷酸作為膽堿酯 酶的抑制劑，與細(xì)胞上的膽堿酯酶結(jié)合，即使細(xì) 胞崩解，也不再與其他細(xì)胞相結(jié)合。故對(duì)測(cè)定血 液循環(huán)中細(xì)胞池

25、的大?。╬ool size）以及滯留的 時(shí)間均非常方便。用于粒細(xì)胞動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，一 旦采血制成離體標(biāo)記物后，即作靜脈注射。經(jīng)過(guò) 一段時(shí)間再次采血。分離粒細(xì)胞，通過(guò)追蹤觀(guān)察 其放射活性的變化，可測(cè)知外周血中有關(guān)粒細(xì)胞 地的參數(shù)。 下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【參考值】 l.粒細(xì)胞總數(shù)的測(cè)定 標(biāo)記粒細(xì)胞半衰期間（T1/2）：410小時(shí)； 血中滯留時(shí)間：1014小時(shí)。 全血粒細(xì)胞池（TBGP）：（3570）x 107/kg 循環(huán)粒細(xì)胞池（CGP）：（2030） xl07kg 邊緣粒細(xì)胞地（MGP）：（l540）x 107/kg 粒細(xì)胞周轉(zhuǎn)率（GTR）：（60160）x107

26、（kgd） 上一頁(yè)下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 2單核細(xì)胞總數(shù)的測(cè)定 標(biāo)記單核細(xì)胞半衰期：4 .510. 0小時(shí) 全血單核細(xì)胞池（TBMP）：（3912. 7）x 107kg 循環(huán)單核細(xì)胞池（CMP）：（l027）x 107kg 邊緣單核細(xì)胞池（MMp）：（2411.7） 107k。 單核細(xì)胞周轉(zhuǎn)率（MTR）：（72336）x 107kg 【臨床評(píng)價(jià)】在慢性白血病、真性紅細(xì)胞增多癥和骨髓纖 維化時(shí)，TBGP及 GTR顯著增加。粒細(xì)胞半壽期明顯延長(zhǎng)。 急性粒細(xì)胞白血病時(shí)有輕微的延長(zhǎng)，而再生障礙性貧血時(shí) 各指數(shù)測(cè)定值均偏低。 上一頁(yè) 第三節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié)

27、 返回首頁(yè) 流式細(xì)胞儀（FCM）是對(duì)單細(xì)胞快速定量分析和分選 的新技術(shù)。當(dāng)被測(cè)細(xì)胞被制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異性熒 光染料染色后加入樣品管中，在氣體壓力推動(dòng)下，流經(jīng) 100m的孔道時(shí)，細(xì)胞排成單列，逐個(gè)勻速通過(guò)激光束， 被熒光染料染色的細(xì)胞受到強(qiáng)烈的激光照射后發(fā)出熒光， 同時(shí)產(chǎn)生散射光。熒光被轉(zhuǎn)化為電子信息，在多道脈沖 高度分析儀的熒光屏上，以一維組方圖或二維點(diǎn)陣圖及 數(shù)據(jù)表或三維圖形顯示，計(jì)算機(jī)快速而準(zhǔn)確地將所測(cè)數(shù) 據(jù)計(jì)算出來(lái)，結(jié)合多參數(shù)分析，從而實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞的定量 分析。 下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) （一）DNA合成的檢測(cè) 【原理】 與氚-胸腺嘧啶標(biāo)記法的原理一樣，用5

28、-溴 脫 氧尿嘧啶摻入 S期細(xì)胞的 DNA，然后用抗 5-BrdU抗原的 特異性抗體，通過(guò)免疫熒光技術(shù)，用 FCM準(zhǔn)確測(cè)定DNA 合成速率。 【結(jié)果】 快速提供有關(guān)細(xì)胞周期各時(shí)相分布的動(dòng)態(tài)參數(shù)， 間接了解DNA的合成情況。 【臨床評(píng)價(jià)】 可直接用于白血病病人體內(nèi)細(xì)胞增殖的動(dòng) 態(tài)研究，據(jù)此按化療藥物對(duì)細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的干擾理論設(shè)計(jì)最 佳治療方案，靜止期腫瘤細(xì)胞對(duì)化療不敏感而增殖期 （SG2M）敏感，可將GO期細(xì)胞分化誘導(dǎo)進(jìn)人 SG2M期， 再予以細(xì)胞殺傷藥物，以達(dá)到最佳殺傷瘤細(xì)胞的效果。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) （二）DNA含量的檢測(cè) 【原理】 碘化丙啶（ProPi

29、diumiodide，PI）熒光染料 可嵌入到雙鏈DNA和RNA的堿基對(duì)中與之結(jié)合。用PI染 DNA后能在指定波長(zhǎng)的光波激發(fā)下產(chǎn)生紅色熒光，利用 FCM可將細(xì)胞按不同的熒光強(qiáng)度即DNA含量分類(lèi)并繪出 DNA直方圖。細(xì)胞在增殖周期的不同階段，其DNA含量 是不同，從DNA直方圖中可以得出細(xì)胞周期不同階段的 細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【結(jié)果】 l . 細(xì)胞DNA含量 V1細(xì)胞中 DNA含量多少用 DNA指 數(shù)（DI）來(lái)表示。根據(jù)DI值來(lái)判斷細(xì)胞DNA倍體的方法 是：以正常同源組織細(xì)胞作為樣品2CDNA含量細(xì)胞的內(nèi) 參標(biāo)準(zhǔn)。DNA倍體的判斷標(biāo)準(zhǔn)為DI0

30、.12CV。二倍體： DI1.0 2CV（直方圖上僅1個(gè)G0G1峰）。非整倍體 （aneuplid，AN）：DI值0.91，1.10。 DNA指數(shù)（DI）計(jì)算公式: 上一頁(yè)下一頁(yè) 樣品G0G1期DNA量平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)二倍體DNA量平均數(shù) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 2.細(xì)胞周期各時(shí)相細(xì)胞比率包括：G0G1期、5期和 G2M期，計(jì)算各時(shí)相細(xì)胞的百分比。其中 S期細(xì)胞百分 比也叫 SPF（S-Phase raction）。 細(xì)胞增殖指數(shù)（proliferous index，PI）（） 上一頁(yè)下一頁(yè) SPF（%）S（G0G1SG2M）x100 （SG2M）（G0G1SG2M）x 100

31、 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【臨床評(píng)價(jià)】 1. DNA非整倍體細(xì)胞是腫瘤的特異性標(biāo)志，從FCM的 DNA圖形分析，可得知血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞DNA的相對(duì)含 量，從而了解白血病細(xì)胞的信體水平及增殖活動(dòng)。 2 .以縱坐標(biāo)表示細(xì)胞數(shù)，橫坐標(biāo)表示DNA相對(duì)含量， 可繪出DNA不同含量血細(xì)胞分布曲線(xiàn)，得到G期、S期和 G2M期細(xì)胞的百分比，尤其對(duì)白血病病人血細(xì)胞動(dòng)力 學(xué)的了解更為重要。急性白血病患者在來(lái)經(jīng)治療時(shí)其骨 髓細(xì)胞（大多數(shù)為白血病細(xì)胞）S（S期細(xì)胞DNA的百 分含量）明顯低于正常骨髓。 上一頁(yè)下一頁(yè) 第三節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 3.用流式細(xì)胞儀對(duì)白血病化療后監(jiān)測(cè)

32、藥效是目前較為 靈敏的方法，對(duì)比化療后的細(xì)胞內(nèi)DNA含量表化，可迅 速得出是否敏感的結(jié)論，從而指導(dǎo)臨床對(duì)初治或復(fù)發(fā)白 血病病人選用和及時(shí)更換化療方案。 4.白血病病人外周血白血病細(xì)胞多處于 G0或 G1期。S 期細(xì)胞百分率（S）高者對(duì)常用周期特異性藥物較為 敏感，患者的完全緩解率高，但容易復(fù)發(fā)。S低者對(duì) 化療不敏感，但一旦緩解，不易復(fù)發(fā)。根據(jù)增殖期細(xì)胞 對(duì)周期特異藥物比靜止期細(xì)胞為敏感，應(yīng)用G-CSF來(lái)復(fù) 蘇G0期白血病細(xì)胞，有利于提高化療效果。 上一頁(yè) 第三節(jié) 返回 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 第四節(jié) 白細(xì)胞免疫標(biāo)記檢測(cè) 一、熒光顯微鏡計(jì)數(shù)檢測(cè) 二、流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)檢測(cè) 三、堿性磷酸

33、酶-抗堿性磷 酸酶橋聯(lián)酶標(biāo)法檢測(cè) 四、生物素-親合素酶標(biāo)法檢測(cè) 第四節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【原理】 將抗體標(biāo)記上熒光素制成的熒光抗體，在一 定條件下與細(xì)胞表面的分化抗原簇相互作用，洗去游離 的熒光抗體后，結(jié)合于細(xì)胞表面的熒光素在一定波長(zhǎng)激 發(fā)光照射下，發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，借此用熒光顯微鏡 就可檢測(cè)到與熒光抗體特異結(jié)合的表面標(biāo)志。以鼠抗羊 IgG作陰性對(duì)照，標(biāo)本中有明顯熒光現(xiàn)象就證明有相應(yīng)的 抗原存在，借此對(duì)標(biāo)本中的抗原作鑒定和定位。根據(jù)標(biāo) 記物和反應(yīng)程序的不同分為：直接熒光法，間接熒光法 和雙標(biāo)記法， 下一頁(yè) 第四節(jié) 第一節(jié) 第二節(jié)第三節(jié)第四節(jié) 返回首頁(yè) 【結(jié)果】 觀(guān)察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度一般用號(hào) 表示，表示無(wú)熒光；為極弱的可疑熒光；為 熒光較弱