原料藥中雜質(zhì)的控制與案例分析中國(guó)藥品生物制品檢定所

1、抗生素室 第一次飛躍第一次飛躍 第二次飛躍第二次飛躍 抗生素室 頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖色譜圖 1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A， 4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢 泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC- CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙?；^孢泊肟 酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B 抗生素室 雜質(zhì)譜控制的整體解決方案雜質(zhì)譜控制的整體解決方案 抗生素室 uQ3A：

2、 新原料藥中的雜質(zhì)新原料藥中的雜質(zhì) uQ3B： 新藥制劑中的雜質(zhì)新藥制劑中的雜質(zhì) uQ3C： 殘留溶劑殘留溶劑 化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 （以原料藥的響應(yīng)因子計(jì)） 抗生素室 抗生素室 抗生素室 N S O HH O H N N S N O H2N CH3 O CH3 O CO2Na 抗生素室 HN O R1 N S O COOH R2 HN O R1 HN S O COOH R2 HN O R1 H2 C HN S R2 COOH OH N S COOH R2 O R1CONH N S COOH R2 O R1CONH

3、 H H B: 抗生素室 N S COOH R2 O R1CONH HH N S COOH R2 O R1CONH H N S COOH R2 R1CONH H N S COOH R2 O R1CONH HH O- 抗生素室 HNC O HC NH2 R1 N S O COOH R2 R1 N H H N O O 分子結(jié)構(gòu)中7位碳側(cè)鏈上有-氨基的頭孢菌素，如頭孢氨芐、 頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢來(lái)星、頭孢克羅等藥物，還 可發(fā)生分子內(nèi)親核反應(yīng)，生成哌嗪二酮衍生物的降解物 抗生素室 N S COOH R NH NH 2 O O 6NH NH 2 O 6 O H N 6 NHO 具有苯苷氨酸側(cè)鏈的-

4、內(nèi)酰胺抗生素可以降解為2-羥 基-3-苯基吡嗪衍生物，這種化合物具有熒光特性，頭 孢克洛、氯碳頭孢均會(huì)產(chǎn)生這種降解產(chǎn)物。 抗生素室 HN O R1 N S O COOH CH2OCOCH 3 HN O R1 N S O COOH CH2OH HN O R1 N S O CH2 O O 當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時(shí)，易脫去乙?；?，形成 脫乙?；到馕铩Ｔ诩訜?、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分 子內(nèi)部環(huán)和，此時(shí)生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。 抗生素室 頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢它啶、頭孢地尼等有甲氧亞 氨鍵的頭孢菌素均會(huì)產(chǎn)生E-異構(gòu)體，多數(shù)在光照的情況 易發(fā)生此類反應(yīng)。 抗生素室 HN O R1 N S

5、 O COOH CH2OCOCH3 HN O R1 N S O COOH CH2OH HN O R1 N S O CH2 O O 當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時(shí)，易脫去乙?；?，形成 脫乙?；到馕?。在加熱、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn) 行分子內(nèi)部環(huán)和，此時(shí)生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。 1. 雜質(zhì)雜質(zhì)B、雜質(zhì)、雜質(zhì)E可以源于頭孢噻肟的降解可以源于頭孢噻肟的降解 抗生素室 抗生素室 抗生素室 2. 雜質(zhì)雜質(zhì)E可以源于起始原料可以源于起始原料 3. 雜質(zhì)雜質(zhì)E可以源于合成中的可以源于合成中的 任一中間過程任一中間過程 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 加替沙星及其十種雜質(zhì)對(duì)照品的色譜圖加

6、替沙星及其十種雜質(zhì)對(duì)照品的色譜圖 加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析 色譜條件：以三乙胺磷酸溶液 三乙胺溶液（1100），用磷酸調(diào)節(jié)pH值 至4.30.05-乙腈（87：13）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm，柱溫為 30，流速為每分鐘1ml。 色譜柱:SHISEIDO CAPCELL PAK C18 抗生素室 加替沙星及加替沙星及10個(gè)已知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式個(gè)已知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式 抗生素室 主要雜質(zhì)是雜質(zhì)主要雜質(zhì)是雜質(zhì)3和雜質(zhì)和雜質(zhì)8 生產(chǎn)工藝雜質(zhì)生產(chǎn)工藝雜質(zhì) 原料的雜質(zhì)譜分析原料的雜質(zhì)譜分析 抗生素室 光照穩(wěn)定性評(píng)價(jià)光照穩(wěn)定性評(píng)價(jià) 比較光照前后各雜質(zhì)含量的變化比較光照前后各雜質(zhì)含量的變化

7、 按隨機(jī)取按隨機(jī)取19批樣品批樣品 UV燈下照射燈下照射10天天 雜質(zhì)雜質(zhì)2、雜質(zhì)雜質(zhì)4是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì)是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì) 大多數(shù)喹喏酮類抗生素對(duì)光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？大多數(shù)喹喏酮類抗生素對(duì)光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？ 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 如何驗(yàn)證？如何驗(yàn)證？ 抗生素室 JCPS，2010，19（4）：285292 抗生素室 抗生素室 抗生素室 藥物分析雜志，待發(fā)表 抗生素室 抗生素室 抗生素室 JPBA，2009, 49(5): 11921202 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 JPBA，2008, 46(

8、3):431-441 抗生素室 藥物雜質(zhì)的可能來(lái)源藥物雜質(zhì)的可能來(lái)源 抗生素室 抗生素室 1.原料：原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素 F、 阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F 2.中間體：中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、 紅霉素 C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 3.副產(chǎn)物：副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、 氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇 霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）-

9、 3,4-去氫阿奇霉素、 O-甲苯 磺酰基紅霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去 二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮 基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯 4.降解產(chǎn)物：降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮 阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種種 抗生素室 模擬色譜圖色譜圖 實(shí)際色譜圖實(shí)際色譜圖 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 樣品樣品 對(duì)照對(duì)照 Kav=0 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室

10、 頭孢地嗪鈉頭孢地嗪鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 TSKgel G2000HHR 頭孢丙烯頭孢丙烯 TSKgel G2500PWXL 法羅培南法羅培南 TSKgel G2000HHR TSKgel G2000SWXL TSKgel G2000SWXL 抗生素室 Sephadex G10 與TSK柱比較 61 G10柱結(jié)果與TSK柱 結(jié)果的相關(guān)性 13.700 14.678 15.546 17.334 20.110 22.260 26.973 AU 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 分鐘 0.002.004.006.008.0010.0012.0014.

11、0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.00 Sephadex G10 TSK 聚合物 其他聚合物 二聚物 抗生素室 抗生素室 頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖色譜圖 1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A， 4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢 泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC- CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙?；^孢泊肟 酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體

12、A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B 抗生素室 中國(guó)新藥雜志 ,2008,17(24):23 抗生素室 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2009，44（23）：1821 抗生素室 抗生素室 Sephadex G-10系統(tǒng)系統(tǒng) TSK-Gel G2000swxl系統(tǒng)系統(tǒng) 柱切換技術(shù)柱切換技術(shù) 0.8ml/min TSK系統(tǒng)系統(tǒng) 0.5ml/min C18系統(tǒng)系統(tǒng) 抗生素室 抗生素室 抗生素室 批次及批量批次及批量 生產(chǎn)日期生產(chǎn)日期 生產(chǎn)地點(diǎn)生產(chǎn)地點(diǎn) 生產(chǎn)工藝生產(chǎn)工藝 產(chǎn)品中單個(gè)雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量產(chǎn)品中單個(gè)雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量 批次用途批次用途 使用的分析方法使用的分析方法 抗生素室 抗生素室 抗生

13、素室 抗生素室 利用色譜相關(guān)光譜法追蹤色利用色譜相關(guān)光譜法追蹤色 譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置 抗生素室 抗生素室 抗生素室 u根據(jù)雜質(zhì)來(lái)源，產(chǎn)生條件，結(jié)合根據(jù)雜質(zhì)來(lái)源，產(chǎn)生條件，結(jié)合母核母核 的質(zhì)譜裂解規(guī)律的質(zhì)譜裂解規(guī)律推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu) 抗生素室 頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一 般規(guī)律般規(guī)律 青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一 般規(guī)律般規(guī)律 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 ACA，535：89-99, 2005 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室

14、抗生素室 抗生素室 Figure 4. Effects of MMTD and TDA on the zebrafish embryonic development (3-dpf). A- D: The embryos treated with MMTD at 10 g/ml (A), 100 g/ml (B), 300 g/ml (C) and at 500 g/ml (D). E-H: the embryos treated with TDA at 100 g/ml (E,F), 300 g/ml (G) and at 500 g/ml (H); I,J: normal embryos a

15、s controls at a lateral view (I) and a dorsal view (J). Hemorrhage of brain areas is indicated by white arrow, opaque yolk and YE by red arrow, deficient eyes are by slight- blue arrows, colorless and cord-like hearts and enlarged pericardial sacs by yellow arrows, ripple-like notochords by orange a

16、rrows. 抗生素室 抗生素室 抗生素室 (A) 5dpf 幼體頭部側(cè)面，示 眼窩 上 (SO1 and SO2), 耳囊(O1) 和枕部 的 (OC1)的神經(jīng)丘；(B) O1神經(jīng)丘毛 細(xì)胞雙染色FM 1-43(紅) 和 Yo- Pro-1 (綠). (C) FM 1-43染色； (D). Yo-Pro-1 染色。 Scale bar = 50 um (A); 10 um (BD). Hearing Research 213 (2006) 2533 抗生素室 藥物耳毒性檢測(cè)藥物耳毒性檢測(cè) 利用一種特殊染料對(duì)斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測(cè)毛 細(xì)胞的存活狀態(tài)，來(lái)判斷檢測(cè)物的耳毒性。 下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色 圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。 給藥后給藥后 系統(tǒng)對(duì)照組系統(tǒng)對(duì)照組 （正常幼體）（正常幼體） 抗生素室 抗生素室 抗生素室 對(duì)結(jié)構(gòu)已知但含量大對(duì)結(jié)構(gòu)已知但含量大 于界定限的雜質(zhì)；于界定限的雜質(zhì)； 結(jié)構(gòu)未知且含量大于結(jié)構(gòu)未知且含量大于 鑒別限的雜質(zhì)，鑒別限的雜質(zhì)， 如對(duì)雜質(zhì)的安全性不確如對(duì)雜質(zhì)的安全性不