專題2課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)--黎麗霞

1、預(yù)習(xí)目標(biāo)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(一)知識與技能利用選擇培養(yǎng)基分離細(xì)菌，運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計(jì)數(shù) 分析研究思路的形成過程，找出共性和差異性(三)情感、態(tài)度與價(jià)值觀形成無菌不在的概念，養(yǎng)成講究衛(wèi)生的習(xí)慣預(yù)習(xí)重點(diǎn)對土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制預(yù)習(xí)難點(diǎn)對分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)一、教材導(dǎo)讀 理論基礎(chǔ)1 .篩選菌株(1) 實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于 生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)或其他微生物生長。(2)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許 _種類的微生物生長，同時(shí) _和_其他種類微 生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。(3 )配

2、制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng) 微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng) ;的微生物加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。2 .統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1 )測定微生物數(shù)量的常用方法有 和。(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的 足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測定微生物數(shù)量的常用方法還有 直接計(jì)數(shù)。3 設(shè)置對照設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中 對實(shí)

3、驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的。例如為了排除培養(yǎng)基是否被雜菌污染了，需以培養(yǎng) 的培養(yǎng)基作為空白對照。二、疑問存檔請你將預(yù)習(xí)中未解決的問題和有疑問的問題寫下來，等待課堂上與老師和同學(xué)共同探究解決。疑惑點(diǎn)疑惑內(nèi)容、預(yù)習(xí)自測1.下列微生物的產(chǎn)物中沒有菌種特異性的一組是A氨基酸、核苷酸、多糖、色素B. 多糖、脂類、維生素、抗生素、氨基酸C. 核苷酸、多糖、維生素、毒素、抗生素D. 核苷酸、維生素、多糖、脂類、氨基酸2 微生物代謝的人工控制是指控制發(fā)酵時(shí)的溫度包括A、B、C三項(xiàng)種內(nèi)斗爭A. 改變微生物的遺傳特性B.C調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的 pH,氧氣通入量D.3. 在微生物群體生長規(guī)律的測定中，不可能發(fā)生的是A

4、. 繁殖 B.生存斗爭C.種間斗爭D.4. 與調(diào)整期長短有關(guān)的因素中，可縮短調(diào)整期的一組是用與菌種相同的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基穩(wěn)定期獲得的菌種對數(shù)期獲得的菌種接種時(shí)間提前接種量加大接種量減小接種種類加大AB 、C 、D 、5 微生物群體生長善的測定方法可以是測定樣品的細(xì)胞數(shù)目測定培養(yǎng)基中細(xì)菌的體積測定初級代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量A. B. 測定次級代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量測定樣品的細(xì)胞重量C. D. 專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一、課堂互動(dòng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)關(guān)于土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：1 取樣：從肥沃、濕潤的土壤中取樣。應(yīng)先 3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先

5、準(zhǔn)備好的 _ 中。2 .制備：準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為 ,用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。3 .微生物的與觀察將10g 土樣加入盛有 90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(體積為250 mL)，充分搖勻，吸取上清 液，轉(zhuǎn)移至盛有 的生理鹽水的無菌大試管中，將土樣以1、101、102 依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107103稀釋度的順序分別吸取 _進(jìn)行平板涂布操作。 每個(gè)稀釋度下需要 3 個(gè)選擇培養(yǎng)基、1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。將涂布好的培養(yǎng)皿放在 30 C溫度下

6、培養(yǎng)，及時(shí)觀察和記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含 培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如教材中圖2-10的顏色反應(yīng)。4 .細(xì)菌的計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對 3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出 ，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。三：思考與討論(1) 如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？(2) 為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能 分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？四：典例分析類型一 選擇培養(yǎng)基的配制【例1】分析下面培養(yǎng)基的配方：KHPQ、NMPQ MgSO7f0、葡萄糖、尿素

7、、瓊脂。請回答：(1) 在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別 和(2)想一想這種培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的 ？解析：碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕 大多數(shù)生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。答案：(1)葡萄糖 尿素(2)有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏ㄒ坏?，因此，只有能夠?用尿素的微生物才能夠生長。類型二統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目【例2】用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為

8、106的培養(yǎng)基中.得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是()A .涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B .涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260,取平均值238C .涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和2墨6，取平均值163D .涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250,取平均值233解析：在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板.作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了 3個(gè)平板，但是，其中 1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)， 說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。答案：D類型三設(shè)置對照【例3

9、】用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對照是（）A. 未接種的選擇培養(yǎng)基B. 未接種的牛肉膏蛋白胨 （全營養(yǎng)）培養(yǎng)基C. 接種了的牛肉膏蛋白胨（全營養(yǎng)）培養(yǎng)基D. 接種了的選擇培養(yǎng)基解析：將菌液稀釋相同的倍數(shù)， 在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上 的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照。對照遵循的原則是單一變量，所以與選擇培養(yǎng)基一 樣接種、培養(yǎng)。答案：C 五、隨堂訓(xùn)練1 在一個(gè)“淀粉一瓊脂”培養(yǎng)基的5個(gè)圓點(diǎn)位置，分別用不同方法處理，將此實(shí)驗(yàn)裝置放在37C恒溫箱中，保溫處理 24h后，將碘液滴在培養(yǎng)基的 5個(gè)圓點(diǎn)上，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于下表：（0淀粉圓點(diǎn)實(shí)驗(yàn)處理方

10、法碘液處理后的顏色反應(yīng)新鮮唾液與鹽酸混合藍(lán)黑色JULUL 八、11經(jīng)過煮沸的新鮮唾液藍(lán)黑色JULUL 八、11接種面包霉棕黃色只有新鮮的唾液?只有一定濃度的蔗糖溶液?請指出和所發(fā)生的顏色反應(yīng)，以及接種的面包霉的分泌物分別是A.棕黃色、棕黃色、淀粉酶B.藍(lán)黑色、棕黃色、麥芽糖酶C.棕黃色、藍(lán)黑色、淀粉酶D.棕黃色、藍(lán)黑色、麥芽糖酶2實(shí)驗(yàn)測定鏈霉素對 3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂塊平板上畫3條等，將平板置于37C條件下恒溫培養(yǎng) 3天，結(jié)果如的D .培養(yǎng)長的平行線（3條線均與下圖中的鏈霉素帶接觸） 圖所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析以下敘述， 不正確的是A. 鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長B.

11、鏈霉素對結(jié)核菌比對霍亂菌更有效C. 鏈霉素對結(jié)核菌比對傷寒菌更有效D. 鏈霉素可以用于治療傷寒病人3. 利用生物工程生產(chǎn)啤酒、味精、胰島素、酸奶 常用菌種分別是A. 酵母菌、枯草桿菌、大腸桿菌、乳酸菌B. 酵母菌、大腸桿菌、青霉菌、乳酸菌C. 酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌、大腸桿菌、乳酸菌D. 黃色短桿菌、酵母菌、大腸桿菌、乳酸菌4. 下列操作不屬于微生物的分離步驟的是A.稀釋B .劃線或涂布 C.接斜面5. 影響微生物生長的主要環(huán)境因素是A.陽光、溫度、水分B .溫度、水分、PH C .水分、PH氧D.溫度、PH氧土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)參考答案：一.理論基礎(chǔ)：1 （1） 目的菌珠 抑制 阻止（2）特定 抑制 阻止自養(yǎng) 能固氮的微生物;2（1）有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（2）.稀釋度細(xì)菌30-300 顯微鏡3.非測試因素可信度 無雜菌污染二實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)： 1. 土壤，鏟去表層土。 2. 培養(yǎng)基 多于 對照 3. 培養(yǎng) 1ml 9ml 0.1mL 4.30-300 平均數(shù) 三： 思考與討論1 統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì) 3 個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然 后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)