PE氣相色譜使用說明

1、.PerkinElmer Clarus 500氣相色譜儀培訓(xùn)教材 美國珀金埃爾默儀器（上海）有限責(zé)任公司第一部分 編輯儀器控制方法運(yùn)行TotalChrom色譜工作站軟件雙擊桌面上圖標(biāo)或打開Totalchrom Workstation 6.2.X程序組, 雙擊圖標(biāo)輸入用戶名: manager(小寫), 密碼,軟件運(yùn)行后界面如下單擊Method圖標(biāo), 開始編輯方法:Create new method: 新建方法 Load method stored on disk: 調(diào)用已有方法Load recently edited method: 調(diào)用最近使用過的方法選擇一種方式,點(diǎn)OK進(jìn)入下一步: 選擇相應(yīng)

2、的儀器, 點(diǎn)OK進(jìn)入下一步: Data Acquisition: 數(shù)據(jù)采集參數(shù)選擇:1. Data Channel: 數(shù)據(jù)通道選擇, 用單一檢測器時選A或B,兩個檢測器同時使用時選Dual, 用單一檢測器時如果用前進(jìn)樣口最好選A通道, 后進(jìn)樣口選B通道.2. Source: 檢測器選擇: 選擇相應(yīng)的檢測器. 前檢測器為DetA,后檢測器為DetB.3. Set Data Rate: 數(shù)據(jù)采樣頻率的選擇(此處可用默認(rèn)值)By peak width at base: 根據(jù)峰寬來決定采樣頻率(需要輸入大致的峰寬時間,單位為秒)By sampling rate: 直接選擇采樣頻率4. Data Sto

3、rage: 數(shù)據(jù)存儲( 可用默認(rèn)值)Store all data from run: 存儲所有數(shù)據(jù)如果只存儲部分?jǐn)?shù)據(jù)(如方法運(yùn)行的前幾分鐘數(shù)據(jù)不存儲), 就不選這個選項, 在Delay time 處輸入不需要采集數(shù)據(jù)的時間.Store run log: 存儲運(yùn)行記錄Real time plot / 實時譜圖選項: 這一選項可以不修改然后點(diǎn)Next 進(jìn)入下一步:Instrument Control儀器控制參數(shù):1. Oven/Inlets: 柱溫箱程序溫度/進(jìn)樣口程序溫度控制Oven Ramp: 柱溫箱程序溫度 Rate: 程序升溫速率 Temp: 溫度Hold: 溫度保持時間 Initial:

4、 溫度/時間初始值如果不使用程序升溫,只需將Rate1 設(shè)為0, 設(shè)置相應(yīng)的Initial Temp 和 Initial Hold即可2. heated zone setpoints: 加熱區(qū)溫度設(shè)置(即進(jìn)樣口溫度設(shè)置)將要使用的進(jìn)樣口溫度設(shè)置為需要的溫度,不使用的進(jìn)樣口溫度最好設(shè)置為零. 如果進(jìn)樣口為PSS程序控制進(jìn)樣口, 此處只能選擇溫度程序的開/關(guān)(on/off), 在Inlet ramp處設(shè)置溫度程序,設(shè)置方法和柱溫箱程序升溫一樣.3. Oven Max temp: 柱溫箱保護(hù)溫度, 由使用的色譜柱最高溫度決定, 設(shè)定值應(yīng)該低于色譜柱允許使用溫度10-20度.Equil time: 柱

5、溫箱溫度平衡時間, 0.5-3分鐘即可 設(shè)置完成,點(diǎn)Carrier進(jìn)入載氣設(shè)置.(不要點(diǎn)Next,還沒有完成方法的設(shè)置)Carrier A Control: 前進(jìn)樣口載氣流速控制, CAP或PSS進(jìn)樣口可選擇3種載氣控制模式,分別為: Programmed Flow 程序流速控制Programmed Pressure 程序壓力控制Programmed Velocity 程序線速度控制PKD進(jìn)樣口只能選擇控制流量或壓力使用PSS/CAP進(jìn)樣口,還需要輸入毛細(xì)柱的規(guī)格 Length: 柱長(m) Diameter: 直徑(um) Vacuum comp: 柱子出口是否接真空系統(tǒng)Split Cont

6、rol: 分流控制 Mode: 分流控制模式 flow控制分流流量 Ratio控制分流比如果儀器有兩個進(jìn)樣口,要分別設(shè)定兩個進(jìn)樣口的載氣, 如果進(jìn)樣口上沒接色譜柱,一定要將載氣流量設(shè)為零, 而接了色譜柱的進(jìn)樣口,一定要設(shè)置相應(yīng)的流量,否則可能損壞色譜柱.如果儀器不帶PPC控制系統(tǒng), 可以不用設(shè)定 Carrier的參數(shù).載氣設(shè)定完成后,點(diǎn)Detectors進(jìn)入檢測器參數(shù)設(shè)置(不要點(diǎn)Next,還沒有完成方法的設(shè)置)Detector A: 前檢測器 Detector B:后檢測器FID 氫火焰檢測器 H2: 45ml/min Air: 450ml/minTCD 熱導(dǎo)檢測器 10-20ml/minEC

7、D 電子捕獲檢測器 30-80ml/minFPD 火焰光度檢測器(硫磷檢測器) S模式: H2 80ml/min, Air 95ml/min P模式: H2 90ml/min, Air 100ml/minNPD 氮磷檢測器 H2: 2ml/min, Air: 100ml/minTemp : 溫度 Range: 靈敏度 對FID, 1為高靈敏度,20為低靈敏度, 對TCD, 有1-4個選擇,對應(yīng)為40,80,120,160mA的橋電流其余檢測器都只有選1Autozero: 自動調(diào)零開關(guān)Polarity: 極性 Positive正, Negative負(fù) 次選項只對TCD檢測器有效, 用H2/He做

8、載氣時選Positive,N2做載氣選Negative, Ar/CH4做載氣時根據(jù)信號來具體選擇.Filament: 電流開關(guān), 選擇on/開 就可以, 關(guān)機(jī)程序選off/關(guān)Gas: 檢測器的輔助氣, 設(shè)置合適的流量即可Int Attenuation信號衰減: 0=1/64,-1=1/32, -5=1/2, -6=1, 即選0,信號衰減64倍,選-1衰減32倍,選-6,信號不衰減Offset: 調(diào)零零點(diǎn)設(shè)置設(shè)定完后點(diǎn) Instrument Timed Events,設(shè)置儀器時間程序(不要點(diǎn)Next,還沒有完成方法的設(shè)置)儀器運(yùn)行時間控制表,可以設(shè)定相關(guān)的控制參數(shù). 如進(jìn)樣閥的控制,信號衰減的改

9、變等.到這里,儀器控制參數(shù)就設(shè)定完畢,以下為數(shù)據(jù)處理參數(shù)設(shè)定.點(diǎn)Next進(jìn)入下一步:注意：如果選擇編輯已經(jīng)有的方法，在Method Editor界面下，選Instrument菜單，選下面的control option選項，再選擇需要修改的地方，如oven/inletes, Autossampler等，都可進(jìn)入儀器控制方法設(shè)置。Autosample 自動進(jìn)樣器的控制：大多數(shù)情況下，只需要設(shè)置進(jìn)樣體積即可。還有就是選擇洗針的次數(shù)，洗針的溶劑選擇點(diǎn)replot選擇條, 去掉Generate a separate replot 選擇項,避免打印出單獨(dú)的色譜圖在Globe information中,選擇

10、定量方法:External standard: 外標(biāo)法Internal standard: 內(nèi)標(biāo)法輸入濃度，體積單位然后一直點(diǎn)Next, 直到點(diǎn)Finish,完成方法編輯. 保存方法. 然后在 Method Editor下other菜單選 Report Format Editor(報告格式編輯):注意: 所有文件名不得使用中文,要使用Windows系統(tǒng)合法的文件名可點(diǎn)擊報告頭名稱,改為合適的名稱. 點(diǎn)擊報告內(nèi)容項目,去掉不需要的項目在Report菜單下,選擇需要添加的報告內(nèi)容點(diǎn)Insert/Add,添加該項目點(diǎn)Options, 做報告內(nèi)容,格式的選擇,通常按上面選項選擇即可.選擇完后,保存報告

11、格式文件,文件名和方法文件名一樣. 關(guān)閉報告格式編輯器, 關(guān)閉方法文件編輯器,回到工作站初始畫面.單擊Setup圖標(biāo), 設(shè)置運(yùn)行方法:Setup Type: 選Method方式Method: 選擇要使用的方法Raw : 數(shù)據(jù)文件路徑,可任意選擇Result : 結(jié)果文件路徑,可任意選擇Base : 數(shù)據(jù)/結(jié)果文件前綴, 輸入后點(diǎn)后面按鈕,再點(diǎn)彈出窗口里面的OK鍵,加上計數(shù)器: 上面輸入的前綴為20040101RGA就變?yōu)?0040101RGA_#, 最后生成的數(shù)據(jù)/結(jié)果文件名就變成 20040101RGA_001,20040101RGA_002,20040101RGA_999.如果此處未加上”

12、_#”自動計數(shù)器,那生成的數(shù)據(jù)/結(jié)果文件名就會自動在前綴后加上做樣時的日期和時間. 如果有相同的文件名,系統(tǒng)也會自動在數(shù)據(jù)/結(jié)果文件名后加上做樣時的日期,時間做后綴, 不會覆蓋已有的數(shù)據(jù)/結(jié)果文件.如果不希望在每次做樣完成后打印報告文件, 選上 Suppress replots/plots選項完成以上選項后,點(diǎn) Vial list選項,編輯樣品信息(Sequence Editor-Vial list):在Name欄,輸入樣品名稱,在site欄,選擇要使用的進(jìn)樣口(A前或B后)在Vial欄,輸入樣品在自動進(jìn)樣器上的位置號(1-80)如果使用內(nèi)標(biāo)法定量,在Int. Std. Amt欄,輸入內(nèi)標(biāo)的濃

13、度如果要添加樣品, 在Edit菜單下按append添加要刪除樣品,在ROW欄點(diǎn)擊要刪除的行,按DEL鍵刪除.編輯完成,存儲樣品列表, 退出Sequence Editor-Vial list.點(diǎn)Setup Instrument界面下的OK, 完成方法和樣品表的設(shè)置.待主界面的 Status狀態(tài)欄內(nèi)容顯示儀器準(zhǔn)備就緒, 儀器基線正常后就可以進(jìn)樣了.在進(jìn)樣前還需確認(rèn): FID是否點(diǎn)火 TCD基線是否調(diào)到10-20mV NPD是否將電壓調(diào)上來,使基線達(dá)到0.75-1.5mV FPD是否點(diǎn)火,是否更換了需要的磷或硫濾光片第二部分 數(shù)據(jù)處理在軟件主界面下,單擊 Graphic Edit，進(jìn)入數(shù)據(jù)處理：選擇

14、要處理的標(biāo)樣的數(shù)據(jù)文件，按open打開文件注意：此時自動會打開一個方法文件，這個方法文件就是做標(biāo)樣時使用的方法文件。如果提示只能用只讀方式打開文件，選擇確定。在這種情況下在后面保存方法文件時就得選擇另外命名保存。在process菜單下選Noise/Area Threshold，用鼠標(biāo)左鍵在色譜圖上選一段噪聲比較大的地方，系統(tǒng)自動會設(shè)定一個噪聲和峰面積的閾值，可跟據(jù)具體情況來設(shè)定這兩個參數(shù)，直到積分結(jié)果滿意為止。Current NT：當(dāng)前噪聲閾值Current AT：當(dāng)前峰面積閾值Suggested NT：根據(jù)你的選擇范圍，系統(tǒng)推薦的噪聲閾值，可在此處自己設(shè)定合適的值Suggested AT:

15、根據(jù)你的選擇范圍，系統(tǒng)推薦的峰面積閾值，可在此處自己設(shè)定合適的值 然后在process菜單下選sampling rate/bunching factor重新設(shè)定采樣頻率和平滑因子用鼠標(biāo)左鍵選擇要處理的峰的范圍，系統(tǒng)自動給出相應(yīng)的參數(shù)。這一參數(shù)注意用來處理峰形不好的峰，尤其是拖尾比較嚴(yán)重的峰，可以得到比較好的積分結(jié)果積分處理完畢，在file菜單下選擇Save Result ，保存新的結(jié)果文件。點(diǎn)擊New data file圖標(biāo)，打開另外的標(biāo)樣數(shù)據(jù)文件，然后保存結(jié)果文件。重復(fù)這一過程直到將所以標(biāo)樣數(shù)據(jù)文件全部重新積分，保存新的結(jié)果文件。注意： 保存結(jié)果文件時一定要選擇覆蓋存儲到各自相同的文件名然后

16、在Calibration菜單下選擇Edit components，給要定量計算的化合物命名在命名時，如果要用內(nèi)標(biāo)法定量，應(yīng)該先用鼠標(biāo)點(diǎn)擊內(nèi)標(biāo)物的峰，輸入內(nèi)標(biāo)物的名稱，選上ISTD選項，輸入合適的時間窗參數(shù)（310均可）。然后按Next輸下一個化合物的名稱等參數(shù)。內(nèi)標(biāo)法要選擇開始設(shè)定的內(nèi)標(biāo)物！所有要定量的組分都輸入完畢后，按return返回。然后保存或另存方法。然后點(diǎn)other菜單下method，進(jìn)入Method Editor方法編輯器。在Method Editor中components菜單下選Edit component，進(jìn)入如下畫面：查看每個組分的設(shè)置是否正確，如內(nèi)標(biāo)物的指定，時間窗口等參數(shù)

17、。確認(rèn)完后點(diǎn)Calibration項目條，設(shè)定標(biāo)樣曲線類型，標(biāo)樣濃度等參數(shù)關(guān)于積分時間表的使用：由Graphic Edit中，在Process菜單下的Baseline Events進(jìn)入：常用的時間事件：AT: Set Area Threshold 設(shè)定峰面積閾值 NT： Set Noise Threshold設(shè)定噪音閾值BF: Set Bunching Factor設(shè)定平滑因子 P：Enable Peak Detection 開始積分P：disable Peak Detection關(guān)閉積分 +V：Valleys Baselines on 峰谷積分開始V：Valleys Baselines of

18、f峰谷積分關(guān)閉在參數(shù)表選定功能項以后，再輸入相應(yīng)參數(shù)值，然后用鼠標(biāo)點(diǎn)擊要開始的地方定義時間。Calibration Type標(biāo)準(zhǔn)類型：Use calibration factor：使用已知校正因子Avg calibration factor：單點(diǎn)多次平均校正Calibrate by reference: 參比校正Use curve： 多點(diǎn)校正通常主要使用2和4這兩種校正方法Response：Area：峰面積定量 Height：峰高定量Curve fit type： 在使用Use curve時才需選擇，單點(diǎn)選 Point to Point, 多點(diǎn)選 1 st Order（線性標(biāo)準(zhǔn)曲線）Scaling，purity和Weighting可以不選，使用默認(rèn)值即可Origin Treatment：Include：零點(diǎn)參與標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸 Force