臨床醫(yī)學(xué)專業(yè) 沉默PHLPP1對(duì)小鼠脊髓損傷運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究

1、沉默PHLPP1對(duì)小鼠脊髓損傷運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究目 的研究PHLPP1沉默后對(duì)小鼠脊髓損傷的影響和對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用。方 法以PHLPP1為目的基因的小干擾RNA（siRNA）與攜帶熒光素蛋白的腺病毒載體重組（AdsiPHLPP1），分別對(duì)脊髓注射和神經(jīng)元轉(zhuǎn)染，在體內(nèi)和體外創(chuàng)建PHLPP1沉默模型。1、選取18-23 g的成年小鼠，隨機(jī)分為：假手術(shù)組（僅椎板切除）、脊髓損傷組（Allens法建立脊髓挫傷模型）、沉默組（脊髓注射AdsiPHLPP1）和沉默脊髓損傷組（脊髓注射AdsiPHLPP1后行Allens法）。2、體外培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元，建立H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型，分為：對(duì)照組、H

2、2O2損傷組、沉默組（細(xì)胞經(jīng)AdsiPHLPP1轉(zhuǎn)染）和沉默損傷組（細(xì)胞經(jīng)AdsiPHLPP1轉(zhuǎn)染后行H2O2處理）。通過(guò)Western blot技術(shù)分別檢測(cè)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)各組的凋亡相關(guān)蛋白和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)； BMS評(píng)分觀察損傷后28天內(nèi)不同處理組中的小鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況；同時(shí)通過(guò)Nissl染色觀察各組脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的數(shù)量。結(jié) 果通過(guò)免疫熒光和Western blot技術(shù)檢測(cè)到AdsiPHLPP1成功作用于神經(jīng)元，并有效的使PHLPP1的表達(dá)減少。而且沉默PHLPP1可減少脊髓損傷后Nrf2的表達(dá)，同時(shí)經(jīng)AdsiPHLPP1處理的組織和細(xì)胞在損傷后均可誘導(dǎo)促凋亡因子(Bax and c

3、leaved-caspase 3)的表達(dá)，并降低神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)和抗凋亡因子 (Bcl-2)的表達(dá)。此外注射AdsiPHLPP1小鼠的后肢運(yùn)動(dòng)功能比野生型（WT）小鼠恢復(fù)得更慢，同時(shí)脊髓損傷后前角存活的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的數(shù)量也降低。結(jié) 論P(yáng)HLPP1的沉默促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)元的凋亡并抑制運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。關(guān)鍵詞PHLPP1；神經(jīng)元凋亡；Nrf2；脊髓損傷英文論著摘要Experimental study on the functional recovery of spinal cord injury in mice by PHLPP1 silenceObjectiveMethodsResultsC

4、onclusionKeywords英文縮略語(yǔ)表論文沉默PHLPP1對(duì)小鼠脊髓損傷運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究前 言 脊髓損傷是一種嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷性疾病，可導(dǎo)致?lián)p傷節(jié)段面以下的肢體功能障礙且具有高度傷殘性和死亡率。脊髓損傷通常包括原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷。原發(fā)性損傷是指外界暴力直接作用于脊髓，引起脊髓損傷不可逆的修復(fù)；繼發(fā)性損傷是在原發(fā)性損傷基礎(chǔ)上引起的一系列生化反應(yīng)，包括氧化應(yīng)激，炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元凋亡的增加1-3。目前臨床上對(duì)脊髓原發(fā)性損傷尚無(wú)有效的治療措施，當(dāng)前對(duì)脊髓損傷的治療主要集中在改善繼發(fā)性損傷引起的脊髓內(nèi)部微環(huán)境的變化，所以尋找一個(gè)可以緩解繼發(fā)性損傷病理生理過(guò)程的靶點(diǎn)將是治療脊髓損傷

5、新途徑。 PH結(jié)構(gòu)域及富含亮氨酸的重復(fù)序列蛋白磷酸酶（PHLPP）屬于Ser/Thr蛋白磷酸酶家族，能夠使下游具有Ser/Thr結(jié)構(gòu)的蛋白磷酸化從而調(diào)控其活性；PHLPP家族主要包含兩種亞型：PHLPP1 和PHLPP2，目前主要對(duì)PHLPP1在各領(lǐng)域的研究較廣泛4-6。研究發(fā)現(xiàn)PHLPP1在成年小鼠的海馬神經(jīng)元中表達(dá)且能夠發(fā)揮保護(hù)作用7。近年來(lái)在結(jié)直腸癌8-9和乳腺癌10中發(fā)現(xiàn)，PHLPP1表達(dá)上調(diào)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，并抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲能力及分化能力，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。同時(shí)在腦缺血模型中發(fā)現(xiàn)PHLPP1基因缺失起保護(hù)作用11。研究證實(shí)，由于神經(jīng)元的凋亡是不可逆修復(fù)，并阻斷神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

6、的傳導(dǎo)，故神經(jīng)元凋亡在加速脊髓繼發(fā)性損傷中起重要作用，是影響運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的主要原因之一12-13。 核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）是一種轉(zhuǎn)錄因子，在靜息狀態(tài)下與細(xì)胞質(zhì)中的Kelch樣ECH相關(guān)蛋白（Keap1）緊密結(jié)合14；當(dāng)機(jī)體受到損傷時(shí)，Nrf2 與Keap1發(fā)生解離從細(xì)胞質(zhì)中釋放到細(xì)胞核成為活性狀態(tài)，同時(shí)激活其下游的靶蛋白血紅素加氧酶-1（HO-1），在損傷的神經(jīng)元細(xì)胞中發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用，減少神經(jīng)元的凋亡15-17。PHLPP1和Nrf2在神經(jīng)元中都能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡。然而，目前仍不清楚在脊髓損傷后PHLPP1是否通過(guò)影響Nrf2的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)神經(jīng)元凋亡。因此，本研究利用AdsiPHL

7、PP1在體內(nèi)外建立PHLPP1沉默模型，并觀察PHLPP1沉默對(duì)脊髓損傷發(fā)展的作用以及是否通過(guò)影響Nrf2的表達(dá)來(lái)調(diào)控神經(jīng)元凋亡，并可能為脊髓損傷的治療提供一個(gè)新的基因靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)材料與方法一、實(shí)驗(yàn)材料 （一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年小白鼠 (18-23 g)，購(gòu)買并飼養(yǎng)于錦州醫(yī)科大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作都遵循美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理指南。 （二）藥品與試劑 （三）儀器設(shè)備二、實(shí)驗(yàn)方法 （一）脊髓損傷模型建立及動(dòng)物分組 健康成年小鼠（18-23 g）購(gòu)于錦州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作都遵循美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理指南。將小鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組（僅椎板切

8、除術(shù)），SCI組，PHLPP1沉默組（脊髓注射AdsiPHLPP1 3天）和沉默損傷組（脊髓注射AdsiPHLPP1后行Allens造模）。野生型（WT）：未注射AdsiPHLPP1的小鼠。使用Allens法18建立小鼠脊髓損傷模型，通過(guò)腹膜內(nèi)注射10水合氯醛（3.0 ml/kg）麻醉小鼠，沿中線切開(kāi)皮膚和肌肉，在T9-10水平進(jìn)行椎板切除術(shù)，將直徑為1mm，重量為3g的撞擊器從50mm的高度落到T9-10脊髓的表面上，造成撞擊表面明顯血腫形成，雙下肢迅速回縮，造成脊髓損傷，最后將肌肉和皮膚分層縫合。每天兩次人工膀胱按摩，直到自主排尿功能恢復(fù)。 （二）原代神經(jīng)元培養(yǎng) 細(xì)胞種板前，6孔板用多聚賴

9、氨酸包埋過(guò)夜。將妊娠13-15 d的小鼠注射過(guò)量10水合氯醛安樂(lè)死并剖宮產(chǎn)，取出胎鼠的脊髓組織剪碎并用木瓜蛋白酶消化25-30 min后用10 FBS終止消化，離心后得到細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞培養(yǎng)在含有10 FBS和0.5青霉素/鏈霉素的高葡萄糖DMEM中8 h，然后將培養(yǎng)基更換為由2 B27，0.25 GlutaMAX和0.5青霉素/鏈霉素組成的神經(jīng)基質(zhì)培養(yǎng)基，并繼續(xù)在37和5 CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7-10 d，并在明場(chǎng)顯微鏡下觀察神經(jīng)元形態(tài)，培養(yǎng)成熟的神經(jīng)元用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)的神經(jīng)元的純度通過(guò)免疫熒光鑒定。 （三）AdsiPHLPP1介導(dǎo)的基因沉默 動(dòng)物：如上所述對(duì)小鼠進(jìn)行T9-10椎板切除后

10、，使用30號(hào)針頭的漢密爾頓注射器，以每分鐘2 L的速度將10 L的AdsiPHLPP1或AdsiGFP原液注入暴露的脊髓區(qū)域。注射完畢將針頭緩慢地拔出并縫合傷口。3 d后，殺死小鼠取出脊髓組織做Western blot分析，檢測(cè)AdsiPHLPP1是否有效降低脊髓中PHLPP1的表達(dá)。所有體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)均使用6.01011 IFU/ml的病毒載體滴度。 細(xì)胞：神經(jīng)元培養(yǎng)到第7 d左右成熟時(shí)，用無(wú)血清培養(yǎng)基將AdsiPHLPP1稀釋成感染復(fù)數(shù)（MOI）為40的培養(yǎng)基19-21，在孵箱中繼續(xù)作用細(xì)胞8 h，在明場(chǎng)顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，此后換取新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3 d22，收集細(xì)胞用于Western

11、blot分析或在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染的效果。 （四）細(xì)胞存活率 將培養(yǎng)的細(xì)胞以1103-104個(gè)/mL的密度接種在96孔板中,分別用濃度為25 mol/ L, 50 mol/ L，100 mol/ L和200 mol/ L的H2O2處理細(xì)胞4 h，8 h，12 h，24 h和36 h。然后每孔加入以磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）配制的MTT（5mg / ml）20 L，并繼續(xù)在孵育箱中孵育4 h?？稍诘撞恳?jiàn)紫色晶體并溶于150 L二甲基亞砜（DMSO）中，在搖床上放置10 min后在470nm的波長(zhǎng)下測(cè)量每孔的吸光度。 使用下列公式計(jì)算作為細(xì)胞存活率：生存率= (At- Ab )/( Ac- Ab)

12、100At、Ab和Ac分別為處理組、空白孔和對(duì)照組的吸光度。 （五）免疫熒光 （六）尼氏染色 （七）Western blot （八）運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估 分別在脊髓損傷后第1 d，5 d，7 d，14 d，21 d和28 d使用BMS23對(duì)小鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)估。BMS分?jǐn)?shù)范圍為0到9分，0分表示運(yùn)動(dòng)功能完全喪失，9分表示運(yùn)動(dòng)功能正常。此過(guò)程采用雙盲的標(biāo)準(zhǔn)。 （九）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組之間比較使用不成對(duì)t檢驗(yàn)，多組比較使用單因素方差分析，Mann-Whitney U檢驗(yàn)用于分析BMS評(píng)分。使用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和IC50的計(jì)算。P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)

13、 果 （一）PHLPP1沉默的小鼠在脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)減慢 （二）PHLPP1沉默減少了脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的數(shù)量 （三）AdsiPHLPP1介導(dǎo)的基因在脊髓組織和原代神經(jīng)元中有效表達(dá) 為了研究AdsiPHLPP1介導(dǎo)的基因是否在脊髓中的有效轉(zhuǎn)染，使用攜帶綠色熒光蛋白（GFP）的AdsiPHLPP1注射到小鼠的脊髓中。三天后在熒光顯微鏡下觀察GFP熒光表達(dá)，顯示定位于脊髓前角的灰質(zhì)（圖3A）。 分別使用NeuN和GFAP與注射AdsiGFP的小鼠脊髓組織共染，發(fā)現(xiàn)GFP作用的區(qū)域與NeuN一致（圖3B），而GFP沒(méi)有與GFAP共定位（圖3C）。將腺病毒載體攜帶三種不同序列的PHLPP1

14、（AdsiPHLPP1-1, 2, 3）和對(duì)照組（AdsiGFP）的注射到脊髓中，Western blot檢測(cè)AdsiPHLPP1-1, 2 , 3的沉默效率分別為35.8，46.5和82.5，顯示AdsiPHLPP1-3是最有效的（P0.001）（圖3F），并在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中使用。 將培養(yǎng)第7天的原代神經(jīng)元用NeuN染色，通過(guò)免疫熒光觀察神經(jīng)元的純度（圖3D）。將原代神經(jīng)元用AdsiGFP轉(zhuǎn)染8小時(shí)，然后加入新鮮培養(yǎng)基并使培養(yǎng)物繼續(xù)培養(yǎng)3天，在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光，顯示GFP與神經(jīng)元共定位（圖3E）。 這些結(jié)果表明AdsiPHLPP1在體內(nèi)外能有效地作用于神經(jīng)元。 （四）PHLPP1沉默可減

15、少脊髓損傷后Nrf2的表達(dá) 為了研究PHLPP1沉默在損傷后對(duì)Nrf2的表達(dá)情況的影響，觀察在脊髓損傷后3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)Nrf2及其下游基因HO-1的表達(dá)情況。在脊髓組織中，觀察到WT組損傷后Nrf2的表達(dá)隨時(shí)間逐漸增加，而AdsiPHLPP1組則相反；且在第7天，AdsiPHLPP1組中Nrf2的表達(dá)水平顯著低于WT組（P0.001）。而只有在第1天，AdsiPHLPP1組的HO-1顯著低于WT組（P0.001），在第5天和第7天沒(méi)有顯著差異（圖4A）。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，首先檢測(cè)H2O2對(duì)細(xì)胞存活率的影響，通過(guò)IC50計(jì)算使用200 mol/ L的H2O2處理24 h來(lái)建立損傷模型（圖4B）。 W

16、estern blot證實(shí)AdsiPHLPP1在細(xì)胞中的沉默效應(yīng)（P0.001）；同時(shí)還觀察到在經(jīng)過(guò)H2O2處理的細(xì)胞中：經(jīng)轉(zhuǎn)染處理的細(xì)胞PHLPP1（P0.05），Nrf2（P0.001）和HO-1（P0.01）的表達(dá)顯著低于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（圖4C）。這些數(shù)據(jù)表明PHLPP1沉默可減少脊髓損傷后Nrf2的表達(dá)。 （五）PHLPP1沉默可減少脊髓損傷后神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá) 分別在脊髓損傷后第1, 5和 7天，使用Western blot檢測(cè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)水平。AdsiPHLPP1組中的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)隨著損傷時(shí)間逐漸下降，在第7天時(shí)明顯低于WT組（P0.001）（圖5A）。

17、在經(jīng)過(guò)H2O2處理的細(xì)胞中：經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞BDNF的表達(dá)顯著低于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（P0.001）（圖5B）。 這些結(jié)果表明PHLPP1的沉默在體內(nèi)外都能減少損傷后神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的產(chǎn)生。 （六）PHLPP1沉默促進(jìn)脊髓損傷后的神經(jīng)元凋亡 為了研究PHLPP1沉默對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響，我們通過(guò)Western blot分別在體內(nèi)外檢測(cè)凋亡相關(guān)因子的表達(dá)水平。隨著損傷時(shí)間的增加，兩組Bcl-2表達(dá)都逐漸減少，但在第5天和第7天AdsiPHLPP1組較WT組減少更顯著（P0.05）； 而AdsiPHLPP1組的Bax和cleaved-caspase 3的表達(dá)水平都顯著高于WT組，尤其在第7天（P0.001）（圖6

18、A）。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，H2O2處理的細(xì)胞中：經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)水平低于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（P0.05），而Bax的表達(dá)水平則明顯增多（P0.001）（圖6B）。以上結(jié)果說(shuō)明PHLPP1沉默顯著促進(jìn)損傷后的神經(jīng)元凋亡。討 論 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在脊髓局部注射AdsiPHLPP1達(dá)到注射部位基因沉默效果，但是腺病毒載體對(duì)脊髓的影響仍不清楚。根據(jù)之前的研究結(jié)果顯示,在小鼠海馬注射慢病毒載體編碼的GFP或Nrf2后顯示慢病毒對(duì)細(xì)胞組織的毒性可忽略不計(jì)；同時(shí)也有研究使用腺病毒載體編碼的BDNF注射到成年老鼠體內(nèi)能夠使注入部位的BDNF表達(dá)增加24-25。在我們研究中，根據(jù)之前的研究報(bào)道，同樣使用以腺病毒為

19、載體與siRNA攜帶的PHLPP1進(jìn)行重組（AdsiPHLPP1），分別注射到脊髓局部和對(duì)體外神經(jīng)元轉(zhuǎn)染，建立PHLPP1體內(nèi)外的沉默模型,免疫熒光結(jié)果顯示AdsiPHLPP1的表達(dá)與神經(jīng)元共定位，Western blot則顯示組織和細(xì)胞中PHLPP1的表達(dá)顯著降低,這意味著在本實(shí)驗(yàn)中PHLPP1的沉默模型建立是成功的。 之前研究證實(shí)，Nrf2對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞具有保護(hù)作用，Nrf2表達(dá)上調(diào)可以保護(hù)損傷后的神經(jīng)元，減少神經(jīng)元的凋亡26-27。在本實(shí)驗(yàn)中可知，Nrf2的表達(dá)在WT組中隨著的損傷時(shí)間點(diǎn)的增加而逐漸增加，提示Nrf2在損傷后觸發(fā)反饋機(jī)制使其表達(dá)增加從而起神經(jīng)保護(hù)作用；然而，在Ads

20、iPHLPP1組中，Nrf2的表達(dá)在損傷前保持在較高的水平，隨著損傷時(shí)間增加而逐漸減少，且在第5天開(kāi)始低于WT組，第7天的差異最為顯著(圖4A)；提示在脊髓損傷后，PHLPP1的沉默可以通過(guò)降低Nrf2的表達(dá)從而抑制神經(jīng)保護(hù)作用。但是Nrf2下游靶向蛋白HO-1僅在第1天，AdsiPHLPP1組的表達(dá)低于WT組，在第5天和第7天表達(dá)相似，意味著PHLPP1在脊髓損傷中的作用可調(diào)節(jié)Nrf2的表達(dá)，但不是主要通過(guò)其下游的靶蛋白HO-1。 越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)表明BDNF為損傷的神經(jīng)元提供營(yíng)養(yǎng)因子，促進(jìn)損傷后神經(jīng)元的修復(fù)；同時(shí)還可以促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)元的再生28-29，有研究通過(guò)把外源性BDNF注射到成年

21、大鼠海馬中發(fā)現(xiàn)大量新生神經(jīng)元的產(chǎn)生 30。有研究在大鼠缺血性損傷模型中發(fā)現(xiàn)Nrf2的高表達(dá)可以促進(jìn)BDNF的表達(dá)，從而發(fā)揮對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用31。在本實(shí)驗(yàn)中，注射AdsiPHLPP1的小鼠在脊髓損傷之前BDNF高水平表達(dá)，但是在損傷后BDNF的表達(dá)明顯低于WT組，在第7天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)在損傷的細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)AdsiPHLPP1轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中BDNF的表達(dá)明顯低于未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。這些結(jié)果表明，PHLPP1沉默導(dǎo)致BDNF水平降低，從而延遲脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)。神經(jīng)元的凋亡可通過(guò)各種途徑促進(jìn)脊髓的繼發(fā)性損傷32。在脊髓損傷后，Bcl-2家族開(kāi)始控制細(xì)胞凋亡，并在凋亡過(guò)程中激活caspase家族

22、成員。 Bcl-2家族成員中控制凋亡的蛋白通常指Bcl-2和Bax，分別在抑制和促進(jìn)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用33-35。Caspase 3通常是無(wú)活性的，但在脊髓損傷后被引發(fā)的caspase裂解，因此cleaved-caspase 3表達(dá)水平是衡量凋亡程度的重要指標(biāo)36-37。在我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在脊髓損傷后兩組中：抗凋亡Bcl-2的表達(dá)都降低，且AdsiPHLPP1組比WT組降低的更多；而促凋亡Bax和cleaved-caspase 3的表達(dá)都明顯增加，且AdsiPHLPP1組比WT組增加更多，尤其在第7天最明顯。同時(shí)通過(guò)Nissl染色觀察到AdsiPHLPP1的小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目在損傷后也顯著減少。

23、此外，AdsiPHLPP1組小鼠的BMS評(píng)分明顯低于WT組。這些數(shù)據(jù)表明PHLPP1沉默促進(jìn)神經(jīng)元凋亡的加速，從而延緩了運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。結(jié) 論P(yáng)HLPP1沉默可以減少脊髓損傷后Nrf2和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活數(shù)量減少，促進(jìn)神經(jīng)元凋亡，延緩小鼠脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。參考文獻(xiàn)1. Isaac L, Peijic L. Secondary mechanisms of spinal cord injury. Surg NeurolJ.1995, 43(5):484-485.2. Penas C, Guzman MS, Verdu E, et al. Spinal cord inj

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