農(nóng)藥生物測定

1、農(nóng)藥生物測定復(fù)習(xí)重點(diǎn)農(nóng)藥生物測定的簡史第一時(shí)期：19世紀(jì)末 1920至1923年間:研究出測定白喉抗毒素含量的標(biāo)準(zhǔn)方法.特點(diǎn)：都是用單個(gè)動物體作直接的效力測定，將待測的藥劑與標(biāo)準(zhǔn)藥劑相比較來估計(jì)其相對藥效。 第二時(shí)期：20世紀(jì)30年代至20世紀(jì)70年代1937年歐文(J.O.Irvin)首先提出了系統(tǒng)的生物測定方法報(bào)告;1947年芬尼(D.J.Finney)出版了系統(tǒng)的生物測定統(tǒng)計(jì)方法;1950年芬尼及古德溫(L.G.Goodwin)出版生物測定標(biāo)準(zhǔn)化一書;1957年布斯維納（J.R.Busvine）出版殺蟲劑生物測定評述;1959年張宗炳在其昆蟲毒理學(xué)一書中,以專章對殺蟲劑生物測定及統(tǒng)計(jì)分析

2、作了系統(tǒng)的論述;1963年張澤溥等出版殺蟲劑及殺菌劑的生物測定;1984年張澤溥出版生物測定統(tǒng)計(jì)專著。特點(diǎn)：研究出以生物群體為反應(yīng)基礎(chǔ)的生物測定方法，提高了測定精度。第三時(shí)期：20世紀(jì)70年代至今1. 研究利用昆蟲神經(jīng)電生理方法檢測化合物對昆蟲的拒食活性已取得進(jìn)展。2. 殺菌劑也由以傳統(tǒng)的病原菌離體試驗(yàn)方法為主，轉(zhuǎn)變?yōu)榧闹髦参锷系幕铙w試驗(yàn)為主。3. 20世紀(jì)80年代以來介于活體與離體之間的植物組織培養(yǎng)生物測定方法受到了廣泛的重視，有可能發(fā)展成一類新的殺菌劑生物測定方法。如適用于細(xì)菌性病害篩選的塊根法；適用于大麥白粉病篩選的芽鞘表皮法等。第四時(shí)期：20世紀(jì)70年代至今 發(fā)展趨勢：1.隨著分子生物

3、學(xué)及生理、生化方面研究技術(shù)的提高，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)和生化技術(shù)進(jìn)行生測的研究亦發(fā)展很快，如對新藥劑的篩選及利用酶學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行害物抗藥性的監(jiān)測和增效劑的篩選等等。2.由于電子計(jì)算機(jī)軟、硬件的迅速發(fā)展，農(nóng)藥生物測定中的統(tǒng)計(jì)分析，早已普遍程序化和微機(jī)化，使生物測定結(jié)果的分析計(jì)算更加簡便、快捷，也更加準(zhǔn)確、可靠。農(nóng)藥生物測定中應(yīng)注意的幾點(diǎn)：1.運(yùn)用特定的試驗(yàn)設(shè)計(jì)；2.在一定條件下（局部控制）進(jìn)行 ；3.均以群體反應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具。農(nóng)藥生物測定的定義:運(yùn)用特定的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，利用生物對農(nóng)藥的反應(yīng)，并以生物統(tǒng)計(jì)為工具，分析供試對象在一定條件下的效應(yīng)，來度量某種農(nóng)藥的生物活性。 農(nóng)藥生物測定的內(nèi)容及應(yīng)用

4、1.測定農(nóng)藥對昆蟲、螨類、病原菌、線蟲、雜草以及鼠類等靶標(biāo)生物的毒力或藥效2.研究農(nóng)藥對植物的生理作用3.篩選新農(nóng)藥品種4.研究化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性關(guān)系的規(guī)律，為定向創(chuàng)制新農(nóng)藥提供依據(jù)5.研究農(nóng)藥的理化性質(zhì)及加工劑型與毒效關(guān)系，提高農(nóng)藥的使用效果6.研究有害生物的生理狀態(tài)及外界環(huán)境條件與藥效的關(guān)系，以便提高農(nóng)藥使用水平，做到適時(shí)用藥7.測定不同農(nóng)藥混用的效力，為農(nóng)藥的合理混用及尋找增效劑提供依據(jù)8.對有害生物抗藥性的監(jiān)測和研究克服或延緩抗藥性發(fā)展的有效措施9.研究農(nóng)藥的作用機(jī)理及生理效應(yīng)10.還可利用敏感生物（如蚊幼蟲等）來測定農(nóng)藥的有效含量及殘留量。11.測定農(nóng)藥對溫血?jiǎng)游锛坝幸嫔锏?/p>

5、毒性農(nóng)藥生物測定基礎(chǔ)1.藥劑濃度的表示方法:(1)百分濃度(2)百萬分濃度（ppm）(3)倍數(shù)法 (4)波美度(1)百分濃度:分容量百分濃度和質(zhì)量百分濃度兩種。 液體與液體之間配藥時(shí)常用容量百分濃度。 固體與固體或固體與液體之間配藥時(shí)多用質(zhì)量百分濃度。新增登記和生產(chǎn)許可的農(nóng)藥產(chǎn)品，其有效成分含量原則上統(tǒng)一以質(zhì)量百分含量（%）表示。(2)百萬分濃度（ppm） ppm：part per million（百萬分之） 10-6 ppb： part per billion（十億分之） 10-9 ppt： part per trillion（萬億分之） 10-12與“”一樣，ppm、ppb、ppt 不是濃

6、度單位。但可定義為摩爾比、體積比、質(zhì)量比或質(zhì)量體積比等。 (2)百萬分濃度:即100萬份藥液或藥粉中含有這種藥劑成分的份數(shù)，以10-6(ppm)表示，其基本單位為百萬分之一。常用mg/kg（g/g）或mg/L （g/mL）表示，即每L或每kg物質(zhì)中所含的物質(zhì)的mg數(shù)。如：1ppm阿維菌素丙酮溶液1mg/L.3)倍數(shù)法內(nèi)比法：稀釋100倍或100倍以下計(jì)算稀釋量時(shí)，要扣除原有藥劑所占的那一份數(shù)量。如：稀釋50倍時(shí)，表示用藥劑1份加水49份。 外比法：稀釋100倍以上計(jì)算稀釋時(shí)，則不扣除原有藥劑所占的那一份。如：稀釋1000倍，則用原藥劑1份加水1000份。在稀釋農(nóng)藥時(shí),如果未注明按容量稀釋則均按

7、質(zhì)量計(jì)算！(4)波美度石硫合劑有效成分的表示單位，用“oBe”表示，它表示濃度與比重的正相關(guān)。(1)百分濃度和百萬分濃度之間的換算 百萬分濃度（ppm）=10000×百分濃度,如:75%的多菌靈丙酮溶液，為多少ppm？ 由上式得：10000×75=750000（ppm） 即: 750000 ppm(2)百分濃度和稀釋倍數(shù)之間的換算百分濃度（%）=原藥劑濃度÷稀釋倍數(shù)×100%如：90%的敵百蟲稀釋1000倍后的藥液百分濃度為多少？ 由上式得90%÷1000=0.09% 即得為0.09%(3)百分濃度與有效成分之間的換算當(dāng)原藥劑的比重等于或近似1

8、時(shí)，百分濃度與有效成分（g）之間的換算關(guān)系為: 藥液有效成分（g）=毫升數(shù)×藥液濃度如：25%功夫菊酯乳油100毫升，含有多少功夫菊酯有效成分？ 解：100×25%=2.5（g）波美度和稀釋倍數(shù)之間的換算 重量稀釋倍數(shù)(加水重量倍數(shù))原液波美度數(shù)-1需用波美度數(shù)= 容量稀釋倍數(shù)(加水體積倍數(shù))原液波美度×(145-需用藥液波美度) -1需用藥液波美度×(145-原液波美度) =(1) 稀釋劑用量的計(jì)算公式 例： 將10毫升20殺滅菊酯乳油稀釋成50ppm的藥液，需用多少水？解：原藥劑的量10毫升 原藥劑濃度20%20×10000ppm 所配制的

9、藥劑濃度50ppm根據(jù)公式 10×200000÷5040 000(毫升)40(升)(2) 原藥劑用藥量的計(jì)算公式例如：50敵敵畏配100公斤含量為500ppm的藥液，需要原藥多少？解：所配藥劑量100公斤（kg）,所配制藥劑濃度500ppm, 原藥劑濃度50%500 000ppm根據(jù)公式 100×500÷500 0000.1（公斤）100克(3)倍數(shù)法計(jì)算公式當(dāng)稀釋倍數(shù)在100倍以下時(shí)（內(nèi)比法）:當(dāng)稀釋倍數(shù)在100倍以上時(shí)（外比法）:例（內(nèi)比法）： 需配制98公斤20 敵稗乳油50倍液用于水稻秧苗除草，求用藥量是多少？ 解：所需藥劑量98公斤 稀釋倍數(shù)5

10、0 根據(jù)公式 98÷(50-1) 2公斤例（外比法）：需配制2.5敵殺死乳油稀釋2000倍液10升，求需加2.5乳油多少？ 解：所需藥劑重量10升 稀釋倍數(shù)2000 根據(jù)公式 10÷20000.005升5豪升 用64%殺毒礬可濕性粉劑750X防治黃瓜霜霉病調(diào)查情況如下： 請計(jì)算藥前及第一次藥后10天及第二次藥后15天的病指。 請計(jì)算第一次藥后10天及第二次藥后15天的防效。 如果畝用藥液為75升，每畝需要多少克64%殺毒礬WP？室內(nèi)毒力測定和田間試驗(yàn) 一般地，農(nóng)藥生物測定指在室內(nèi)進(jìn)行的測定。 室內(nèi)毒力測定主要是測定一種藥劑的毒性、毒力或比較幾種藥劑毒力的大小。室內(nèi)試驗(yàn)的結(jié)果

11、，除可作為藥劑的初步篩選的根據(jù)外，還可為田間試驗(yàn)提供參考。有時(shí)在田間發(fā)現(xiàn)的問題必須拿回室內(nèi)作比較精細(xì)的試驗(yàn)研究。 田間試驗(yàn)主要測定或比較藥劑在田間條件下的藥效，其結(jié)果比較接近實(shí)際情況，為生產(chǎn)防治提供可靠的依據(jù)。 農(nóng)藥生物測定試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則（1）相對控制測定條件（2）必須設(shè)立對照 （3）各種處理必須設(shè)置平行重復(fù) （4）運(yùn)用生物統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)結(jié)果（1）相對控制測定條件 環(huán)境條件：溫度、濕度、光照。 供試生物：標(biāo)準(zhǔn)化生物（同一環(huán)境下培養(yǎng)的，發(fā)育一致）。 供試藥劑：室內(nèi)生物測定必須純凈（原油或原粉），至少要有確切的有效成分含量。施藥要均勻一致。 （2）必須設(shè)立對照 對照(check，符號CK) ，對照有

12、三種： 空白對照： 非藥劑成分對照 ：如丙酮對照。 標(biāo)準(zhǔn)藥劑對照：多菌靈 根據(jù)具體情況和測定要求確定試驗(yàn)中所需設(shè)置的對照。（3）各種處理必須設(shè)置平行重復(fù) 任何實(shí)驗(yàn)都必須能夠重復(fù)，這是具有科學(xué)性的標(biāo)志。 增加重復(fù)是減少誤差的一種方法。 一般室內(nèi)毒力測定要求至少重復(fù)3次。田間小區(qū)藥效試驗(yàn)，則要求重復(fù)4-5次。室內(nèi)毒力測定線性濃度范圍的尋找（1）濃度（或劑量）范圍的尋找將待測樣品分別配制成跨度較大的幾個(gè)濃度，根據(jù)試驗(yàn)所需要的方法測定每個(gè)濃度（或劑量）對供試生物的活性，尋找其效應(yīng)值（如死亡率、抑制率等）在1%-99%之間的濃度（或劑量），即可確定大致的濃度范圍（2）設(shè)置濃度（或劑量）在所得到的大致濃度

13、范圍內(nèi)，設(shè)計(jì)一系列不同的藥劑濃度（或劑量），濃度梯度可以根據(jù)藥劑特點(diǎn)及初步確定的濃度范圍設(shè)置成等比、等差或其它形式，然后測定不同濃度藥劑對目標(biāo)生物的效應(yīng)值。（3）最終的濃度確定:若可選出5-7組滿足上面兩個(gè)條件的數(shù)據(jù)，即所設(shè)置濃度合理。反之，則需要重新設(shè)置濃度。注意：殺蟲實(shí)驗(yàn)中對照組的死亡率不能超過20%殺蟲劑室內(nèi)生物測定殺蟲劑生物測定技術(shù)的一般原則（一）控制影響因素 環(huán)境條件、昆蟲、藥劑、溶劑等。（二）必須設(shè)立對照 空白對照、溶劑對照、標(biāo)準(zhǔn)藥劑對照。（三）必須設(shè)重復(fù) 一般重復(fù)3次，每重復(fù)2050頭試蟲。（四）供試的目標(biāo)昆蟲盡量選擇農(nóng)作物害蟲，在同一環(huán)境條件下人工飼養(yǎng),或在田間同一環(huán)境條件下抓

14、捕，盡量一致。 標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲：是指在生物測定中被普遍采用的，具有一定代表性和經(jīng)濟(jì)意義，并且抗藥力穩(wěn)定均勻的農(nóng)藥殺蟲毒力和毒效指示的試蟲群體。對標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲的要求1、易飼養(yǎng)，繁殖力強(qiáng)，不互相殘殺，不受季節(jié)限制，能保證常年充分供應(yīng)；2、要求有一定的代表性和經(jīng)濟(jì)意義。3、生活力及抗藥力要穩(wěn)定和均勻一致；4、選用合適蟲期、齡期、年齡的試蟲群體或混合群體作為測試對象。5、便于進(jìn)行移取處理標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲的移取方法(一) 一般移取法(二) 趨光法(三) 麻醉法: 1、CO2法；2、揮發(fā)蒸氣法 ；3、冷凍法 ；4、乙醚低溫麻醉法(四)吸蟲法(五)自行運(yùn)動移蟲法二、初步毒力試驗(yàn)1、應(yīng)用范圍:主要用于對大量化合物的

15、殺蟲活性篩選用于為田間防治害蟲篩選有效藥劑初步毒力試驗(yàn)又叫過篩試驗(yàn)（screen test）。其目的是：確定一種新化合物對某一目標(biāo)昆蟲是否有毒，以便確定是否有必要進(jìn)一步做毒殺作用方式或精密的毒力測定。比較粗放的初步試驗(yàn)，對篩選新農(nóng)藥來說是更為主要的。初步毒力測定的方法:噴霧 噴粉 浸漬食料混藥法 精密的毒力測定:就是我們常說的毒力測定。指在特定條件下衡量某種殺蟲劑對某種昆蟲毒力程度的一種方法。可用來了解某一殺蟲劑對某一害蟲的毒力程度，也可用來比較幾種殺蟲劑對某一種昆蟲的毒力差別；1、內(nèi)容: 毒殺作用方式的測定毒力程度的測定定量取食法、夾毒葉片法、液滴飼喂法、口腔注射法葉片夾毒法致死中量的計(jì)算：

16、根據(jù)取食面積、單位面積上的著藥量及試蟲體重，求出每頭試蟲的單位體重受藥量，排序，分組:生存組、生死組、死亡組。葉片夾毒法致死中量的計(jì)算： A:中間組每項(xiàng)死蟲單位體重藥量累加除以總死蟲數(shù)得A。B:中間組每項(xiàng)活蟲單位體重藥量累加除以總死蟲數(shù)得B。經(jīng)典夾毒葉片法的缺點(diǎn)：操作麻煩.需要控制取食量。濕度不好控制，導(dǎo)致葉片干縮，難測定面積。要求施藥均勻。殺蟲劑胃毒毒力測定技術(shù)改進(jìn)夾毒葉片法改進(jìn)夾毒葉片法的特點(diǎn)：將不定量進(jìn)食改為定量給食，并用點(diǎn)滴藥量代替噴粉或噴霧。殺蟲劑的觸殺毒力測定技術(shù)局部施藥法點(diǎn)滴法（topical application) 將一定濃度的藥液點(diǎn)滴于蟲體的某一部位，多在幼蟲的前胸背板上，

17、藥劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁形成藥膜而侵入體內(nèi)。熏蒸殺蟲作用測定方法：（1）二重皿法（2）三角瓶法（3）廣口瓶法葉蝶法：拒食率（%）=(對照取食面積處理取食面積)/對照取食面積×100溫濕度對殺蟲劑的熏蒸毒力影響較大，一般在25、相對濕度50%條件下測定。熏蒸劑的藥量計(jì)算：以單位容積內(nèi)的藥劑用量來表示（mg/L或ml/L）。校正死亡率（%）處理死亡率對照死亡率1對照死亡率×100校正死亡率公式的局限性1、只有當(dāng)自然死亡與藥劑所引起的死亡沒有關(guān)系時(shí),自然死亡率在5%20%之間時(shí)才運(yùn)用；2、如自然死亡率過大或藥劑處理對自然死亡率有影響時(shí)均不運(yùn)用；3、如自然死亡率在5%以下，可將處理

18、組死亡率減去自然死亡率即可得到校正，即：校正死亡率=處理組對照組4、如自然死亡率>20%時(shí)，則表示該目標(biāo)昆蟲種群不宜供試驗(yàn)用，試驗(yàn)結(jié)果不可靠。致死中量（Medium Lethal Dose）LD50：指在一定條件下，可致供試生物半數(shù)死亡機(jī)會的藥劑劑量，表示單位：mg/kg、g/g或g/頭。致死中濃（Medium Lethal Concentration）LC50：可致供試生物半數(shù)死亡機(jī)會的藥劑濃度。致死中時(shí)(Medium Lethal Time)LT50或擊倒中時(shí)(Medium Knockdown Time)KT50即殺死或擊倒昆蟲群體一半個(gè)體所需的時(shí)間。相對毒力指數(shù)昆蟲對殺蟲劑的敏感性

19、分布是一個(gè)偏常態(tài)分布，殺蟲劑對昆蟲的效應(yīng)的增加不是和劑量的增加成比例，而是與劑量增加的比例成比例。毒力指數(shù)（TI）(%)標(biāo)準(zhǔn)殺蟲劑LD50*100/供試殺蟲劑LD50混劑（M）的實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）(%)標(biāo)準(zhǔn)殺蟲劑的LD50*100/混劑M的LD50混劑M的理論毒力指數(shù)（TTI）A藥的TI×M藥中的A% B藥的 TI×M藥中的B%混劑M的共毒系數(shù)（CTC）ATI÷TTI×100增效與否判定標(biāo)準(zhǔn)：CTC>120增效作用；CTC80 120相加作用；CTC<80拮抗作用 實(shí)際死亡率與理論死亡率之差或協(xié)同毒力指數(shù)大于20時(shí)屬增效，小-20屬拮抗。

20、 協(xié)同毒力指數(shù)（）實(shí)際死亡率理論死亡率理論死亡率× 100一般認(rèn)為預(yù)期LD50/實(shí)測LD50的毒力比值在0.52.6之間屬相加作用，大于2.6時(shí)屬增效，小于0.5屬拮抗。 實(shí)例：菊·殺混劑(3:7混配)對棉鈴蟲3齡幼蟲毒力測定數(shù)據(jù)為：氰戊菊酯LD500.6598g/g殺螟硫磷LD5078.2013g/g菊·殺混劑LD501.0831g/g通過計(jì)算，請說明這兩種農(nóng)藥混配后有無增效作用？菊·殺混劑理論毒力指數(shù)（TTI）(0.6598÷0.6598)×30%×100+ (0.6598÷78.2013)× 70%

21、×100 =30.6菊·殺混劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）(0.6598÷1.0831)×100=60.9菊·殺混劑共毒系數(shù)（CTC）60.9÷30.6×100199120說明：氰戊菊酯與殺螟硫磷以3:7混配具增效作用。殺菌劑的生物測定殺菌劑生物測定：以病菌（活體或離體）為測定對象，評價(jià)各種殺菌劑的毒效一、離體測定：這種測定中僅包括病菌和藥劑，判斷藥劑的毒力主要是根據(jù)病菌與藥劑接觸后的反應(yīng)（如孢子不萌發(fā)，不長菌絲等）。優(yōu)點(diǎn)：易于控制、操作簡便迅速、精確度較高。缺點(diǎn)：測定結(jié)果與生產(chǎn)實(shí)際距離較大，而有些化合物必須在寄主植物體內(nèi)活化后才

22、起殺菌作用?？赡苈┖Y一些未來頗具潛力的化合物。二、活體測定:這一類型的方法包括病原菌、藥劑和寄主植物。殺菌劑毒力以寄主植物的發(fā)病情況（普遍程度、嚴(yán)重程度）來評判。特點(diǎn)：測定周期較長，操作比較復(fù)雜，大田藥效測定常受季節(jié)限制，測定時(shí)受多種因子的影響，致使結(jié)果不穩(wěn)定。但在應(yīng)用實(shí)際較接近，有很大實(shí)用價(jià)值殺菌劑毒力測定步驟：1、 在室內(nèi)進(jìn)行殺菌劑生物測定；2、在控制條件下，進(jìn)行殺菌劑溫室盆栽生物測定；3、在自然條件下，進(jìn)行殺菌劑的大田藥效試驗(yàn)。清潔：排除其它化合物的影響。滅菌：用物理或化學(xué)方法滅菌，完全除去或殺死器皿表面和內(nèi)部的一些微生物。消毒：消毒是消滅或減少某些病原微生物，而不是消滅一切微生物。在進(jìn)

23、行分離工作時(shí)，植物組織表面往往要消毒、去雜而?！罢妗保ú≡?）物理滅菌干熱滅菌：利用干熱空氣來滅菌溫度：160180，不宜超過180。時(shí)間：160°，2h；180，1h。為提高效果，可用間歇滅菌法，熱-冷-熱（溫度可低些）。濕熱滅菌：高壓蒸氣滅菌較常用，效率高。干熱：160，2h，滅菌濕熱：121，20min 2）化學(xué)滅菌：殺菌力極強(qiáng)的洗液有：1%升汞活液、5%福爾馬林、70%酒精次氯酸鹽3）過濾滅菌：細(xì)菌不能通過，如過濾漏斗可用來濾出含蛋白的培養(yǎng)基、血清及抗藥素中的細(xì)菌。 （二）植物病原菌的培養(yǎng)步驟（要求：在無菌條件下進(jìn)行）1、培養(yǎng)基的制備2、接菌3、保存對供試菌的要求1、較易

24、繁殖、菌落邊緣明顯，產(chǎn)菌絲、孢子量合適；2、要求有一定代表性、經(jīng)濟(jì)意義，為重要的農(nóng)業(yè)病菌；3、生活力、抗性均勻、穩(wěn)定、一致；4、便于操作、移取等。殺菌劑皿內(nèi)生物測定:（一）孢子萌發(fā)法（二）含毒介質(zhì)培養(yǎng)法（三）葉碟法（一）孢子萌發(fā)法基本原理：將供試藥劑附著在載玻片上或其它平面上，然后將供試病菌孢子懸浮液滴在上面（或?qū)㈡咦討腋∫号c藥液混合后滴在玻片上），在保溫、保濕條件下培養(yǎng)一定時(shí)間后鏡檢以孢子萌發(fā)力判斷殺菌劑毒力。優(yōu)點(diǎn)：快速、試驗(yàn)當(dāng)天即可得結(jié)果。 步驟：1. 萌發(fā)表面的處理2. 藥劑在玻片上的附著3. 孢子懸浮液的準(zhǔn)備4. 定溫保濕培養(yǎng)5. 結(jié)果檢查及表示孢子懸浮液的準(zhǔn)備:菌種應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)菌種，供試

25、菌種應(yīng)符合以下條件 菌種純粹，在一般培養(yǎng)基上易大量產(chǎn)生孢子； 多代繁殖不易產(chǎn)生變異； 孢子個(gè)體較大，易于在顯微鏡下觀察萌發(fā)情況； 無菌水，攪勻 二層紗布過濾 除去菌絲體及破碎培養(yǎng)基 菌種懸浮 液 菌種 離心 無菌水洗 洗凈的孢子 在分類上有一定的代表性，而且是重要的植物病害病原菌。 調(diào)至最高濃度（10×10倍，40個(gè)孢子），一定時(shí)間后（對照萌發(fā)率在85%以上）檢查孢子萌發(fā)率，一般在低倍鏡下，隨機(jī)檢查200個(gè)孢子。 抑制孢子萌發(fā)率（%） 對照孢子萌發(fā)率處理孢子萌發(fā)率 對照萌發(fā)率 ×100 (二) 含毒介質(zhì)培養(yǎng)法：1. 水平擴(kuò)散法（又叫抑菌圈法或平面法）2. 生長速率法3. 最低抑制濃度法1. 水平擴(kuò)散法（又叫抑菌圈法或平面法）步驟：制備雙層培養(yǎng)基、擺放牛津杯放帶濾紙片、低溫放置、適溫培養(yǎng)、結(jié)果檢查優(yōu)點(diǎn)：精確度高，操作簡單，很快可得到結(jié)果.缺點(diǎn)：測定結(jié)果受藥劑溶解后和擴(kuò)散能力影響很大，有一定局限性，另外，對嚴(yán)格的寄生菌不適合。2. 生長速率法步驟： 制備菌餅； 制備帶毒培養(yǎng)基； 移菌餅； 結(jié)果檢查生長抑制率（%）對照的菌落直徑處理的菌落直徑對照菌落生長直徑