地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷

1、a和卩地中海貧血的it傳舞查和產(chǎn)前診新Genetic Screening and Prenatal Diagnosis fora and 卩 thalassemia in Guangdongizleizhou 2006 Decen±)er 07南方醫(yī)科大學，醫(yī)學遺傳學教研宣南方醫(yī)阮產(chǎn)前診斷和遺傳病診斷技術(shù)中心Southern Medical University地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國南方a和0地貧的人群攜帶率地區(qū)攜帶率(%)a地貧P地貧廣東8.532.54廣西14.956.78四川1.922.18貴州4.72臺灣4.201.10香港5.023.41b東珠海湛江南廣

2、東省五個地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學調(diào)查Journal of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22.廣東省人群中a地貧的攜帶者頻率遺傳變異Allele數(shù) %a地貧染色體(sea) Deletion (-a3-7) Deletion (-a") Deletion (-acs) Mutation4788.532324141743.10530951001820.042004100210.0210.022004(thai) Deletion (-aQS) Mutation (11-1) Deletion a2CD118 (+TCA) -a-gene de

3、letion Undetermined廣東省人群中0地貧的攜帶者頻率遺傳變異Allele 數(shù)%0地貧染色體1982.54Deletion of CTTT at codons 41-42720.92C->T at position 654 in IVS2480.62A->G at nucleotide-28330.42G->A at codon 2610013A->T at codon 1780.09Insertion of A atcodons71-7270.09G->T at codon 4370.09A->G at nucleotide-2940.05I

4、nsertion of A atcodons27-284005p-gene deletion1001Undetermined30.06廣東省年富鳳險幺姬狽測數(shù)據(jù)(95%CI丿重型或中間型0地貧： 645(480, 835) Barfs胎兒水腫綜合征：1714 (1498, 1945)血紅蛋白(Hb) H ?。?1677 (1467, 1901)廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率(1998-2001)排序出生缺陷分析例數(shù)發(fā)生頻率(/10,0 00)1先天性心臟病26019.662重型01地貧20815.733多指20015.124肢體短縮1118.395唇裂/腭裂1098.24rw I重型Ot地貧:胎兒

5、水腫綜合征早產(chǎn)死胎或出生前后死亡可導致嚴重產(chǎn)科并發(fā)癥無理想治療方法地貧純合子：致死性出生缺陷重型卩地貧出生后1年內(nèi)發(fā)病多于未成年前因嚴重貧血而夭折 輸血和去鐵治療可維持，代價昂貴研究地中海貧血的意義重癥地貧患兒的出生是世界公認的公共衛(wèi)生問題通過產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預防措施 WHO優(yōu)先推薦在發(fā)展中國家實施預防的遺傳性疾病 預防地貧是中國南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求應用于地貧控制的人群卸查策略基于醫(yī)院水平的預防計劃 基于社區(qū)水平的預防計劃 擴展的家系篩查計劃中國南方地貧人群預防的管個飾瞻性舞查計劃時間:1993.01,012003.12.31基于醫(yī)院的預防計劃：廣州市婦嬰醫(yī)院 占廣州

6、市出生數(shù)的1 /17策略：孕期雜合子篩查結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實施被檢對象（婚前或孕中期）血液學分析（MCVl，Hb A2變化）I 排除地貧遺傳咨詢二雙親基因分析胎兒產(chǎn)前診斷地貧攜帶者遺傳咨詢，配偶檢查血液學分析（MCVl HbA2變化）IJI地貧攜帶者排除地貧地貧攜帶者卸查及產(chǎn)前診斷流程篩查結(jié)果異常血紅蛋匂節(jié)查結(jié)果異常血紅蛋白孕婦陽性病例 配偶數(shù)總數(shù)頻率%0Hb E46349091Hb H21223043Hb CS153180.34Hb G*141150.28Hb Q*13215028Hb N*12113024Hb D*101110.20HB New York808015Total139

7、13152283(00T)（8-96）(OP(厶P(乙g)（£）(厶g)8£乙8乙98TS8S99DTT089T09666T（00T）（00T）（8乙）(6-T)(os)（8-£）(8-g)8L1乙T8LTZL1£9乙g乙方乙£9866T(00T)（£"98）（9乙）(厶P(乙g)（9£）(厶GL8T0TLTS89Tog乙TOD686"乙6£匸L66T（00T）©68)（9乙）(厶Pd)（9飛）(厶G8LTST86TT8TS8S方汕09方方厶 66P966T（00T）（2*88）(&#

8、163;£)(6-T)W)（9飛）(8-g)L9T2TLLT乙仇L乙乙T9STSLTL乙06£S66T（00T）（6-88）(T-S)(6P(£S)（9飛）(8-g)89T688T992乙方L131L 9"方66T（9厶8）（£乙6）（6乙）（£乙）（厶£）（乙£）(8-g)LST0T8£T6乙T乙£乙0S££6£89686££661(%)(%)（%）總時(%)(%)(%)湮來Dd/»（%）尊祂尊科D尊Wl碉D旺¥種華鄭淇W

9、43謨M審【誣3臟尊華鄭醬轉(zhuǎn)身陳井尋勢E002-E661觀多酋瞬* “ J(conf d)年份篩查 孕婦數(shù)廣州總 孕婦數(shù)篩查 丈夫數(shù)篩查發(fā)現(xiàn)的 陽性孕婦數(shù)檢陽；a地貧 (%)測 出 性夫婦P地貧 (%)的 數(shù)岬 地貧()完成的診斷a地貧(%)產(chǎn)前 數(shù)卩地貧(溝a地貧(%)P地貧 (%)200044928181741825617221716217(5.7)(3.8)(5.0)(1.7)(3.8)(100)(100)200145218015241125416417812178(5.6)(3.6)(4.1)(1.9)(2.9)(100)(100)200246958066741526016316811

10、168(5.6)(3.4)(3.9)(1.9)(2.7)(100)(100)200341248639337222715215613156(5.5)(3.6)(4.0)(1.6)(3.5)(100)(100)Total492218607584503280417831988313118782(5.7)(3.6)(4.4)(1.8)(2.9)(95.8)(98.8)產(chǎn)前診斷：187例a地貧82例卩地貧1234篩查發(fā)現(xiàn)的陽性孕婦或陽性夫婦 a地貧勺 P地貧a地貧B地貧5.7%3.6%4.4%1.8%pauags se-dnoo 2SV0 -£01廣州申如嬰醫(yī)隨1993-2003卸查計劃的結(jié)果

11、產(chǎn)箭診斷結(jié)果地中海貧血的產(chǎn)前診斷胎兒取樣技術(shù) DNA診斷技術(shù)a 地貧的診斷B 地貧的診斷DNA診斷技術(shù)多重PCR （ multiplex PCR）等位基因特異性性寡核昔酸雜交（ASO）反向點雜交（RDB）變性高效液相色譜（DHPLC）多重引物延伸 DHPLC （multiplex PE/DHPLC）用于(X和B地貧產(chǎn)前診新的方(1993-2003)年份主要診斷技術(shù)產(chǎn)前診斷例數(shù)總數(shù)a地貧B地貧PNDs1993 一 2003胎兒血分析1261261999 一 2003超聲診斷6161(DNA: Gap-PCR)19931-199312DNA: AS0 雜交771994 - 2002DNA:反向點雜

12、交707020031-200312PE/DHPLC66BarfsAFA2originPatient3Patient2FetalAdultDiagnosisPatient 1Barfs hydrops fetalisPatient 2Hb H diseasePatient 3a thal trait於兒朋帶血血紅蠶匂電冰圖譜本賣殮童應用的主要技術(shù)應用對象Gap-PCRa地貧常見突變RDBa地貧/ 0地貧半變性DHPLC*a地貧/。地貧SBE/FP*B地貧常見突變PE/DHPLC。地貧5種常見突變q-鏈ELISA assaya地貧一sea缺失突變¥軫國聲身両諮回幺身疇硏D凈普qwq”oz

13、QMOTq”oqmot-uoiiapa （z£ Q ） uoijQpa （乙 p q -） uoiiaiaa（V3S-）C3mvRPl>采用Gap-PCR進行“sea優(yōu)地貧基因缺失的基因分憂M 純合子雜合子正常 MFamily 1 Family 2 Family3M N P B Fa Mo Fe Fa Mo Fe Fa Mo Fe NormalMutantNormal Heterozygote Homozygote三個a地貧家庭的產(chǎn)侖診斷結(jié)系與美國商嬴化UB1渕利盒的對此研老卜UBl Kit. USA1 SGI System. IM方醫(yī)大1圖3-4侵用他I KIT. USA和S

14、G= 57stern對樣品宦淤的比較Figure 3一4Ccaparison of deteiminatiion Ucir；g UBI kit sr.d 3GI syztem注冊號：粵食藥監(jiān)械（準）字2006第2400333號珠海經(jīng)濟#區(qū)海泰生物制藥有艱公司:你單住生產(chǎn)的東南亞型x 地中海貧血Zeta鏈蛋白檢測試列盒.經(jīng)審查.符合醫(yī)療器域產(chǎn)品市場準入規(guī)定，準許注冊 自批準之日起有效期至二OO年匕月十二日止°中華人民共和國PEOPLES REPUBLIC Ol CHINA 醫(yī)療器械注冊證 REGIS I RAI ION CERTIFICATE FOR MFDICAI DEVICE特此證

15、明。局2'的6年7 ；推附件：法療器械注冊登記長中國南方B地貧災變的變異類矍和住置TranscriptionFrameshift:RNA splicingNonsense codonInitiator codonDouble heterozygote中國南方B地貧災變的變異類矍和住置DHPLC分析人B珠妥匂基因: 三個PCR片段擴增5 UTR IVS1IVS23， UTRA B Fragment size: A = 453 bpB = 364 bpC = 423 bp One set of PCR conditionsfcjDHPLC的三種操作棧式非變性分析(50 °C )雙

16、鏈DNA大小測定半變性分析(52-78 °C ) 突變鑒定全變性分析(78-80 °C ) Oligo和RNA分析PCR產(chǎn)物的半變性分析(52-78 °C )Reference SamplesMutantHeteroduplexesHomoduplexes+G CIIheatcoolA C G TA T G CVVIIDouble-stranded DNA Fragmento 9 s e 6® e o ©PtiosphaLe+ t temperature JCH2CH3Trithyl AmmoniumPartially Single-stran

17、ded DNA FragmentFragment A765432 1098765432109575 5432101222222 221111111111 -CXE) 2UU代qssqa一 060602 一 060516060530- 080449060524- 060544 一 060546 一 080651 一 060635060637 一 060536DHPLC檢測B地貧吏變的結(jié)果Time (Minutes)525046464442403s363432302826242220181xE) 2UU 傀qssqa一 0605110607037 一 0607044 -0

18、6060510607045 一 0607046 一 06070470606050 一 08080270608023DHPLC檢測B地貧吏變的結(jié)果Fragment C2423-222120191817-16154 A141312-1110CAUJ) QuueqssqqTime (Minutes)DHPLC檢測B地貧吏變的結(jié)果GenotypeFatherCDs4142(CTTT)/NMotherIVS-2-654 (C-T) / NFetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal controlN / NRDB analysis: application to rapid prena

19、tal diagnosis for eight pthalassaemia mutations83例卩地貧富鳳險於兒產(chǎn)前診斷結(jié)果診斷結(jié)果基因型例數(shù)正常30雜合子(total)35CDs 41-42(-TCTT)/ N14IVS-2-654(C>T) /N8-28 (A>G)/ N5CD17 (A>T)/ N3CD26 (G>A)/ N2-29 (A>G)/ N1CDs27-28 (+C) / N1Unknown /N or Normal1(confd)診斷結(jié)果基因型例數(shù)純合子或雙重雜合子(總數(shù))18CDs 41-42(-TCTT)/IVS-2-654(C>T

20、)6CDs 41-42(-TCTT)/-28 (A>G)4CDs 41-42(-TCTT)/CD17 (A>T)2IVS-2-654(C>T)/CD17 (A>T)2CDs 41-42(-TCTT)/CDs 41-42(-TCTT)1CDs 41-42(-TCTT)/CDs 27-28(+C)1IVS-2-654(C>T)/CDs71-72 (+A)1IVS-2-654(C>T)/ CD43(G>T)1總數(shù)83266例富風險妹振的產(chǎn)前診新結(jié)果胎兒診斷產(chǎn)前診斷例數(shù)總數(shù)(%)a地貧卩地貧正常413069 (25.6)攜帶者9235125 (46.3)受累胎

21、兒*541872 (26.7)胎兒流產(chǎn)213 (1.11)誤診000.0總數(shù)(%)187 (693)83 (30.7)270 (100)* Three Hb H disease involved49221例被篩查的孕婦4503 (98.2%)84 (1. 8%)4222例非風險妊娠4587 (9. 3%)地貧特征/病例 2804 (5.7%) oc地貧 1783 (3,%)。地貧139例其他異常Hb個體44495例正常表型個體例配偶未接受篩查281(6. 2%)例高風險妊娠 198重型a地貧 83重型卩地長281 (100%)例高風險妊娠孕婦 進入爾隨訪269 （95. 7%） 孕婦實施產(chǎn)前診斷 187 a地貧 83 。地貧（1雙胞胎）72 （26.7%）孕婦要求終止妊娠 54重型a地貧69重型地貧被預防 51水腫胎 18重型卩地貧（1雙胞胎）12孕婦不接受產(chǎn)前診斷2例水腫胎出生197例孕婦繼續(xù)妊娠 18重型。地貧（1雙胞胎）廣東