地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷

1、a和卩地中海貧血的it傳舞查和產(chǎn)前診新Genetic Screening and Prenatal Diagnosis fora and 卩 thalassemia in Guangdongizleizhou 2006 Decen±)er 07南方醫(yī)科大學(xué)，醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研宣南方醫(yī)阮產(chǎn)前診斷和遺傳病診斷技術(shù)中心Southern Medical University地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國(guó)南方a和0地貧的人群攜帶率地區(qū)攜帶率(%)a地貧P地貧廣東8.532.54廣西14.956.78四川1.922.18貴州4.72臺(tái)灣4.201.10香港5.023.41b東珠海湛江南廣

2、東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查Journal of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22.廣東省人群中a地貧的攜帶者頻率遺傳變異Allele數(shù) %a地貧染色體(sea) Deletion (-a3-7) Deletion (-a") Deletion (-acs) Mutation4788.532324141743.10530951001820.042004100210.0210.022004(thai) Deletion (-aQS) Mutation (11-1) Deletion a2CD118 (+TCA) -a-gene de

3、letion Undetermined廣東省人群中0地貧的攜帶者頻率遺傳變異Allele 數(shù)%0地貧染色體1982.54Deletion of CTTT at codons 41-42720.92C->T at position 654 in IVS2480.62A->G at nucleotide-28330.42G->A at codon 2610013A->T at codon 1780.09Insertion of A atcodons71-7270.09G->T at codon 4370.09A->G at nucleotide-2940.05I

4、nsertion of A atcodons27-284005p-gene deletion1001Undetermined30.06廣東省年富鳳險(xiǎn)幺姬狽測(cè)數(shù)據(jù)(95%CI丿重型或中間型0地貧： 645(480, 835) Barfs胎兒水腫綜合征：1714 (1498, 1945)血紅蛋白(Hb) H ?。?1677 (1467, 1901)廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率(1998-2001)排序出生缺陷分析例數(shù)發(fā)生頻率(/10,0 00)1先天性心臟病26019.662重型01地貧20815.733多指20015.124肢體短縮1118.395唇裂/腭裂1098.24rw I重型Ot地貧:胎兒

5、水腫綜合征早產(chǎn)死胎或出生前后死亡可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥無(wú)理想治療方法地貧純合子：致死性出生缺陷重型卩地貧出生后1年內(nèi)發(fā)病多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折 輸血和去鐵治療可維持，代價(jià)昂貴研究地中海貧血的意義重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問(wèn)題通過(guò)產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施 WHO優(yōu)先推薦在發(fā)展中國(guó)家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病 預(yù)防地貧是中國(guó)南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求應(yīng)用于地貧控制的人群卸查策略基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃 基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃 擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃中國(guó)南方地貧人群預(yù)防的管個(gè)飾瞻性舞查計(jì)劃時(shí)間:1993.01,012003.12.31基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃：廣州市婦嬰醫(yī)院 占廣州

6、市出生數(shù)的1 /17策略：孕期雜合子篩查結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施被檢對(duì)象（婚前或孕中期）血液學(xué)分析（MCVl，Hb A2變化）I 排除地貧遺傳咨詢二雙親基因分析胎兒產(chǎn)前診斷地貧攜帶者遺傳咨詢，配偶檢查血液學(xué)分析（MCVl HbA2變化）IJI地貧攜帶者排除地貧地貧攜帶者卸查及產(chǎn)前診斷流程篩查結(jié)果異常血紅蛋匂節(jié)查結(jié)果異常血紅蛋白孕婦陽(yáng)性病例 配偶數(shù)總數(shù)頻率%0Hb E46349091Hb H21223043Hb CS153180.34Hb G*141150.28Hb Q*13215028Hb N*12113024Hb D*101110.20HB New York808015Total139

7、13152283(00T)（8-96）(OP(厶P(乙g)（£）(厶g)8£乙8乙98TS8S99DTT089T09666T（00T）（00T）（8乙）(6-T)(os)（8-£）(8-g)8L1乙T8LTZL1£9乙g乙方乙£9866T(00T)（£"98）（9乙）(厶P(乙g)（9£）(厶GL8T0TLTS89Tog乙TOD686"乙6£匸L66T（00T）©68)（9乙）(厶Pd)（9飛）(厶G8LTST86TT8TS8S方汕09方方厶 66P966T（00T）（2*88）(&#

8、163;£)(6-T)W)（9飛）(8-g)L9T2TLLT乙仇L乙乙T9STSLTL乙06£S66T（00T）（6-88）(T-S)(6P(£S)（9飛）(8-g)89T688T992乙方L131L 9"方66T（9厶8）（£乙6）（6乙）（£乙）（厶£）（乙£）(8-g)LST0T8£T6乙T乙£乙0S££6£89686££661(%)(%)（%）總時(shí)(%)(%)(%)湮來(lái)Dd/»（%）尊祂尊科D尊Wl碉D旺¥種華鄭淇W

9、43謨M審【誣3臟尊華鄭醬轉(zhuǎn)身陳井尋勢(shì)E002-E661觀多酋瞬* “ J(conf d)年份篩查 孕婦數(shù)廣州總 孕婦數(shù)篩查 丈夫數(shù)篩查發(fā)現(xiàn)的 陽(yáng)性孕婦數(shù)檢陽(yáng)；a地貧 (%)測(cè) 出 性夫婦P地貧 (%)的 數(shù)岬 地貧()完成的診斷a地貧(%)產(chǎn)前 數(shù)卩地貧(溝a地貧(%)P地貧 (%)200044928181741825617221716217(5.7)(3.8)(5.0)(1.7)(3.8)(100)(100)200145218015241125416417812178(5.6)(3.6)(4.1)(1.9)(2.9)(100)(100)200246958066741526016316811

10、168(5.6)(3.4)(3.9)(1.9)(2.7)(100)(100)200341248639337222715215613156(5.5)(3.6)(4.0)(1.6)(3.5)(100)(100)Total492218607584503280417831988313118782(5.7)(3.6)(4.4)(1.8)(2.9)(95.8)(98.8)產(chǎn)前診斷：187例a地貧82例卩地貧1234篩查發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性孕婦或陽(yáng)性夫婦 a地貧勺 P地貧a地貧B地貧5.7%3.6%4.4%1.8%pauags se-dnoo 2SV0 -£01廣州申如嬰醫(yī)隨1993-2003卸查計(jì)劃的結(jié)果

11、產(chǎn)箭診斷結(jié)果地中海貧血的產(chǎn)前診斷胎兒取樣技術(shù) DNA診斷技術(shù)a 地貧的診斷B 地貧的診斷DNA診斷技術(shù)多重PCR （ multiplex PCR）等位基因特異性性寡核昔酸雜交（ASO）反向點(diǎn)雜交（RDB）變性高效液相色譜（DHPLC）多重引物延伸 DHPLC （multiplex PE/DHPLC）用于(X和B地貧產(chǎn)前診新的方(1993-2003)年份主要診斷技術(shù)產(chǎn)前診斷例數(shù)總數(shù)a地貧B地貧PNDs1993 一 2003胎兒血分析1261261999 一 2003超聲診斷6161(DNA: Gap-PCR)19931-199312DNA: AS0 雜交771994 - 2002DNA:反向點(diǎn)雜

12、交707020031-200312PE/DHPLC66BarfsAFA2originPatient3Patient2FetalAdultDiagnosisPatient 1Barfs hydrops fetalisPatient 2Hb H diseasePatient 3a thal trait於兒朋帶血血紅蠶匂電冰圖譜本賣(mài)殮童應(yīng)用的主要技術(shù)應(yīng)用對(duì)象Gap-PCRa地貧常見(jiàn)突變RDBa地貧/ 0地貧半變性DHPLC*a地貧/。地貧SBE/FP*B地貧常見(jiàn)突變PE/DHPLC。地貧5種常見(jiàn)突變q-鏈ELISA assaya地貧一sea缺失突變¥軫國(guó)聲身両諮回幺身疇硏D凈普qwq”oz

13、QMOTq”oqmot-uoiiapa （z£ Q ） uoijQpa （乙 p q -） uoiiaiaa（V3S-）C3mvRPl>采用Gap-PCR進(jìn)行“sea優(yōu)地貧基因缺失的基因分憂M 純合子雜合子正常 MFamily 1 Family 2 Family3M N P B Fa Mo Fe Fa Mo Fe Fa Mo Fe NormalMutantNormal Heterozygote Homozygote三個(gè)a地貧家庭的產(chǎn)侖診斷結(jié)系與美國(guó)商嬴化UB1渕利盒的對(duì)此研老卜UBl Kit. USA1 SGI System. IM方醫(yī)大1圖3-4侵用他I KIT. USA和S

14、G= 57stern對(duì)樣品宦淤的比較Figure 3一4Ccaparison of deteiminatiion Ucir；g UBI kit sr.d 3GI syztem注冊(cè)號(hào)：粵食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2006第2400333號(hào)珠海經(jīng)濟(jì)#區(qū)海泰生物制藥有艱公司:你單住生產(chǎn)的東南亞型x 地中海貧血Zeta鏈蛋白檢測(cè)試列盒.經(jīng)審查.符合醫(yī)療器域產(chǎn)品市場(chǎng)準(zhǔn)入規(guī)定，準(zhǔn)許注冊(cè) 自批準(zhǔn)之日起有效期至二OO年匕月十二日止°中華人民共和國(guó)PEOPLES REPUBLIC Ol CHINA 醫(yī)療器械注冊(cè)證 REGIS I RAI ION CERTIFICATE FOR MFDICAI DEVICE特此證

15、明。局2'的6年7 ；推附件：法療器械注冊(cè)登記長(zhǎng)中國(guó)南方B地貧災(zāi)變的變異類(lèi)?ài)呛妥≈肨ranscriptionFrameshift:RNA splicingNonsense codonInitiator codonDouble heterozygote中國(guó)南方B地貧災(zāi)變的變異類(lèi)?ài)呛妥≈肈HPLC分析人B珠妥匂基因: 三個(gè)PCR片段擴(kuò)增5 UTR IVS1IVS23， UTRA B Fragment size: A = 453 bpB = 364 bpC = 423 bp One set of PCR conditionsfcjDHPLC的三種操作棧式非變性分析(50 °C )雙

16、鏈DNA大小測(cè)定半變性分析(52-78 °C ) 突變鑒定全變性分析(78-80 °C ) Oligo和RNA分析PCR產(chǎn)物的半變性分析(52-78 °C )Reference SamplesMutantHeteroduplexesHomoduplexes+G CIIheatcoolA C G TA T G CVVIIDouble-stranded DNA Fragmento 9 s e 6® e o ©PtiosphaLe+ t temperature JCH2CH3Trithyl AmmoniumPartially Single-stran

17、ded DNA FragmentFragment A765432 1098765432109575 5432101222222 221111111111 -CXE) 2UU代qssqa一 060602 一 060516060530- 080449060524- 060544 一 060546 一 080651 一 060635060637 一 060536DHPLC檢測(cè)B地貧吏變的結(jié)果Time (Minutes)525046464442403s363432302826242220181xE) 2UU 傀qssqa一 0605110607037 一 0607044 -0

18、6060510607045 一 0607046 一 06070470606050 一 08080270608023DHPLC檢測(cè)B地貧吏變的結(jié)果Fragment C2423-222120191817-16154 A141312-1110CAUJ) QuueqssqqTime (Minutes)DHPLC檢測(cè)B地貧吏變的結(jié)果GenotypeFatherCDs4142(CTTT)/NMotherIVS-2-654 (C-T) / NFetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal controlN / NRDB analysis: application to rapid prena

19、tal diagnosis for eight pthalassaemia mutations83例卩地貧富鳳險(xiǎn)於兒產(chǎn)前診斷結(jié)果診斷結(jié)果基因型例數(shù)正常30雜合子(total)35CDs 41-42(-TCTT)/ N14IVS-2-654(C>T) /N8-28 (A>G)/ N5CD17 (A>T)/ N3CD26 (G>A)/ N2-29 (A>G)/ N1CDs27-28 (+C) / N1Unknown /N or Normal1(confd)診斷結(jié)果基因型例數(shù)純合子或雙重雜合子(總數(shù))18CDs 41-42(-TCTT)/IVS-2-654(C>T

20、)6CDs 41-42(-TCTT)/-28 (A>G)4CDs 41-42(-TCTT)/CD17 (A>T)2IVS-2-654(C>T)/CD17 (A>T)2CDs 41-42(-TCTT)/CDs 41-42(-TCTT)1CDs 41-42(-TCTT)/CDs 27-28(+C)1IVS-2-654(C>T)/CDs71-72 (+A)1IVS-2-654(C>T)/ CD43(G>T)1總數(shù)83266例富風(fēng)險(xiǎn)妹振的產(chǎn)前診新結(jié)果胎兒診斷產(chǎn)前診斷例數(shù)總數(shù)(%)a地貧卩地貧正常413069 (25.6)攜帶者9235125 (46.3)受累胎

21、兒*541872 (26.7)胎兒流產(chǎn)213 (1.11)誤診000.0總數(shù)(%)187 (693)83 (30.7)270 (100)* Three Hb H disease involved49221例被篩查的孕婦4503 (98.2%)84 (1. 8%)4222例非風(fēng)險(xiǎn)妊娠4587 (9. 3%)地貧特征/病例 2804 (5.7%) oc地貧 1783 (3,%)。地貧139例其他異常Hb個(gè)體44495例正常表型個(gè)體例配偶未接受篩查281(6. 2%)例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠 198重型a地貧 83重型卩地長(zhǎng)281 (100%)例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠孕婦 進(jìn)入爾隨訪269 （95. 7%） 孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷 187 a地貧 83 。地貧（1雙胞胎）72 （26.7%）孕婦要求終止妊娠 54重型a地貧69重型地貧被預(yù)防 51水腫胎 18重型卩地貧（1雙胞胎）12孕婦不接受產(chǎn)前診斷2例水腫胎出生197例孕婦繼續(xù)妊娠 18重型。地貧（1雙胞胎）廣東