Liporint使用說(shuō)明書翻譯

1、脂蛋白分類檢測(cè)系統(tǒng)低密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒英文用途和適用范圍Quantimetrix公司的脂蛋白分類檢測(cè)系統(tǒng)低密度脂蛋白試劑盒，是設(shè)計(jì)用來(lái)檢測(cè)血漿或血清中濃度大于100mg/dl的總膽固醇值（脂蛋白成分包括極低密度脂蛋白到高密度脂蛋白）。脂蛋白膽固醇測(cè)量值用作評(píng)估脂分解代謝輔助手段，當(dāng)和其他脂測(cè)試方法結(jié)合使用時(shí)，可用于病人風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和臨床診斷。試驗(yàn)總結(jié)和解釋血漿脂蛋白是用于運(yùn)輸膽固醇、三酰甘油和磷脂的球狀顆粒。主要有五種脂蛋白：乳糜微粒、極低密度脂蛋白、中密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。低HDL膽固醇是冠心病的獨(dú)立的強(qiáng)預(yù)兆。LDL膽固醇增高被認(rèn)為是冠心病主要危險(xiǎn)因素。眾所周知，脂蛋白種類多

2、樣，由多種適合顆粒大小、密度的化學(xué)成分組成。脂蛋白的異質(zhì)性已經(jīng)被多種分析手段演示，例如密度梯度離心、核磁共振、梯度凝膠電脈技術(shù)和脂蛋白分類檢測(cè)系統(tǒng)，一個(gè)線性的、聚丙烯酰胺電泳系統(tǒng)。 低密度脂蛋白在脂蛋白檢測(cè)系統(tǒng)中可能分解成最多7種LDL成分。LDL成分按照組成顆粒從大到小，分別命名為L(zhǎng)DL-1到LDL-7。 受試者LDL異質(zhì)性水平的不同是受基因和環(huán)境因素影響的。年齡、性別和脂質(zhì)情況是常見(jiàn)的影響LDL組分因素。個(gè)體所展示出的脂蛋白概況，主要由認(rèn)定為模式A的浮力大的LDL-1和LDL-2組分構(gòu)成，相對(duì)地，較小的和較密集的成分（LDL-3到LDL-7）被認(rèn)定為“模式B”。 奧斯汀關(guān)于109名心肌梗死

3、患者的研究表明，LDL的模式B成分與心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)增加三倍有關(guān)，不受性別、年齡和相對(duì)體重的支配。Krauss報(bào)告有相似發(fā)現(xiàn)，Rajman的在標(biāo)準(zhǔn)三酰甘油的人中的研究也就低密度脂蛋白組分與風(fēng)險(xiǎn)因素的關(guān)系作報(bào)告。測(cè)試原則脂蛋白檢測(cè)系統(tǒng)試劑盒組成在試管中預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠加有親脂染料的上樣液態(tài)凝膠緩沖鹽染料與每個(gè)脂蛋白中相應(yīng)膽固醇的數(shù)量成比例結(jié)合。預(yù)染的脂蛋白隨后經(jīng)過(guò)電泳。在電泳第一相中，脂蛋白顆粒集中于上樣膠和濃縮膠的一條窄條帶中。當(dāng)脂蛋白顆粒在分離膠基質(zhì)中流動(dòng)時(shí)，由于凝膠的吸引力，它們的顆粒按照從最大到最小排列，溶解于脂蛋白條帶中：HDL移動(dòng)最快，其次是較小的、大浮力的LDL、中間條帶（基本由ID

4、L組成）和VLDL。乳糜微粒如果存在，將在濃縮膠中出現(xiàn)或存在于上樣膠中。典型的脂蛋白分類檢測(cè)輪廓由VLDL條帶、中間條帶、直到LDL條帶和HDL條帶。電泳完成后，在樣本中出現(xiàn)的多種染色的脂蛋白片段（條帶）通過(guò)用VLDL作為起始參考點(diǎn)（VLDL=0）和HDL（HDL=1）作為主要參考點(diǎn)進(jìn)行鑒定。每種脂蛋白條帶相關(guān)區(qū)域膽固醇含量是由mg/dl的樣本中總膽固醇濃度定量決定的。樣本中總膽固醇濃度需要獨(dú)立測(cè)量，例如，臨床用分析儀或一種保健儀器（a point of care instrument）。產(chǎn)品說(shuō)明低密度會(huì)蛋白試劑盒由預(yù)制的高分辨的聚丙烯酰胺凝膠管，含有親脂性燃料的上樣膠液和緩沖鹽。儀器和材料（

5、提供的，看Quantimetrix參考目錄第48-7002）100次測(cè)試的試劑盒組成（a 100 test kit consist of）1.低密度脂蛋白脂印膠管 100管聚丙烯酰胺、緩沖、防腐劑2.LDL脂印上樣膠（the loading jel）丙烯酰胺N，N-亞甲基雙丙烯酰胺親脂性染料催化劑穩(wěn)定劑緩沖劑3.LDL脂印緩沖鹽（羥甲基）三氨基甲烷硼酸4.LDL脂印產(chǎn)品嵌件脂印系統(tǒng)（沒(méi)有提供的，看Quantimetrix目錄第48-9150） 電腦（包括脂制品分析程序） 彩印機(jī) 數(shù)據(jù)掃描機(jī) 電泳槽 電源（120v/220v） 準(zhǔn)備燈 準(zhǔn)備架 煮沸的工具Liposure-脂蛋白控制（不提供，看Q

6、uantimetrix目錄第48-7060-水平1）材料要求（不提供）1. 蒸餾或去離子水2. 25ul移液槍3. 200ul移液槍4. 電磁攪拌器5. 封口膜6. 量筒回收的試劑電解質(zhì)緩沖液回收通過(guò)結(jié)晶一整瓶1200ml蒸餾或去離子水中的LDL脂印檢測(cè)試劑盒緩沖鹽。存儲(chǔ)與穩(wěn)定性膠管，上樣膠和緩沖鹽應(yīng)置于2-8攝氏度中保存。不要冷凍。適當(dāng)保存的試劑不論敞開(kāi)還是密閉，在保質(zhì)期前都是穩(wěn)定的。注意事項(xiàng)僅用于體外診斷。LDL試劑盒只能按照嵌入指令使用。上樣膠液包含皮膚接觸和吞咽有毒的丙烯酰胺。避免吸入和長(zhǎng)時(shí)間暴露上樣膠液。上樣膠液是光敏感的，并且存于琥珀色玻璃瓶中。避免用嘴吸液和任何與試劑或樣本的身體

7、接觸。所有樣本，試劑和控制裝置由于通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間皮膚接觸攝取或吸收應(yīng)該作為潛在傳染源處理。注意，當(dāng)它們用于你的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)該習(xí)慣總是管理和清理材料。樣本和采樣只有空腹（12小時(shí)）樣本能用血清或EDTA血清可能能用（看p15）不用肝素作為抗凝劑。樣品可以在2-8攝氏度下保留7天。不建議冷凍樣本。然而，如果樣本需要冷凍應(yīng)該低溫冷凍（-70攝氏度及以下）化驗(yàn)步驟1. 準(zhǔn)備電解質(zhì)緩沖液，如前所述，通過(guò)結(jié)晶一整瓶1200ml蒸餾或去離子水中的緩沖鹽。2. 從廣口瓶中移出膠管，擦干凈并空豎著它們放置于準(zhǔn)備架中。避免碰觸膠管底部或施加任何壓力與膠管上，因?yàn)檫@將導(dǎo)致空氣泡引入膠中。如果內(nèi)部有空氣泡或突起就不用膠管。

8、3. 從膠頂部完全移出儲(chǔ)存的膠通過(guò)倒轉(zhuǎn)晃動(dòng)架子，如果必要，為了從管中移出過(guò)量緩沖可以在倒置時(shí)從管底吸出。4. 每管用25ul樣品。5. 每管加200ul脂印上樣膠。6. 放一條裝封口膜在膠管和準(zhǔn)備架蓋之間避免污染。通過(guò)倒置幾次準(zhǔn)備架混合上樣膠和樣品。7. 設(shè)置準(zhǔn)備燈上端燈泡垂直。放上裝有東西的準(zhǔn)備架使上樣膠接觸燈泡。上樣膠光聚合30分鐘（但是不超過(guò)40分鐘）。8. 光聚合完成后，從準(zhǔn)備架上移出膠管并小心插入硅適配器或上氣室。側(cè)面握住膠管，推至管底部上樣膠與適配器上部平齊。濕潤(rùn)膠管頂部使容易插入。在這一步避免接觸任一管的底部。如果剩下少于一整氣室，由于這個(gè)目的為空適配器供小玻璃管插入。從頂部推管

9、直到流入適配器的低端。9. 在氣室下端中放入1000ul電泳緩沖液，在氣室上端中放入200ul。較低的緩沖可重復(fù)利用該5次。在氣室上端只用新配的緩沖。緩沖液必須處于室溫下。（18-27攝氏度）10. 所有氣室組裝和充滿緩沖后，徹底檢查每一管中的氣泡。用吸管尖端驅(qū)出氣泡。氣泡可能阻礙電流的流通。11. 在適當(dāng)?shù)奈恢梅烹娪臼疑w并接上電源。調(diào)整電源至每膠管給予3mA電流（例如，12管36mA，6管18mA等）。電壓應(yīng)該設(shè)置為最大給予量（500V）。12. 電泳時(shí)間大約為60分鐘。當(dāng)HDL分子離最快遷移膠管底部1cm時(shí)停止電泳。13. 當(dāng)完成電泳，關(guān)閉電源，移出氣室蓋并丟掉氣室上端的電泳緩沖液。下端的

10、緩沖液可以保留并重復(fù)使用5次。7天后丟掉。14. 在電泳氣室移出膠管之前，擦掉多余緩沖液，接著放到準(zhǔn)備架上送入掃描機(jī)分析。在掃描之前允許膠管靜置至少30分鐘但不超過(guò)2小時(shí)。程序注解：分離膠表面扭曲并且VLDL條帶可能在電泳期間出現(xiàn)。在膠從電泳移出后，通過(guò)小心的從上樣膠上端、沿著玻璃引入rimming工具可以矯正扭曲。沿著分離膠的表面做圓周運(yùn)動(dòng)。膠會(huì)恢復(fù)它的正常形狀。當(dāng)撤出工具時(shí)避免移出上樣膠（用蒸餾/去離子水充滿膠空出的位置。）質(zhì)量控制測(cè)試結(jié)果的可靠性通常用適當(dāng)?shù)哪７禄颊邩颖镜谋憩F(xiàn)來(lái)質(zhì)控。建議每次患者樣本用質(zhì)量質(zhì)控。質(zhì)控只作為準(zhǔn)確度和精確度的監(jiān)視器。適當(dāng)范圍內(nèi)的控制數(shù)值回復(fù)應(yīng)該是有效分析性能表

11、現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)控應(yīng)該與當(dāng)?shù)亍⒅藓吐?lián)邦的規(guī)定 或評(píng)審要求表現(xiàn)一致。來(lái)自Quantimetrix公司，liposue，是一個(gè)適當(dāng)?shù)目刂撇牧?。定性結(jié)果注解：一個(gè)脂印文件的多種條帶可以用脂印模板的質(zhì)量評(píng)估來(lái)分辨。（均勻的LDL分布/非均勻的分布）。脂蛋白文件反映了患者樣本的脂質(zhì)狀況。一個(gè)正常脂蛋白文件（模式A）將典型展示出VLDL的條帶;中等條帶C、B和A（這些包含IDL）；LDL-1、2和HDL。額外LDL分子的存在是不均一LDL的跡象。（例如，模式B）。（5個(gè)均勻的LDL分子樣品中的脂蛋白分子從左至右逐漸的不均勻）用脂印模板LDL脂印系統(tǒng)模板用于分辨出現(xiàn)在膠中的均勻的脂蛋白分子。1. 用記號(hào)筆在玻璃

12、管標(biāo)記每條脂蛋白表面。2. 使分離膠頂端VLDL分子與模板上標(biāo)記“VLDL”的線排成一行。3. 沿模板使膠滑下直到HDL條帶與標(biāo)記為“HDL”的線重疊。4. 通過(guò)使膠上的條帶與模板上相應(yīng)的線相配確定樣本表面上的脂蛋白分子。數(shù)值結(jié)果注解：在出現(xiàn)數(shù)值結(jié)果之前，一個(gè)總膽固醇數(shù)值對(duì)于每個(gè)要分析樣品來(lái)說(shuō) ，必須包括應(yīng)用臨床支持的膽固醇方法。樣品中總膽固醇濃度必須100mg/dl。掃描的膠管和每個(gè)脂蛋白分子的相關(guān)區(qū)域通過(guò)在每個(gè)條帶預(yù)先的界限的范圍內(nèi)滴落的垂直線確定。膽固醇的數(shù)量為在每個(gè)脂蛋白中通過(guò)計(jì)算樣品中每個(gè)條帶相關(guān)區(qū)域總膽固醇得到的和。LDL膽固醇分別計(jì)算所有LDL分子包括中等條帶A、B和C的膽固醇濃

13、度總量。照慣例，根據(jù)LDL顆粒的平均大小把脂蛋白分子文件分類為A類（正常）和B類（不正常）。一個(gè)正常的主要地包含大LDL（LDL-1和LDL-2）脂印文件與A類一致。一個(gè)不正常的主要地包含小LDL（LDL-3到LDL-7）脂印文件與B類一致，在文獻(xiàn)中有描述。局限LDL脂印測(cè)試應(yīng)該與其他數(shù)據(jù)一起使用（例如，額外的臨床測(cè)試，身體檢查，家庭歷史等）。肝素干擾LDL分子的分離。樣品中總膽固醇必須大于100mg/dl以避免高估VLDL膽固醇。樣品中乳糜微粒將使膽固醇分子測(cè)量無(wú)效。樣品外觀（例如，模糊、渾濁或在樣本上端有脂層）在過(guò)夜冷藏后應(yīng)該用于確定乳糜微粒存在的測(cè)試。在懷孕期間脂印結(jié)果不能評(píng)估脂蛋白測(cè)試

14、。NCEP沒(méi)有發(fā)布LDL分子的最佳的/合適的數(shù)值。預(yù)期值HDL-C和LDL-C國(guó)家膽固醇教育技術(shù)沒(méi)有建立LDL膽固醇和HDL膽固醇風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)定點(diǎn)。這些在2001年4月通過(guò)在NCEP成人治療小組第三次報(bào)告上強(qiáng)調(diào)。分子 范圍 狀況HDL-C 40 mg/dl 在較高水平風(fēng)險(xiǎn)減少 40 mg/dl 風(fēng)險(xiǎn)增加LDL-C 100 mg/Dl 對(duì)冠心病人（CHD）最理想 130 mg/dl 合適 130-159 mg/dl 高危界限 160 mg/dl 高危LDL-C包括所有直徑大于1.006至1.063kg/L脂蛋白顆粒，例如殘存的VLDL、IDL、LP（a）和LDL。這些顆粒相當(dāng)于中等條帶和LDL分子通

15、過(guò)脂印系統(tǒng)分解的總量。膽固醇分子在脂印系統(tǒng)中的獨(dú)立分子期望正常值建立如下：自我聲明健康個(gè)體，雇傭的N=273（年齡19至85歲，166名女性和107名男性，47%白種人，18%西班牙人，16%亞洲人，5%黑人和14%未經(jīng)宣布）。這些志愿者被要求空腹12小時(shí)。所有血液靜脈穿刺收集入血清管中。血清樣本接著用于測(cè)試脂質(zhì)參數(shù)并用LDL脂印系統(tǒng)生成脂蛋白文件。把糖尿病、個(gè)體吃降低脂質(zhì)的藥物和那些近期心臟病發(fā)的列入除去標(biāo)準(zhǔn)。除此以外，懷孕女性由于她們脂質(zhì)狀況的改變從試驗(yàn)中除去。只有樣本在理想的脂質(zhì)狀態(tài)符合NCEP指導(dǎo)方針，也就是TC200mg/dl、LDL130mg/dl、HDL40mg/dl，并且三酰甘

16、油150mg/dl用于確定期望數(shù)值。正常數(shù)值，N=144（年齡18到84歲，32%男性和68%女性）用于建立期望正常數(shù)值，在LDL脂印系統(tǒng)得到的每個(gè)脂質(zhì)參數(shù)定義95%的置信區(qū)間。（樣本數(shù)值顯示相應(yīng)的分?jǐn)?shù)）建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室建立自己的正常范圍，它可能服務(wù)于獨(dú)一無(wú)二的群體，取決于地理、患者或環(huán)境因素。NCEP團(tuán)體以外的人口數(shù)據(jù)， N=144（年齡18至77歲，46%男性和54%女性）在表2中顯示。特定的性能特征精密度為了區(qū)間之間和區(qū)間內(nèi)可變性測(cè)試四個(gè)樣本。低、中、高HDL-C和LDL-C樣品的選擇：樣品1：低LDL-C、高HDL-C和均勻的LDL模式（僅LDL-1和2）樣品2：中LDL-C、中HDL-

17、C和稍微分散的LDL模式（LDL-1、2、3）樣品3：高LDL、低HDL和分散的LDL模式（LDL-1、2、3和4）樣品4：高 LDL-C、中間的HDL-C和分散的LDL模式（LDL-1到7）區(qū)間內(nèi)精密度樣品測(cè)試復(fù)制的12（電泳室最大容積）。表3中顯示HDL-C、LDL-C（中等條帶C、B、A和LDL分子）和VLDL-C精確結(jié)果 。區(qū)間外精確度四個(gè)樣品測(cè)試一式兩份，5天每天兩次，在4電泳室用一個(gè)很大的膠管。在表6-8中顯示區(qū)間外相應(yīng)的精確結(jié)果。線性關(guān)系線性關(guān)系研究為兩份超度離心分離加強(qiáng)的HDL-C或LDL-C血清樣本。用人生理血清白蛋白液準(zhǔn)備系列稀釋。觀察總LDL-C、HDL-C和VLDL-C

18、的濃度與期望值比較。如下計(jì)算回收率 ：%回收=（觀察值/預(yù)期值）*100.劑量效應(yīng)血清樣本A（包含各種各樣的分子）與等量樣本B（包括主要的LDL-2）混合成AB。樣本用脂印系統(tǒng)分析，決定了個(gè)別分子膽固醇濃度并且比較了觀察值與期望值。同樣地，血清樣本A（包含各種各樣的分子）與等量樣本C（包括主要的LDL-1）混合成AC。樣本用脂印系統(tǒng)分析，并且決定了個(gè)別分子膽固醇濃度而且比較了觀察值與期望值。靈敏度 脂印系統(tǒng)的靈敏度定義為能夠檢測(cè)出的HDL-C和全LDL-C最低濃度。It was determined as the intersection of the lower 95 confidence

19、interval of the mean with x-axis when plotting a dilution series of expected vs. actual values for the individual lipoprotein parameters:VLDL靈敏性2.02mg/dl，HDL靈敏性3.65mg/dl，總LDL靈敏性為8.30mg/dl。干擾因素血清樣本中的潛在干擾化學(xué)物質(zhì)在表14列出濃度并且接著測(cè)試不理想的樣本（4復(fù)制）。血紅蛋白在濃度大于200mg/dl并且在肝素化血清收集管中找到的標(biāo)準(zhǔn)濃度肝素被發(fā)現(xiàn)干擾脂印測(cè)試。血清與血漿比較來(lái)自37位患者的血清和EDTA血漿樣本在脂印系統(tǒng)中