食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗課件

1、食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗n金黃色葡萄球菌的生物學特性金黃色葡萄球菌的生物學特性n金黃色葡萄球菌的抗原構(gòu)造及分型簡介金黃色葡萄球菌的抗原構(gòu)造及分型簡介n金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌的致病性n金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌的流行病學n金黃色葡萄球菌的檢驗方法金黃色葡萄球菌的檢驗方法n金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測n金黃色葡萄球菌的快速檢測方法金黃色葡萄球菌的快速檢測方法n金黃色葡萄球菌污染的控制金黃色葡萄球菌污染的控制食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗食品中微生物的檢測金黃

2、色葡萄球菌檢驗 金黃色葡萄球菌的顯微照片 典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.80.8 m mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。 食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗 金黃色葡萄球菌革蘭氏染色顯微照片金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。革蘭氏染色陽性。革蘭氏染色陽性。 食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片Staphylococcus aureus Enhanced sem w: 7.9 micron 食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌

3、檢驗金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片Tem x12000 digitized Staphylococcus aureus 食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗2、培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性： 金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度度3737，最適生長最適生長pH 7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，邊緣整平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，邊緣整齊、表面光滑、濕潤，直徑一般為齊、表面光滑、濕潤，直徑一般為1 12 2 mm。血血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。平板

4、菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在7.57.515%15%NaCl肉湯中生長。肉湯中生長。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗 食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗3、生化特性：生化特性：可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應陽性，不產(chǎn)氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。反應弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，

5、但對青霉素、紅霉素等高度敏類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。感。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的抗原構(gòu)造和分型金黃色葡萄球菌的抗原構(gòu)造和分型 對分型進行簡單的了解。對分型進行簡單的了解。、血清學分型：、血清學分型：金黃色葡萄球菌水解，獲得兩種抗原成分：蛋白抗原和金黃色葡萄球菌水解，獲得兩種抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。多糖抗原。蛋白抗原主要為葡萄球菌蛋白抗原主要為葡萄球菌A蛋白（蛋白（SPA)，是一種表面抗是一種表面抗原，原，90%90%以上金黃色葡萄球菌有此抗原，無特異性。以上金黃色葡萄球菌有此抗原，無特異性。多糖抗原為半抗原，有型特異性。多糖抗原為半抗原，有

6、型特異性。、噬菌體分型。、噬菌體分型。、根據(jù)腸毒素分型。、根據(jù)腸毒素分型。、根據(jù)血漿凝固酶分型。、根據(jù)血漿凝固酶分型。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿引起局部化膿 感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。 金黃色葡萄球菌的致病力金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.a.溶血毒

7、素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五種，能損傷溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞； c.c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關；葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關；d.d.脫氧核

8、糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為白質(zhì)性腸毒素，分為A A、B B、C C、D D、E E及及F F六種血清型。六種血清型。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗 當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在溫分較多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在溫度條件適

9、宜時，經(jīng)過度條件適宜時，經(jīng)過8 81010小時即可產(chǎn)生相當數(shù)量的小時即可產(chǎn)生相當數(shù)量的腸毒素，腸毒素可耐受腸毒素，腸毒素可耐受100100煮沸煮沸3030分鐘而不被破壞。分鐘而不被破壞。人攝食該菌污染的食物人攝食該菌污染的食物2 23 3小時后可引起中毒癥狀，小時后可引起中毒癥狀，它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌的流行病學 金黃色葡萄球菌在自然界中無處

10、不在，金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌的流行病學近年來，美國疾病控制中心報告，由近年來，美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位

11、，僅金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。次于大腸桿菌。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的流行病學特點金黃色葡萄球菌的流行病學特點季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的流

12、行病學金黃色葡萄球菌的流行病學一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳嚴，運輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r，對肉體其他部位腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。的污染。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗

13、* *金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%33%，加拿大則更多，占加拿大則更多，占45%45%，我國每年發(fā)生的此，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。腸毒素形成條件：類中毒事件也非常多。腸毒素形成條件：存放溫度，在存放溫度，在3737內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短；時間越短；存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸毒素；毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同食物種類，含蛋白質(zhì)

14、豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的檢驗金黃色葡萄球菌的檢驗1 1、樣品制備、樣品制備按無菌操作取檢樣按無菌操作取檢樣25 25 g（mL），加入，加入225 225 mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成均質(zhì)器中制成1:101:10樣品混懸液。樣品混懸液。 供計數(shù)檢驗時，可按十進位遞增稀釋法供計數(shù)檢驗時，可按十進位遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。將樣品勻液再進行適當稀釋。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌的檢驗金黃色葡萄球菌的檢驗2

15、 2、增菌及分離培養(yǎng)、增菌及分離培養(yǎng) 吸取吸取5 5 mL混懸液，接種于混懸液，接種于7.5%7.5%氯化鈉氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯肉湯或胰酪胨大豆肉湯50 50 mL培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)基內(nèi)，363611培養(yǎng)培養(yǎng)24 24 h，轉(zhuǎn)種血平板和轉(zhuǎn)種血平板和Baird-Parker平板，平板， 36 3611培養(yǎng)培養(yǎng)24 24 h，挑取挑取血平板上金黃色（有時為白色）菌落進行血平板上金黃色（有時為白色）菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗血平板上金黃色葡萄球菌菌落形態(tài) 金黃色葡萄球球菌的單個菌落金黃色葡萄球球菌的單個菌落在血平板上

16、呈金黃色，有時也為白色，在血平板上呈金黃色，有時也為白色，大而突出、圓形、不透明、表面光滑，大而突出、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。周圍有溶血圈。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌在在BPBP平板上的菌落形態(tài)平板上的菌落形態(tài)在在Baird-Parker瓊脂平板上菌落呈圓形，表面光瓊脂平板上菌落呈圓形，表面光滑、凸起、濕滑、凸起、濕 潤，直徑潤，直徑2 23 3 mm。灰黑色至黑色，灰黑色至黑色，有光澤，常有淺色（非白色）的邊緣，周圍繞以不透有光澤，常有淺色（非白色）的邊緣，周圍繞以不透明圈明圈 （沉淀），其外常有一清晰帶

17、。當用接種針觸（沉淀），其外常有一清晰帶。當用接種針觸及菌落時具有黃油樣粘稠感。有時可見到不分解脂肪及菌落時具有黃油樣粘稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株，除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本的菌株，除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫相同。從長期貯存的冷凍或脫 水食品中分離的菌落水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些，且外觀可能較粗糙，質(zhì)，其黑色常較典型菌落淺些，且外觀可能較粗糙，質(zhì)地較干燥。地較干燥。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽平板上的菌落在甘露醇鹽平板上的菌落Staphylo

18、coccus aureus on mannitol salts agar 食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗3、血漿凝固酶試驗： 吸取吸取1:41:4新鮮兔血漿新鮮兔血漿0.5 0.5 mL，放入小放入小試管中，再加入培養(yǎng)試管中，再加入培養(yǎng)24 24 h的金黃色葡萄球的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5 0.5 mL，振蕩搖勻，振蕩搖勻，置置 36 3611溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察一次，觀察6 6 h，如呈現(xiàn)凝固如呈現(xiàn)凝固, ,即將試管倒即將試管倒置或置或 傾斜時，呈現(xiàn)凝塊者，被認為陽性傾斜時，呈現(xiàn)凝塊者，被認為陽性結(jié)果。同時以已知陽

19、性和陰性葡萄球菌株結(jié)果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。及肉湯作為對照。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測 一、動物學試驗主要用幼貓和猴。一、動物學試驗主要用幼貓和猴。 二、血清學試驗腸毒素作為抗原，可二、血清學試驗腸毒素作為抗原，可以和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應，產(chǎn)生可以和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應，產(chǎn)生可見沉淀。見沉淀。 用血清學反應檢驗金黃色葡萄球用血清學反應檢驗金黃色葡萄球菌腸毒素，方法主要有：菌腸毒素，方法主要有： 免疫瓊脂擴散法免疫瓊脂擴散法 反向間接血凝試驗反向間接血凝試驗 免疫熒

20、光法免疫熒光法 1.1.酶聯(lián)免疫吸附法酶聯(lián)免疫吸附法食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌快速檢測方法目前，隨著研究的深入，一些快速和采用目前，隨著研究的深入，一些快速和采用現(xiàn)代技術的檢測方法不斷出現(xiàn)，這些新的快速現(xiàn)代技術的檢測方法不斷出現(xiàn)，這些新的快速方法，一般都縮短了傳統(tǒng)檢測方法的時間，能方法，一般都縮短了傳統(tǒng)檢測方法的時間，能夠較快地得到檢測結(jié)果，并且操作相對簡單。夠較快地得到檢測結(jié)果，并且操作相對簡單。比如：法國梅里埃公司生產(chǎn)的比如：法國梅里埃公司生產(chǎn)的RPF培養(yǎng)基培養(yǎng)基、API檢測系統(tǒng)等。梅里埃公司生產(chǎn)的檢測系統(tǒng)等。梅里埃公司生產(chǎn)的mini VIDAS利用熒光免疫的方法檢測葡萄球菌利用熒光免疫的方法檢測葡萄球菌腸毒素，在儀器上腸毒素，在儀器上45 45 min可以得到結(jié)果。可以得到結(jié)果。食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗法國梅里埃公司生產(chǎn)的法國梅里埃公司生產(chǎn)的RPFRPF培養(yǎng)基培養(yǎng)基凝固酶陽性葡萄球菌凝固酶陽性葡萄球菌 : 菌落周圍形成沉淀圈菌落周圍形成沉淀圈 -+l將兔血漿包括在培養(yǎng)基中作為直接確認菌落的手段將兔血漿包括在培養(yǎng)基中作為直接確認菌落的手段食品中微生物的檢測金黃色葡萄球菌檢驗金黃色葡萄球菌污染的控制金黃色葡萄球菌污染的控制防止食品污染防止食品污染防止帶菌人群