淺談百合種球組織培養(yǎng)

1、畢業(yè)設計（論文）題 目淺談百合種球組織培養(yǎng)實習單位實習崗位組織培養(yǎng)接種員專業(yè)班級商品花卉學生姓名指導教師目 錄摘要1關鍵詞11行業(yè)背景12公司簡介23組培苗的生產23.1外植體的處理23.1.1打破百合鱗片的休眠23.1.2鱗片消毒23.2培養(yǎng)方法33.2.1培養(yǎng)基的選擇33.2.2培養(yǎng)基的配制43.3外植體的接種與培養(yǎng)53.3.1鱗片接種53.3.2外植體的培養(yǎng)63.4組培苗的移栽64發(fā)展趨勢74.1供應規(guī)模74.2銷售概況7致謝7參考文獻8淺談百合種球組織培養(yǎng)以金華市香蝶百合種球有限公司為例摘要:冃前我國國內百合種球需求量大、種球嚴重依賴進口。如何有效口主開展百合組培，改變嚴重依賴進口現(xiàn)狀

2、，意義重人。木文結合金華市香蝶百合種球有限公同的百合 種球牛產經(jīng)驗，介紹了工廠化組培快繁基本方法，為百合組培提供i個參考。關鍵詞：百合鱗片，組織培養(yǎng)，發(fā)展趨勢1行業(yè)背景百合（l訂ium spp.）為百合科百合屬多年生球根類花卉，是目前世界上最受 歡迎的高檔切花之一。除觀賞價值外，百合還具有豐富的營養(yǎng)價值與重要的藥用 價值。近年來，隨著百合在國內外鮮切花市場的走俏，百合種球和鮮切花生產量 很大（需求量分布見表1）。然而我國百合花產業(yè)嚴重依賴國外，目前我國生產 鮮切花的百合種球95%以上依靠進口，僅2011年，我國進口荷蘭百合種球總量 就約為1.58億粒。百合種球的需求量分布地區(qū)國際市場國內市場北

3、方廣東浙江江蘇云南福建需求量（單位：頭）25億5000 萬4500 萬1200 萬2000 萬7000 力1000 萬表1百合種球的生產周期長，國外普遍采用鱗片桿插法繁殖百合種球，種球生產 周期為3年、母球需要量大，導致種球成本高（均價超過3元/頭）、種球總數(shù) 提升慢。不僅進口種球價格昂貴，種球出現(xiàn)質量問題維權難等因素也極大地增大 了花農種植百合花的成本和風險，嚴重削弱了我國百合切花出口的市場競爭優(yōu) 勢。因此優(yōu)質百合種球的國產化、產業(yè)化是做大做強我國百合產業(yè)的關鍵?？谇?在中國百合種球生產主要依靠鱗片抒插，子球培育成母球的方法獲得，但該方法 存在病毒感染率高、種球品質退化快、不能重復使用等缺點

4、。用組織培養(yǎng)方法繁 育種球不但繁殖系數(shù)高、速度快、周期短、遺傳性狀一致，而且還可以脫除病菌、 病毒，提高種球質量，定植試管苗可使植株產量及繁殖能力大幅度提高?？梢姡?開展百合組織培養(yǎng)育苗工作-1 分必要。2公司簡介金華市香蝶百合種球冇限公司專業(yè)從事百合新品種的選育和百合種球的規(guī) ?；a，成立于2010年9月，已建成組織培養(yǎng)實驗室1000m2,連棟蜩料大棚 2240 m2,籌建連棟玻璃溫室5000 m2,種球種植基地300畝。公司有自主選育的 百合花新品種三十多個，育種中間材料三百多種。截止目前已生產百合組培球 800萬頭,年底累計可達1500萬頭，到2012年年底預計首批900-1000萬頭

5、成 品百合商業(yè)種球可投放市場。公司堅持生產具有我國口主知識產權百合品種的種球。主要品種有：復色東 方百合“甜蜜”、巨型東方百合“巨神”、直立鐵炮百合“神箭”、盆栽東方百 合“喜來臨”。公司的發(fā)展規(guī)劃為首選繼續(xù)擴大切花百合種球的生產，逐步實現(xiàn) 進口取代，進而參與國際競爭。公司依據(jù)國內現(xiàn)狀，結合現(xiàn)代生物學技術，采用工廠式組培快繁結合大皿大 規(guī)模培育方法，將種球所生產周期縮短到2年。通過不斷的摸索和總結，形成一 整套完整、高效的球生產程序，組培球快繁周期75天，組培球下地存活率超過 95%,種球冷藏時間達到8-12個月。這些幾項技術處于國內領先地位。3組培苗的生產3.1外植體的處理3.1.1打破百合

6、鱗片的休眠方法：48°c溫水中毎隔2-3分鐘提起再泡入，反復2-3次，后在4°c浸泡 1小時；在2°c低溫冷藏條件下經(jīng)6-8周即可打破休眠。（公司采用這種方法, 該方法簡單易操作，使用冰箱低溫條件易控制，11成本不高。）3.1.2鱗片消毒將鱗莖用自來水沖洗干凈，分瓣，在口來水下沖洗30分，于超凈工作臺內用 75%乙醇浸泡10秒，然后放入0.1%升汞浸泡15分鐘，用無菌水洗5次。3. 2培養(yǎng)方法3. 2.1培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基是以ms為基本培養(yǎng)基，附加不同激素構成的。其中ms基本培養(yǎng)基配方 見表2：ms培養(yǎng)基（單位:mg/l）溶nh.ino3knobkh2po4mgs

7、o.!gusoi 5kiznso., 7h.0h3bo3液 7出0h20濃度165019001703700. 0250. 83& 66.2溶液na2-edta煙酸蔗糖mnsot 4h>0na2mo0i 2h20瓊脂鹽酸硫胺索肌醇濃度37. 250.53000022.30. 25100000.4100溶液cocl2 6h20cacl220甘氨酸fes04 7h20鹽酸毗哆醇ph濃度0. 0254400. 02527. 850. 55.8表2根據(jù)培養(yǎng)鱗片的生長期不同，分為以下三種:初代培養(yǎng)基（用于叢生芽的誘導）:msnaa mg/l6-ba mg/l10. 10. 3繼代培養(yǎng)基（用于

8、增殖繼代培養(yǎng)）:（6-ba/naa二4/1）msnaa mg/l6 bamg / l10. 10. 1生根培養(yǎng)基（用于生根培養(yǎng)）：1/2msnaa mg/l6-ba mg/l10. 103.2.2培養(yǎng)基的配制3. 2. 2. 1 ms培養(yǎng)基母液的配制ms培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種 成分進行稱量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱量， 配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時，取其總量的1/20（50 ml）或1/200 （5 ml）,加水稀釋,制成培養(yǎng)液。根據(jù)ms培養(yǎng)基中元索分類，分為以下四種母液：大量元素（母液 i ） n

9、h4no3 > kno3、cacl2 2h2o、mgso4 7h2o、kh2p04 微量元素（母液 ii） ki、h3bo3、mnso4 4h20> zns04 - 7h20. namca 2也0、 cusor 5也0、cocl2 6h2o、鐵鹽（母液iii） feso.t - 7出0、na2-edta 2h2o有機成分（母液iv）肌醇、煙酸、鹽酸毗哆醇、鹽酸硫胺素、lt氨酸以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液i為20倍濃縮液外，其余的均為200 倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨配成1 l的貯備液。其中，母液【、母液ii及母液iv 的配制方法是：每種母液屮的幾種成分稱量完畢后，分別用少量

10、的蒸錨水徹底溶 解，然后再將它們混溶，最后定容到1 lo母液iii的配制方法是:將稱好的fesor 7h20和na2-edta 2h20分別放到450 譏蒸懈水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們溶解，然后將兩種溶液混合，并將ph調 至5. 5,最后定容到1 l,保存在棕色玻璃瓶中。各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標簽，注明母液號、配制倍 數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。3. 2. 2. 2生長物質母液的配制蔡乙酸（naa）、6-節(jié)基卩票吟（6-ba）分別配成母液（0. 1 mg/ml）o其配制方 法是：分別稱取這2種物質各10 mg,將naa用1 ml無水乙醇預溶，將6ba用1 ml濃度為

11、0. 1 mol/l的naoh溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容 至100 ml,即得質量濃度為0. 1 mg/ml的母液。3. 2. 2. 3培養(yǎng)液的配制混合母液：用量筒或移液管從ms培養(yǎng)基的各種母液中分別取出按比例所需 的用量以及6-ba. naa母液混合放入燒杯中；溶化瓊脂：用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 nil的搪瓷 量杯中，再加入蒸館水750 ml,用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液 體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂屮，最后加蒸諸水 定容至1 000 ml,攪拌均勻；調ph：用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/l的m0h

12、溶液，逐滴滴入溶化的 培養(yǎng)基中,邊滴邊攪拌,并隨時用精密的ph試紙（5.47.0）測培養(yǎng)基的ph, 一直到培養(yǎng)基的ph為5. 8為止（培養(yǎng)基的ph必須嚴格控制在5. 8）0培養(yǎng)基配制完畢后，應立即滅菌。培養(yǎng)基通常應在高壓蒸汽滅菌鍋內，在汽 相120°c條件下，滅菌20分鐘左右。經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基應置于10°c下保存，特 別是含有生長調節(jié)物質的培養(yǎng)基，在45°c低溫下保存要更好些。3.3外植體的接種與培養(yǎng)3. 3.1鱗片接種在開始接種前，要做好準備工作，先把紫外燈打開滅菌一小吋，加熱半小吋 （圖1）。進入接種室前，用滅菌皂洗手，并用毛巾擦干。進入接種室，打開風 機，過

13、濾空氣。再把耍用的酒精噴壺、酒精棉、滅菌紙（碩紙和軟紙）以及培養(yǎng) 基準備好。穿上工作服，在超凈工作臺而坐廠用酒精擦手滅菌，然后用酒精噴 壺向超凈臺各個角落噴灑酒精，并用滅菌軟紙擦拭干凈（圖2）。開始接種，把三副錫子和解剖刀從加熱皿屮拿出，用酒精棉屁滅菌降溫。先 用銀子夾兩張碩紙，把要切的種球拿出來放在右邊的紙上（圖3）,把種球的根 部、葉子以及枯萎的鱗片切干凈放在另一張紙上，把切好的種球放入新的培養(yǎng)基 中（圖4）,不要的部分放入垃圾桶中。（培養(yǎng)基分為兩種，一種是種球的，一種 是鱗片的。前者是用來放置培養(yǎng)大球和中球的，后者是放置小球和鱗片的。球的 培養(yǎng)基的濃度要比片的濃度要稍微高一點，顏色也偏黃

14、一點，為了便于區(qū)分，球 的厚度也比片的要多一點。）在操作中不能把手放在種球和培養(yǎng)基的正上方，以 免細菌污染。用酒精棉花清潔躡子和解剖刀，用軟紙擦干插入加熱血屮，用酒精 清潔超凈臺。接好的培養(yǎng)基放在一個托盤里，滿48瓶后寫上標簽（品種，口期, 接種人），下班后放在培養(yǎng)室（圖5）指定的位置并記住擺放的位置，如a-（6）o 并在工作木上寫下當日工作時間，品種，接的種球總瓶數(shù)，剩余瓶數(shù)，擺放位置 等。毎天中午和傍晚下班把切完剩下的空瓶以及垃圾放到規(guī)定的位置，整理好自 己的超凈臺，保持位子上干凈整齊，工作服最少兩周洗一次。操作基木流程：滅菌加熱準備工作切球圖43.3.2外植體的培養(yǎng)3. 3. 2.1叢生

15、芽的誘導圖2放入培養(yǎng)室圖5將生長最好的愈傷組織切割成適當大小接種到不同配比初代培養(yǎng)基上后，每 平行組5瓶，每瓶2個愈傷組織。將其置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度2426°c, 光照條件為1216h/do每七天觀察一次，經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)，觀察從生芽 的生長狀況。3. 3. 2. 2增殖繼代培養(yǎng)為了擴大增殖，取培養(yǎng)出來的初生代叢生芽，將莖切成數(shù)段，每段12節(jié), 保留12張小葉，同上述方法接種到繼代培養(yǎng)基上，待腋芽萌發(fā)，并丁切口處 膨大形成愈傷組織，培養(yǎng)若干天后，一般每莖段可分化出1-4條從生芽。3. 3. 2. 3生根培養(yǎng)將叢生芽切割下來，轉入生根培養(yǎng)基屮，每平行組5瓶，每瓶2個愈傷組織。

16、培養(yǎng)若干天，使其產生根系，形成完整的試管苗。3.4組培苗的移栽試管苗從無菌到光、溫、濕穩(wěn)定的環(huán)境進入自然環(huán)境，必須進行煉苗。一般 移植前，先將培養(yǎng)容器打開，于室內自然光照下放3天，當試管苗的根原基突起 或形成幾毫米長的短根時，將其取岀，用自來水把根系上的營養(yǎng)基沖洗干凈，再 栽入已準備好的基質中，基質使用而最好消毒。移栽后要適當遮蔭，避免陽光直 射和過大的溫度波動，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98%左 右），但基質不宜過濕，以防爛苗。經(jīng)過7d的逐步鍛煉過程，再定植到土壤屮。4發(fā)展趨勢4.1供應規(guī)模2011年，我國進口荷蘭百合種球總量約為158億粒，成為國際市場上為數(shù) 不多的保持高增

17、長率的百合生產國。進口量的大幅增長也給國內百合生產和銷售 帶來影響，預計2012年進口百合種球總量將與去年持平，進口量維持在15億 至1.6億粒。4.2銷售概況現(xiàn)階段，國內種球貿易公司與國際供貨商之間的訂單已基木完成，云南格桑 花卉公司、尋甸金惠公司等企業(yè)也已經(jīng)開始制定今年的種球價格，并積極開展訂 單銷售。2011年9月開始岀現(xiàn)種球價格下跌，下半年百合切花價格平均水平也 遠低于2010年同期水平。據(jù)了解，主流品種除球徑12厘米至14厘米的小規(guī)格 種球價格保持不變外，中人規(guī)格的各個品種報價與去年同期相比都冇不同程度的 下跌，每粒降價約0.2元。今年荷蘭小規(guī)格種球的產量不高，由于需求量較大， 小規(guī)

18、格種球仍然呈現(xiàn)出供不應求。受生產成本的影響，球徑為18厘米至20厘米 的大規(guī)格以及20厘米以上的超大規(guī)格種球，由于需求量的減少，后期價格可能 會出現(xiàn)卜滑。針對在這種情況我們耍適量地增加小球的產量，減少大球的產量。致謝：本論文是在我的指導老師王普形老師的親切關懷與細心指導下完成的。從課題的選擇到 論文的最終完成，王老師始終都給予了細心的指導和不懈的支持。還要感謝我的班主任楊照 渠老師，謝謝他在這三年中為我們全班所做的一切，他不求凹報，無私奉獻的精神很讓我感 動，再次向他表示由衷的感謝。然后還要感謝大學三年來所冇的老師，為我們打下花卉園藝 知識的基礎：同時還要感謝所有的同學們，正是因為有了你們的支持和陪伴，我的人學生活 才能如此的多彩。木文參考了大量的文獻資料，在此，向各學術界的而輩們致敬！感謝我的實習單位金華 市香蝶百合種球有限公司為我的論文提供資料。參考文獻：1 余小涵.百合組織培養(yǎng)技術研究j.林業(yè)科技開發(fā),2002, (6).2 王和