布魯氏菌實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1布魯氏菌布魯氏菌(b l sh jn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)第一頁(yè)，共47頁(yè)。主要主要(zhyo)(zhyo)內(nèi)容：內(nèi)容：1 1、布魯氏菌病原學(xué)；、布魯氏菌病原學(xué)；2 2、布魯氏菌診斷標(biāo)準(zhǔn)、布魯氏菌診斷標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)(biozhn)；3 3、布魯氏菌血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的幾種方法。、布魯氏菌血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的幾種方法。第1頁(yè)/共46頁(yè)第二頁(yè)，共47頁(yè)。第2頁(yè)/共46頁(yè)第三頁(yè)，共47頁(yè)。布魯氏菌布魯氏菌(b l sh jn)的發(fā)展史的發(fā)展史年份年份菌名菌名發(fā)現(xiàn)人發(fā)現(xiàn)人國(guó)家國(guó)家宿主宿主1887羊種菌羊種菌Bruce馬爾他馬爾他羊羊1897牛種菌牛種菌Bang丹麥丹麥牛牛1914豬種菌豬種菌Traun美

2、國(guó)美國(guó)豬豬1953綿羊附睪種菌綿羊附睪種菌Buadle新西蘭新西蘭公綿羊公綿羊1956沙漠森林鼠種菌沙漠森林鼠種菌Stoennen美國(guó)美國(guó)沙漠森林野鼠沙漠森林野鼠1966犬種菌犬種菌Carmichael美國(guó)美國(guó)小獵犬小獵犬第3頁(yè)/共46頁(yè)第四頁(yè)，共47頁(yè)。沙漠沙漠(shm)(shm)森林野鼠種布氏菌森林野鼠種布氏菌（Br neotomae)Br neotomae)綿羊附睪種布氏菌（綿羊附睪種布氏菌（Br ovis)Br ovis)犬種布氏菌犬種布氏菌 （Br canis) Br canis) 第4頁(yè)/共46頁(yè)第五頁(yè)，共47頁(yè)。n布魯氏菌沒(méi)有鞭毛，不形成芽布魯氏菌沒(méi)有鞭毛，不形成芽胞和夾膜。胞和

3、夾膜。第5頁(yè)/共46頁(yè)第六頁(yè)，共47頁(yè)。細(xì)菌呈綠色和蘭色。細(xì)菌呈綠色和蘭色。第6頁(yè)/共46頁(yè)第七頁(yè)，共47頁(yè)。第7頁(yè)/共46頁(yè)第八頁(yè)，共47頁(yè)。第8頁(yè)/共46頁(yè)第九頁(yè)，共47頁(yè)。第9頁(yè)/共46頁(yè)第十頁(yè)，共47頁(yè)。第10頁(yè)/共46頁(yè)第十一頁(yè)，共47頁(yè)。自然條件自然條件生存時(shí)間（天）生存時(shí)間（天）自然條件自然條件生存時(shí)間（天）生存時(shí)間（天）水水50120奶油奶油2565塵塵4120奶酪奶酪2190糞糞2172凍肉凍肉1447畜舍墻棚畜舍墻棚4150腌肉腌肉2045地面地面4150培養(yǎng)基培養(yǎng)基60318衣服衣服3080干燥胎膜干燥胎膜120皮毛皮毛45120腐敗臟器腐敗臟器死亡死亡鮮牛乳鮮牛乳255

4、0人工胃液人工胃液2050第11頁(yè)/共46頁(yè)第十二頁(yè)，共47頁(yè)。第12頁(yè)/共46頁(yè)第十三頁(yè)，共47頁(yè)。第13頁(yè)/共46頁(yè)第十四頁(yè)，共47頁(yè)。第14頁(yè)/共46頁(yè)第十五頁(yè)，共47頁(yè)。第15頁(yè)/共46頁(yè)第十六頁(yè)，共47頁(yè)。菌，參照血培養(yǎng)觀察結(jié)果，菌，參照血培養(yǎng)觀察結(jié)果，15天不長(zhǎng)菌定為陰性天不長(zhǎng)菌定為陰性第16頁(yè)/共46頁(yè)第十七頁(yè)，共47頁(yè)。第17頁(yè)/共46頁(yè)第十八頁(yè)，共47頁(yè)。第18頁(yè)/共46頁(yè)第十九頁(yè)，共47頁(yè)。3 3應(yīng)用色譜技術(shù)鑒定布氏菌應(yīng)用色譜技術(shù)鑒定布氏菌; ; 第19頁(yè)/共46頁(yè)第二十頁(yè)，共47頁(yè)。第20頁(yè)/共46頁(yè)第二十一頁(yè)，共47頁(yè)。清培養(yǎng)基清培養(yǎng)基效果最好效果最好第21頁(yè)/共46頁(yè)

5、第二十二頁(yè)，共47頁(yè)。0 010102020303040405050606070708080909010010020204040808016016032032064064012801280符合率符合率第22頁(yè)/共46頁(yè)第二十三頁(yè)，共47頁(yè)。第23頁(yè)/共46頁(yè)第二十四頁(yè)，共47頁(yè)。第24頁(yè)/共46頁(yè)第二十五頁(yè)，共47頁(yè)。第25頁(yè)/共46頁(yè)第二十六頁(yè)，共47頁(yè)。第26頁(yè)/共46頁(yè)第二十七頁(yè)，共47頁(yè)。第27頁(yè)/共46頁(yè)第二十八頁(yè)，共47頁(yè)。第28頁(yè)/共46頁(yè)第二十九頁(yè)，共47頁(yè)。過(guò)期失效者不可使用。過(guò)期失效者不可使用。 保存：布氏菌素于保存：布氏菌素于4-104-10冷暗處冷暗處. .第29頁(yè)/共

6、46頁(yè)第三十頁(yè)，共47頁(yè)。第30頁(yè)/共46頁(yè)第三十一頁(yè)，共47頁(yè)。第31頁(yè)/共46頁(yè)第三十二頁(yè)，共47頁(yè)。（2 2）試管）試管(shgun)(shgun)凝集試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)原理原理(yunl)： Ag+Ab Ag-AbNaclNacl電介質(zhì)電介質(zhì)布氏菌侵入機(jī)體后，就會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗體可與相應(yīng)抗原（布氏菌體）發(fā)生特異性結(jié)合布氏菌侵入機(jī)體后，就會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗體可與相應(yīng)抗原（布氏菌體）發(fā)生特異性結(jié)合(jih)，在電介質(zhì)作用下，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，我們就是用已知抗原查未知抗體。，在電介質(zhì)作用下，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，我們就是用已知抗原查未知抗體。第32頁(yè)/

7、共46頁(yè)第三十三頁(yè)，共47頁(yè)。試管試管(shgun)(shgun)凝集反應(yīng)步驟凝集反應(yīng)步驟1 1、加入倍比稀釋受檢血清、加入倍比稀釋受檢血清0.50.5mlml2 2、加入、加入1 1：1010稀釋布氏菌抗原稀釋布氏菌抗原0.50.5mlml3737度度2424小時(shí)觀察結(jié)果小時(shí)觀察結(jié)果同時(shí)配置比濁管便于結(jié)果判定同時(shí)配置比濁管便于結(jié)果判定第33頁(yè)/共46頁(yè)第三十四頁(yè)，共47頁(yè)。試管試管(shgun)(shgun)凝集反應(yīng)（凝集反應(yīng)（SATSAT）示）示意圖意圖(1)(1)稀釋稀釋(xsh)血清血清1:251:501:1001:2001:4000.5棄去棄去稀釋稀釋(xsh)度度第34頁(yè)/共46頁(yè)

8、第三十五頁(yè)，共47頁(yè)。比濁管的制備比濁管的制備(zhbi)管號(hào)1:20稀釋抗原生理鹽水清亮度標(biāo)記10.001.00100%+20.250.7575%+30.500.5050%+40.750.2525%+ +51.000.000%-第35頁(yè)/共46頁(yè)第三十六頁(yè)，共47頁(yè)。第36頁(yè)/共46頁(yè)第三十七頁(yè)，共47頁(yè)。結(jié)果判定：結(jié)果判定： 根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄凝集反應(yīng)程度（滴度），特別是根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄凝集反應(yīng)程度（滴度），特別是50%50%清亮度（清亮度（+）對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大）對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大(jio d)(jio d)，一定要與比濁管對(duì)比判定。，一定要與比濁管對(duì)比判定。+

9、 + 等于完全凝集，上層液等于完全凝集，上層液100%100%清亮。清亮。+ + 等于幾乎完全凝集，上層液等于幾乎完全凝集，上層液75%75%清亮。清亮。+ + 等于顯著凝集，上層液等于顯著凝集，上層液50%50%清亮。清亮。+ + 等于有凝集出現(xiàn)，液體等于有凝集出現(xiàn)，液體25%25%清亮。清亮。- - 等于無(wú)凝集，液體不清亮。等于無(wú)凝集，液體不清亮。人的診斷標(biāo)準(zhǔn)：人的診斷標(biāo)準(zhǔn)：1:100+1:100+為陽(yáng)性，為陽(yáng)性，1:50+1:50+為可疑。為可疑。第37頁(yè)/共46頁(yè)第三十八頁(yè)，共47頁(yè)。評(píng)價(jià)：試管凝集試驗(yàn)是評(píng)價(jià)：試管凝集試驗(yàn)是WrightWright和和SampleSample于于189

10、81898年首先建立的，是布病診斷在國(guó)際上唯一的全標(biāo)化方法，使用廣泛，經(jīng)久不衰。特異性好，也較敏感，實(shí)用性強(qiáng)，診斷、流調(diào)、監(jiān)測(cè)均適用。年首先建立的，是布病診斷在國(guó)際上唯一的全標(biāo)化方法，使用廣泛，經(jīng)久不衰。特異性好，也較敏感，實(shí)用性強(qiáng)，診斷、流調(diào)、監(jiān)測(cè)均適用。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 有前帶現(xiàn)象。有前帶現(xiàn)象。 不能區(qū)別人工免疫和自然感染。不能區(qū)別人工免疫和自然感染。 產(chǎn)生產(chǎn)生(chnshng)(chnshng)一定的交叉反應(yīng)。一定的交叉反應(yīng)。 慢，需要兩天。慢，需要兩天。第38頁(yè)/共46頁(yè)第三十九頁(yè)，共47頁(yè)。簽混勻，在簽混勻，在5分鐘內(nèi)判定結(jié)果。分鐘內(nèi)判定結(jié)果。判定級(jí)別同平板判定級(jí)別同平板(pngbn)凝

11、凝集反應(yīng)。亦可只分為集反應(yīng)。亦可只分為(+)陽(yáng)性，陽(yáng)性，(-)陰性兩類。陰性兩類。第39頁(yè)/共46頁(yè)第四十頁(yè)，共47頁(yè)。第40頁(yè)/共46頁(yè)第四十一頁(yè)，共47頁(yè)。抗體(kngt)補(bǔ)體紅細(xì)胞溶血素陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性抗原紅細(xì)胞溶血素補(bǔ)體陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性抗原抗體補(bǔ)體紅細(xì)胞溶血素陰性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性第41頁(yè)/共46頁(yè)第四十二頁(yè)，共47頁(yè)。第42頁(yè)/共46頁(yè)第四十三頁(yè)，共47頁(yè)。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是一種傳統(tǒng)的免疫學(xué)技術(shù)，特異性強(qiáng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是一種傳統(tǒng)的免疫學(xué)技術(shù)，特異性強(qiáng)。它所查的免疫蛋白主要是。它所查的免疫蛋白主要是IgGIgG類，此法不僅類，此法不僅(bjn)(bjn)與布病臨床表現(xiàn)、病期有較好一致性與布病臨床表現(xiàn)、病期有較好一致性，常用于鑒別診斷。，常用于鑒別診斷。缺點(diǎn)：參與反應(yīng)的成分多，缺點(diǎn)：參與反應(yīng)的成分多， 影響因素復(fù)雜，操作影響因素復(fù)雜，操作 煩瑣，不適與普查。煩瑣，不適與普查。第43頁(yè)/共46頁(yè)第四十四頁(yè)，共47頁(yè)。第44頁(yè)/共46頁(yè)第四十五頁(yè)，共47頁(yè)。謝謝(xi xie)第45頁(yè)/共46頁(yè)第四十六頁(yè)，共47頁(yè)。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會(huì)計(jì)學(xué)。需要各種氨基酸和各種金屬離子，有的菌種需要血清才能