苦瓜花粉生活活力檢測(cè)方法的比較研究

1、.苦瓜花粉生活力檢測(cè)方法的比較研究苦瓜花粉生活力檢測(cè)方法的比較研究摘 要苦瓜是一種重要的蔬菜作物，研究苦瓜花粉活力的檢測(cè)方法，可以為苦瓜的雜交育種工作提供前期的參考。離體萌發(fā)法是普遍認(rèn)為檢測(cè)花粉活力最接近花粉的實(shí)際生活力，但該法所耗的時(shí)間長(zhǎng)，所以本研究通過其他方法與離體萌發(fā)法比較，選出適宜苦瓜花粉活力快速檢測(cè)的方法。本研究用碘碘化鉀染色法、TTC染色法、醋酸洋紅染色法、過氧化物酶法、無機(jī)酸法和離體萌發(fā)法對(duì)苦瓜花粉活力進(jìn)行研究，得出碘碘化鉀染色法、TTC染色法、醋酸洋紅染色法、無機(jī)酸法測(cè)出的花粉活力與離體萌發(fā)法有極顯著的差異，過氧化物酶染色法與離體萌發(fā)法測(cè)得結(jié)果沒有達(dá)到顯著差異，且這兩種方法測(cè)得

2、苦瓜花粉活性分別為：過氧化物酶染色法04-17×25：62.27%，04-17：70.72%；離體萌發(fā)法04-17×25：66.99%，04-17：72.48%。通常認(rèn)為離體萌發(fā)法測(cè)出的花粉萌發(fā)率是做接近自然狀態(tài)的花粉活力，所以研究得出的結(jié)論為過氧化物酶染色法適宜苦瓜花粉生活力的快速檢測(cè)。蔗糖基本培養(yǎng)基上添加硼酸能夠顯著促進(jìn)苦瓜花粉萌發(fā)，苦瓜花粉離體萌發(fā)的合適培養(yǎng)基配方和濃度有待進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞：苦瓜；花粉活力；測(cè)定方法AbstractBitter gourd is an important vegetable crops, pollen viability of the

3、 detection method of bitter gourd, bitter gourd of cross-breeding can provide early information. Germination in vitro testing method is generally considered the actual pollen viability Pollen viability of the closest, but the time consumption of the law long, so this study by other methods compared

4、with the in vitro germination, pollen viability bitter election of suitable methods for rapid detection of . In this study, iodine - potassium iodide staining, TTC staining, aceto carmine staining, peroxidase, inorganic acid and in vitro germination of pollen viability studies bitter, drawn iodine -

5、 potassium iodide staining, TTC staining , aceto carmine staining, inorganic acid measured in vitro pollen germination vigor and there were significant differences in peroxidase staining and measured in vitro germination results are not significantly different, and the various ways in these two meas

6、urements Pollen viability was bitter gourd were: peroxidase stain for the 04-17 × 25:62.27% ,04-17: 70.72%; in vitro germination 04-17 × 25:66.99% ,04-17: 72.48%. Usually that measured in vitro germination of pollen germination rate is close to natural state do pollen viability, the study

7、concluded that the bitter gourd peroxidase staining method suitable for rapid detection of pollen viability. Basic medium supplemented with sucrose, boric acid can significantly promote pollen germination bitter, bitter melon pollen germination in vitro is concentration of the appropriate culture me

8、dium to be studied further. Keywords：Bitter gourd；Pollen viability；Determination目 錄摘 要1Abstract21前言41.1花粉生活力的檢測(cè)方法41.2花粉活力測(cè)定方法的研究進(jìn)展。41.3目的和意義62材料與方法62.1材料6供試材料采集自園藝園林學(xué)院教學(xué)基地，上午八點(diǎn)之前采集當(dāng)天開放的，04-17與04-17×25兩個(gè)品系的花朵，放在有冰塊的泡沫箱中拿回實(shí)驗(yàn)室立刻做實(shí)驗(yàn)。62.2方法62.2.1碘碘化鉀染色法13,3262.2.2醋酸洋紅法3372.2.3TTC法3,2472.2.4過氧化物酶法347

9、2.2.5離體萌發(fā)法72.2.6無機(jī)酸法1383結(jié)果與分析83.1不同方法鑒定花粉生活力83.1.1碘碘化鉀染色法鑒定花粉活力83.1.2醋酸洋紅染色法鑒定花粉活力93.1.3TTC染色法鑒定花粉活力93.1.4過氧化物酶法鑒定花粉活力93.1.5離體培養(yǎng)法鑒定花粉活力93.1.6無機(jī)酸檢測(cè)花粉的活力103.2品種間測(cè)定結(jié)果的比較103.3不同方法的比較114結(jié)論與討論114.1結(jié)論11致謝13參考文獻(xiàn)141 前言1.1 花粉生活力的檢測(cè)方法目前花粉活力的測(cè)定方法有染色法中的碘碘化鉀染色法1、醋酸洋紅法2,3、TTC染色法4-6、FCR法7、聯(lián)苯胺染色法（過氧化物酶染色法）8,9、MTT法10

10、-12，萌發(fā)法中的離體萌發(fā)法和活體萌發(fā)法，還有田間授粉法、形態(tài)鑒定法、無機(jī)酸法13,14。本研究采用碘碘化鉀染色法、醋酸洋紅法、TTC法、過氧化物酶染色法、離體萌發(fā)法、無機(jī)酸法。碘碘化鉀染色法是根據(jù)淀粉遇碘變藍(lán)的特性，根據(jù)藍(lán)色的深淺程度來判斷花粉粒中淀粉的含量，從而確定花粉?；钚缘母叩停淮姿嵫蠹t法的染色原理是靠花粉中的脫氫輔酶而染色，有活力的花粉被染成紅色，部分失去活力的呈現(xiàn)粉紅色，而無活力或不育的花粉無色；TTC法基本原理是，當(dāng)TTC滲入細(xì)胞后，遇到活細(xì)胞里的脫氫酶接受氫離子，由無色的氧化型變成紅色還原型不溶于水的化合物，由此來判斷花粉的生活力；FCR法基本原理是熒光染料本身不產(chǎn)生熒光，無極

11、性，并能自由地透過完整的原生質(zhì)膜。當(dāng)此種染料進(jìn)入原生質(zhì)后，即被醋酶作用形成一種能產(chǎn)生熒光的極性物質(zhì)熒光素。由于熒光素不能自由地出人原生質(zhì)膜，而只在細(xì)胞內(nèi)積累，因此可以根據(jù)花粉產(chǎn)生熒光的情況來判斷花粉的生活；MTT染色法是根據(jù)花粉粒中脫氫酶的活性判斷花粉生活力，適用試劑是四唑鹽類染料，染料的配制方法為:1% 2,5-聯(lián)苯四唑溴化物(MTT或噻唑蘭)溶于5%蔗糖；活體萌發(fā)法基本原理是15，具有花粉管的花粉粒能被錨定在柱頭上，并且不會(huì)被漂洗掉，因此可以通過漂洗柱頭和比較漂洗前后柱頭上的花粉粒數(shù)目來推測(cè)其萌發(fā)率；田間授粉檢測(cè)法基本原理11是根據(jù)果實(shí)和種子的形成情況來判斷花粉生活力；無機(jī)酸檢測(cè)法，也稱瞬

12、時(shí)花粉管法，基本原理是，由于酸對(duì)花粉粒質(zhì)膜的刺激作用，使質(zhì)膜變得非常脆弱，通透性也增大，以致大量地吸收H+，使內(nèi)壓迅速升高并導(dǎo)致質(zhì)膜膨脹，最后活性花粉的胞質(zhì)內(nèi)含物就會(huì)噴射而出，形成“瞬時(shí)花粉管”。1.2 花粉活力測(cè)定方法的研究進(jìn)展。不同的植物適應(yīng)的花粉檢測(cè)方法不同。在辣椒花粉活力測(cè)定最佳方法的篩選試驗(yàn)時(shí)張子學(xué)16,17等得出的結(jié)論是，離體萌發(fā)法和TTC法適用于不同貯藏時(shí)間的花粉生活力的測(cè)定，而碘-碘化鉀染色法、醋酸洋紅染色法、過氧化物酶沉淀法均不能用于貯藏辣椒花粉生活力的測(cè)定，以上各種方法皆適合現(xiàn)菜的辣椒花粉活力的檢測(cè)。而王少先18、嚴(yán)崢19的研究結(jié)果是只有離體萌發(fā)法是適宜辣椒花粉活力檢測(cè)。在

13、蕓苔屬植物花粉萌發(fā)和貯藏過程中的生活力測(cè)定方法篩選實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)離體萌發(fā)法是最可靠的方法20。M.R.Tuinstra認(rèn)為在高梁上用離體萌發(fā)法測(cè)定花粉生活力時(shí)要注意在瓊脂培養(yǎng)基上蔗糖、硼酸和硝酸鈣的濃度以及溫度，結(jié)果表明最佳培養(yǎng)基成分為0.9M蔗糖 +2.43mM硼酸 +2.12mM硝酸鈣，溫度應(yīng)保持在20-40之間21。但在黃瓜花粉生活力最佳測(cè)定試驗(yàn)的觀察中發(fā)現(xiàn)TTC染色法才是測(cè)定黃瓜現(xiàn)采花粉生活力的最佳染色方法，I-KI染色法、醋酸洋紅染色法不適用于黃瓜花粉生活力的測(cè)定22。對(duì)羊草的研究也發(fā)現(xiàn)TTC法優(yōu)于I-KI染色法23。另外對(duì)矮牽?；ǚ廴旧珓┑暮Y選實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用醋酸洋紅染色花粉粒均被染成紅色

14、，次甲基蘭能將花粉粒全部染為藍(lán)色，但-茶酚、聯(lián)苯氨和TTC三種染色法均無法使花粉著色，因此它們不能作為測(cè)定矮牽?；ǚ凵盍Φ娜旧珓?4。在對(duì)苧麻花粉活力研究時(shí)，I-KI、TTC、醋酸洋紅的染色效果不理想，得出的結(jié)果與離體萌發(fā)法相差較大，因此這三種方法適合苧麻花粉活力的檢測(cè)25?；ǚ垭x體萌發(fā)需要一系列合適的外部條件如溫度、培養(yǎng)基濃度等，萌發(fā)溫度一般在25時(shí)最好，低于18不萌發(fā)，如荔枝26棉花花粉萌發(fā)及花粉管生長(zhǎng)的最高溫度為3227，一般來說植物花粉萌發(fā)的溫度應(yīng)控制在15-35。蔗糖濃度對(duì)花粉發(fā)芽率也有很大的影響，大多數(shù)物種的花粉在10%的蔗糖濃度下發(fā)芽最好。如梨 28、黃皮29、矮牽牛花24，但

15、有些花粉的萌發(fā)需要的最佳蔗糖濃度高于10%，如丁香花粉萌發(fā)以15%蔗糖+2%瓊脂的培養(yǎng)基效果最好，花粉萌發(fā)率最高。培養(yǎng)基中除了蔗糖以外還要有一些微量物質(zhì)，如硼、鈣等，不同花粉萌發(fā)需要的鈣濃度不同，如梨花粉萌發(fā)最佳鈣濃度為0.03%28；藍(lán)豬耳花粉萌發(fā)的最佳Ca濃度為 2.1×10-4mol/L，萌發(fā)頻率達(dá)65%30；南瓜花粉萌發(fā)培養(yǎng)基中硝酸鈣300mg/L較為適宜31。1.3 目的和意義苦瓜又名涼瓜，是葫蘆科植物，為一年生攀緣草本。原產(chǎn)亞洲熱帶地區(qū)，目前廣泛分布于熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)?？喙暇哂刑厥獾目辔?，但仍然受到大眾的喜愛，這不單純因?yàn)樗目谖短厥?，還因?yàn)樗哂幸话闶卟藷o法比擬的

16、神奇作用?？喙峡梢猿盁幔山馄７?，清心聰耳明目，潤(rùn)澤肌膚，強(qiáng)身，使人精力旺盛，抗衰老。所以通過遺傳育種增加餐桌上苦瓜的品種有重要意義。遺傳育種中，花粉是不可缺少的材料，所以在遺傳育種中研究花粉的活力成為關(guān)鍵的一步。在花粉生活力檢測(cè)的方法中，一般都認(rèn)為離體萌發(fā)法效果最好，結(jié)果最接近花粉的自然生活力，但是此方法與其他的染色法、無機(jī)酸法比較所需時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)快速檢測(cè)起到相對(duì)的限制作用。所以本研究是為了篩選出適宜苦瓜花粉生活力檢測(cè)的、快于離體萌發(fā)法的檢測(cè)方法。目前對(duì)苦瓜花粉生活力檢測(cè)方的研究較少，本研究對(duì)給出適合苦瓜花粉快速檢測(cè)的方法、苦瓜花粉生活力的其他研究及育種工作有重要的意義。另外，苦瓜是典型的

17、雌雄異花，在繁殖過程中要借助外力才能完成傳粉受精的過程?？喙想s交過程中，兩性之間的傳粉是基礎(chǔ)，傳粉過程始于花藥開裂和成熟花粉的散出，攜帶著雄配子體或其前體的花粉粒被暴露在干燥條件下，必須在具有活力時(shí)到達(dá)適宜的接受柱頭。因此，選擇恰當(dāng)?shù)幕ǚ刍盍y(cè)定方法對(duì)其花粉活力的變化規(guī)律進(jìn)行研究，對(duì)提高其繁殖效率具有重要意義。2 材料與方法2.1 材料供試材料采集自園藝園林學(xué)院教學(xué)基地，上午八點(diǎn)之前采集當(dāng)天開放的，04-17與04-17×25兩個(gè)品系的花朵，放在有冰塊的泡沫箱中拿回實(shí)驗(yàn)室立刻做實(shí)驗(yàn)。2.2 方法2.2.1 碘碘化鉀染色法13,32 將1.3gKI溶解于10mL的蒸餾水中，然后放入0.

18、3gI2，待完全溶解后定容至100mL。在載有花粉的載玻片上加2滴碘-碘化鉀溶液，用鑷子攪拌均勻，并使花粉散開，蓋上蓋玻片迅速進(jìn)行觀察。凡被染成藍(lán)色表示有生活力或花粉里含有淀粉，未被染色或程黃褐色為缺失生活力。選取五個(gè)視野進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)有活力花粉的百分率，取平均值。2.2.2 醋酸洋紅法33將花粉輕輕涂抹在載玻片上，在載玻片上滴入1-2滴醋酸洋紅溶液，用鑷子攪拌均勻，蓋上蓋玻片，片刻后在顯微鏡下觀察，有活力的花粉染成紅色。選取五個(gè)視野進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)有活力花粉的百分率，取平均值。2.2.3 TTC法3,24取少量花粉直接放人載玻片上，加l滴1TI'C溶液，用鑷子攪拌均勻，蓋上蓋玻片，然后

19、放置于30的恒溫箱內(nèi)15min。在光學(xué)顯微鏡下觀察，凡被染為紅色的生活力強(qiáng)，淡紅色次之，無色者為沒有生活力的花粉或不育花粉。選取五個(gè)視野進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)有活力花粉的百分率，取平均值。2.2.4 過氧化物酶法34過氧化物酶染色法又稱聯(lián)苯胺染色法，是根據(jù)花粉中過氧化物酶的活性來判斷花粉的活力。配試劑：0.5%的聯(lián)苯胺：將0.5 g聯(lián)苯胺溶于100 mL乙醇中；0.5%-萘酚：將0.5 g-萘酚溶于100 mL 50%乙醇中；0.25%的碳酸鈉：將0.25 g碳酸鈉溶于100 mL蒸餾水中；0.3%過氧化氫。試驗(yàn)前將溶液各10 mL混合均勻成試劑；溶液為試劑。在干凈載玻片上加試劑和各1小滴，放少量花粉

20、,攪勻后蓋上蓋玻片，30環(huán)境條件下，放置30 min，在顯微鏡下觀察。由于有活力的花粉有活躍的過氧化物酶，所用試劑與過氧化物酶發(fā)生氧化反應(yīng)而染色，有活力的花粉被染成紅色，無活力的花粉則呈現(xiàn)黃色或無色透明。選取五個(gè)視野進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)有活力花粉的百分率，取平均值。2.2.5 離體萌發(fā)法 花粉離體萌發(fā)法是另外一種測(cè)定花粉生活力的方法，用以彌補(bǔ)花粉不萌發(fā)法的不足。取一培養(yǎng)皿，底蓋內(nèi)放1張濾紙，將滴有培養(yǎng)基（10%蔗糖與1%硼酸、10%蔗糖）的雙凹載玻片放入其中，新鮮花粉放置于培養(yǎng)基上，于30的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1 h，用10×10倍顯微鏡隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行觀察，觀察花粉萌發(fā)情況，以花粉管長(zhǎng)度大于

21、或等于花粉直徑為標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算花粉萌發(fā)率。2.2.6 無機(jī)酸法13取少量花粉置于雙凹玻片內(nèi)，滴上1滴08 mol/L的硝酸，在510 min內(nèi)在10×10倍顯微鏡下，隨機(jī)觀察5個(gè)視野，重復(fù)3次。有生活力花粉的胞質(zhì)內(nèi)含物噴射而出形成瞬時(shí)花粉管。觀察5個(gè)視野中形成瞬時(shí)花粉管的花粉所占的比例，計(jì)算花粉活力百分率。3 結(jié)果與分析3.1 不同方法鑒定花粉生活力3.1.1 碘碘化鉀染色法鑒定花粉活力從表1可知，碘碘化鉀染色法測(cè)得的結(jié)果有明顯的差異，而且花粉活性都在85%以上，04-17超過了95%。碘碘化鉀染色法實(shí)質(zhì)是利用花粉內(nèi)的淀粉遇碘變色去判斷花粉有無生活力。利用碘碘化鉀染色法測(cè)定芒的花粉活性時(shí)

22、，碘碘化鉀將有活力的花粉染成藍(lán)黑色，說明芒花粉細(xì)胞中的淀粉含量較高，但在苦瓜花粉染色時(shí)藍(lán)色和褐色之間呈現(xiàn)過度顏色，這個(gè)過渡色難以辨認(rèn)為藍(lán)色或是褐色。所以該法不適合苦瓜花粉活力的快速檢測(cè)。當(dāng)花粉保存一段時(shí)間后失去活性，但由于細(xì)胞中的淀粉依然存在，花粉仍然能被碘碘化鉀染成藍(lán)色，若有此方法作為花粉生活力的跟蹤，就會(huì)被認(rèn)為花粉的生活力不變，所以此法也只能作為花粉初始活力的檢測(cè)。表1 不同檢測(cè)方法的花粉活力品種過氧化物酶染色法TTC染色法無機(jī)酸法I2-KI法染色法醋酸洋紅染色法離體萌發(fā)法+0.01硼酸離體萌發(fā)法04-17×250-1762.27%70.72%82.55%84.87%81.42%

23、83.08%89.26%95.26%99.1199.8466.99%72.48%0.62%1.33%3.1.2 醋酸洋紅染色法鑒定花粉活力從表1看出，醋酸洋紅染色法側(cè)的兩品種的花粉活力都接近100%，在觀測(cè)時(shí)可見花粉染色明顯，易于區(qū)分，由于觀察到的幾乎是被染色的花粉，偶爾會(huì)看到一兩個(gè)不染色的花粉，可以忽略，認(rèn)為花粉全部被染色，由此可得出此法不適合苦瓜花粉活力的測(cè)定。3.1.3 TTC染色法鑒定花粉活力從表1可知，TTC法測(cè)得04-17×25和04-17的花粉活力基本一致，觀察時(shí)花粉顏色差別小，有活力的花粉邊緣被染成紅色，中間呈現(xiàn)黃褐色，而無活力的花粉整個(gè)呈現(xiàn)黃褐色，在顯微鏡下不易分辨

24、。所以認(rèn)為該法不適宜苦瓜花粉生活力的檢測(cè)。3.1.4 過氧化物酶法鑒定花粉活力從表1 不難看出過氧化物酶法測(cè)得兩品種的花粉活力差別較大，其中04-17×25為62.27%，04-17為70.72%。此法染色明顯，顏色分界線明確，且被染色的花粉邊緣附著有氣泡，易于區(qū)分。染色結(jié)果染色率與培養(yǎng)液法測(cè)得結(jié)果基本一致，但低于離體培養(yǎng)法測(cè)得的花粉生活力，可以作為快速測(cè)定苦瓜花粉生活力的適宜方法。3.1.5 離體培養(yǎng)法鑒定花粉活力在用離體培養(yǎng)檢測(cè)花粉活力時(shí)采用兩種不同溶液，一是純的蔗糖溶液，另一是向蔗糖溶液中加入0.01%的硼酸。從表1中不難看出，加硼酸的蔗糖培養(yǎng)液花粉萌發(fā)率顯著高于純蔗糖培養(yǎng)液，

25、無硼酸的培養(yǎng)液中只有個(gè)別花粉萌發(fā)，甚至觀測(cè)不到萌發(fā)的花粉，所以得出加入硼酸更適宜苦瓜花粉和活力的檢測(cè)。3.1.6 無機(jī)酸檢測(cè)花粉的活力由表1看出，用無機(jī)酸測(cè)定苦瓜花粉活力，得到兩個(gè)品種的花粉活性基本接近，用此法得到的結(jié)果與TTC法無太大區(qū)別?？喙匣ǚ鄣紊舷跛釒追昼姾?，可以看見花粉萌發(fā)孔有膨脹向外突出的現(xiàn)象（但都小于1倍花粉直徑）；但在花粉吸水后也可以觀察到萌發(fā)孔膨脹外突的現(xiàn)象，所以采用無機(jī)酸法不易判斷花粉是否真正有生活力。因此，無機(jī)酸法也不適于苦瓜花粉生活力的檢測(cè)。表2 檢測(cè)方法的平均數(shù)比較處理方法 花粉活力平均數(shù)差異顯著性0.050.01醋酸洋紅染色法離體萌發(fā)法+0.01%硼酸過氧化物酶染色

26、法I2-KI法染色法無機(jī)酸法TTC染色法83.443.6340.335.9725.624.07abbcddABBCCDD3.2 品種間測(cè)定結(jié)果的比較在所用到的方法中，測(cè)得的結(jié)果變化趨勢(shì)一致，都是04-17的活力大于04-17×25的活力。過氧化物酶法和離體培養(yǎng)法測(cè)得兩品種花粉的活力相差較大，且只有過氧化物酶染色法得到花粉活力與離體培養(yǎng)法相近。綜合幾種方法的檢測(cè)結(jié)果可以初步認(rèn)為04-17的花粉活力大于04-17×25的花粉活力，并且過氧化物酶染色法可以作為這兩種苦瓜花粉活力的檢測(cè)。3.3 不同方法的比較對(duì)花粉活力進(jìn)行發(fā)差分析得出，碘-碘化鉀染色法、無機(jī)酸法、TTC染色法與離體

27、萌發(fā)法差異達(dá)到了極顯著水平，只有過氧化物酶法與離體萌發(fā)法的花粉活力差異不顯著，比較接近。醋酸洋紅幾乎將所有的花粉都染成紅色，所以得出的花粉活力最大，都在99%以上，TTC法和無機(jī)酸法得到花粉活性基本相近，但又與離體萌發(fā)法差異較大。綜合所得的花粉活力百分率及方差分析可以得出過氧化物酶染色法是最適宜苦瓜花粉活力快速檢測(cè)的方法。4 結(jié)論與討論4.1 結(jié)論1 對(duì)苦瓜進(jìn)行花粉活力測(cè)定的六種方法中，以離體萌發(fā)法最為準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定地測(cè)定苦瓜的花粉活力，測(cè)得04-17×25的活力為66.99%，04-17為72.48%，但該法所用時(shí)間長(zhǎng)，要達(dá)到最佳的效果一般都要培養(yǎng)1小時(shí)以上，對(duì)作為快速檢測(cè)苦瓜花

28、粉活力是存在著時(shí)間上的缺陷。2 其他方法與離體萌發(fā)法比較，過氧化物酶法染色最佳、效果最好、最易辨認(rèn)花粉活力的方法，而且得出的結(jié)果基本與離體萌發(fā)法一致，這兩種方法測(cè)得04-17×25和04-17兩個(gè)品種花粉的活性分別為：過氧化物酶法62.28%、70.72%，離體萌發(fā)法(加0.01%的硼酸)66.97%、72.70%。方差分析得出的結(jié)果也是這兩者間無顯著差異，所以本研究初步認(rèn)為過氧化物染色法是最適宜快速檢測(cè)苦瓜花粉活力的方法。4.2 討論4.2.1 不同方法測(cè)定花粉活力的比較離體萌發(fā)法是根據(jù)花粉離體培養(yǎng)時(shí)的萌發(fā)率判定其生活力，這種方法簡(jiǎn)單、結(jié)果直觀，該方法幾乎適合所有植物花粉生活力的測(cè)

29、定，但當(dāng)培養(yǎng)條件和培養(yǎng)液配方有差異時(shí)，測(cè)定結(jié)果相差懸殊35。加入硼酸的蔗糖培養(yǎng)基花粉萌發(fā)率顯著大于不加硼酸的培養(yǎng)基，說明在離體培養(yǎng)時(shí)苦瓜花粉的萌發(fā)對(duì)硼的要求嚴(yán)格，因本研究只是初步研究，對(duì)于苦瓜花粉最適宜培養(yǎng)基配方還有待于進(jìn)一步研究。但應(yīng)該注意的是，花粉萌發(fā)率并不等同于花粉活力，因?yàn)榫哂忻劝l(fā)能力的花粉在其傳粉后不一定能正常結(jié)實(shí)。一般認(rèn)為離體萌發(fā)法是最能反映花粉的活力，在本研究中的結(jié)果表明，碘碘化鉀染色法、TTC法、醋酸洋紅染色法、無機(jī)酸法檢測(cè)的花粉花粉活力的結(jié)果與離體萌發(fā)法所得結(jié)果都存在著極顯著地差異，說明這幾種方法都不是合苦瓜花粉活力的快速檢測(cè)。只有過氧化物酶染色法得出的結(jié)果與離體萌發(fā)一致。4

30、.2.2 染色法檢測(cè)花粉活力從方差分析中可以得出，本研究所用到的快速檢測(cè)花粉活力的方法中過氧化物酶染色法適合苦瓜花粉生活力的快速檢測(cè)。從染色效果、顏色的區(qū)分難度和花粉活力百分率來看過氧化物酶法都是其余四種法中最好的，其結(jié)果與離體萌發(fā)法相近，且染色效果最好。本研究考慮的因素較少，只能初步認(rèn)為過氧化物酶染色法是適合苦瓜花粉活力快速檢測(cè)的方法，研究還可以用FDA染色法、MTT染色法、P-苯二胺法對(duì)苦瓜花粉活力進(jìn)行檢測(cè)，找出更適宜苦瓜花粉生活力快速檢測(cè)染色法。致謝本研究從選題、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)實(shí)施到論文撰寫，都是在導(dǎo)師田麗波副教授的悉心指導(dǎo)下完成的，能成為她的弟子是我一生的榮幸。導(dǎo)師為人寬厚正直，待人誠

31、懇，治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，具有忘我的敬業(yè)精神和積極的人生態(tài)度，這些都將令我終生受益。在此衷心的向我的導(dǎo)師致以最崇高的敬意!同時(shí)感謝海南大學(xué)園藝園林學(xué)院設(shè)施實(shí)驗(yàn)室分別為我提供了試驗(yàn)材料和試驗(yàn)場(chǎng)地。還感謝吳勝利同學(xué)、任國華同學(xué)在實(shí)驗(yàn)過程中給予的幫助。感謝所有關(guān)心和支持我的老師、朋友和同學(xué)們!感謝我的父母多年來對(duì)我的教育、支持和鼓勵(lì)!參考文獻(xiàn)1 秦賀蘭,賈宗鍇,閆東艷.南非萬壽菊溫室栽培花粉活力和柱頭可授性研究J.河北林業(yè)科技.2010.32 郭慶,王德斌,王定康等.海棠藤花粉活力的測(cè)定方法比較J.昆明學(xué)院學(xué)報(bào).2009, 31(3)3 許利彩,李海真,沈火林.西葫蘆花粉生活力測(cè)定方法及最佳授粉時(shí)間的研究J.河

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