Shh基因在肝細胞癌中的表達及意義

1、Shh基因在肝細胞癌中的表達及意義 作者：云建 劉蛟 陳強譜 歐琨 管清海 夏國華 汪謙 【摘要】 目的 探討sonic hedgehog（Shh）基因在肝細胞癌(HCC)中的表達及其臨床意義。方法 采用組織芯片技術(shù)和免疫組化(ABCHRP)法對150例HCC手術(shù)切除標本進行Shh檢測，評估Shh的表達與HCC臨床病理的關(guān)系。結(jié)果 150例肝癌組織，脫片9例，139例中39例有高表達（26.6%）；25例癌旁肝組織無脫片，陽性表達3例（12.0%）；二者比較有顯著性差異（P0.05）。Shh陽性表達與HCC的轉(zhuǎn)移、淋巴浸潤、包膜形成及細胞分化密切相關(guān)（P0.05）。結(jié)論 Shh檢測對判斷HCC

2、的轉(zhuǎn)移、復發(fā)及預后具有意義。 【關(guān)鍵詞】 肝腫瘤 Sonic hedghog基因 【Abstract】 Objective To investigate the effect of sonic hedgehog gene on the invasion,metastasis and prognosis of hepatocellular carcinoma(HCC).Methods Immunohistochemistry and tissue marray technique were used to evaluate the expression of sonic hedgehog gen

3、e, and the relationship between its expression and the clinicopathological prognostic parameters was analyzed in 150 HCC. Results The results showed that the positive expression rate of patched gene in HCC tissue (n=139) was 26.6%,but that in normal liver tissue was 12.0%. The expression was signifi

4、cantly higher in HCC than that in normal liver tissue. The positive rate of Shh gene was correlated with lymph node invasion, capsule,metastasis (intra2 / 7 or extrahepatic metastasis) and pathological stage.Conclusion These results suggest that Shh gene may play important roles in the invasion, met

5、astasis and prognosis of HCC. 【Key words】 hepatic tumor，sonic hedgehog gene Sonic hedgehog（Shh）基因與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切。我們采用組織芯片技術(shù)和免疫組化（ABCHRP）法對150例肝細胞癌（HCC）手術(shù)切除標本進行檢測，研究Shh基因表達與HCC臨床病理的關(guān)系，旨在探討其在HCC的轉(zhuǎn)移、復發(fā)及預后判斷中的作用，現(xiàn)報告如下。 1 材料與方法 1.1 材料 標本來自本院19931997年手術(shù)切除的HCC 150例，肝癌癌旁組織25例為對照，患者術(shù)前未行放療、化療。標本在甲醛中浸泡812 h后石蠟包埋

6、。150例中，脫片11例；參檢的139例中，男115例，女24例；年齡2477歲。有肝外轉(zhuǎn)移者占29.8%(42/139)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者占10.6%（15/139）。對照組25例組織取自腫瘤邊緣外部位，并經(jīng)HE染色，病理切片證實無癌變。 1.2 組織微陣列制備 蠟塊用組織芯片儀（MD）制作。150例腫瘤組織和25例癌旁組織每例放入兩孔，孔直徑0.6 mm。制作芯片時參考HE染色玻片，選擇最有代表性區(qū)域取組織。小心切片（厚約6 m）固定在顯微鏡的玻片上。HE染色的組織芯片供形態(tài)學參考。 1.3 免疫組化 石蠟包埋的組織芯片經(jīng)脫蠟，0.3%H2O2 10 min阻斷內(nèi)源性過氧化酶活性。微波爐抗原

7、熱修復處理（700 W×20 min）。山羊血清封閉非特異性抗原，滴加一抗4過夜，然后滴加生物素化羊抗鼠/兔IgG，37孵育30 min。DAB顯色后，蘇木素復染細胞核，脫水樹膠封固。每項試驗都有陰性對照（缺少一抗）。 1.4 結(jié)果判定 光鏡下以細胞質(zhì)（膜）呈棕黃色為陽性。每例組織芯片隨機觀察10個高倍（HPFs×400）視野，胞質(zhì)（膜）呈棕黃色細胞數(shù)10%為0，10%30%為1，31%50%為2，50%為3。對照組Shh染色程度1為正常。 1.5 統(tǒng)計學方法 采用Fisher精確計算法或2檢驗。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 2 結(jié)果 2.1 Shh在肝細胞癌中的表達 1

8、39例HCC中，39例陽性表達；25例癌旁組織中，3例(12%)陽性表達。兩者比較，有顯著性差異（P0.05）。 2.2 Shh表達水平和HCC臨床病理特征的關(guān)系 見表1。Shh陽性表達率與HCC的淋巴浸潤、轉(zhuǎn)移、包膜形成、腫瘤分化明顯相關(guān)（分別為P=0.002，P=0.012，P=0.031），而與性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤分期無明顯關(guān)系。表1 Shh表達水平與HCC臨床病理特征的關(guān)系注：同一病理特征內(nèi)比較，*P0.05 3 討論 Sonic hedgehog（Shh）信號通道由Shh配體、2個跨膜蛋白受體Patched（Ptc）和Smoothened（Smo）組成的復合物以及轉(zhuǎn)錄因子Gli

9、蛋白等組成，在胚胎發(fā)育過程中對細胞的增殖和分化意義重大，通路的功能異常會引起腫瘤發(fā)生。Shh是Shh通路中的起始基因。Patild等的研究表明，Gli1和Smo在肝癌中的表達較正常肝組織高，認為Shh信號通路在某些肝癌組織中有異常活動，可以作為肝癌治療的新靶標。Sicklick等研究發(fā)現(xiàn)，Shh信號通路在肝癌中活動失調(diào)，Smo介導癌基因cmyc過表達在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，認為Smo是預測HCC的預后指標。我們的研究發(fā)現(xiàn)，HCC中Shh的陽性表達與癌旁組織有顯著性差異，而在性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤分期方面無差異。此表明Shh在HCC的發(fā)生、發(fā)展中起有重要作用，提示在HCC中Shh與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。我們認為，Shh不僅可以作為HCC診斷和評價預后的指標，而且可以成為HCC生物治療的靶標之一。 組織芯片技術(shù)對于疾病的分子學診斷、預后指標的篩選、治療靶點的定位及治療效果的預測等均有重大使用價值。此技術(shù)不僅取材少，獲取信息量大，而且最大限度地減少了系統(tǒng)誤差。參 考 文 獻 【參考文獻】 1 Patild MA, Zhang J, Ho C, et al. Hedgehog signaling in human hepatocellular carcinomaJ. Cancer Bile Ther, 2006,5(1