最新2019年多功能酶標(biāo)儀SpectraMax-i3的操作規(guī)程.doc

1、新版多功能酶標(biāo)儀 SpectraMax i3 的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程Standard Operation of SpectraMax i3部門簽名 /日期DepartmentSignature/Date起草人： Prepared by樊小川， Xiaochuan Fan QC審核人： Reviewed by黃思佳， Sijia Huang QC審核人： Reviewed by褚夫蘭， Fulan ChuQA批準(zhǔn)人： Approved by張伯彥， Boyan Zhang 質(zhì)量負(fù)責(zé)人頒發(fā)部門 Issued by質(zhì)量保證部 -QA執(zhí)行日期 Effective Date替換文件 Replaced ForVe

2、rsion 00復(fù)審日期 Review Date分發(fā)部門 Distributed toQA，QC1 目的 建立多功能酶標(biāo)儀 SpectraMax i3 的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，規(guī)范 SpectraMax i3 多功能酶標(biāo)儀 檢測時(shí)的操作。2 適用范圍本規(guī)程適用于所有對多功能酶標(biāo)儀 SpectraMax i3 的操作3 術(shù)語或定義 多功能酶標(biāo)儀：指功能較強(qiáng)、精度較高的單體臺式酶標(biāo)儀，可檢測吸光度（Abs）、熒光強(qiáng)度 （FL）、時(shí)間分辨熒光（ TRF）、化學(xué)發(fā)光（ Lum）等。4 責(zé)任4.1 儀器負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)多功能酶標(biāo)儀的日常及定期維護(hù)，出現(xiàn)故障時(shí)負(fù)責(zé)聯(lián)系廠家維修，保 證運(yùn)行正常。4.2 實(shí)驗(yàn)操作人員需嚴(yán)格

3、按照本規(guī)程執(zhí)行，保證儀器正常使用，每次用完后填寫儀器使用 記錄，且使用后及時(shí)清理臺面，保持儀器潔凈。5 EHS 要求N/A6 程序6.1 儀器安裝 儀器與電腦連接完畢并連接電源以后，按儀器背面的按鈕可以直接啟動儀器，經(jīng)過幾分 鐘后的儀器自檢后就可以開始用于檢測。 在連有電源的情況下， 保持24小時(shí)開機(jī)， 不要罩防 塵罩以保持透氣，隔 1-2 月關(guān)機(jī)重啟一次。6.2 SoftMax Pro 軟件操作基本步驟6.2.1 打開軟件點(diǎn)擊“ SoftMax Pro 6.3 ”圖標(biāo)，打開 SoftMax Pro 軟件，出現(xiàn) "Plate Setup Helper" 對 話框。若無則點(diǎn)擊

4、 圖標(biāo)。6.2.2 連接儀器點(diǎn)擊 Choose a diffecient instrument '，打開 Instrument Connection '對 話框， 在 “Availible Instruments ”菜單中選擇儀器連接線與電腦所接的串口號 （COM） 。 選擇所購買的酶標(biāo)儀型號 SpectraMax i3 或添加模塊卡盒型號。 最后點(diǎn)擊“OK”鍵連接。6.2.3儀器檢測參數(shù)設(shè)定點(diǎn)擊圖標(biāo)后出現(xiàn)Settings ”對話框，對話框最上方出現(xiàn) Read Mode （讀板模式）和Read Type （讀板類型）兩個(gè)選項(xiàng)，讀板模式有 ABS（光吸收）、FL（熒光強(qiáng)度）、LU

5、M（化學(xué)發(fā)光）和TRF（時(shí)間分辨熒光 ），讀板類型有終點(diǎn)檢測（ Endpoint ）、動力學(xué) （Kinetic ）、單孔掃描（ Well Scan ）和光譜掃描（ Spectrum ）四種。使用者根據(jù)實(shí)驗(yàn) 需要選擇合適的讀板模式和讀板類型。 對話框下方左側(cè)列表有如下選項(xiàng)，從上往下依次用鼠標(biāo)點(diǎn)中選項(xiàng)，并在右欄中選擇 對應(yīng)的參數(shù)設(shè)定。1）Wavelengths （波長）可以選擇檢測幾種波長，光吸收模式最多為 6 種，其他模式均為 4 種。a）對于光吸收模式，可以在 Lm1 后面的框中填入檢測所用波長。b）對于熒光強(qiáng)度，時(shí)間分辨熒光和熒光偏振模式，可以在 2個(gè)框中分別填入激發(fā)波 長和發(fā)射波長。 Cu

6、toff 一般選為自動 （Auto） 。c）對于化學(xué)發(fā)光模式，一般使用 All'。當(dāng)同時(shí)檢測不止一色化學(xué)發(fā)光的時(shí)候可 填入相應(yīng)的檢測波長。2）Plate Type （板型） 對于不同實(shí)驗(yàn)可以選擇 6-384 孔板及其具體的板型。3）Read Area （讀板區(qū)域） 可用鼠標(biāo)先選中起始孔按住不放，進(jìn)行拖曳直到選中微孔板上所有需要檢測的孔。4）PathCheck （光徑校正） 僅用于光吸收模式，即將微孔板檢測得到的原始光吸收值通過參比校正到 1cm 光 徑長度時(shí)的光吸收值?？蛇x擇“ Water Constant ”（以水做參比 ）和“ Cuvette Refence ” （在比色皿中加入相

7、應(yīng)溶液預(yù)讀一次作為參比 ）。一般情況下可以不用校正。5）shake選中Before First Read 后可以選擇讀板之前震板，可選擇 0-999 秒。一般不選擇。6）Speed Read 可加速讀數(shù)速度，為準(zhǔn)確所讀數(shù)值，默認(rèn)不加速，一般不選擇。7）More SettingRead order 可按實(shí)驗(yàn)要求選擇 按列（ Column ）、排（ Row ）或者孔（ Well ） 掃描讀數(shù)。全部設(shè)定完后按對話框右下角的“ OK ”確認(rèn)，回到 "Plate Setup Helper" 對話框。6.2.4 檢測樣品分組設(shè)定按 鍵后出現(xiàn) Template Edite '對話

8、框，先用鼠標(biāo)拖曳選中要進(jìn)行編輯的孔， 被選中的空會變黑，然后點(diǎn)擊 Groups 欄中的下拉菜單選擇所要進(jìn)行的分組。具體設(shè)定步驟如下：1) 設(shè)定本底參照 (BLANK)進(jìn)入上述界面后，點(diǎn)擊 Assignment Option 欄中的下拉菜單選中“ Plate blank ”，則 其他的數(shù)據(jù)結(jié)果均顯示為扣除本底平均值的結(jié)果。2) 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)樣品 (Standards)當(dāng)有一系列已知濃度梯度的樣品做為標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)， 點(diǎn)擊 Groups 欄中的“Standards ”， 再點(diǎn)擊“assign”進(jìn)行標(biāo)記，繼而點(diǎn)擊“series”進(jìn)行設(shè)定，新出現(xiàn)的對話框中“Start from ” 中“Top to Bott

9、om ”、“ Bottom to Top ”、“ Left to Right ”或“Right to Left ”表示該 組內(nèi)樣品排列次序，根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇；右上方的“ pattern of Replicates ”會自動顯示 復(fù)孔數(shù)目；下方的“ Starting value ”表示起始樣品的濃度，可以在框內(nèi)填入相應(yīng)數(shù)值， “Step by ”表示以什么方式設(shè)置濃度梯度，前面下拉框可以選擇“ + 、-、 *、/”，后 面框內(nèi)可以填入相應(yīng)的值，比如起始濃度是 2，增加2，則選擇“ +”，輸入“ 2”。設(shè)定 完畢，點(diǎn)對話框右下角 “OK”確認(rèn)。在上一界面中點(diǎn)右邊的 “Edit”，新對話框中“Sam

10、ple Descriptor ”下的“Column name ”根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況命名， 默認(rèn)是“Concentration ”，“ Units ” 后面可以填入適當(dāng)?shù)臐舛葐挝?，設(shè)置好后退出“ Template Edite ”。3) 設(shè)定未知樣品 (Unknowns)對未知樣品進(jìn)行分組設(shè)定時(shí)， 進(jìn)入“Template Edite ”界面，選中微孔，點(diǎn)擊“Groups ” 欄“ Unknowns ”下的“ Unknowns ”，若未知樣品已知濃度，選“ Unk-dilution ”，具體 設(shè)定同標(biāo)準(zhǔn)樣品。4) 有多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品或樣品時(shí)點(diǎn) Groups 欄中的“ add ”，可以添加新組，其它設(shè)置同上6.

11、2.5 數(shù)據(jù)分析設(shè)定圖標(biāo)，進(jìn)入 Plot1) 在“ standardCurve ”進(jìn)行數(shù)據(jù)分析設(shè)定，點(diǎn)擊Edite- standardcurve 進(jìn)'行圖表設(shè)置，在該對話框中，“ Grafe Title ”中填入該圖的名稱， 即以后在數(shù)據(jù)計(jì)算中要引用的名字?！?Plot Name ”中填入該條曲線的名稱，“ X-Axis 和“Y-Axis ”可以通過下拉欄選擇該曲線橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)所引用的數(shù)據(jù)，如選擇 “Concentration ”和“ MeanValue ”。在“ Plot Attributes ”中可選擇圖中每個(gè)點(diǎn)的形狀和顏色。一張圖中可以有多條曲線，按“ add ”可在該圖中增加

12、曲線2) “Curve Fit ”右邊的下拉菜單可選擇曲線擬合的方式，如四參數(shù)方程“ 4-Parameter 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行選擇。6.2.6 設(shè)定溫度儀器可以設(shè)定溫度，可在室溫以上加溫。當(dāng)開啟溫度控制后需使儀器的微孔板插槽置于 關(guān)閉狀態(tài)保持所設(shè)溫度，如果處于打開狀態(tài)，儀器會發(fā)出報(bào)警聲，然后自動關(guān)閉微孔板 插槽。6.2.7 參數(shù)設(shè)置保存 實(shí)驗(yàn)檢測參數(shù)都設(shè)定完畢后，所有檢測條件的設(shè)定、樣品類型的設(shè)定、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、數(shù)據(jù) 分析結(jié)果等，可以另存為兩種格式：1) *.sda 格式，即數(shù)據(jù)格式。該文檔含有包括參數(shù)設(shè)定，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果分析等所有 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。2) *.spr 格式，即模版格式。該文檔含有參數(shù)設(shè)定

13、，分析公式等實(shí)驗(yàn)設(shè)定內(nèi)容，可以 應(yīng)用于多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)而使用統(tǒng)一模版。為避免覆蓋原有數(shù)據(jù)，每次使用需新建模板或?qū)贆z測模版讀數(shù)，禁止使用已保存的原 始檢測數(shù)據(jù)作為模版。6.2.8 運(yùn)行程序1) 按 “ open/close ”可以控制儀器微孔板插槽的打開和關(guān)閉，微孔板插槽打開后， 將酶標(biāo)板水平放置到微孔板插槽，點(diǎn)“ open/close ” 關(guān)閉微孔板插槽。2) 點(diǎn)擊 開始讀數(shù)。 讀數(shù)完畢后保存文件即可。 軟件安裝后默認(rèn)用戶在做完實(shí)驗(yàn) 后自己保存數(shù)據(jù)。如果用戶希望每次實(shí)驗(yàn)檢測后自動保存可以在“Save DataAfter Read ”前打勾。6.3 結(jié)果分析 在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，自動根據(jù)所設(shè)參數(shù)進(jìn)行結(jié)果

14、分析以及曲線擬合。在結(jié)果中包括了所 讀數(shù)值及曲線相關(guān)的數(shù)據(jù)，內(nèi)容包括樣品序號、樣品數(shù)值( value )、 SD (Standard Deviation )值和CV值(coefficient of variation )，在曲線圖下方，軟件還會自動計(jì)算出 曲線的各種參數(shù)如 EC50 值等。數(shù)據(jù)分析完后，建議將其屬性更改為只讀，以防止誤刪。6.4 其他分析SpectraMax i3還包括相關(guān)性分析等分析模塊，可根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)需要選用。6.5 儀器保養(yǎng)注意1) 有良好的電源，保持 24 小時(shí)開機(jī)。2) 保持避光和干凈的室內(nèi)環(huán)境，維持一定的濕度 (30%-80%) 。3) 維持室內(nèi)比較恒定的溫度，以

15、20-22 度為最適宜。4) 適用 6-384 孔板。 96 孔微孔板內(nèi)每孔可檢測 100-300ul 溶液，最佳檢測體積為 200ul 。 384孔微孔板內(nèi)每孔可檢測 50-100ul 溶液，最佳檢測體積為 80ul。5) 檢測后的微孔板不要長期置于儀器插槽中，檢測完后就從儀器中取出，避免溶液 蒸發(fā)腐蝕或損壞儀器內(nèi)部光路系統(tǒng)。如果為有腐蝕性或揮發(fā)性溶液，請帶蓋檢測。6) 對于可見光吸收檢測，使用全透明微孔板；紫外光吸收檢測，使用紫外可透全透 明微孔板；熒光強(qiáng)度和熒光偏振，使用黑色不透明板，需要檢測底讀的用黑色底透微 孔板；化學(xué)發(fā)光和時(shí)間分辨熒光，使用白色不透明微孔板。7 附件N/A8 參考或引用文件 SoftMax? Pro Microplate Data Acquisition and Analysis Software -Version 6 UserGuide 9 文件版本修改歷史版本號執(zhí)行日期修訂原因主要修訂內(nèi)容00新訂新訂01到期復(fù)審