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文檔簡介

1、溯源性和標(biāo)準(zhǔn)化一、基本概念 (一)溯源性定義:通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈,使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn),通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的特性。VIM: 1993,定義6.10臨床檢驗(yàn)的目的:對(duì)患者新鮮標(biāo)本檢驗(yàn)報(bào)告可靠的結(jié)果。臨床檢驗(yàn)的傳統(tǒng):對(duì)收集的患者標(biāo)本只做一次檢驗(yàn),就發(fā)出報(bào)告。因此,發(fā)出報(bào)告的可靠性必須體現(xiàn)兩個(gè)基本要求:精密度:重復(fù)性好;準(zhǔn)確度:和參考方法具有可比性。在臨床檢驗(yàn)中,公認(rèn):在參考實(shí)驗(yàn)室內(nèi),由具有認(rèn)可資格的操作人員使用參考方法、或以參 考品為標(biāo)準(zhǔn),對(duì)新鮮標(biāo)本進(jìn)行的檢測結(jié)果是參考值結(jié)果??墒?,在參考實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的所有參考 方法是手工方法;或使用參考品

2、校準(zhǔn)的方法,在實(shí)現(xiàn)參考值的傳遞上非常煩瑣。在日常檢測 中,無法使用這樣的參考方法或參考品進(jìn)行大量病人標(biāo)本的檢測,出報(bào)告。因此,現(xiàn)實(shí)問題 是:是否可以讓常規(guī)的檢測系統(tǒng),對(duì)病人標(biāo)本的檢測,在計(jì)量單位一致的前提下,得到和參 考系列相同的檢測量值。這就是通過一條不間斷的比較鏈,使檢測結(jié)果或檢測標(biāo)準(zhǔn)的值能夠 與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn),通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來。為此,生產(chǎn)廠商必須對(duì)完成檢 測涉及的檢測系統(tǒng)各組分(儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序)進(jìn)行嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)化程序,實(shí) 現(xiàn)溯源性。(二)標(biāo)準(zhǔn)化1972年,由ISO出版,T. R. B. Sanders主編的標(biāo)準(zhǔn)化的目的與原理一書對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 化下的定義是:“標(biāo)準(zhǔn)

3、化是為了所有有關(guān)方面的利益,特別是為了促進(jìn)最佳的、全面的經(jīng)濟(jì) 并適當(dāng)考慮到產(chǎn)品使用條件與安全要求,在所有有關(guān)方面的協(xié)作下,進(jìn)行有秩序的特定活動(dòng) 所制定并實(shí)施各項(xiàng)規(guī)則的過程?!笨梢院唵卫斫鉃椋簽榱藢?shí)現(xiàn)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性,檢測系統(tǒng)的生產(chǎn)廠商的所有努力的 過程為標(biāo)準(zhǔn)化。(三)理解檢驗(yàn)的特點(diǎn)1 .檢驗(yàn)的檢測對(duì)象是病人標(biāo)本,而且一定是新鮮的標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)室使臨床和病人滿意的 是檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。實(shí)現(xiàn)結(jié)果可靠性的質(zhì)量管理有許多內(nèi)容。在保證收集和處理的標(biāo)本質(zhì) 量、在檢驗(yàn)后不存在處理檢測數(shù)據(jù)和發(fā)出報(bào)告的差錯(cuò)前提下,獲得可靠結(jié)果的主要階段是分 析過程的質(zhì)量。2 .檢驗(yàn)的習(xí)慣是對(duì)每份病人標(biāo)本只做一次檢測,就發(fā)出報(bào)告

4、;而且,每個(gè)標(biāo)本內(nèi)究竟 內(nèi)含多少分析物無法知道。因此,度量檢驗(yàn)的分析質(zhì)量不能以工業(yè)上的多次采樣、多次檢測 或測量、取均值和預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)比較等方式來觀察。3 .病人結(jié)果可靠性的含義是準(zhǔn)確度。國際上準(zhǔn)確度的定義為:檢測結(jié)果和被檢測物/分析物真值間的一致性。(VIM93-3.5 )。注:a)作為結(jié)果,在真值和該值間的差異,通常表 示為相同的計(jì)量單位;此時(shí),表示差異的更確切的詞為“不準(zhǔn)確度”。b)可以使用“可接受的參考值”替代“真值”。(ISO3534-1,3.11 ) c)特別是對(duì)每個(gè)標(biāo)本只作一次測定時(shí),差異 不僅包括分析過程的不準(zhǔn)確度,也包括了分析過程的不精密度。4 .檢驗(yàn)質(zhì)量的首要問題是分析過程(即

5、檢測的)精密度。定義為:各個(gè)重復(fù)檢測值間 的一致性。度量精密度的指標(biāo)是不精密度。也即:臨床要求結(jié)果的重復(fù)性好。5 .自動(dòng)化在臨床檢驗(yàn)的應(yīng)用,極大地提高了檢驗(yàn)的效率和質(zhì)量。而且,在多年的實(shí)踐 中,認(rèn)識(shí)到:保持檢驗(yàn)必需的自動(dòng)化儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序的固定組合,是實(shí)現(xiàn)溯源性的前提。否則,一事無成。因此,要使檢驗(yàn)結(jié)果的量值和參考系統(tǒng)結(jié)果一致,也就是 對(duì)涉及檢驗(yàn)的檢測系統(tǒng)各組分的標(biāo)準(zhǔn)化。(四)、如何理解校準(zhǔn)品1 .衡量一個(gè)檢測系統(tǒng)(檢驗(yàn)方法)的基本分析性能有4點(diǎn):不精密度、不準(zhǔn)確度、病人結(jié)果可報(bào)告范圍、分析靈敏度。使用了自動(dòng)化分析儀,日常檢驗(yàn)的精密度得到了顯著的提 高;在優(yōu)良試劑盒的配合下,病人

6、結(jié)果的可報(bào)告范圍也可以滿足臨床要求;大多常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng) 目沒有對(duì)極低濃度的臨床要求。這樣,結(jié)果的可靠性的關(guān)鍵是準(zhǔn)確度,即對(duì)校準(zhǔn)品值的調(diào)節(jié)。 因此,實(shí)現(xiàn)新鮮病人標(biāo)本結(jié)果的溯源性,成為使校準(zhǔn)品值實(shí)現(xiàn)溯源性。2 .認(rèn)識(shí)標(biāo)準(zhǔn)品傳統(tǒng)的臨床檢驗(yàn),要使檢驗(yàn)結(jié)果可靠或有依據(jù),往往有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)。以臨床化學(xué)檢驗(yàn)的比色測定為例,常作三個(gè)檢測:空白、標(biāo)準(zhǔn)、測定。用空白液調(diào)整吸光度為零, 讀出測定比色液和標(biāo)準(zhǔn)比色液的吸光度,分別為As和 Au;已知標(biāo)準(zhǔn)液濃度為Cs。在一定范圍內(nèi),某分析物濃度和吸光度呈良好比例關(guān)系,則樣品內(nèi)某分析物濃度Cu為:一般而言,檢驗(yàn)工作使用的標(biāo)準(zhǔn)品屬應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。配制或供應(yīng)這類標(biāo)準(zhǔn)品

7、的實(shí)驗(yàn)室或廠商 具有符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的純品。稱取一定量的純品,然后將其溶解,在容量瓶內(nèi)用溶劑稀釋至容 積刻度,混勻,標(biāo)準(zhǔn)液配制完成。由稱量法獲得的稱量值和容量法配制的容積,計(jì)算出該標(biāo) 準(zhǔn)品濃度。檢定部門抽樣測定,結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)屬合格。即使測定檢定結(jié)果在范圍的上、 下限,也不能將實(shí)測值作為標(biāo)準(zhǔn)值。因?yàn)闇y定值的可靠性取決于檢定方法,一般的分析方法 的可靠性不如分析化學(xué)公認(rèn)的稱量法和容量法。所以標(biāo)準(zhǔn)品的定值由稱量和容積計(jì)算確定。 檢定不合格即報(bào)廢,決不可將實(shí)測值替代修正。3 .校準(zhǔn)品和定值為了克服因純標(biāo)準(zhǔn)液和病人樣品間的基體差異,對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)重誤差,20年前開始引用具有與病人樣品基體相似的校準(zhǔn)品替代

8、標(biāo)準(zhǔn)品,用于日常工作??墒牵M管校準(zhǔn)品的主 要來源是人的血清,為了使校準(zhǔn)品內(nèi)的一些分析物水平達(dá)到某個(gè)程度,而且形成穩(wěn)定的產(chǎn)品, 所有的校準(zhǔn)品、控制品、室間調(diào)查品等都是處理過的血清。和原來的天然血清間又產(chǎn)生了新 的基體差異。(1)校準(zhǔn)值隨方法而異校準(zhǔn)品中被檢分析物的含量無法由稱量法和容量法確定,只能倚賴于分析方法。校準(zhǔn)品 的校準(zhǔn)值必須取決于分析方法或檢測系列。(2)新鮮病人標(biāo)本是最佳校準(zhǔn)品由于所有校準(zhǔn)品都是處理過的樣品,和新鮮病人標(biāo)本有著基體差異。若使用公認(rèn)的參考 方法去標(biāo)化測定校準(zhǔn)品,測定程序是嚴(yán)密的,測定值是可靠的。但使用該測定值去校準(zhǔn)常規(guī) 的檢測系列時(shí),校準(zhǔn)品中被檢分析物參與反應(yīng)時(shí)的表現(xiàn)明

9、顯不同于新鮮病人標(biāo)本,不能將參 考方法系列的準(zhǔn)確度通過校準(zhǔn)品傳遞給病人標(biāo)本。須明確的,所有用于檢驗(yàn)中的檢測方法、 儀器、試劑等都是用來檢測病人新鮮標(biāo)本的,不是用來檢測校準(zhǔn)品這樣的處理過樣品。如果 先用公認(rèn)的參考方法檢測病人標(biāo)本,再以具有參考值的病人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測系列(包括方 法、試劑、儀器),此時(shí)該檢測系列再檢測其他新鮮病人標(biāo)本時(shí),這些病人標(biāo)本結(jié)果的溯源 性可上溯至公認(rèn)的參考方法。也即用新鮮病人標(biāo)本是校準(zhǔn)檢測系列的最佳校準(zhǔn)品。用這種方 式校準(zhǔn),能使同一個(gè)檢測系列在不同實(shí)驗(yàn)室檢測新鮮病人標(biāo)本時(shí),檢驗(yàn)結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室間具可 比性。一些大公司正是按照這樣的認(rèn)識(shí)為校準(zhǔn)品定值。原則上,以具有參考值的新鮮病

10、人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測系列(包括方法、試劑、儀器) 后,檢測系列再去檢測候選的校準(zhǔn)品(處理過),得到的檢測值為初始校準(zhǔn)值。以初始校準(zhǔn) 值反過來再校準(zhǔn)組合的檢測系列后,該檢測系列又去檢測病人的新鮮標(biāo)本。觀察病人標(biāo)本的 檢測值是否和參考方法的測定值具良好的可比性。實(shí)踐說明,只有不斷地調(diào)整校準(zhǔn)值,直至 用該校準(zhǔn)值校準(zhǔn)指定的檢測系列(加上具有校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品,即組合成檢測系統(tǒng))后,檢測 系統(tǒng)再檢測病人標(biāo)本,得到的測定值和病人標(biāo)本的參考方法測定值具有滿意的可比性,此時(shí), 校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值可以確認(rèn)。二、公司標(biāo)準(zhǔn)化的大致內(nèi)容和步驟(一) 實(shí)現(xiàn)溯源性的必備條件1 .建立“公司一級(jí)參考品”:準(zhǔn)備多個(gè)混和血清,經(jīng)離心、過

11、濾等處理后,各個(gè)混和血 清分裝成小包裝。-70C保存。試驗(yàn)說明,這樣保存的血清復(fù)融后具有的性能和新鮮血清相 似。所以,這些血清組是公司產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化的“公司一級(jí)參考品”。由參考實(shí)驗(yàn)室使用參考方 法,或采用參考品對(duì)這些血清定值,使血清具有參考值。2 .設(shè)立公司內(nèi)部使用的“一級(jí)校準(zhǔn)品”:由于參考系統(tǒng)或參考材料的使用常常是很有限的,因此,必須設(shè)立內(nèi)部使用的參考系統(tǒng)(或材料)復(fù)制品一即設(shè)立公司一級(jí)校準(zhǔn)品(MasterCalibrator)。對(duì)公司一級(jí)校準(zhǔn)品的定值方案見以下內(nèi)容。除了有公司一級(jí)校準(zhǔn)品外,還需要 建立公司生產(chǎn)用的應(yīng)用校準(zhǔn)品(Working Calibrator )。日常供應(yīng)的校準(zhǔn)品為商品校準(zhǔn)品

12、(Business Calibrator)。所有各種校準(zhǔn)品的原料要求和加工制備工藝一樣。只是在定值方案上有區(qū)別。大致上,定值按照下列兩個(gè)步驟的方法:(i)按照參考標(biāo)準(zhǔn)化方式對(duì)公司一級(jí)校準(zhǔn)品定值,(ii)常規(guī)校準(zhǔn)品(routine calibrator)按照常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化方式定值。3 .自始至終以方法學(xué)比較實(shí)驗(yàn)為確定、驗(yàn)證、或傳遞定值的手段。因此,除了上述的 混和血清組外,隨時(shí)還需要實(shí)際的新鮮病人標(biāo)本,供方法學(xué)比較用。4 .進(jìn)行定值的實(shí)驗(yàn)室:按照德國法律規(guī)定,為Roche診斷公司控制品和校準(zhǔn)品確定定值的實(shí)驗(yàn)室,遵從法律上受委托的質(zhì)量導(dǎo)則,所以完全符合專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定。選擇合適的 實(shí)驗(yàn)室是定值質(zhì)量的先

13、決條件。參加定值的實(shí)驗(yàn)室要求見表1。為了確保實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立完成工作,Roche公司很少參與實(shí)驗(yàn)室為進(jìn)行靶值設(shè)定的實(shí)施,并且確保所有數(shù)據(jù)的及時(shí)返回。對(duì)于公司“一級(jí)參考血清”的參考值定值,由公司選擇國際上知名的參考實(shí)驗(yàn)室委托 定值。這些參考實(shí)驗(yàn)室在國際上的數(shù)量很少,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室只是對(duì)某一個(gè)或幾個(gè)項(xiàng)目接受定值 委托,費(fèi)用昂貴。但是,這是公司校準(zhǔn)品定值的依據(jù)。表1外部實(shí)驗(yàn)室參與靶值設(shè)定的質(zhì)量要求組織機(jī)構(gòu)有明確的職責(zé),有訓(xùn)練有素的檢驗(yàn)人員 有明確的操作程序檢測儀器有具體說明和注意保養(yǎng)加樣系統(tǒng)加樣器的校正(分析天平) 有控制圖樣品處理對(duì)凍干樣品的復(fù)溶有具體說明,對(duì)深低溫冰凍樣品的凍融有具體說明內(nèi)部QC系統(tǒng)有QC

14、圖室間QC系統(tǒng)參加室間質(zhì)量評(píng)估,有相應(yīng)的反饋力殺有合適的計(jì)算機(jī)系統(tǒng),用于方案儲(chǔ)存有合適的儲(chǔ)存條件,對(duì)儲(chǔ)存溫度有記錄和檢查實(shí)驗(yàn)室和Roche診斷公司的聯(lián)系有反饋,實(shí)驗(yàn)室主任參加會(huì)議,互相聯(lián)系5 .確定公司產(chǎn)品對(duì)病人標(biāo)本檢測結(jié)果可溯源的參考方法或參考品目前,公司的部分產(chǎn)品指定以表2中所列的參考方法或參考品為溯源目標(biāo)。表2羅氏公司校準(zhǔn)品的溯源性項(xiàng)目名稱今方法或經(jīng)f品ACP酸性磷酸酶(磷酸酚儆)羅氏試劑,子,萬法Alb白蛋白(plus)CRM 470Alb白蛋白(BCP)CRM 470-1-抗胰蛋白酶(免疫透射)ALP堿性磷酸酶(IFCC)CRM 470IFCC 1983推薦的手工方法ALP堿性磷酸酶

15、(DGKC 1972 )羅氏試劑,手工方法ALP堿性磷酸酶(SFBC/AMP )羅氏試劑,手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(IFCC加/或不加PYP)IFCC 1985推薦的手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(DGKC )羅氏試劑,手工方法Amy淀粉酶(IFCC)依據(jù)IFCC 1998推薦羅氏試劑,手工方法P Amy胰淀粉酶(液體)羅氏試劑,手工方法Apo-A1 載脂蛋白 A1 (免疫透射)WHO ,國際參考品SP1-01ApoB載脂蛋白 B (免疫透射)WHO ,國際參考品 SP3-07ASLO抗鏈球菌溶血素 O (顆粒增強(qiáng),免疫透射)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)AST/ASAT 天門冬氨酸氨

16、基轉(zhuǎn)移酶(IFCC加/或不加PYP)IFCC 1985推薦的手工方法AST/ASAT 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(DGKC)羅氏試劑,手工方法碳酸氫鹽新標(biāo)準(zhǔn)(純物質(zhì)稱量)TBIL總膽紅素(DPD)Doumas推存方法TBIL總膽紅素(Jendrassik-Grof法,Malloy-Evelyn 法)Doumas>TT 法DBIL直接膽紅素(Jendrassik-Grof法,Malloy-Evelyn 法)羅氏試劑,手工方法C 3-c補(bǔ)體 C3-c (免疫透射)CRM 470C 4補(bǔ)體C 4 (免疫透射)Ca鈣(鄰甲酚酗:絡(luò)合酮o-CPC)CRM 470原子吸收Cl氯(離子選擇電極法ISE)電量

17、滴定法CHOL 膽固醇(CHOD-PAP )a) ID-MSb) Abell KendallCHE膽堿酯酶(丁酰硫代膽堿)羅氏試劑,手工方法CHE膽堿酯酶(乙酰硫代膽堿)羅氏試劑,手工方法CER1銅藍(lán)蛋白(免疫透射)CRM 470CK肌酸激酶(IFCC, DGKC)IFCC 1991推薦的手工方法CK-MB 肌酸激酶同工酶 MB (改良IFCC)IFCC 1985推薦的改艮手,方法CREA肌酎(酶比色法 plus)ID-MSCREA肌酊(Jafe堿性苦味酸比色法)ID-MSCRPC-反應(yīng)蛋白(免疫透射)CRM 470CRPC-反應(yīng)蛋白(顆粒增強(qiáng),免疫透射) Ferritin鐵蛋白(顆粒增強(qiáng),免

18、疫透射)CRM 470NIBSC人脾果糖胺(NBT )精選的檢測方法GGT©-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(Szasz)Persijn/v.d.Slik (1976), 手工方法GGT©-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(IFCC)IFCC 1983推薦的手工方法GLDH谷氨酸脫氫酶(DGKC , 1972)羅氏試劑,手工方法GLU葡萄糖(GOD-PAP, HK)ID-MS(1-acid glycoprotein(1-酸性糖蛋白(免疫透射)CRM 470HBDH羥丁酸脫氫酶(DGKC , 1972)羅氏試劑,手工方法HDL-CHOL 高密度脂蛋白膽固醇CDC方法葡聚糖硫酸鹽沉淀,Abell Kendal方法顯

19、色Haptoglobulin觸珠蛋白(免疫透射)CRM 470KappaK輕鏈(免疫透射)應(yīng)用 CRM 470 中的 IgG、IgM、 IgAIgG免疫球蛋白 G (免疫透射)CRM 470IgA免疫球蛋白 A (免疫透射)CRM 470IgM免疫球蛋白 M (免疫透射)CRM 470FE鐵(ferrozine )Lactate乳酸(酶比色法)一級(jí)參考品(純物質(zhì)稱量) 一級(jí)參考品(純物質(zhì)稱量)Lambda L輕鏈(免疫透射)應(yīng)用 CRM 470 中的 IgG、IgM、 IgALDH L-P乳酸脫氫酶 L-P (IFCC)LDH L-P乳酸脫氫酶L-P(Gay/McComb/Bowers )IF

20、CC 1994 推薦的手工方法羅氏試劑,手工方法LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L (DGKC 1972 )羅氏試劑,手工方法LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L (SFBC)羅氏試劑,手工方法LDL-CHOL 低密度脂蛋白膽固醇CDC方法肝素/鎂沉淀(超離心),Abell Kendal方法顯色Lipase脂肪酶(比色法)羅氏試劑,手工方法Mg 鎂(xylidylblue )原子吸收Prealbumin前白蛋白(免疫透射)CRM 470Pi磷(鋁藍(lán)紫外比色法)一級(jí)參考品(NERL) (純物質(zhì)稱量)K鉀(離子選擇電極法ISE)火焰光度法Protein Total總蛋白(雙縮月尿)SRM 927Sali

21、cylate水楊酸(比色法)一級(jí)經(jīng)f品(純物質(zhì)稱量)Na鈉(離子選擇電極法ISE)火焰光度法Transferrin轉(zhuǎn)鐵蛋白(免疫透射)CRM 470TG甘油三酯(GPO-PAP)以一級(jí)參考品校準(zhǔn)的 ID-MSTG甘油三酯(去除甘油空白)SRM 909bUrea/BUN(月尿酶 UV)SRM 909bUric Acid 尿酸(酶比色法 plus)ID-MSUIBC不飽和鐵結(jié)合力一級(jí)參考品(純物質(zhì)稱量)轉(zhuǎn)換為鐵注:CRM =歐共體標(biāo)準(zhǔn)局的認(rèn)可參考品SRM =美國的標(biāo)準(zhǔn)參考品ID-MS=同位素稀釋-質(zhì)譜法CDC =美國疾病控制中心NIBSC =英國國立生物標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照研究院6 .方法學(xué)比較的標(biāo)準(zhǔn)化(對(duì)

22、公司一級(jí)校準(zhǔn)品定值的過程)這個(gè)方式在臨床化學(xué)中是最常用的。關(guān)鍵概念是:首先,我們要有一批具有參考結(jié)果X參考值(X參考方法的結(jié)果,即X的參考值)的樣品(即公司準(zhǔn)備的一級(jí)參考品血清)。這些樣品在將成為常規(guī)檢測系統(tǒng)的組合系統(tǒng)(指定的分析儀+試劑+操作程序+校準(zhǔn)品等)上的檢測,得到真實(shí)(至少通過轉(zhuǎn)換)的初步結(jié)果X檢測值。在第二步中,以方法學(xué)比較分析評(píng)價(jià)參考結(jié)果和初步檢測值結(jié)果的差異。又用方法學(xué)比較的回歸線來調(diào)整樣品在公司組合的 檢測系統(tǒng)上的初步結(jié)果數(shù)值,向大家公認(rèn)的參考系統(tǒng)(或方法)的參考結(jié)果數(shù)值靠攏。實(shí)際 上,是調(diào)整公司組合的檢測系統(tǒng)校準(zhǔn)品的定值,將它調(diào)整到:公司組合的檢測系統(tǒng)再次被該 校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)

23、品校準(zhǔn)后,對(duì)參考樣品的檢測結(jié)果盡可能和原有的相應(yīng)參考結(jié)果一致(見圖 1)。14通過方法學(xué)比較確定定值公司組合的檢測系 統(tǒng)和原始校準(zhǔn)品定 值()方法學(xué)比較CiijhjlJ VS. CrM靶系統(tǒng)和最終校 準(zhǔn)品定值()方法學(xué)比較rtjpl VS. Crf,1Ctar為具有參考值血清在公司組合 的檢測系統(tǒng)上的檢測結(jié)果。Cref為參考血清的參考值。圖1:由圖說明,方法學(xué)比較定值的程序。第一步,在公司組合檢測系統(tǒng)內(nèi)用初始校準(zhǔn)品定值校準(zhǔn)后, 對(duì)系列參考樣品檢測。第二步,將每個(gè)參考樣品的參考值和公司系統(tǒng)檢測的值進(jìn)行方法學(xué)比較。第三步, 使用在第二步中經(jīng)方法學(xué)比較的回歸式調(diào)整得到的新校準(zhǔn)品的定值,對(duì)公司系統(tǒng)再次

24、校準(zhǔn),再檢測參考樣 品。第四步,用校準(zhǔn)品新校準(zhǔn)值再次后,再對(duì)參考樣品人血清的檢測結(jié)果,和相應(yīng)的參考值再進(jìn)行方法學(xué) 比較。若最后回歸的截距和斜率分別和0、1很接近,說明標(biāo)準(zhǔn)化成功地完成了(二)常規(guī)臨床化學(xué)的校準(zhǔn)品定值過程7 .參加定值的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量:在上世紀(jì)的80年代,德國診斷廠商協(xié)會(huì)( German DiagnosticsManufacturers Association, VDGH )依據(jù)大量研究,提出一個(gè)高效而可靠的定值測定模式?!癡DGH模式”要求每個(gè)校準(zhǔn)品每個(gè)項(xiàng)目的結(jié)果至少由6個(gè)實(shí)驗(yàn)室做 5個(gè)天間樣品的測定。這個(gè)6X5=30個(gè)結(jié)果模式還要求同時(shí)進(jìn)行“未知控制品”的檢測。只有負(fù)責(zé)靶值設(shè)定R

25、oche診斷公司,知道“未知控制品”的定值。所有被評(píng)估的參加實(shí)驗(yàn)室必須能回收這個(gè)值。研究說明,確定定值要求白實(shí)驗(yàn)室數(shù)量為6個(gè)是最佳安排;盡管使用了相同的檢測系統(tǒng),但是,各實(shí)驗(yàn)室同項(xiàng)目的精密度不一致;而且數(shù)據(jù)分布不呈正態(tài)分布。因此,確定靶值的做法是: 將所有實(shí)驗(yàn)室結(jié)果合在一起,去除5%的極值后的中位數(shù)為定值。VDGH模式發(fā)表于1981年的 J. Clin. Chem. Clin. Biochemistry, Vol. 19, pp. 1137-1179 。它的基本原理仍然用于今天對(duì) 每個(gè)靶值設(shè)定中。歐洲的約30個(gè)實(shí)驗(yàn)室中,總的有7個(gè)(至少6個(gè))近日參與靶值設(shè)定工作。8 .公司一級(jí)參考品和一級(jí)校準(zhǔn)

26、品的標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)化的目的是確?;颊哐逶诹_氏診斷分析系統(tǒng)上檢測得到的結(jié)果,和直接用參考方法檢測、或使用參考品為校準(zhǔn)品的檢測結(jié)果一致。標(biāo)準(zhǔn)化的各要素見圖2。圖2:圖中有三個(gè)要素,它們共同影響患者樣品的結(jié)果的可靠性所以,除非有一些例外,病人樣品總是使用于參考標(biāo)準(zhǔn)化中。依據(jù)方法學(xué)要求,始終使 用單一獻(xiàn)血員血清或混合血清。這些血清即為上述的公司一級(jí)參考品。這些人來源的樣品或者直接用參考方法檢測;或者在羅氏診斷分析系統(tǒng)上,經(jīng)參考品校 準(zhǔn)后檢測得到參考值。以后它們作為參考血清組(公司一級(jí)參考品)服務(wù)于公司一級(jí)校準(zhǔn)品 校準(zhǔn)值的定值。使用時(shí),在需要標(biāo)準(zhǔn)化的分析儀上檢測,用具有初步校準(zhǔn)品值的通常公司一 級(jí)校準(zhǔn)品批

27、號(hào)進(jìn)行校準(zhǔn)。然后,通過方法學(xué)比較或使用各個(gè)檢測平均變異等,為公司一級(jí)校 準(zhǔn)品設(shè)定最終值。公司一級(jí)校準(zhǔn)品的基體大致和各批市售校準(zhǔn)品(常規(guī)校準(zhǔn)品)相當(dāng);另外,這些一級(jí)校 準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-70C,并定期檢查穩(wěn)定性。在參考標(biāo)準(zhǔn)化中為了避免未處理過人的樣品穩(wěn)定性問題,單一獻(xiàn)血員樣品只使用一次?;旌先搜宓膮⒖挤椒ㄖ底疃啾徽J(rèn)可6個(gè)月;需要重新用于參考標(biāo)準(zhǔn)化時(shí),應(yīng)重確定。對(duì)公司一級(jí)參考血清定值的最高計(jì)量水平是國際認(rèn)可的參考方法(如:ID-MS)。若沒有參考方法可用,則選擇合適的正式官方參考品(如: CRM 470)。若這個(gè)也沒有,則可使 用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的水標(biāo)準(zhǔn)液(如:乳酸鋰)為參考,或者某個(gè)確定的檢測方法。酶活力檢

28、測通常以酶催化活力為檢測量,依據(jù)規(guī)定的檢測方法,在指定的系統(tǒng)上指示底 物的轉(zhuǎn)換速率即為檢測量。IFCC方法是在正式的研究單位(他們是這些方法的發(fā)表者)進(jìn) 行手工檢測的參考方法,以基本的活力計(jì)算公式得到酶活力。國家認(rèn)可的方法,是在實(shí)驗(yàn)室 內(nèi)或各個(gè)實(shí)驗(yàn)室間,使用系統(tǒng)試劑作為參考進(jìn)行手工檢測的方法。幾乎所有的分析物,確定溯源性的程序歸納如下:用參考方法、或以參考品為校準(zhǔn)品,對(duì)人血清的檢測。公司一級(jí)校準(zhǔn)品以這些參考方法值標(biāo)準(zhǔn)化。市售校準(zhǔn)品和控制品則以公司一級(jí)批號(hào)校準(zhǔn)品(真實(shí)性控制)在羅氏診斷分析系統(tǒng)上作校準(zhǔn)。這樣保證了在這些系統(tǒng)上確定的患者結(jié)果值的溯源性。每個(gè)分析儀平臺(tái)(羅氏 /日立、COBAS IN

29、TEGRA )對(duì)每個(gè)方法 各自都以相同方式,按照該參考標(biāo)準(zhǔn)化。溯源性途徑市售C.f.a.s.和真實(shí)性控制品羅氏分析儀方法vs.參考方法人混合血清分析儀C.f.a.s. 校準(zhǔn)品(公司一級(jí)校準(zhǔn)品)圖3:臨床化學(xué)的參考系統(tǒng)和產(chǎn)品校準(zhǔn)品、真實(shí)性控制品間的溯源性鏈(1)相對(duì)于參考方法的參考標(biāo)準(zhǔn)化測定參考方法值,如ID-MS參考方法,一定要在認(rèn)可的參考檢測實(shí)驗(yàn)室,如ZRI(Reference Institute of Bioanalysis )以參考方法作檢測,每次對(duì)使用的510個(gè)混合血清檢測,但是檢測費(fèi)用非常昂貴。每個(gè)混合血清由約100個(gè)供血員血液組成?;旌涎逯械母鱾€(gè)分析物濃度或活力,盡可能分布于整個(gè)

30、相應(yīng)的檢測范圍?;旌涎鍍?nèi)不可添加任何處理過的 材料,也不可用氯化鈉溶液稀釋。以確保在參考標(biāo)準(zhǔn)化中使用的樣品,和天然的患者血清沒 有任何差別。另外,使用天然的人材料,我們能對(duì)出現(xiàn)在校準(zhǔn)品的任何基體效應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)償。 程序匯總于圖 4。用公司一級(jí)參考品校準(zhǔn)圖4:本圖說明相對(duì)于參考方法的參考標(biāo)準(zhǔn)化的程序人混合血清分裝后冰凍于-70 C,在參考實(shí)驗(yàn)室和7個(gè)外部實(shí)驗(yàn)室(使用羅氏診斷分析儀系統(tǒng))同時(shí)對(duì)混合血清平行檢測。在羅氏 /日立或COBAS INTEGRA系統(tǒng)上檢測的統(tǒng)計(jì)模式相當(dāng)于用于確定定值的模式。公司一級(jí)校準(zhǔn)品為具有初步校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品。在進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化 的分析儀上,每個(gè)樣品在被標(biāo)準(zhǔn)化系統(tǒng)上所有可接受檢測

31、結(jié)果的中位數(shù),和該樣品的參考方 法值作比較。公司一級(jí)校準(zhǔn)品值的標(biāo)準(zhǔn)化通過方法學(xué)比較(線性回歸)實(shí)現(xiàn)。方法學(xué)比較回 歸線的截距若在允許限值內(nèi),可以從斜率的偏離計(jì)算出新校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值。若截距超出了允許 限值,則方法學(xué)比較不能用于公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)化。有些項(xiàng)目,如 HDL ,參考標(biāo)準(zhǔn)化的整個(gè)過程按照合適的方案在確認(rèn)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)實(shí)施。(2)相對(duì)于參考品的參考標(biāo)準(zhǔn)化若以參考品為參考標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ),通常檢測常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的各個(gè)供血員的新鮮血清。一般,在4個(gè)實(shí)驗(yàn)室總共對(duì) 50例患者血清每份獨(dú)立地進(jìn)行2歇檢測。這些血清中的分析物濃度盡可能分布于整個(gè)相應(yīng)的檢測范圍。嚴(yán)格地在分析儀的2個(gè)通道上進(jìn)行檢測。一個(gè)通道用參

32、考品校準(zhǔn),另一個(gè)用公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn);在任何情況下,都使用一個(gè)批號(hào)的試劑。一個(gè)未 知樣品和2個(gè)校準(zhǔn)品,和其他樣品一起在每批中進(jìn)行檢測。檢測程序見圖5。用參考品或一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化參考品如:CRM 470圖5:本圖說明相對(duì)于參考品的參考標(biāo)準(zhǔn)化程序使用方法學(xué)比較(Passing,Bablok回歸統(tǒng)計(jì))進(jìn)行校準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)化;評(píng)價(jià)時(shí)通常需要200個(gè)樣品,但是最少為 50個(gè)。新批號(hào)公司一級(jí)校準(zhǔn)品值的計(jì)算方法基本上和用參考方法進(jìn)行 標(biāo)準(zhǔn)化的方法一樣。另外,在使用公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后,要設(shè)定對(duì)參考品回收的允許限值。9 .常規(guī)校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)化由于公司一級(jí)校準(zhǔn)品具有和常規(guī)校準(zhǔn)品相同的基體,使用公司一級(jí)校準(zhǔn)品的單獨(dú)校準(zhǔn),

33、 得到的常規(guī)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值預(yù)期不會(huì)和使用人血清校準(zhǔn)得到的值有差異。校準(zhǔn)值的真實(shí)性和檢 測不確定度主要取決于統(tǒng)計(jì)模式和檢測性能的質(zhì)量。但是,為了確認(rèn)這個(gè)假設(shè)和認(rèn)可常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化的程序,對(duì)每個(gè)方法(分析儀平臺(tái)/校準(zhǔn)品/試劑組成)進(jìn)行下列的外部實(shí)驗(yàn)室的檢測。使用相同批號(hào)的試劑,對(duì)一些患者樣品(分析物 含量分布于相應(yīng)范圍),用公司一級(jí)校準(zhǔn)品和市售校準(zhǔn)品任意批號(hào)分別校準(zhǔn)后進(jìn)行平行檢測。 為了肯定市售校準(zhǔn)品和公司一級(jí)校準(zhǔn)品在這個(gè)程序中的可比性,方法學(xué)比較的直線回歸的截 距必須接近 0,斜率和1.00間的差異在規(guī)定的限值內(nèi)。(1)常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化的趨勢控制品對(duì)校準(zhǔn)品定值依據(jù)公司一級(jí)校準(zhǔn)品(C.fas.masterlot

34、)。(在生產(chǎn)公司一級(jí)校準(zhǔn)品和市售校準(zhǔn)品中是一樣的。)公司一級(jí)校準(zhǔn)品的定值可以用具有整個(gè)生理相應(yīng)檢測范圍分析物的人 樣品,直接溯源至參考方法或參考品。公司一級(jí)校準(zhǔn)品的儲(chǔ)存溫度為-70C,可以使用月 23年。為了確認(rèn),在46年后對(duì)一級(jí)校準(zhǔn)品重新用參考方法標(biāo)準(zhǔn)化。為了使參與標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量在連續(xù)的質(zhì)量控制下,要求每個(gè)實(shí)驗(yàn)市室對(duì)每批市售C.f.a.s.校準(zhǔn)品的定值時(shí),同時(shí)檢測2個(gè)不同漂移/趨勢控制品組成監(jiān)視系統(tǒng)。一個(gè)控制品是儲(chǔ)存于-70C的市售校準(zhǔn)品,以確保在儲(chǔ)存期間有最好的穩(wěn)定性。冰凍的(-70C)天然人血清為第二個(gè)漂移控制品。這個(gè)混合血清的來源和羅氏診斷產(chǎn)品過程是獨(dú)立的。兩個(gè)趨勢控制品至少可以使

35、用2年以上。如果要變換這些控制品,應(yīng)將近期的和新的控制品在一個(gè)試驗(yàn)中作平行檢測。依據(jù)不確定度的計(jì)算,確定允許的可接受范圍。若有一個(gè)趨勢控制品超出了允許范圍,應(yīng)開始重-標(biāo)準(zhǔn)化。若重標(biāo)準(zhǔn)化的C.f.a.s.值超出了預(yù)定的限值,公司一級(jí)校準(zhǔn)品的定值應(yīng)以此調(diào)整。這些做法的指標(biāo)隨不同分析物而不同, 出現(xiàn)顯著差異-這些指標(biāo)和分析物有關(guān)-必須對(duì)所有市售校準(zhǔn)品和控制品進(jìn)行完全的重設(shè)定 靶值。圖6:在市售C.f.a.s.校準(zhǔn)品產(chǎn)品校準(zhǔn)值設(shè)定時(shí)的趨勢控制品(2)對(duì)參與標(biāo)準(zhǔn)化和靶值設(shè)定的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求羅氏診斷公司提供的校準(zhǔn)品和控制品的定值,都以臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)患者臨床化學(xué)項(xiàng)目檢測 值進(jìn)行校正確定的。所以,參與確定控制品

36、和校準(zhǔn)品定值的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量是極其重要的。1)進(jìn)行定值的實(shí)驗(yàn)室的QC參與標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)室通常是獨(dú)立的外部實(shí)驗(yàn)室,也檢測患者的樣品值,接受國家機(jī)構(gòu)的 質(zhì)量控制。在德國,例如,質(zhì)量控制包括內(nèi)部質(zhì)量控制,定期參加循環(huán)檢測,和參加德國醫(yī) 學(xué)委員會(huì)導(dǎo)則要求的室間質(zhì)量評(píng)估。參與定值的實(shí)驗(yàn)室分布于歐洲和美國,都接受相似的質(zhì) 量控制。實(shí)驗(yàn)室定期接受審核。靶值確定的質(zhì)量要求需要符合GMP導(dǎo)則,公司和靶值設(shè)定實(shí)驗(yàn)室間按照標(biāo)準(zhǔn)要求簽訂合作協(xié)議。參與的實(shí)驗(yàn)室被要求檢查設(shè)備、人員、檢測性能、保存記錄等是否符合文件要求。 各實(shí)驗(yàn)室獲得的原始數(shù)據(jù),須進(jìn)行抽樣檢查,然后必須將數(shù)據(jù)送給羅氏診斷公司確認(rèn)。進(jìn)行 每個(gè)靶值設(shè)定時(shí),實(shí)驗(yàn)室將

37、收到詳細(xì)說明,要求按此實(shí)施,例如:關(guān)于樣品穩(wěn)定性(通常較 正式說明書考慮的要短)和各個(gè)檢測的特點(diǎn)。定值的測定一定在恒定的質(zhì)量控制下。和患者樣品測定一樣,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室在檢測時(shí)應(yīng)同時(shí)檢測12個(gè)內(nèi)部質(zhì)量控制樣品。若有任何一個(gè)質(zhì)量控制樣品的回收超出了2標(biāo)準(zhǔn)差范圍,實(shí)驗(yàn)室必須檢查原因,有必要重做。參與者也會(huì)收到未知樣品,要求像QC樣品那樣,每批檢測時(shí)進(jìn)行被檢測。若這個(gè)未知樣品的回收超出2標(biāo)準(zhǔn)差,這個(gè)實(shí)驗(yàn)室的所有檢測結(jié)果將被排除在評(píng)價(jià)以外。若結(jié)果沒有任何不正常,或在分析儀、試劑、或校準(zhǔn)品等有任何問題,參 與者應(yīng)寫出報(bào)告和簽署。必須消除檢測操作中發(fā)生的誤差,如樣品混勻等。2)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)、試劑、預(yù)處理、重復(fù)靶值設(shè)定的統(tǒng)計(jì)模式依據(jù)德國診斷產(chǎn)品廠商協(xié)會(huì)VDGH ( German DiagnosticsManufactures Association VDGH )的模式,作下列修改。和7個(gè)實(shí)驗(yàn)室簽訂協(xié)議,確定校準(zhǔn)值(常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化)和定值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)每個(gè)臨床化學(xué)項(xiàng)目(如:葡萄糖、膽固醇)進(jìn)行3次

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