溯源性和標(biāo)準(zhǔn)化概要

1、溯源性和標(biāo)準(zhǔn)化一、基本概念 （一）溯源性定義：通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的特性。VIM: 1993,定義6.10臨床檢驗的目的：對患者新鮮標(biāo)本檢驗報告可靠的結(jié)果。臨床檢驗的傳統(tǒng)：對收集的患者標(biāo)本只做一次檢驗，就發(fā)出報告。因此，發(fā)出報告的可靠性必須體現(xiàn)兩個基本要求：精密度：重復(fù)性好；準(zhǔn)確度：和參考方法具有可比性。在臨床檢驗中，公認(rèn)：在參考實驗室內(nèi)，由具有認(rèn)可資格的操作人員使用參考方法、或以參 考品為標(biāo)準(zhǔn)，對新鮮標(biāo)本進行的檢測結(jié)果是參考值結(jié)果?？墒?，在參考實驗室內(nèi)的所有參考 方法是手工方法；或使用參考品

2、校準(zhǔn)的方法，在實現(xiàn)參考值的傳遞上非常煩瑣。在日常檢測 中，無法使用這樣的參考方法或參考品進行大量病人標(biāo)本的檢測，出報告。因此，現(xiàn)實問題 是：是否可以讓常規(guī)的檢測系統(tǒng)，對病人標(biāo)本的檢測，在計量單位一致的前提下，得到和參 考系列相同的檢測量值。這就是通過一條不間斷的比較鏈，使檢測結(jié)果或檢測標(biāo)準(zhǔn)的值能夠 與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來。為此，生產(chǎn)廠商必須對完成檢 測涉及的檢測系統(tǒng)各組分（儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序）進行嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)化程序，實 現(xiàn)溯源性。（二）標(biāo)準(zhǔn)化1972年，由ISO出版，T. R. B. Sanders主編的標(biāo)準(zhǔn)化的目的與原理一書對標(biāo)準(zhǔn) 化下的定義是：“標(biāo)準(zhǔn)

3、化是為了所有有關(guān)方面的利益，特別是為了促進最佳的、全面的經(jīng)濟 并適當(dāng)考慮到產(chǎn)品使用條件與安全要求，在所有有關(guān)方面的協(xié)作下，進行有秩序的特定活動 所制定并實施各項規(guī)則的過程?！笨梢院唵卫斫鉃椋簽榱藢崿F(xiàn)臨床檢驗結(jié)果的溯源性，檢測系統(tǒng)的生產(chǎn)廠商的所有努力的 過程為標(biāo)準(zhǔn)化。（三）理解檢驗的特點1 .檢驗的檢測對象是病人標(biāo)本，而且一定是新鮮的標(biāo)本。實驗室使臨床和病人滿意的 是檢驗結(jié)果的可靠性。實現(xiàn)結(jié)果可靠性的質(zhì)量管理有許多內(nèi)容。在保證收集和處理的標(biāo)本質(zhì) 量、在檢驗后不存在處理檢測數(shù)據(jù)和發(fā)出報告的差錯前提下，獲得可靠結(jié)果的主要階段是分 析過程的質(zhì)量。2 .檢驗的習(xí)慣是對每份病人標(biāo)本只做一次檢測，就發(fā)出報告

4、；而且，每個標(biāo)本內(nèi)究竟 內(nèi)含多少分析物無法知道。因此，度量檢驗的分析質(zhì)量不能以工業(yè)上的多次采樣、多次檢測 或測量、取均值和預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)比較等方式來觀察。3 .病人結(jié)果可靠性的含義是準(zhǔn)確度。國際上準(zhǔn)確度的定義為：檢測結(jié)果和被檢測物/分析物真值間的一致性。（VIM93-3.5 ）。注：a）作為結(jié)果，在真值和該值間的差異，通常表 示為相同的計量單位；此時，表示差異的更確切的詞為“不準(zhǔn)確度”。b）可以使用“可接受的參考值”替代“真值”。（ISO3534-1,3.11 ） c）特別是對每個標(biāo)本只作一次測定時，差異 不僅包括分析過程的不準(zhǔn)確度，也包括了分析過程的不精密度。4 .檢驗質(zhì)量的首要問題是分析過程（即

5、檢測的）精密度。定義為：各個重復(fù)檢測值間 的一致性。度量精密度的指標(biāo)是不精密度。也即：臨床要求結(jié)果的重復(fù)性好。5 .自動化在臨床檢驗的應(yīng)用，極大地提高了檢驗的效率和質(zhì)量。而且，在多年的實踐 中，認(rèn)識到：保持檢驗必需的自動化儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序的固定組合，是實現(xiàn)溯源性的前提。否則，一事無成。因此，要使檢驗結(jié)果的量值和參考系統(tǒng)結(jié)果一致，也就是 對涉及檢驗的檢測系統(tǒng)各組分的標(biāo)準(zhǔn)化。（四）、如何理解校準(zhǔn)品1 .衡量一個檢測系統(tǒng)（檢驗方法）的基本分析性能有4點：不精密度、不準(zhǔn)確度、病人結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度。使用了自動化分析儀，日常檢驗的精密度得到了顯著的提 高；在優(yōu)良試劑盒的配合下，病人

6、結(jié)果的可報告范圍也可以滿足臨床要求；大多常規(guī)檢驗項 目沒有對極低濃度的臨床要求。這樣，結(jié)果的可靠性的關(guān)鍵是準(zhǔn)確度，即對校準(zhǔn)品值的調(diào)節(jié)。 因此，實現(xiàn)新鮮病人標(biāo)本結(jié)果的溯源性，成為使校準(zhǔn)品值實現(xiàn)溯源性。2 .認(rèn)識標(biāo)準(zhǔn)品傳統(tǒng)的臨床檢驗，要使檢驗結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）。以臨床化學(xué)檢驗的比色測定為例，常作三個檢測：空白、標(biāo)準(zhǔn)、測定。用空白液調(diào)整吸光度為零， 讀出測定比色液和標(biāo)準(zhǔn)比色液的吸光度，分別為As和 Au;已知標(biāo)準(zhǔn)液濃度為Cs。在一定范圍內(nèi)，某分析物濃度和吸光度呈良好比例關(guān)系，則樣品內(nèi)某分析物濃度Cu為：一般而言，檢驗工作使用的標(biāo)準(zhǔn)品屬應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。配制或供應(yīng)這類標(biāo)準(zhǔn)品

7、的實驗室或廠商 具有符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的純品。稱取一定量的純品，然后將其溶解，在容量瓶內(nèi)用溶劑稀釋至容 積刻度，混勻，標(biāo)準(zhǔn)液配制完成。由稱量法獲得的稱量值和容量法配制的容積，計算出該標(biāo) 準(zhǔn)品濃度。檢定部門抽樣測定，結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)屬合格。即使測定檢定結(jié)果在范圍的上、 下限，也不能將實測值作為標(biāo)準(zhǔn)值。因為測定值的可靠性取決于檢定方法，一般的分析方法 的可靠性不如分析化學(xué)公認(rèn)的稱量法和容量法。所以標(biāo)準(zhǔn)品的定值由稱量和容積計算確定。 檢定不合格即報廢，決不可將實測值替代修正。3 .校準(zhǔn)品和定值為了克服因純標(biāo)準(zhǔn)液和病人樣品間的基體差異，對檢驗結(jié)果的嚴(yán)重誤差，20年前開始引用具有與病人樣品基體相似的校準(zhǔn)品替代

8、標(biāo)準(zhǔn)品，用于日常工作。可是，盡管校準(zhǔn)品的主 要來源是人的血清，為了使校準(zhǔn)品內(nèi)的一些分析物水平達到某個程度，而且形成穩(wěn)定的產(chǎn)品， 所有的校準(zhǔn)品、控制品、室間調(diào)查品等都是處理過的血清。和原來的天然血清間又產(chǎn)生了新 的基體差異。（1）校準(zhǔn)值隨方法而異校準(zhǔn)品中被檢分析物的含量無法由稱量法和容量法確定，只能倚賴于分析方法。校準(zhǔn)品 的校準(zhǔn)值必須取決于分析方法或檢測系列。（2）新鮮病人標(biāo)本是最佳校準(zhǔn)品由于所有校準(zhǔn)品都是處理過的樣品，和新鮮病人標(biāo)本有著基體差異。若使用公認(rèn)的參考 方法去標(biāo)化測定校準(zhǔn)品，測定程序是嚴(yán)密的，測定值是可靠的。但使用該測定值去校準(zhǔn)常規(guī) 的檢測系列時，校準(zhǔn)品中被檢分析物參與反應(yīng)時的表現(xiàn)明

9、顯不同于新鮮病人標(biāo)本，不能將參 考方法系列的準(zhǔn)確度通過校準(zhǔn)品傳遞給病人標(biāo)本。須明確的，所有用于檢驗中的檢測方法、 儀器、試劑等都是用來檢測病人新鮮標(biāo)本的，不是用來檢測校準(zhǔn)品這樣的處理過樣品。如果 先用公認(rèn)的參考方法檢測病人標(biāo)本，再以具有參考值的病人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測系列（包括方 法、試劑、儀器），此時該檢測系列再檢測其他新鮮病人標(biāo)本時，這些病人標(biāo)本結(jié)果的溯源 性可上溯至公認(rèn)的參考方法。也即用新鮮病人標(biāo)本是校準(zhǔn)檢測系列的最佳校準(zhǔn)品。用這種方 式校準(zhǔn)，能使同一個檢測系列在不同實驗室檢測新鮮病人標(biāo)本時，檢驗結(jié)果在實驗室間具可 比性。一些大公司正是按照這樣的認(rèn)識為校準(zhǔn)品定值。原則上，以具有參考值的新鮮病

10、人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測系列（包括方法、試劑、儀器） 后，檢測系列再去檢測候選的校準(zhǔn)品（處理過），得到的檢測值為初始校準(zhǔn)值。以初始校準(zhǔn) 值反過來再校準(zhǔn)組合的檢測系列后，該檢測系列又去檢測病人的新鮮標(biāo)本。觀察病人標(biāo)本的 檢測值是否和參考方法的測定值具良好的可比性。實踐說明，只有不斷地調(diào)整校準(zhǔn)值，直至 用該校準(zhǔn)值校準(zhǔn)指定的檢測系列（加上具有校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品，即組合成檢測系統(tǒng)）后，檢測 系統(tǒng)再檢測病人標(biāo)本，得到的測定值和病人標(biāo)本的參考方法測定值具有滿意的可比性，此時， 校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值可以確認(rèn)。二、公司標(biāo)準(zhǔn)化的大致內(nèi)容和步驟（一） 實現(xiàn)溯源性的必備條件1 .建立“公司一級參考品”：準(zhǔn)備多個混和血清，經(jīng)離心、過

11、濾等處理后，各個混和血 清分裝成小包裝。-70C保存。試驗說明，這樣保存的血清復(fù)融后具有的性能和新鮮血清相 似。所以，這些血清組是公司產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化的“公司一級參考品”。由參考實驗室使用參考方 法，或采用參考品對這些血清定值，使血清具有參考值。2 .設(shè)立公司內(nèi)部使用的“一級校準(zhǔn)品”：由于參考系統(tǒng)或參考材料的使用常常是很有限的，因此，必須設(shè)立內(nèi)部使用的參考系統(tǒng)（或材料）復(fù)制品一即設(shè)立公司一級校準(zhǔn)品（MasterCalibrator）。對公司一級校準(zhǔn)品的定值方案見以下內(nèi)容。除了有公司一級校準(zhǔn)品外，還需要 建立公司生產(chǎn)用的應(yīng)用校準(zhǔn)品（Working Calibrator ）。日常供應(yīng)的校準(zhǔn)品為商品校準(zhǔn)品

12、（Business Calibrator）。所有各種校準(zhǔn)品的原料要求和加工制備工藝一樣。只是在定值方案上有區(qū)別。大致上，定值按照下列兩個步驟的方法：（i）按照參考標(biāo)準(zhǔn)化方式對公司一級校準(zhǔn)品定值，（ii）常規(guī)校準(zhǔn)品（routine calibrator）按照常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化方式定值。3 .自始至終以方法學(xué)比較實驗為確定、驗證、或傳遞定值的手段。因此，除了上述的 混和血清組外，隨時還需要實際的新鮮病人標(biāo)本，供方法學(xué)比較用。4 .進行定值的實驗室：按照德國法律規(guī)定，為Roche診斷公司控制品和校準(zhǔn)品確定定值的實驗室，遵從法律上受委托的質(zhì)量導(dǎo)則，所以完全符合專業(yè)實驗室的規(guī)定。選擇合適的 實驗室是定值質(zhì)量的先

13、決條件。參加定值的實驗室要求見表1。為了確保實驗室獨立完成工作，Roche公司很少參與實驗室為進行靶值設(shè)定的實施，并且確保所有數(shù)據(jù)的及時返回。對于公司“一級參考血清”的參考值定值，由公司選擇國際上知名的參考實驗室委托 定值。這些參考實驗室在國際上的數(shù)量很少，每個實驗室只是對某一個或幾個項目接受定值 委托，費用昂貴。但是，這是公司校準(zhǔn)品定值的依據(jù)。表1外部實驗室參與靶值設(shè)定的質(zhì)量要求組織機構(gòu)有明確的職責(zé)，有訓(xùn)練有素的檢驗人員 有明確的操作程序檢測儀器有具體說明和注意保養(yǎng)加樣系統(tǒng)加樣器的校正（分析天平） 有控制圖樣品處理對凍干樣品的復(fù)溶有具體說明，對深低溫冰凍樣品的凍融有具體說明內(nèi)部QC系統(tǒng)有QC

14、圖室間QC系統(tǒng)參加室間質(zhì)量評估，有相應(yīng)的反饋力殺有合適的計算機系統(tǒng)，用于方案儲存有合適的儲存條件，對儲存溫度有記錄和檢查實驗室和Roche診斷公司的聯(lián)系有反饋，實驗室主任參加會議，互相聯(lián)系5 .確定公司產(chǎn)品對病人標(biāo)本檢測結(jié)果可溯源的參考方法或參考品目前，公司的部分產(chǎn)品指定以表2中所列的參考方法或參考品為溯源目標(biāo)。表2羅氏公司校準(zhǔn)品的溯源性項目名稱今方法或經(jīng)f品ACP酸性磷酸酶（磷酸酚儆）羅氏試劑，子，萬法Alb白蛋白（plus）CRM 470Alb白蛋白（BCP）CRM 470-1-抗胰蛋白酶（免疫透射）ALP堿性磷酸酶（IFCC）CRM 470IFCC 1983推薦的手工方法ALP堿性磷酸酶

15、（DGKC 1972 ）羅氏試劑，手工方法ALP堿性磷酸酶（SFBC/AMP ）羅氏試劑，手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（IFCC加/或不加PYP）IFCC 1985推薦的手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（DGKC ）羅氏試劑，手工方法Amy淀粉酶（IFCC）依據(jù)IFCC 1998推薦羅氏試劑，手工方法P Amy胰淀粉酶（液體）羅氏試劑，手工方法Apo-A1 載脂蛋白 A1 （免疫透射）WHO ,國際參考品SP1-01ApoB載脂蛋白 B （免疫透射）WHO ,國際參考品 SP3-07ASLO抗鏈球菌溶血素 O （顆粒增強，免疫透射）內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)AST/ASAT 天門冬氨酸氨

16、基轉(zhuǎn)移酶（IFCC加/或不加PYP）IFCC 1985推薦的手工方法AST/ASAT 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（DGKC）羅氏試劑，手工方法碳酸氫鹽新標(biāo)準(zhǔn)（純物質(zhì)稱量）TBIL總膽紅素（DPD）Doumas推存方法TBIL總膽紅素(Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn 法)Doumas>TT 法DBIL直接膽紅素(Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn 法)羅氏試劑，手工方法C 3-c補體 C3-c （免疫透射）CRM 470C 4補體C 4 （免疫透射）Ca鈣（鄰甲酚酗:絡(luò)合酮o-CPC）CRM 470原子吸收Cl氯（離子選擇電極法ISE）電量

17、滴定法CHOL 膽固醇（CHOD-PAP ）a) ID-MSb) Abell KendallCHE膽堿酯酶（丁酰硫代膽堿）羅氏試劑，手工方法CHE膽堿酯酶（乙酰硫代膽堿）羅氏試劑，手工方法CER1銅藍蛋白（免疫透射）CRM 470CK肌酸激酶（IFCC, DGKC）IFCC 1991推薦的手工方法CK-MB 肌酸激酶同工酶 MB （改良IFCC）IFCC 1985推薦的改艮手，方法CREA肌酎（酶比色法 plus）ID-MSCREA肌酊（Jafe堿性苦味酸比色法）ID-MSCRPC-反應(yīng)蛋白（免疫透射）CRM 470CRPC-反應(yīng)蛋白（顆粒增強，免疫透射） Ferritin鐵蛋白（顆粒增強，免

18、疫透射）CRM 470NIBSC人脾果糖胺（NBT ）精選的檢測方法GGT©-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（Szasz）Persijn/v.d.Slik (1976), 手工方法GGT©-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（IFCC）IFCC 1983推薦的手工方法GLDH谷氨酸脫氫酶（DGKC , 1972）羅氏試劑，手工方法GLU葡萄糖（GOD-PAP, HK）ID-MS（1-acid glycoprotein（1-酸性糖蛋白（免疫透射）CRM 470HBDH羥丁酸脫氫酶（DGKC , 1972）羅氏試劑，手工方法HDL-CHOL 高密度脂蛋白膽固醇CDC方法葡聚糖硫酸鹽沉淀，Abell Kendal方法顯

19、色Haptoglobulin觸珠蛋白（免疫透射）CRM 470KappaK輕鏈（免疫透射）應(yīng)用 CRM 470 中的 IgG、IgM、 IgAIgG免疫球蛋白 G （免疫透射）CRM 470IgA免疫球蛋白 A （免疫透射）CRM 470IgM免疫球蛋白 M （免疫透射）CRM 470FE鐵（ferrozine ）Lactate乳酸（酶比色法）一級參考品（純物質(zhì)稱量） 一級參考品（純物質(zhì)稱量）Lambda L輕鏈（免疫透射）應(yīng)用 CRM 470 中的 IgG、IgM、 IgALDH L-P乳酸脫氫酶 L-P (IFCC)LDH L-P乳酸脫氫酶L-P(Gay/McComb/Bowers )IF

20、CC 1994 推薦的手工方法羅氏試劑，手工方法LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L (DGKC 1972 )羅氏試劑，手工方法LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L （SFBC）羅氏試劑，手工方法LDL-CHOL 低密度脂蛋白膽固醇CDC方法肝素/鎂沉淀（超離心），Abell Kendal方法顯色Lipase脂肪酶（比色法）羅氏試劑，手工方法Mg 鎂(xylidylblue )原子吸收Prealbumin前白蛋白（免疫透射）CRM 470Pi磷（鋁藍紫外比色法）一級參考品（NERL） （純物質(zhì)稱量）K鉀（離子選擇電極法ISE）火焰光度法Protein Total總蛋白（雙縮月尿）SRM 927Sali

21、cylate水楊酸（比色法）一級經(jīng)f品（純物質(zhì)稱量）Na鈉（離子選擇電極法ISE）火焰光度法Transferrin轉(zhuǎn)鐵蛋白（免疫透射）CRM 470TG甘油三酯（GPO-PAP）以一級參考品校準(zhǔn)的 ID-MSTG甘油三酯（去除甘油空白）SRM 909bUrea/BUN（月尿酶 UV）SRM 909bUric Acid 尿酸（酶比色法 plus）ID-MSUIBC不飽和鐵結(jié)合力一級參考品（純物質(zhì)稱量）轉(zhuǎn)換為鐵注：CRM =歐共體標(biāo)準(zhǔn)局的認(rèn)可參考品SRM =美國的標(biāo)準(zhǔn)參考品ID-MS=同位素稀釋-質(zhì)譜法CDC =美國疾病控制中心NIBSC =英國國立生物標(biāo)準(zhǔn)和對照研究院6 .方法學(xué)比較的標(biāo)準(zhǔn)化（對

22、公司一級校準(zhǔn)品定值的過程）這個方式在臨床化學(xué)中是最常用的。關(guān)鍵概念是：首先，我們要有一批具有參考結(jié)果X參考值（X參考方法的結(jié)果，即X的參考值）的樣品（即公司準(zhǔn)備的一級參考品血清）。這些樣品在將成為常規(guī)檢測系統(tǒng)的組合系統(tǒng)（指定的分析儀+試劑+操作程序+校準(zhǔn)品等）上的檢測，得到真實（至少通過轉(zhuǎn)換）的初步結(jié)果X檢測值。在第二步中，以方法學(xué)比較分析評價參考結(jié)果和初步檢測值結(jié)果的差異。又用方法學(xué)比較的回歸線來調(diào)整樣品在公司組合的 檢測系統(tǒng)上的初步結(jié)果數(shù)值，向大家公認(rèn)的參考系統(tǒng)（或方法）的參考結(jié)果數(shù)值靠攏。實際 上，是調(diào)整公司組合的檢測系統(tǒng)校準(zhǔn)品的定值，將它調(diào)整到：公司組合的檢測系統(tǒng)再次被該 校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)

23、品校準(zhǔn)后，對參考樣品的檢測結(jié)果盡可能和原有的相應(yīng)參考結(jié)果一致（見圖 1）。14通過方法學(xué)比較確定定值公司組合的檢測系 統(tǒng)和原始校準(zhǔn)品定 值（）方法學(xué)比較CiijhjlJ VS. CrM靶系統(tǒng)和最終校 準(zhǔn)品定值（）方法學(xué)比較rtjpl VS. Crf，1Ctar為具有參考值血清在公司組合 的檢測系統(tǒng)上的檢測結(jié)果。Cref為參考血清的參考值。圖1：由圖說明，方法學(xué)比較定值的程序。第一步，在公司組合檢測系統(tǒng)內(nèi)用初始校準(zhǔn)品定值校準(zhǔn)后, 對系列參考樣品檢測。第二步，將每個參考樣品的參考值和公司系統(tǒng)檢測的值進行方法學(xué)比較。第三步， 使用在第二步中經(jīng)方法學(xué)比較的回歸式調(diào)整得到的新校準(zhǔn)品的定值，對公司系統(tǒng)再次

24、校準(zhǔn)，再檢測參考樣 品。第四步，用校準(zhǔn)品新校準(zhǔn)值再次后，再對參考樣品人血清的檢測結(jié)果，和相應(yīng)的參考值再進行方法學(xué) 比較。若最后回歸的截距和斜率分別和0、1很接近，說明標(biāo)準(zhǔn)化成功地完成了（二）常規(guī)臨床化學(xué)的校準(zhǔn)品定值過程7 .參加定值的實驗室數(shù)量：在上世紀(jì)的80年代，德國診斷廠商協(xié)會（ German DiagnosticsManufacturers Association, VDGH ）依據(jù)大量研究，提出一個高效而可靠的定值測定模式?！癡DGH模式”要求每個校準(zhǔn)品每個項目的結(jié)果至少由6個實驗室做 5個天間樣品的測定。這個6X5=30個結(jié)果模式還要求同時進行“未知控制品”的檢測。只有負責(zé)靶值設(shè)定R

25、oche診斷公司，知道“未知控制品”的定值。所有被評估的參加實驗室必須能回收這個值。研究說明，確定定值要求白實驗室數(shù)量為6個是最佳安排；盡管使用了相同的檢測系統(tǒng)，但是，各實驗室同項目的精密度不一致；而且數(shù)據(jù)分布不呈正態(tài)分布。因此，確定靶值的做法是： 將所有實驗室結(jié)果合在一起，去除5%的極值后的中位數(shù)為定值。VDGH模式發(fā)表于1981年的 J. Clin. Chem. Clin. Biochemistry, Vol. 19, pp. 1137-1179 。它的基本原理仍然用于今天對 每個靶值設(shè)定中。歐洲的約30個實驗室中，總的有7個（至少6個）近日參與靶值設(shè)定工作。8 .公司一級參考品和一級校準(zhǔn)

26、品的標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)化的目的是確保患者血清在羅氏診斷分析系統(tǒng)上檢測得到的結(jié)果，和直接用參考方法檢測、或使用參考品為校準(zhǔn)品的檢測結(jié)果一致。標(biāo)準(zhǔn)化的各要素見圖2。圖2:圖中有三個要素，它們共同影響患者樣品的結(jié)果的可靠性所以，除非有一些例外，病人樣品總是使用于參考標(biāo)準(zhǔn)化中。依據(jù)方法學(xué)要求，始終使 用單一獻血員血清或混合血清。這些血清即為上述的公司一級參考品。這些人來源的樣品或者直接用參考方法檢測；或者在羅氏診斷分析系統(tǒng)上，經(jīng)參考品校 準(zhǔn)后檢測得到參考值。以后它們作為參考血清組（公司一級參考品）服務(wù)于公司一級校準(zhǔn)品 校準(zhǔn)值的定值。使用時，在需要標(biāo)準(zhǔn)化的分析儀上檢測，用具有初步校準(zhǔn)品值的通常公司一 級校準(zhǔn)品批

27、號進行校準(zhǔn)。然后，通過方法學(xué)比較或使用各個檢測平均變異等，為公司一級校 準(zhǔn)品設(shè)定最終值。公司一級校準(zhǔn)品的基體大致和各批市售校準(zhǔn)品（常規(guī)校準(zhǔn)品）相當(dāng)；另外，這些一級校 準(zhǔn)品儲存于-70C,并定期檢查穩(wěn)定性。在參考標(biāo)準(zhǔn)化中為了避免未處理過人的樣品穩(wěn)定性問題，單一獻血員樣品只使用一次。混合人血清的參考方法值最多被認(rèn)可6個月；需要重新用于參考標(biāo)準(zhǔn)化時，應(yīng)重確定。對公司一級參考血清定值的最高計量水平是國際認(rèn)可的參考方法（如：ID-MS）。若沒有參考方法可用，則選擇合適的正式官方參考品（如： CRM 470）。若這個也沒有，則可使 用一級標(biāo)準(zhǔn)的水標(biāo)準(zhǔn)液（如：乳酸鋰）為參考，或者某個確定的檢測方法。酶活力檢

28、測通常以酶催化活力為檢測量，依據(jù)規(guī)定的檢測方法，在指定的系統(tǒng)上指示底 物的轉(zhuǎn)換速率即為檢測量。IFCC方法是在正式的研究單位（他們是這些方法的發(fā)表者）進 行手工檢測的參考方法，以基本的活力計算公式得到酶活力。國家認(rèn)可的方法，是在實驗室 內(nèi)或各個實驗室間，使用系統(tǒng)試劑作為參考進行手工檢測的方法。幾乎所有的分析物，確定溯源性的程序歸納如下：用參考方法、或以參考品為校準(zhǔn)品，對人血清的檢測。公司一級校準(zhǔn)品以這些參考方法值標(biāo)準(zhǔn)化。市售校準(zhǔn)品和控制品則以公司一級批號校準(zhǔn)品（真實性控制）在羅氏診斷分析系統(tǒng)上作校準(zhǔn)。這樣保證了在這些系統(tǒng)上確定的患者結(jié)果值的溯源性。每個分析儀平臺（羅氏 /日立、COBAS IN

29、TEGRA ）對每個方法 各自都以相同方式，按照該參考標(biāo)準(zhǔn)化。溯源性途徑市售C.f.a.s.和真實性控制品羅氏分析儀方法vs.參考方法人混合血清分析儀C.f.a.s. 校準(zhǔn)品（公司一級校準(zhǔn)品）圖3:臨床化學(xué)的參考系統(tǒng)和產(chǎn)品校準(zhǔn)品、真實性控制品間的溯源性鏈（1）相對于參考方法的參考標(biāo)準(zhǔn)化測定參考方法值，如ID-MS參考方法，一定要在認(rèn)可的參考檢測實驗室，如ZRI（Reference Institute of Bioanalysis ）以參考方法作檢測，每次對使用的510個混合血清檢測，但是檢測費用非常昂貴。每個混合血清由約100個供血員血液組成。混合血清中的各個分析物濃度或活力，盡可能分布于整個

30、相應(yīng)的檢測范圍?；旌涎鍍?nèi)不可添加任何處理過的 材料，也不可用氯化鈉溶液稀釋。以確保在參考標(biāo)準(zhǔn)化中使用的樣品，和天然的患者血清沒 有任何差別。另外，使用天然的人材料，我們能對出現(xiàn)在校準(zhǔn)品的任何基體效應(yīng)進行補償。 程序匯總于圖 4。用公司一級參考品校準(zhǔn)圖4:本圖說明相對于參考方法的參考標(biāo)準(zhǔn)化的程序人混合血清分裝后冰凍于-70 C,在參考實驗室和7個外部實驗室（使用羅氏診斷分析儀系統(tǒng)）同時對混合血清平行檢測。在羅氏 /日立或COBAS INTEGRA系統(tǒng)上檢測的統(tǒng)計模式相當(dāng)于用于確定定值的模式。公司一級校準(zhǔn)品為具有初步校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品。在進行標(biāo)準(zhǔn)化 的分析儀上，每個樣品在被標(biāo)準(zhǔn)化系統(tǒng)上所有可接受檢測

31、結(jié)果的中位數(shù)，和該樣品的參考方 法值作比較。公司一級校準(zhǔn)品值的標(biāo)準(zhǔn)化通過方法學(xué)比較（線性回歸）實現(xiàn)。方法學(xué)比較回 歸線的截距若在允許限值內(nèi)，可以從斜率的偏離計算出新校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值。若截距超出了允許 限值，則方法學(xué)比較不能用于公司一級校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)化。有些項目，如 HDL ,參考標(biāo)準(zhǔn)化的整個過程按照合適的方案在確認(rèn)的實驗室內(nèi)實施。（2）相對于參考品的參考標(biāo)準(zhǔn)化若以參考品為參考標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)，通常檢測常規(guī)實驗室的各個供血員的新鮮血清。一般，在4個實驗室總共對 50例患者血清每份獨立地進行2歇檢測。這些血清中的分析物濃度盡可能分布于整個相應(yīng)的檢測范圍。嚴(yán)格地在分析儀的2個通道上進行檢測。一個通道用參

32、考品校準(zhǔn)，另一個用公司一級校準(zhǔn)品校準(zhǔn)；在任何情況下，都使用一個批號的試劑。一個未 知樣品和2個校準(zhǔn)品，和其他樣品一起在每批中進行檢測。檢測程序見圖5。用參考品或一級標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化參考品如：CRM 470圖5:本圖說明相對于參考品的參考標(biāo)準(zhǔn)化程序使用方法學(xué)比較（Passing,Bablok回歸統(tǒng)計）進行校準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)化；評價時通常需要200個樣品，但是最少為 50個。新批號公司一級校準(zhǔn)品值的計算方法基本上和用參考方法進行 標(biāo)準(zhǔn)化的方法一樣。另外，在使用公司一級校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，要設(shè)定對參考品回收的允許限值。9 .常規(guī)校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)化由于公司一級校準(zhǔn)品具有和常規(guī)校準(zhǔn)品相同的基體，使用公司一級校準(zhǔn)品的單獨校準(zhǔn)，

33、 得到的常規(guī)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值預(yù)期不會和使用人血清校準(zhǔn)得到的值有差異。校準(zhǔn)值的真實性和檢 測不確定度主要取決于統(tǒng)計模式和檢測性能的質(zhì)量。但是，為了確認(rèn)這個假設(shè)和認(rèn)可常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化的程序，對每個方法（分析儀平臺/校準(zhǔn)品/試劑組成）進行下列的外部實驗室的檢測。使用相同批號的試劑，對一些患者樣品（分析物 含量分布于相應(yīng)范圍），用公司一級校準(zhǔn)品和市售校準(zhǔn)品任意批號分別校準(zhǔn)后進行平行檢測。 為了肯定市售校準(zhǔn)品和公司一級校準(zhǔn)品在這個程序中的可比性，方法學(xué)比較的直線回歸的截 距必須接近 0,斜率和1.00間的差異在規(guī)定的限值內(nèi)。（1）常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化的趨勢控制品對校準(zhǔn)品定值依據(jù)公司一級校準(zhǔn)品（C.fas.masterlot

34、）。（在生產(chǎn)公司一級校準(zhǔn)品和市售校準(zhǔn)品中是一樣的。）公司一級校準(zhǔn)品的定值可以用具有整個生理相應(yīng)檢測范圍分析物的人 樣品，直接溯源至參考方法或參考品。公司一級校準(zhǔn)品的儲存溫度為-70C,可以使用月 23年。為了確認(rèn)，在46年后對一級校準(zhǔn)品重新用參考方法標(biāo)準(zhǔn)化。為了使參與標(biāo)準(zhǔn)化的實驗室質(zhì)量在連續(xù)的質(zhì)量控制下，要求每個實驗市室對每批市售C.f.a.s.校準(zhǔn)品的定值時，同時檢測2個不同漂移/趨勢控制品組成監(jiān)視系統(tǒng)。一個控制品是儲存于-70C的市售校準(zhǔn)品，以確保在儲存期間有最好的穩(wěn)定性。冰凍的（-70C）天然人血清為第二個漂移控制品。這個混合血清的來源和羅氏診斷產(chǎn)品過程是獨立的。兩個趨勢控制品至少可以使

35、用2年以上。如果要變換這些控制品，應(yīng)將近期的和新的控制品在一個試驗中作平行檢測。依據(jù)不確定度的計算，確定允許的可接受范圍。若有一個趨勢控制品超出了允許范圍，應(yīng)開始重-標(biāo)準(zhǔn)化。若重標(biāo)準(zhǔn)化的C.f.a.s.值超出了預(yù)定的限值，公司一級校準(zhǔn)品的定值應(yīng)以此調(diào)整。這些做法的指標(biāo)隨不同分析物而不同， 出現(xiàn)顯著差異-這些指標(biāo)和分析物有關(guān)-必須對所有市售校準(zhǔn)品和控制品進行完全的重設(shè)定 靶值。圖6：在市售C.f.a.s.校準(zhǔn)品產(chǎn)品校準(zhǔn)值設(shè)定時的趨勢控制品（2）對參與標(biāo)準(zhǔn)化和靶值設(shè)定的實驗室質(zhì)量要求羅氏診斷公司提供的校準(zhǔn)品和控制品的定值，都以臨床實驗室對患者臨床化學(xué)項目檢測 值進行校正確定的。所以，參與確定控制品

36、和校準(zhǔn)品定值的實驗室質(zhì)量是極其重要的。1）進行定值的實驗室的QC參與標(biāo)準(zhǔn)化的實驗室通常是獨立的外部實驗室，也檢測患者的樣品值，接受國家機構(gòu)的 質(zhì)量控制。在德國，例如，質(zhì)量控制包括內(nèi)部質(zhì)量控制，定期參加循環(huán)檢測，和參加德國醫(yī) 學(xué)委員會導(dǎo)則要求的室間質(zhì)量評估。參與定值的實驗室分布于歐洲和美國，都接受相似的質(zhì) 量控制。實驗室定期接受審核。靶值確定的質(zhì)量要求需要符合GMP導(dǎo)則，公司和靶值設(shè)定實驗室間按照標(biāo)準(zhǔn)要求簽訂合作協(xié)議。參與的實驗室被要求檢查設(shè)備、人員、檢測性能、保存記錄等是否符合文件要求。 各實驗室獲得的原始數(shù)據(jù)，須進行抽樣檢查，然后必須將數(shù)據(jù)送給羅氏診斷公司確認(rèn)。進行 每個靶值設(shè)定時，實驗室將

37、收到詳細說明，要求按此實施，例如：關(guān)于樣品穩(wěn)定性（通常較 正式說明書考慮的要短）和各個檢測的特點。定值的測定一定在恒定的質(zhì)量控制下。和患者樣品測定一樣，每個實驗室在檢測時應(yīng)同時檢測12個內(nèi)部質(zhì)量控制樣品。若有任何一個質(zhì)量控制樣品的回收超出了2標(biāo)準(zhǔn)差范圍，實驗室必須檢查原因，有必要重做。參與者也會收到未知樣品，要求像QC樣品那樣，每批檢測時進行被檢測。若這個未知樣品的回收超出2標(biāo)準(zhǔn)差，這個實驗室的所有檢測結(jié)果將被排除在評價以外。若結(jié)果沒有任何不正常，或在分析儀、試劑、或校準(zhǔn)品等有任何問題，參 與者應(yīng)寫出報告和簽署。必須消除檢測操作中發(fā)生的誤差，如樣品混勻等。2）統(tǒng)計設(shè)計、試劑、預(yù)處理、重復(fù)靶值設(shè)定的統(tǒng)計模式依據(jù)德國診斷產(chǎn)品廠商協(xié)會VDGH （ German DiagnosticsManufactures Association VDGH ）的模式，作下列修改。和7個實驗室簽訂協(xié)議，確定校準(zhǔn)值（常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化）和定值。每個實驗室對每個臨床化學(xué)項目（如：葡萄糖、膽固醇）進行3次