溯源性和標準化概要

1、溯源性和標準化一、基本概念 （一）溯源性定義：通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準，通常是與國家標準或國際標準聯(lián)系起來的特性。VIM: 1993,定義6.10臨床檢驗的目的：對患者新鮮標本檢驗報告可靠的結(jié)果。臨床檢驗的傳統(tǒng)：對收集的患者標本只做一次檢驗，就發(fā)出報告。因此，發(fā)出報告的可靠性必須體現(xiàn)兩個基本要求：精密度：重復性好；準確度：和參考方法具有可比性。在臨床檢驗中，公認：在參考實驗室內(nèi)，由具有認可資格的操作人員使用參考方法、或以參 考品為標準，對新鮮標本進行的檢測結(jié)果是參考值結(jié)果。可是，在參考實驗室內(nèi)的所有參考 方法是手工方法；或使用參考品

2、校準的方法，在實現(xiàn)參考值的傳遞上非常煩瑣。在日常檢測 中，無法使用這樣的參考方法或參考品進行大量病人標本的檢測，出報告。因此，現(xiàn)實問題 是：是否可以讓常規(guī)的檢測系統(tǒng)，對病人標本的檢測，在計量單位一致的前提下，得到和參 考系列相同的檢測量值。這就是通過一條不間斷的比較鏈，使檢測結(jié)果或檢測標準的值能夠 與規(guī)定的參考標準，通常是與國家標準或國際標準聯(lián)系起來。為此，生產(chǎn)廠商必須對完成檢 測涉及的檢測系統(tǒng)各組分（儀器、試劑、校準品、和操作程序）進行嚴格的標準化程序，實 現(xiàn)溯源性。（二）標準化1972年，由ISO出版，T. R. B. Sanders主編的標準化的目的與原理一書對標準 化下的定義是：“標準

3、化是為了所有有關(guān)方面的利益，特別是為了促進最佳的、全面的經(jīng)濟 并適當考慮到產(chǎn)品使用條件與安全要求，在所有有關(guān)方面的協(xié)作下，進行有秩序的特定活動 所制定并實施各項規(guī)則的過程?！笨梢院唵卫斫鉃椋簽榱藢崿F(xiàn)臨床檢驗結(jié)果的溯源性，檢測系統(tǒng)的生產(chǎn)廠商的所有努力的 過程為標準化。（三）理解檢驗的特點1 .檢驗的檢測對象是病人標本，而且一定是新鮮的標本。實驗室使臨床和病人滿意的 是檢驗結(jié)果的可靠性。實現(xiàn)結(jié)果可靠性的質(zhì)量管理有許多內(nèi)容。在保證收集和處理的標本質(zhì) 量、在檢驗后不存在處理檢測數(shù)據(jù)和發(fā)出報告的差錯前提下，獲得可靠結(jié)果的主要階段是分 析過程的質(zhì)量。2 .檢驗的習慣是對每份病人標本只做一次檢測，就發(fā)出報告

4、；而且，每個標本內(nèi)究竟 內(nèi)含多少分析物無法知道。因此，度量檢驗的分析質(zhì)量不能以工業(yè)上的多次采樣、多次檢測 或測量、取均值和預定標準比較等方式來觀察。3 .病人結(jié)果可靠性的含義是準確度。國際上準確度的定義為：檢測結(jié)果和被檢測物/分析物真值間的一致性。（VIM93-3.5 ）。注：a）作為結(jié)果，在真值和該值間的差異，通常表 示為相同的計量單位；此時，表示差異的更確切的詞為“不準確度”。b）可以使用“可接受的參考值”替代“真值”。（ISO3534-1,3.11 ） c）特別是對每個標本只作一次測定時，差異 不僅包括分析過程的不準確度，也包括了分析過程的不精密度。4 .檢驗質(zhì)量的首要問題是分析過程（即

5、檢測的）精密度。定義為：各個重復檢測值間 的一致性。度量精密度的指標是不精密度。也即：臨床要求結(jié)果的重復性好。5 .自動化在臨床檢驗的應用，極大地提高了檢驗的效率和質(zhì)量。而且，在多年的實踐 中，認識到：保持檢驗必需的自動化儀器、試劑、校準品、和操作程序的固定組合，是實現(xiàn)溯源性的前提。否則，一事無成。因此，要使檢驗結(jié)果的量值和參考系統(tǒng)結(jié)果一致，也就是 對涉及檢驗的檢測系統(tǒng)各組分的標準化。（四）、如何理解校準品1 .衡量一個檢測系統(tǒng)（檢驗方法）的基本分析性能有4點：不精密度、不準確度、病人結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度。使用了自動化分析儀，日常檢驗的精密度得到了顯著的提 高；在優(yōu)良試劑盒的配合下，病人

6、結(jié)果的可報告范圍也可以滿足臨床要求；大多常規(guī)檢驗項 目沒有對極低濃度的臨床要求。這樣，結(jié)果的可靠性的關(guān)鍵是準確度，即對校準品值的調(diào)節(jié)。 因此，實現(xiàn)新鮮病人標本結(jié)果的溯源性，成為使校準品值實現(xiàn)溯源性。2 .認識標準品傳統(tǒng)的臨床檢驗，要使檢驗結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個標準品（Standard）。以臨床化學檢驗的比色測定為例，常作三個檢測：空白、標準、測定。用空白液調(diào)整吸光度為零， 讀出測定比色液和標準比色液的吸光度，分別為As和 Au;已知標準液濃度為Cs。在一定范圍內(nèi)，某分析物濃度和吸光度呈良好比例關(guān)系，則樣品內(nèi)某分析物濃度Cu為：一般而言，檢驗工作使用的標準品屬應用標準。配制或供應這類標準品

7、的實驗室或廠商 具有符合質(zhì)量標準的純品。稱取一定量的純品，然后將其溶解，在容量瓶內(nèi)用溶劑稀釋至容 積刻度，混勻，標準液配制完成。由稱量法獲得的稱量值和容量法配制的容積，計算出該標 準品濃度。檢定部門抽樣測定，結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)屬合格。即使測定檢定結(jié)果在范圍的上、 下限，也不能將實測值作為標準值。因為測定值的可靠性取決于檢定方法，一般的分析方法 的可靠性不如分析化學公認的稱量法和容量法。所以標準品的定值由稱量和容積計算確定。 檢定不合格即報廢，決不可將實測值替代修正。3 .校準品和定值為了克服因純標準液和病人樣品間的基體差異，對檢驗結(jié)果的嚴重誤差，20年前開始引用具有與病人樣品基體相似的校準品替代

8、標準品，用于日常工作?？墒?，盡管校準品的主 要來源是人的血清，為了使校準品內(nèi)的一些分析物水平達到某個程度，而且形成穩(wěn)定的產(chǎn)品， 所有的校準品、控制品、室間調(diào)查品等都是處理過的血清。和原來的天然血清間又產(chǎn)生了新 的基體差異。（1）校準值隨方法而異校準品中被檢分析物的含量無法由稱量法和容量法確定，只能倚賴于分析方法。校準品 的校準值必須取決于分析方法或檢測系列。（2）新鮮病人標本是最佳校準品由于所有校準品都是處理過的樣品，和新鮮病人標本有著基體差異。若使用公認的參考 方法去標化測定校準品，測定程序是嚴密的，測定值是可靠的。但使用該測定值去校準常規(guī) 的檢測系列時，校準品中被檢分析物參與反應時的表現(xiàn)明

9、顯不同于新鮮病人標本，不能將參 考方法系列的準確度通過校準品傳遞給病人標本。須明確的，所有用于檢驗中的檢測方法、 儀器、試劑等都是用來檢測病人新鮮標本的，不是用來檢測校準品這樣的處理過樣品。如果 先用公認的參考方法檢測病人標本，再以具有參考值的病人標本去校準某檢測系列（包括方 法、試劑、儀器），此時該檢測系列再檢測其他新鮮病人標本時，這些病人標本結(jié)果的溯源 性可上溯至公認的參考方法。也即用新鮮病人標本是校準檢測系列的最佳校準品。用這種方 式校準，能使同一個檢測系列在不同實驗室檢測新鮮病人標本時，檢驗結(jié)果在實驗室間具可 比性。一些大公司正是按照這樣的認識為校準品定值。原則上，以具有參考值的新鮮病

10、人標本去校準某檢測系列（包括方法、試劑、儀器） 后，檢測系列再去檢測候選的校準品（處理過），得到的檢測值為初始校準值。以初始校準 值反過來再校準組合的檢測系列后，該檢測系列又去檢測病人的新鮮標本。觀察病人標本的 檢測值是否和參考方法的測定值具良好的可比性。實踐說明，只有不斷地調(diào)整校準值，直至 用該校準值校準指定的檢測系列（加上具有校準值的校準品，即組合成檢測系統(tǒng)）后，檢測 系統(tǒng)再檢測病人標本，得到的測定值和病人標本的參考方法測定值具有滿意的可比性，此時， 校準品的校準值可以確認。二、公司標準化的大致內(nèi)容和步驟（一） 實現(xiàn)溯源性的必備條件1 .建立“公司一級參考品”：準備多個混和血清，經(jīng)離心、過

11、濾等處理后，各個混和血 清分裝成小包裝。-70C保存。試驗說明，這樣保存的血清復融后具有的性能和新鮮血清相 似。所以，這些血清組是公司產(chǎn)品標準化的“公司一級參考品”。由參考實驗室使用參考方 法，或采用參考品對這些血清定值，使血清具有參考值。2 .設立公司內(nèi)部使用的“一級校準品”：由于參考系統(tǒng)或參考材料的使用常常是很有限的，因此，必須設立內(nèi)部使用的參考系統(tǒng)（或材料）復制品一即設立公司一級校準品（MasterCalibrator）。對公司一級校準品的定值方案見以下內(nèi)容。除了有公司一級校準品外，還需要 建立公司生產(chǎn)用的應用校準品（Working Calibrator ）。日常供應的校準品為商品校準品

12、（Business Calibrator）。所有各種校準品的原料要求和加工制備工藝一樣。只是在定值方案上有區(qū)別。大致上，定值按照下列兩個步驟的方法：（i）按照參考標準化方式對公司一級校準品定值，（ii）常規(guī)校準品（routine calibrator）按照常規(guī)標準化方式定值。3 .自始至終以方法學比較實驗為確定、驗證、或傳遞定值的手段。因此，除了上述的 混和血清組外，隨時還需要實際的新鮮病人標本，供方法學比較用。4 .進行定值的實驗室：按照德國法律規(guī)定，為Roche診斷公司控制品和校準品確定定值的實驗室，遵從法律上受委托的質(zhì)量導則，所以完全符合專業(yè)實驗室的規(guī)定。選擇合適的 實驗室是定值質(zhì)量的先

13、決條件。參加定值的實驗室要求見表1。為了確保實驗室獨立完成工作，Roche公司很少參與實驗室為進行靶值設定的實施，并且確保所有數(shù)據(jù)的及時返回。對于公司“一級參考血清”的參考值定值，由公司選擇國際上知名的參考實驗室委托 定值。這些參考實驗室在國際上的數(shù)量很少，每個實驗室只是對某一個或幾個項目接受定值 委托，費用昂貴。但是，這是公司校準品定值的依據(jù)。表1外部實驗室參與靶值設定的質(zhì)量要求組織機構(gòu)有明確的職責，有訓練有素的檢驗人員 有明確的操作程序檢測儀器有具體說明和注意保養(yǎng)加樣系統(tǒng)加樣器的校正（分析天平） 有控制圖樣品處理對凍干樣品的復溶有具體說明，對深低溫冰凍樣品的凍融有具體說明內(nèi)部QC系統(tǒng)有QC

14、圖室間QC系統(tǒng)參加室間質(zhì)量評估，有相應的反饋力殺有合適的計算機系統(tǒng)，用于方案儲存有合適的儲存條件，對儲存溫度有記錄和檢查實驗室和Roche診斷公司的聯(lián)系有反饋，實驗室主任參加會議，互相聯(lián)系5 .確定公司產(chǎn)品對病人標本檢測結(jié)果可溯源的參考方法或參考品目前，公司的部分產(chǎn)品指定以表2中所列的參考方法或參考品為溯源目標。表2羅氏公司校準品的溯源性項目名稱今方法或經(jīng)f品ACP酸性磷酸酶（磷酸酚儆）羅氏試劑，子，萬法Alb白蛋白（plus）CRM 470Alb白蛋白（BCP）CRM 470-1-抗胰蛋白酶（免疫透射）ALP堿性磷酸酶（IFCC）CRM 470IFCC 1983推薦的手工方法ALP堿性磷酸酶

15、（DGKC 1972 ）羅氏試劑，手工方法ALP堿性磷酸酶（SFBC/AMP ）羅氏試劑，手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（IFCC加/或不加PYP）IFCC 1985推薦的手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（DGKC ）羅氏試劑，手工方法Amy淀粉酶（IFCC）依據(jù)IFCC 1998推薦羅氏試劑，手工方法P Amy胰淀粉酶（液體）羅氏試劑，手工方法Apo-A1 載脂蛋白 A1 （免疫透射）WHO ,國際參考品SP1-01ApoB載脂蛋白 B （免疫透射）WHO ,國際參考品 SP3-07ASLO抗鏈球菌溶血素 O （顆粒增強，免疫透射）內(nèi)部標準AST/ASAT 天門冬氨酸氨

16、基轉(zhuǎn)移酶（IFCC加/或不加PYP）IFCC 1985推薦的手工方法AST/ASAT 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（DGKC）羅氏試劑，手工方法碳酸氫鹽新標準（純物質(zhì)稱量）TBIL總膽紅素（DPD）Doumas推存方法TBIL總膽紅素(Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn 法)Doumas>TT 法DBIL直接膽紅素(Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn 法)羅氏試劑，手工方法C 3-c補體 C3-c （免疫透射）CRM 470C 4補體C 4 （免疫透射）Ca鈣（鄰甲酚酗:絡合酮o-CPC）CRM 470原子吸收Cl氯（離子選擇電極法ISE）電量

17、滴定法CHOL 膽固醇（CHOD-PAP ）a) ID-MSb) Abell KendallCHE膽堿酯酶（丁酰硫代膽堿）羅氏試劑，手工方法CHE膽堿酯酶（乙酰硫代膽堿）羅氏試劑，手工方法CER1銅藍蛋白（免疫透射）CRM 470CK肌酸激酶（IFCC, DGKC）IFCC 1991推薦的手工方法CK-MB 肌酸激酶同工酶 MB （改良IFCC）IFCC 1985推薦的改艮手，方法CREA肌酎（酶比色法 plus）ID-MSCREA肌酊（Jafe堿性苦味酸比色法）ID-MSCRPC-反應蛋白（免疫透射）CRM 470CRPC-反應蛋白（顆粒增強，免疫透射） Ferritin鐵蛋白（顆粒增強，免

18、疫透射）CRM 470NIBSC人脾果糖胺（NBT ）精選的檢測方法GGT©-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（Szasz）Persijn/v.d.Slik (1976), 手工方法GGT©-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（IFCC）IFCC 1983推薦的手工方法GLDH谷氨酸脫氫酶（DGKC , 1972）羅氏試劑，手工方法GLU葡萄糖（GOD-PAP, HK）ID-MS（1-acid glycoprotein（1-酸性糖蛋白（免疫透射）CRM 470HBDH羥丁酸脫氫酶（DGKC , 1972）羅氏試劑，手工方法HDL-CHOL 高密度脂蛋白膽固醇CDC方法葡聚糖硫酸鹽沉淀，Abell Kendal方法顯

19、色Haptoglobulin觸珠蛋白（免疫透射）CRM 470KappaK輕鏈（免疫透射）應用 CRM 470 中的 IgG、IgM、 IgAIgG免疫球蛋白 G （免疫透射）CRM 470IgA免疫球蛋白 A （免疫透射）CRM 470IgM免疫球蛋白 M （免疫透射）CRM 470FE鐵（ferrozine ）Lactate乳酸（酶比色法）一級參考品（純物質(zhì)稱量） 一級參考品（純物質(zhì)稱量）Lambda L輕鏈（免疫透射）應用 CRM 470 中的 IgG、IgM、 IgALDH L-P乳酸脫氫酶 L-P (IFCC)LDH L-P乳酸脫氫酶L-P(Gay/McComb/Bowers )IF

20、CC 1994 推薦的手工方法羅氏試劑，手工方法LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L (DGKC 1972 )羅氏試劑，手工方法LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L （SFBC）羅氏試劑，手工方法LDL-CHOL 低密度脂蛋白膽固醇CDC方法肝素/鎂沉淀（超離心），Abell Kendal方法顯色Lipase脂肪酶（比色法）羅氏試劑，手工方法Mg 鎂(xylidylblue )原子吸收Prealbumin前白蛋白（免疫透射）CRM 470Pi磷（鋁藍紫外比色法）一級參考品（NERL） （純物質(zhì)稱量）K鉀（離子選擇電極法ISE）火焰光度法Protein Total總蛋白（雙縮月尿）SRM 927Sali

21、cylate水楊酸（比色法）一級經(jīng)f品（純物質(zhì)稱量）Na鈉（離子選擇電極法ISE）火焰光度法Transferrin轉(zhuǎn)鐵蛋白（免疫透射）CRM 470TG甘油三酯（GPO-PAP）以一級參考品校準的 ID-MSTG甘油三酯（去除甘油空白）SRM 909bUrea/BUN（月尿酶 UV）SRM 909bUric Acid 尿酸（酶比色法 plus）ID-MSUIBC不飽和鐵結(jié)合力一級參考品（純物質(zhì)稱量）轉(zhuǎn)換為鐵注：CRM =歐共體標準局的認可參考品SRM =美國的標準參考品ID-MS=同位素稀釋-質(zhì)譜法CDC =美國疾病控制中心NIBSC =英國國立生物標準和對照研究院6 .方法學比較的標準化（對

22、公司一級校準品定值的過程）這個方式在臨床化學中是最常用的。關(guān)鍵概念是：首先，我們要有一批具有參考結(jié)果X參考值（X參考方法的結(jié)果，即X的參考值）的樣品（即公司準備的一級參考品血清）。這些樣品在將成為常規(guī)檢測系統(tǒng)的組合系統(tǒng)（指定的分析儀+試劑+操作程序+校準品等）上的檢測，得到真實（至少通過轉(zhuǎn)換）的初步結(jié)果X檢測值。在第二步中，以方法學比較分析評價參考結(jié)果和初步檢測值結(jié)果的差異。又用方法學比較的回歸線來調(diào)整樣品在公司組合的 檢測系統(tǒng)上的初步結(jié)果數(shù)值，向大家公認的參考系統(tǒng)（或方法）的參考結(jié)果數(shù)值靠攏。實際 上，是調(diào)整公司組合的檢測系統(tǒng)校準品的定值，將它調(diào)整到：公司組合的檢測系統(tǒng)再次被該 校準品的校準

23、品校準后，對參考樣品的檢測結(jié)果盡可能和原有的相應參考結(jié)果一致（見圖 1）。14通過方法學比較確定定值公司組合的檢測系 統(tǒng)和原始校準品定 值（）方法學比較CiijhjlJ VS. CrM靶系統(tǒng)和最終校 準品定值（）方法學比較rtjpl VS. Crf，1Ctar為具有參考值血清在公司組合 的檢測系統(tǒng)上的檢測結(jié)果。Cref為參考血清的參考值。圖1：由圖說明，方法學比較定值的程序。第一步，在公司組合檢測系統(tǒng)內(nèi)用初始校準品定值校準后, 對系列參考樣品檢測。第二步，將每個參考樣品的參考值和公司系統(tǒng)檢測的值進行方法學比較。第三步， 使用在第二步中經(jīng)方法學比較的回歸式調(diào)整得到的新校準品的定值，對公司系統(tǒng)再次

24、校準，再檢測參考樣 品。第四步，用校準品新校準值再次后，再對參考樣品人血清的檢測結(jié)果，和相應的參考值再進行方法學 比較。若最后回歸的截距和斜率分別和0、1很接近，說明標準化成功地完成了（二）常規(guī)臨床化學的校準品定值過程7 .參加定值的實驗室數(shù)量：在上世紀的80年代，德國診斷廠商協(xié)會（ German DiagnosticsManufacturers Association, VDGH ）依據(jù)大量研究，提出一個高效而可靠的定值測定模式。“VDGH模式”要求每個校準品每個項目的結(jié)果至少由6個實驗室做 5個天間樣品的測定。這個6X5=30個結(jié)果模式還要求同時進行“未知控制品”的檢測。只有負責靶值設定R

25、oche診斷公司，知道“未知控制品”的定值。所有被評估的參加實驗室必須能回收這個值。研究說明，確定定值要求白實驗室數(shù)量為6個是最佳安排；盡管使用了相同的檢測系統(tǒng)，但是，各實驗室同項目的精密度不一致；而且數(shù)據(jù)分布不呈正態(tài)分布。因此，確定靶值的做法是： 將所有實驗室結(jié)果合在一起，去除5%的極值后的中位數(shù)為定值。VDGH模式發(fā)表于1981年的 J. Clin. Chem. Clin. Biochemistry, Vol. 19, pp. 1137-1179 。它的基本原理仍然用于今天對 每個靶值設定中。歐洲的約30個實驗室中，總的有7個（至少6個）近日參與靶值設定工作。8 .公司一級參考品和一級校準

26、品的標準化標準化的目的是確?；颊哐逶诹_氏診斷分析系統(tǒng)上檢測得到的結(jié)果，和直接用參考方法檢測、或使用參考品為校準品的檢測結(jié)果一致。標準化的各要素見圖2。圖2:圖中有三個要素，它們共同影響患者樣品的結(jié)果的可靠性所以，除非有一些例外，病人樣品總是使用于參考標準化中。依據(jù)方法學要求，始終使 用單一獻血員血清或混合血清。這些血清即為上述的公司一級參考品。這些人來源的樣品或者直接用參考方法檢測；或者在羅氏診斷分析系統(tǒng)上，經(jīng)參考品校 準后檢測得到參考值。以后它們作為參考血清組（公司一級參考品）服務于公司一級校準品 校準值的定值。使用時，在需要標準化的分析儀上檢測，用具有初步校準品值的通常公司一 級校準品批

27、號進行校準。然后，通過方法學比較或使用各個檢測平均變異等，為公司一級校 準品設定最終值。公司一級校準品的基體大致和各批市售校準品（常規(guī)校準品）相當；另外，這些一級校 準品儲存于-70C,并定期檢查穩(wěn)定性。在參考標準化中為了避免未處理過人的樣品穩(wěn)定性問題，單一獻血員樣品只使用一次?；旌先搜宓膮⒖挤椒ㄖ底疃啾徽J可6個月；需要重新用于參考標準化時，應重確定。對公司一級參考血清定值的最高計量水平是國際認可的參考方法（如：ID-MS）。若沒有參考方法可用，則選擇合適的正式官方參考品（如： CRM 470）。若這個也沒有，則可使 用一級標準的水標準液（如：乳酸鋰）為參考，或者某個確定的檢測方法。酶活力檢

28、測通常以酶催化活力為檢測量，依據(jù)規(guī)定的檢測方法，在指定的系統(tǒng)上指示底 物的轉(zhuǎn)換速率即為檢測量。IFCC方法是在正式的研究單位（他們是這些方法的發(fā)表者）進 行手工檢測的參考方法，以基本的活力計算公式得到酶活力。國家認可的方法，是在實驗室 內(nèi)或各個實驗室間，使用系統(tǒng)試劑作為參考進行手工檢測的方法。幾乎所有的分析物，確定溯源性的程序歸納如下：用參考方法、或以參考品為校準品，對人血清的檢測。公司一級校準品以這些參考方法值標準化。市售校準品和控制品則以公司一級批號校準品（真實性控制）在羅氏診斷分析系統(tǒng)上作校準。這樣保證了在這些系統(tǒng)上確定的患者結(jié)果值的溯源性。每個分析儀平臺（羅氏 /日立、COBAS IN

29、TEGRA ）對每個方法 各自都以相同方式，按照該參考標準化。溯源性途徑市售C.f.a.s.和真實性控制品羅氏分析儀方法vs.參考方法人混合血清分析儀C.f.a.s. 校準品（公司一級校準品）圖3:臨床化學的參考系統(tǒng)和產(chǎn)品校準品、真實性控制品間的溯源性鏈（1）相對于參考方法的參考標準化測定參考方法值，如ID-MS參考方法，一定要在認可的參考檢測實驗室，如ZRI（Reference Institute of Bioanalysis ）以參考方法作檢測，每次對使用的510個混合血清檢測，但是檢測費用非常昂貴。每個混合血清由約100個供血員血液組成?；旌涎逯械母鱾€分析物濃度或活力，盡可能分布于整個

30、相應的檢測范圍。混合血清內(nèi)不可添加任何處理過的 材料，也不可用氯化鈉溶液稀釋。以確保在參考標準化中使用的樣品，和天然的患者血清沒 有任何差別。另外，使用天然的人材料，我們能對出現(xiàn)在校準品的任何基體效應進行補償。 程序匯總于圖 4。用公司一級參考品校準圖4:本圖說明相對于參考方法的參考標準化的程序人混合血清分裝后冰凍于-70 C,在參考實驗室和7個外部實驗室（使用羅氏診斷分析儀系統(tǒng)）同時對混合血清平行檢測。在羅氏 /日立或COBAS INTEGRA系統(tǒng)上檢測的統(tǒng)計模式相當于用于確定定值的模式。公司一級校準品為具有初步校準值的校準品。在進行標準化 的分析儀上，每個樣品在被標準化系統(tǒng)上所有可接受檢測

31、結(jié)果的中位數(shù)，和該樣品的參考方 法值作比較。公司一級校準品值的標準化通過方法學比較（線性回歸）實現(xiàn)。方法學比較回 歸線的截距若在允許限值內(nèi)，可以從斜率的偏離計算出新校準品校準值。若截距超出了允許 限值，則方法學比較不能用于公司一級校準品校準值的標準化。有些項目，如 HDL ,參考標準化的整個過程按照合適的方案在確認的實驗室內(nèi)實施。（2）相對于參考品的參考標準化若以參考品為參考標準化的基礎，通常檢測常規(guī)實驗室的各個供血員的新鮮血清。一般，在4個實驗室總共對 50例患者血清每份獨立地進行2歇檢測。這些血清中的分析物濃度盡可能分布于整個相應的檢測范圍。嚴格地在分析儀的2個通道上進行檢測。一個通道用參

32、考品校準，另一個用公司一級校準品校準；在任何情況下，都使用一個批號的試劑。一個未 知樣品和2個校準品，和其他樣品一起在每批中進行檢測。檢測程序見圖5。用參考品或一級標準的標準化參考品如：CRM 470圖5:本圖說明相對于參考品的參考標準化程序使用方法學比較（Passing,Bablok回歸統(tǒng)計）進行校準值的標準化；評價時通常需要200個樣品，但是最少為 50個。新批號公司一級校準品值的計算方法基本上和用參考方法進行 標準化的方法一樣。另外，在使用公司一級校準品校準后，要設定對參考品回收的允許限值。9 .常規(guī)校準品標準化由于公司一級校準品具有和常規(guī)校準品相同的基體，使用公司一級校準品的單獨校準，

33、 得到的常規(guī)校準品校準值預期不會和使用人血清校準得到的值有差異。校準值的真實性和檢 測不確定度主要取決于統(tǒng)計模式和檢測性能的質(zhì)量。但是，為了確認這個假設和認可常規(guī)標準化的程序，對每個方法（分析儀平臺/校準品/試劑組成）進行下列的外部實驗室的檢測。使用相同批號的試劑，對一些患者樣品（分析物 含量分布于相應范圍），用公司一級校準品和市售校準品任意批號分別校準后進行平行檢測。 為了肯定市售校準品和公司一級校準品在這個程序中的可比性，方法學比較的直線回歸的截 距必須接近 0,斜率和1.00間的差異在規(guī)定的限值內(nèi)。（1）常規(guī)標準化的趨勢控制品對校準品定值依據(jù)公司一級校準品（C.fas.masterlot

34、）。（在生產(chǎn)公司一級校準品和市售校準品中是一樣的。）公司一級校準品的定值可以用具有整個生理相應檢測范圍分析物的人 樣品，直接溯源至參考方法或參考品。公司一級校準品的儲存溫度為-70C,可以使用月 23年。為了確認，在46年后對一級校準品重新用參考方法標準化。為了使參與標準化的實驗室質(zhì)量在連續(xù)的質(zhì)量控制下，要求每個實驗市室對每批市售C.f.a.s.校準品的定值時，同時檢測2個不同漂移/趨勢控制品組成監(jiān)視系統(tǒng)。一個控制品是儲存于-70C的市售校準品，以確保在儲存期間有最好的穩(wěn)定性。冰凍的（-70C）天然人血清為第二個漂移控制品。這個混合血清的來源和羅氏診斷產(chǎn)品過程是獨立的。兩個趨勢控制品至少可以使

35、用2年以上。如果要變換這些控制品，應將近期的和新的控制品在一個試驗中作平行檢測。依據(jù)不確定度的計算，確定允許的可接受范圍。若有一個趨勢控制品超出了允許范圍，應開始重-標準化。若重標準化的C.f.a.s.值超出了預定的限值，公司一級校準品的定值應以此調(diào)整。這些做法的指標隨不同分析物而不同， 出現(xiàn)顯著差異-這些指標和分析物有關(guān)-必須對所有市售校準品和控制品進行完全的重設定 靶值。圖6：在市售C.f.a.s.校準品產(chǎn)品校準值設定時的趨勢控制品（2）對參與標準化和靶值設定的實驗室質(zhì)量要求羅氏診斷公司提供的校準品和控制品的定值，都以臨床實驗室對患者臨床化學項目檢測 值進行校正確定的。所以，參與確定控制品

36、和校準品定值的實驗室質(zhì)量是極其重要的。1）進行定值的實驗室的QC參與標準化的實驗室通常是獨立的外部實驗室，也檢測患者的樣品值，接受國家機構(gòu)的 質(zhì)量控制。在德國，例如，質(zhì)量控制包括內(nèi)部質(zhì)量控制，定期參加循環(huán)檢測，和參加德國醫(yī) 學委員會導則要求的室間質(zhì)量評估。參與定值的實驗室分布于歐洲和美國，都接受相似的質(zhì) 量控制。實驗室定期接受審核。靶值確定的質(zhì)量要求需要符合GMP導則，公司和靶值設定實驗室間按照標準要求簽訂合作協(xié)議。參與的實驗室被要求檢查設備、人員、檢測性能、保存記錄等是否符合文件要求。 各實驗室獲得的原始數(shù)據(jù)，須進行抽樣檢查，然后必須將數(shù)據(jù)送給羅氏診斷公司確認。進行 每個靶值設定時，實驗室將

37、收到詳細說明，要求按此實施，例如：關(guān)于樣品穩(wěn)定性（通常較 正式說明書考慮的要短）和各個檢測的特點。定值的測定一定在恒定的質(zhì)量控制下。和患者樣品測定一樣，每個實驗室在檢測時應同時檢測12個內(nèi)部質(zhì)量控制樣品。若有任何一個質(zhì)量控制樣品的回收超出了2標準差范圍，實驗室必須檢查原因，有必要重做。參與者也會收到未知樣品，要求像QC樣品那樣，每批檢測時進行被檢測。若這個未知樣品的回收超出2標準差，這個實驗室的所有檢測結(jié)果將被排除在評價以外。若結(jié)果沒有任何不正常，或在分析儀、試劑、或校準品等有任何問題，參 與者應寫出報告和簽署。必須消除檢測操作中發(fā)生的誤差，如樣品混勻等。2）統(tǒng)計設計、試劑、預處理、重復靶值設定的統(tǒng)計模式依據(jù)德國診斷產(chǎn)品廠商協(xié)會VDGH （ German DiagnosticsManufactures Association VDGH ）的模式，作下列修改。和7個實驗室簽訂協(xié)議，確定校準值（常規(guī)標準化）和定值。每個實驗室對每個臨床化學項目（如：葡萄糖、膽固醇）進行3次