D-D二聚體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、XXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科D-二聚體測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)制定日期 文件版次 正文頁(yè)數(shù) 附件份數(shù)6第一版D- 二聚體測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書發(fā)行章修訂日期訂記錄批準(zhǔn)版次第一版頁(yè)次全部修訂內(nèi)容審核編制制定部門檢驗(yàn)科文件持有部門：檢驗(yàn)科臨檢室D- 二聚體測(cè)定（分析儀器法）1 實(shí)驗(yàn)原理 ：免疫比濁法當(dāng)混合標(biāo)本中含有 D-二聚體時(shí)，聚苯乙烯顆粒包被到單克隆抗體（DD5 ），與交聯(lián)纖維蛋白降解產(chǎn)物（ D-二聚體）的交聯(lián)區(qū)域結(jié)合。交聯(lián)區(qū)域呈立體結(jié)構(gòu)，有兩個(gè)單克隆抗體表位?？傊粋€(gè)單 克隆抗體就能觸發(fā)凝集反應(yīng)，隨后檢測(cè)濁度的增加。儀器在 575nm 處通過對(duì)濁度改變的監(jiān)測(cè)，將 吸光度轉(zhuǎn)換成濃度值，由此獲得樣本中D- 二聚

2、體的量。2 標(biāo)本采集2.1 早晨空腹采血 （ 空腹 12 小時(shí)左右 ）, 靜脈采血。2.2 3.8 （w/v） 枸椽酸鈉 0.2ml+ 靜脈血 1.8ml, 混勻。3 標(biāo)本存放1 小時(shí)內(nèi) （3000r/min × 15min） 分離血漿 , 室溫放置不超過 2 小時(shí) ,2 8保存不超過 4 小時(shí)，長(zhǎng)時(shí) 間保存需在冰凍條件下， （ -70 不超過 6 個(gè)月） , 只能凍融 1 次，在 37 迅速解凍，以減低凝血 因子的消耗，解凍后立即測(cè)試。4 標(biāo)本運(yùn)輸： 低溫條件下運(yùn)輸。5 標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn) : 抗凝劑不符合 , 采血量不準(zhǔn)確 , 凝固, 溶血 , 脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。6. 實(shí)驗(yàn)材料 :

3、6.1 德國(guó) Dade Behring Marburg 公司 D-Dimer PLUS 乳膠試劑 , 用 4mlD- 二聚體 PLUS 復(fù)溶液溶解一 瓶 D 二聚體 PLUS 試劑，室溫（ 15 25 ）放置約 5 分鐘，并不時(shí)混勻。將試劑放于儀器相應(yīng)的 試劑位置上。未開封試劑2 8 貯存到說(shuō)明書上有效期，復(fù)溶試劑2 8保存不超過 2 天，室溫保存不超過 5 天。6.2 D-Dimer PLUS 加速劑：用 5ml 蒸餾水溶解，室溫（ 15 25 ）放置約 15 分鐘，并不時(shí)混勻。將 試劑放于儀器相應(yīng)的試劑位置上。使用前，輕輕振蕩試劑。未開封試劑2 8貯存到說(shuō)明書上有效期，復(fù)溶試劑 28保存不

4、超過 5 天。6.3 D-Dimer PLUS 復(fù)溶液：液體。用于溶解 D-二聚體 PLUS 乳膠試劑。未開封試劑2 8貯存到說(shuō)明書上有效期，開瓶后試劑2 8保存不超過 12 周。6.4 Dade D-二聚體質(zhì)控血漿 I/II. 用蒸鎦水 1ml 溶解后放置 30 分鐘 , 才能使用或分裝。復(fù)溶后, 室溫保存 2 小時(shí) ,2 8 4 小時(shí)。7. 儀器設(shè)備 :7.1 儀器名稱 : Sysmex CA-1500 全自動(dòng)血液凝固分析儀7.2 儀器廠家 : 日本 Sysmex 公司2.3 儀器型號(hào) : Sysmex CA-15002.4 儀器技術(shù)參數(shù) :8. 速度: 最快檢測(cè)速度 180 測(cè)試/ 小時(shí)

5、, 組合檢測(cè)約 140 測(cè)試/ 小時(shí)9. 試劑位 :36 個(gè) , 具冷藏功能。10. 樣本位 :50 個(gè) , 可自動(dòng)連續(xù)添加。2.5 儀器校準(zhǔn)程序 :6.5 校準(zhǔn)頻率 : 當(dāng)方法改變 , 試劑廠家或試劑批號(hào)改變 , 儀器維修影響測(cè)定結(jié)果等情況時(shí) , 必須進(jìn)行校準(zhǔn)。6.6 校準(zhǔn)操作 : 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線分析 （ 由儀器提供商指定工程師執(zhí)行 ）7.3 操作步驟 :8.1 檢查前準(zhǔn)備 :8.1.1 清空廢液瓶 , 清空反應(yīng)杯拋棄槽。8.1.2 添加足夠反應(yīng)杯 （ 不能超過警告線 ） 。8.1.3 添加清潔液試劑 , 清洗用蒸餾水等。8.2 開機(jī)先開打印機(jī)再開主機(jī) , 開機(jī)后儀器自檢 , 約 15 分鐘,

6、 屏幕上方 “ Not Ready ”變?yōu)椤?Ready ”, 表示 儀器預(yù)熱完成 , 進(jìn)入系統(tǒng)準(zhǔn)備工作狀態(tài) , 可進(jìn)行測(cè)定。8.3 輸入工作清單 :從主菜單選 Work List 出現(xiàn)第一架樣本工作清單輸入畫面, 選 ID No Entry 輸入第一個(gè)樣本號(hào) 按相應(yīng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱鍵 D-D, 并同時(shí)輸入此標(biāo)本的其他測(cè)試項(xiàng)目 , 若選“凝血四項(xiàng) （ PT 、APTT 、Fbg、 TT ）”，可按 Profile #1 組合選項(xiàng)選擇，選中項(xiàng)目相應(yīng)位置標(biāo)記為 “” ，選完項(xiàng)目后按 ENTER 確 認(rèn)，要?jiǎng)h除某項(xiàng)目時(shí)只需按該項(xiàng)目（按鍵如PT變?yōu)?PT-）即可， 用 鍵，同樣輸入其他標(biāo)本編號(hào)項(xiàng)目。 （快

7、速輸入可用 Repeat 鍵，輸入重復(fù)標(biāo)本數(shù)，復(fù)制同樣項(xiàng)目的輸入。8.4 放置樣本按 8.3 所設(shè)好的工作清單順序?qū)㈦x心分離好的樣本放置于樣本架上 , 并按順序把樣本架排列于 Sampler 進(jìn)樣器右邊位置 （ 最多同時(shí)放 5 架共 50 個(gè)樣本 ）8.5 按 Start 鍵開始測(cè)定 .蓋好遮光蓋 , 確認(rèn)儀器為準(zhǔn)備狀態(tài)（ 顯示屏正上方顯示 “ Ready ” ） 按 Start 鍵, 進(jìn)樣開始 , 測(cè)定進(jìn)行, 儀器顯示為 “ Analying ”（ 被選擇項(xiàng)目背景變?yōu)?“” ，此時(shí)可重復(fù) 8.3,8.4, 繼續(xù)輸入其他架 樣本工作清單 , 按 Rigester, 繼續(xù)確認(rèn)測(cè)試任務(wù) , 添加樣

8、本架繼續(xù)測(cè)試 , 測(cè)定完成 , 測(cè)定項(xiàng)目背景 變?yōu)椤啊?，打印機(jī)打印出測(cè)定結(jié)果，所有測(cè)定清單完成，系統(tǒng)恢復(fù) “ Ready ”狀態(tài)。2.6 每日維護(hù) : （完成每日的測(cè)定后 , 關(guān)機(jī)前維護(hù)。）11. 沖冼針 Rinse Probe12. 清空廢液瓶 , 和已使用過的反應(yīng)杯。13. 將試劑架連用試劑放入冰箱。2.7 關(guān)機(jī): 先關(guān)主機(jī) , 再關(guān)打印機(jī)。9檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析 :6.7 儀器測(cè)定 D-Dimer 的線性范圍在 40-2000ug/L, 測(cè)定完成后儀器顯示 D-D 含量等參數(shù)。若不能對(duì)參 數(shù)進(jìn)行正確計(jì)算 , 將出現(xiàn)下列信息 : . 出現(xiàn)錯(cuò)誤 , 不能得到分析數(shù)據(jù) . 不能計(jì)算參數(shù) .

9、數(shù)值超出線性范圍.6.8 儀器設(shè)定 D-D 參考范圍在 40-2000ug/L, 如果得不到一個(gè)正常數(shù)值 , 在數(shù)據(jù)的左側(cè)將出現(xiàn)下列標(biāo)記 出現(xiàn)錯(cuò)誤信息< 數(shù)據(jù)低于可報(bào)告的低限> 數(shù)據(jù)高于可報(bào)告的高限7.4 質(zhì)量控制 : 每批樣本同時(shí)測(cè)定兩個(gè)濃度水平 （ 高值和正常值 ） 的質(zhì)控品 , 以 2S 為警告限 ,3S 為失控限, 繪制質(zhì)控圖 , 判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則詳見室內(nèi)質(zhì)控作業(yè)指導(dǎo)書。11 臨床意義： 檢測(cè) D 二聚體交聯(lián)降解產(chǎn)物，即可反映纖溶作用。8.6 參考范圍： 500ug/L8.7 D 二聚體濃度增加見于各種局灶性、彌漫性、年齡性的血栓性疾病。因此， D 二聚體濃度基礎(chǔ)值

10、超出健康人群的范圍，不能排除血栓性疾病。 D 二聚體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和臨 床數(shù)據(jù)。 D 二聚體升高提示出現(xiàn)凝塊，報(bào)告有深靜脈血栓，肺栓塞和彌漫性血管內(nèi)凝血。8.8 若 D 二聚體結(jié)果低于決定水平，可以用陰性預(yù)示值排除血栓可能。12 變異的潛在來(lái)源抗凝劑：草酸鹽、 EDTA 、肝素不適用于 PT 檢查標(biāo)本采集處理不當(dāng) ,如血與抗凝劑未充分混勻，出現(xiàn)凝塊，混勻時(shí)過分用力，使標(biāo)本溶血，造成結(jié) 果變異。纖溶藥物的影響，如雙香豆素、鏈激酶、尿酶等。 超劑量使用肝素使凝固時(shí)間延長(zhǎng)。FDP 增加使凝固時(shí)間延長(zhǎng)。 某些藥物，如口服避孕藥、雌激素、無(wú)門冬跣胺酶、鈉絡(luò)酮等影響測(cè)試結(jié)果。2.8 操作

11、注意事項(xiàng) : （干粉試劑及質(zhì)控血漿溶解）14. 確認(rèn)溶劑類型，一般溶解液包括：蒸餾水、生理鹽水、緩沖液、廠家特定溶解液，必須按說(shuō)明書 要求使用。15. 溶解時(shí)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，保證干粉完全溶解，避免劇烈振蕩。16. 復(fù)溶后，室溫放置 15-30 分鐘方可使用。2.9 儀器維護(hù)與保養(yǎng)6.9 日常維護(hù) （見 8.6）6.10 每周維護(hù)7.5 液路沖洗： 儀器在 “ Ready ”狀態(tài)下， 從主菜單按 Special Menu 按 Maintain 按 Rinse Prepare 按 Execute 鍵運(yùn)行此程序 完成后按 Return 返回。7.6 清潔儀器：定期用擦布擦干凈儀器內(nèi)外，包括試劑槽。6.11 需要時(shí)維護(hù)：8.9 調(diào)整壓力： 儀器在 “ Ready ”狀態(tài)下， 以主菜單按 Special Menu 按 Maintain 按 Pressure Adjust 鍵，顯示壓力是否在其調(diào)整范圍內(nèi)？若不在，則打開儀器右側(cè)相應(yīng)壓力調(diào)整旋鈕，旋動(dòng)調(diào)整好 壓力，再鎖緊旋鈕。8.10 更換燈泡：關(guān)機(jī) 從儀器右側(cè)取下燈泡外蓋及內(nèi)蓋 換上好的燈泡 裝上內(nèi)外蓋 從主菜單按Execute 運(yùn)行調(diào)整程序。Special Menu 再按 Maintain 按 Calib lamp 確認(rèn)關(guān)上遮光蓋，按8.11 更換保險(xiǎn)管：關(guān)機(jī) 從儀器左側(cè)旋下保險(xiǎn)蓋 更換上好的保險(xiǎn)管 裝上保險(xiǎn)