建立 HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室的方法

1、 實(shí)驗(yàn)研究與疾病監(jiān)測(cè) 建立 HIV 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室的方法吉 逵 張永剛 濰坊出入境檢驗(yàn)檢疫局 (濰坊 261041 摘要 目的 規(guī)范 HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室的管理 , 提高檢測(cè)質(zhì)量 。 方法 根據(jù)衛(wèi)生部制定的 全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范 及國(guó)家質(zhì)檢總局的有關(guān)文件 , 對(duì) HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室的建立的方法進(jìn)行了研究 。 結(jié)果 HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室必須通過相應(yīng)的審批程序 ; 具備人員條件和醫(yī)用設(shè)施才能開展 HI V 抗體的檢測(cè)工作 。檢測(cè)中要嚴(yán)格執(zhí)行 HI V 抗體檢測(cè)程序 ; 選用敏感性 、 特異性 、 功效率較高的試劑并建立實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系 , 才能提高檢測(cè)結(jié)果的可信度 , 提高實(shí)驗(yàn)室的檢

2、測(cè)質(zhì)量 。 結(jié)論 必須按照規(guī)范化的方法建立 HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室 , 才能保證初篩實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量 。關(guān)鍵詞 HI V 抗體 ; 實(shí)驗(yàn)室 ; 初篩 中圖分類號(hào) R512. 91 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 實(shí)驗(yàn)室 HI V 抗體特異性檢測(cè)在 HI V 感染和 AI DS 的臨床診斷上起著至關(guān)重要作用 。 1997年 9月衛(wèi)生部制定了 全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范 從法制 化的角度對(duì)艾滋病的檢測(cè)工作加以規(guī)范 。因此 , 在 籌建 HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室時(shí) , 必須遵守上述規(guī)范中 的各項(xiàng)規(guī)定 。1 HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室的建立 (1 根據(jù)當(dāng)?shù)?AI DS 防治工作的需要建立 HI V 抗 體實(shí)驗(yàn)室須經(jīng)相應(yīng)衛(wèi)

3、生部門審批同意 (或系統(tǒng)相應(yīng) 部門批準(zhǔn) 方可建立 。初篩實(shí)驗(yàn)室須經(jīng)相應(yīng)的衛(wèi)生 行政部門 (或局系統(tǒng)相應(yīng)部門 組織確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室專家 34人評(píng)審 , 經(jīng)審評(píng)組審定批準(zhǔn)后 , 方能開展 HI V 抗體檢測(cè)工作 。(2 初篩實(shí)驗(yàn)室必須具備的條件 人員條件 有 3名以上醫(yī)技人員 , 其中中級(jí) 衛(wèi)生技術(shù)職稱 1名以上 (供血機(jī)構(gòu)的 HI V -抗體檢 測(cè)人員須有技師以上衛(wèi)生職稱 , 從事病毒檢測(cè)技術(shù) 工作 2年以上 , 并曾在國(guó)家或省級(jí) HI V 抗體確認(rèn)中 心舉辦的 HI V 抗體檢測(cè)學(xué)習(xí)班參加過學(xué)習(xí)并獲得 合格證書 。 必備設(shè)施 有獨(dú)立的試驗(yàn)用房 , 污染區(qū)和清 潔區(qū)要分開 , 必要時(shí)建立半污染區(qū)和清潔

4、區(qū) 。設(shè)立 專門采血室及消毒室 。按照我國(guó) HI V 抗體檢測(cè)工 作要求 , 要按酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (E LIS A 測(cè)定所需配 備試驗(yàn)器材 , 必須配備酶標(biāo)讀數(shù)儀和洗板機(jī) 、 精確移 液器 、 普通冰箱 、 低溫冰箱 、 離心機(jī)及消毒與污物處 理設(shè)施 、 安全防護(hù)用品和恒溫設(shè)備 。(3 開展檢測(cè)工作時(shí)要嚴(yán)格執(zhí)行 HI V 抗體檢測(cè) 程序 , 嚴(yán)格執(zhí)行國(guó)家規(guī)定的各種檢測(cè)要求 。 檢測(cè)試劑 初篩用的 HI V 抗體檢測(cè)試劑必 須是經(jīng)衛(wèi)生部注冊(cè) , 經(jīng)過批檢檢定合格的 HI V12混 合型試劑 , 并在有效期內(nèi)應(yīng)用 。阿克蘇試劑 (E LIS A 法 、 雅培試劑 (快速紙條法 , 為衛(wèi)生部首選指

5、定試 劑 。 操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行 。 檢測(cè)程序a. 血液標(biāo)本驗(yàn)收合格后 , 用初篩檢測(cè)試劑檢測(cè) 如呈陰性反應(yīng) , 則作 HI V 抗體無(wú)反應(yīng)陰性報(bào)告 。 b. 初篩檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本必須進(jìn)行重 復(fù)檢測(cè) , 在復(fù)檢時(shí)用另一種不同原理的檢測(cè)試劑予 以復(fù)檢 , 復(fù)檢陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本 , 按規(guī)定送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室 確證 (表 1 。表 1 初篩陽(yáng)性標(biāo)本復(fù)檢對(duì)比表第 1次檢測(cè)第 2次原試劑檢測(cè)第 2次與第 1次不同原理檢測(cè)結(jié)果+ 陰性反應(yīng) + 陽(yáng)性反應(yīng) +陽(yáng)性反應(yīng) (4 要嚴(yán)格遵守保密制度 , 妥善保存各種實(shí)驗(yàn)記 錄 , 不得私自修改或銷毀 。未經(jīng)省衛(wèi)生行政部門許 可不得向無(wú)關(guān)人員 , 或單位提供任何情

6、況 。初篩檢 測(cè)結(jié)果不是最終結(jié)果 , 不得向受檢者宣布陽(yáng)性結(jié)果 。 (5 要加強(qiáng) HI V 抗體初篩實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理 。 在技術(shù)上要精益求精 , 對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn) 行上崗業(yè)務(wù)培訓(xùn) 。實(shí)驗(yàn)室按照質(zhì)量保證 、 質(zhì)量控制 和質(zhì)量評(píng)價(jià)方案實(shí)施細(xì)則開展工作 。 8 1 在平時(shí)要按接觸陽(yáng)性標(biāo)本做好預(yù)防性感染工 作 。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立安全操作 、 消毒 、 復(fù)核報(bào)告等制 度 , 并嚴(yán)格執(zhí)行 。 質(zhì)量保證 是指保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果正確性的整個(gè) 程序 , 是實(shí)驗(yàn)室的最佳工作方式 。它包括可靠的實(shí) 驗(yàn)方法 , 復(fù)核實(shí)驗(yàn)記錄的正確性 。 質(zhì)量控制 對(duì)結(jié)果可信程度的檢驗(yàn) 。 每次實(shí) 驗(yàn)必須進(jìn)行質(zhì)量控制 , 才能保證結(jié)果可靠性

7、。失控 時(shí)結(jié)果不可靠 , 必須重做 , 并找出失控原因 。 每次實(shí)驗(yàn)都要進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控 。 一般采用內(nèi)部 對(duì)照及外部對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室監(jiān)控 。 最理想的外部對(duì) 照設(shè)陽(yáng)性 、 弱陽(yáng)性臨界值及陰性標(biāo)本對(duì)照可取得正 確可信的結(jié)果 , 可信度達(dá)到 99%為最佳 。2 HI V 抗體檢測(cè)試劑的評(píng)價(jià) HI V 抗體特異性實(shí)驗(yàn)室診斷方法發(fā)展的快 , 目 前國(guó)內(nèi)外診斷試劑 、 方法數(shù)十種 , 究竟哪一種方法最 好 ? 這是一個(gè)重大的研究課題 。 我國(guó)國(guó)家參比實(shí)驗(yàn) 室為此做了大量科學(xué)可靠的選擇工作 , 對(duì)全國(guó)艾滋 病檢測(cè)工作起了重要的指導(dǎo)作用 ; 同時(shí)衛(wèi)生部提出 了首選試劑 、 方法的要求 , 各地各部門必須遵照?qǐng)?zhí)

8、行 。 通常用于評(píng)價(jià)試劑質(zhì)量的重要指標(biāo)有敏感性 、 特異性 、 功效性 、 值 、 可信度 、 預(yù)期值等 , HI V 抗體 初篩實(shí)驗(yàn)室工作人員必須熟練地掌握 。2. 1 敏感性 敏感性是指該試劑可以檢出樣本中 特異抗體最小含量的能力 。必須選擇敏感性高 , 在 初感染者血樣標(biāo)本中含少量的特異抗體時(shí)能檢測(cè)出 陽(yáng)性結(jié)果 , 對(duì)早發(fā)現(xiàn) 、 早治療起到良好的作用 。 使假 陰性率降到最低限度 , 使陽(yáng)性正確度達(dá)到 98%以上 為理想合格試劑 。敏感性 =真陽(yáng)性 (真陽(yáng)性 +假陰性 ×100%。 2 特異性 是指該實(shí)驗(yàn)方法能準(zhǔn)確的區(qū)分非感 染團(tuán)體的能力 , 也就是不產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng) 。在實(shí)驗(yàn)

9、過程中選用的方法特異性強(qiáng) , 可提高檢測(cè)結(jié)果的可 信度 。 目前 HI V 血清篩選試劑的特異性沒有一種 為 100%, 所以對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本血清要采用另一種原理 的試劑重做試驗(yàn) , 以求更高的特異性 。如果檢測(cè)試 劑特異性差 , 出現(xiàn)大量的假陽(yáng)性 , 會(huì)使檢測(cè)結(jié)果不可 信 , 一定要引起初篩實(shí)驗(yàn)室高度重視 。所用試劑特 異性應(yīng)達(dá) 98%以上 , 方可在初篩實(shí)驗(yàn)室使用 。 特異性 =真陰性 (真陰性 +假陽(yáng)性 ×100%。 2. 3 功效率 (性 功效率是指能準(zhǔn)確的區(qū)分真陽(yáng) 性和真陰性結(jié)果的能力 , 就是說不產(chǎn)生假陽(yáng)性 、 假陰 性結(jié)果 。 功效率是將敏感性與特異性相結(jié)合的一種 綜合質(zhì)量

10、, 要求功效率達(dá) 98%為比較理想的指標(biāo) 。 功效率 =(真陽(yáng)性 +真陰性 (真陽(yáng)性 +假陽(yáng)性 +真陰性 +假陰性 ×100%。如 :在 100份血樣中 , 有 5份為感染者 ,95份為 非感染者 , 記實(shí)結(jié)果 5個(gè)陽(yáng)性 (有 4個(gè)為真陽(yáng)性 95份陰性 (94份真陰性 。計(jì)算 :功效率 =(4+94 (4+1+94+1 ×100% =98%2. 4 值 雖然大多數(shù)試劑用特異性和敏感性指 標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià) , 但定量評(píng)價(jià)為更佳 。 E LIS A 試驗(yàn)的評(píng) 價(jià) OD 值能否接近切點(diǎn)是非常重要的指標(biāo) , 陽(yáng)性 值高表明確認(rèn)陽(yáng)性標(biāo)本能力好 ; 陰性 值高表明確 認(rèn)陰性能力高 。在測(cè) 值

11、時(shí)樣品在 50份以上才有 代表性 。2. 5 預(yù)期值 預(yù)期值是考慮人群中感染率分布因 素 , 分為陽(yáng)性預(yù)期值和陰性預(yù)期值 。陽(yáng)性預(yù)期值 (PPV =真陽(yáng)性 (真陽(yáng)性 +假陽(yáng)性 ×100%。陰性預(yù)期值 (NPV =真陰性 (真陰性 +假陰 性 ×100%。3 建立艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系 為確保艾滋病實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量 , 確保檢測(cè)結(jié) 果的正確性 , 公正性 、 科學(xué)性 , 按衛(wèi)生部及國(guó)家質(zhì)檢 總局有關(guān)文件要求 , 并參照 IS O IEC17025 標(biāo)準(zhǔn)的檢 測(cè)實(shí)驗(yàn)室能力的通知要求 , 結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際 , 制 定出質(zhì)量體系文件 , 指導(dǎo)艾滋病檢測(cè)工作 。3. 1 質(zhì)量方針 科學(xué)

12、公正 、 準(zhǔn)確及時(shí) 、 精益求精 , 要 維護(hù)實(shí)驗(yàn)室的正確性和權(quán)威性 。3. 2 質(zhì)量體系 適用于本室的質(zhì)量控制和質(zhì)量保 證 。 質(zhì)量體系基本要素應(yīng)為 :(1 組織與管理 ;(2 文件控制 ;(3 人員配備 、 培訓(xùn)及職責(zé)分工 ;(4 實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所及儀器設(shè)備 ;(5 儀器的校準(zhǔn)及儀器操作規(guī)程 ;(6 質(zhì)量控制的建立 ;(7 樣品的管理 ;(8 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告及記錄 。3. 3 保密制度 建立實(shí)驗(yàn)室保密制度 , 加強(qiáng)保密意 識(shí) , 規(guī)定保密范圍 。3. 4 規(guī)章制度 建立實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度 , 使工作制度 化 、 實(shí)驗(yàn)規(guī)范化 。規(guī)章制度的重點(diǎn) : 9 1 實(shí)驗(yàn)研究與疾病監(jiān)測(cè) 合資企業(yè)職工超聲診斷腎臟占位性

13、病變結(jié)果分析夏 青 劉 震 青島市中心醫(yī)院 (青島 266001田曉青 山東國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心 (青島 266001 摘要 目的 評(píng)價(jià)超聲診斷腎占位性病變的臨床價(jià)值 。 方法 用 LOGI Q400型和 A LOK ASS D -1100型灰階超聲診斷儀 , 對(duì)進(jìn)行健康體檢的 4380名合資企業(yè)職工的腎臟行常規(guī)掃查 。 結(jié)果 共檢出腎占位性病變 148例 , 檢出率 3. 38%。 其中經(jīng) CT 、 X 線腎盂造影 、 手術(shù)及病理證實(shí)的 73例 , 誤診 2例 , 漏診 1例 , 準(zhǔn)確率為 97. 79%。 結(jié)論 超聲檢查對(duì)腎占位性病變的診斷正確率高 , 定位準(zhǔn)確 , 是既準(zhǔn)確可靠又經(jīng)濟(jì)的檢

14、查方法 。關(guān)鍵詞 腎臟占位性病變 ; 超聲檢查 ; 企業(yè)職工 中圖分類號(hào) R692 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 腎臟占位性病變可分為囊性占位和實(shí)性占位 2大類 , 前者主要是指腎囊腫 , 后者主要是指腎腫瘤 , 90%以上為惡性 。 為了解合資企業(yè)職工發(fā)生腎占位 性病變的情況 ,1998年 9月2002年 7月 , 青島市 紡織醫(yī)院與山東國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心聯(lián)合在對(duì)紡 織系統(tǒng)合資企業(yè)職工進(jìn)行健康體檢時(shí) , 采用超聲診 斷儀進(jìn)行腎臟常規(guī)掃查 , 現(xiàn)將檢查結(jié)果報(bào)告如下 :1 對(duì)象與方法1. 1 檢查對(duì)象 :紡織系統(tǒng)合資企業(yè)職工 , 共計(jì) 4380人 。 1. 2 檢查儀器 LOGI Q400型和 A LOK

15、ASS D -1100型灰階超聲診斷儀 , 探頭頻率為 3. 5MHZ 。診斷標(biāo) 準(zhǔn)參照周永昌 , 郭萬(wàn)學(xué)主編 超聲醫(yī)學(xué) 。1. 3 檢查方法 患者取俯臥位 、 仰臥位 、 或左右側(cè) 臥位 , 經(jīng)背部及側(cè)腰部位縱 、 橫 、 冠狀切面掃查 。2 結(jié)果2. 1 檢出率與準(zhǔn)確率 在接受檢查的 4380名合資企 業(yè)職工中 , 共發(fā)現(xiàn)腎占位性病變者 148例 , 檢出率為 3. 38%。 其中有 73例 , 后被 CT 、 X 線腎孟造影、 手術(shù)及病 理所證實(shí) ; 誤診 2例 ; 漏診 1例 , 準(zhǔn)確率達(dá) 97. 97%。 (1 艾滋病實(shí)驗(yàn)室管理制度 ;(2 艾滋病實(shí)驗(yàn)室消毒及污物處理制度 ;(3 艾

16、滋病實(shí)驗(yàn)室個(gè)人防護(hù)制度 , 清場(chǎng)處理制 度 ;(4 艾滋病實(shí)驗(yàn)室意外事故處理制度 ;(5 艾滋病實(shí)驗(yàn)室重要儀器 , 如 :酶標(biāo)儀 、 洗板 機(jī) 、 高壓滅菌器 、 計(jì)算機(jī)等操作規(guī)程的建立 ;(6 實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程的建立 :HI V 抗體標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī) 范 , 血液 (血清 采集及保存操作規(guī)程 ;(7 建立艾滋病實(shí)驗(yàn)室檔案管理辦法 ;(8 建立必要的登記記錄 :低溫冰箱 、 普通冰箱 、 保溫箱及實(shí)驗(yàn)室等溫度記錄卡及儀器使用記錄 , 檢 驗(yàn)原始記錄及質(zhì)控記錄及質(zhì)控圖等主要記錄 。 艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的可信度受到各方面因 素的影響 , 在試驗(yàn)過程中 , 應(yīng)注意各個(gè)環(huán)節(jié) , 有一個(gè) 小問題的疏忽會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果的可信性 。 在實(shí) 驗(yàn)過程中應(yīng)提高影響結(jié)果可信度的各個(gè)因素的可信 度 , 并將其定為每個(gè)檢測(cè)工作人員的神圣職責(zé) 。參 考 文 獻(xiàn)1 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 . 全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范 . 北京 :人民衛(wèi) 生出版社 ,19972 康來儀 . 艾滋病防治手冊(cè) . 上海 :上海醫(yī)