第3節(jié)液相色譜的固定相與流動(dòng)相ppt課件

1、第三章第三章液相色譜分析液相色譜分析一、液相色譜固定相一、液相色譜固定相stationary phase stationary phase of HPLCof HPLC二、液相色譜流動(dòng)相二、液相色譜流動(dòng)相 mobile phase of mobile phase of HPLCHPLC第三節(jié)第三節(jié)液相色譜的固定相與液相色譜的固定相與流動(dòng)相流動(dòng)相high performance liquid chromatographstationary phase and mobile phase of HPLC一、液相色譜固定相一、液相色譜固定相 stationary phases of LC 1. 液-液

2、分配及離子對(duì)分離固定相 （1全多孔型擔(dān)體 由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100m的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見(jiàn)； 現(xiàn)采用10m以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料； （2表面多孔型擔(dān)體表面多孔型擔(dān)體 （薄殼型微珠擔(dān)體）（薄殼型微珠擔(dān)體） 3040m的玻璃微球，的玻璃微球，表面附著一層厚度為表面附著一層厚度為1 2m的多孔硅膠。的多孔硅膠。 表面積小，柱容量底；表面積小，柱容量底；（3化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相 化學(xué)鍵合固定相: 目前應(yīng)用最廣、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳鍵型： SiOC b. 硅氧硅碳鍵型：SiOSi C 穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣

3、； c. 硅碳鍵型： SiC d. 硅氮鍵型： SiN化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)（1傳質(zhì)快，表面無(wú)深凹陷，比一般液體固定相傳質(zhì)快；傳質(zhì)快，表面無(wú)深凹陷，比一般液體固定相傳質(zhì)快；（2壽命長(zhǎng)，化學(xué)鍵合，無(wú)固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊；壽命長(zhǎng)，化學(xué)鍵合，無(wú)固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊； 耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定；耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定； （4選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性；選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性；（5有利于梯度洗脫；有利于梯度洗脫； 存在著雙重分離機(jī)制：存在著雙重分離機(jī)制：(鍵合基團(tuán)的覆蓋率決定分離機(jī)理鍵合基團(tuán)的覆蓋率決定分離機(jī)理)高覆蓋率：分配為主；高覆蓋率

4、：分配為主；低覆蓋率：吸附為主；低覆蓋率：吸附為主； 2. 2.液液- -固吸附分離固定相固吸附分離固定相 種類(lèi)：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等； 結(jié)構(gòu)類(lèi)型：全多孔型和薄殼型； 粒度：510 m； 3.3.離子交換色譜分離固定相離子交換色譜分離固定相 結(jié)構(gòu)類(lèi)別：結(jié)構(gòu)類(lèi)別：（1薄殼型離子交換樹(shù)脂薄殼型離子交換樹(shù)脂 薄殼玻璃珠為擔(dān)體，表薄殼玻璃珠為擔(dān)體，表面涂約面涂約1%的離子交換樹(shù)脂；的離子交換樹(shù)脂；（2離子交換鍵合固定相離子交換鍵合固定相 薄殼鍵合型；微粒硅膠薄殼鍵合型；微粒硅膠鍵合型鍵合離子交換基團(tuán)）鍵合型鍵合離子交換基團(tuán)） 樹(shù)脂類(lèi)別：樹(shù)脂類(lèi)別：（1） 陽(yáng)離子交換樹(shù)脂強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換樹(shù)脂強(qiáng)酸性

5、、弱酸性）性、弱酸性）（2） 陰離子交換樹(shù)脂強(qiáng)堿陰離子交換樹(shù)脂強(qiáng)堿性、弱堿性）性、弱堿性） 4. 4. 空間排阻分離固定相空間排阻分離固定相（1軟質(zhì)凝膠軟質(zhì)凝膠 葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)； 水為流動(dòng)相。適用于常壓排阻分離。水為流動(dòng)相。適用于常壓排阻分離。（2半硬質(zhì)凝膠半硬質(zhì)凝膠 苯乙烯苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機(jī)凝膠；二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機(jī)凝膠； 非極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑非極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑（3硬質(zhì)凝膠硬質(zhì)凝膠 多孔硅膠、多孔玻珠等；多孔硅膠、多孔玻珠等； 化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好

6、、機(jī)械強(qiáng)度大，流動(dòng)相性質(zhì)影響化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大，流動(dòng)相性質(zhì)影響小，可在較高流速下使用。小，可在較高流速下使用。 可控孔徑玻璃微球，具有恒定孔徑和窄粒度分布?？煽乜讖讲Ａ⑶?，具有恒定孔徑和窄粒度分布。二、液相色譜的流動(dòng)相二、液相色譜的流動(dòng)相 mobile phases of LC 1. 1. 流動(dòng)相特性流動(dòng)相特性 （1 1液相色譜的流動(dòng)相又稱(chēng)為：淋洗液相色譜的流動(dòng)相又稱(chēng)為：淋洗液，洗脫劑。流動(dòng)相組成改變，極性改變，液，洗脫劑。流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況；可顯著改變組分分離狀況； （2 2親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的

7、極性小于固定相的極性，稱(chēng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，稱(chēng)為正相液液色譜法，極性柱也稱(chēng)正相柱。為正相液液色譜法，極性柱也稱(chēng)正相柱。 （3 3若流動(dòng)相的極性大于固定液的極若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱(chēng)為反相液液色譜，非極性柱也稱(chēng)為性，則稱(chēng)為反相液液色譜，非極性柱也稱(chēng)為反相柱。組分在兩種類(lèi)型分離柱上的出峰順?lè)聪嘀＝M分在兩種類(lèi)型分離柱上的出峰順序相反。序相反。 2. 2. 流動(dòng)相類(lèi)別流動(dòng)相類(lèi)別 按流動(dòng)相組成分：?jiǎn)谓M分和多組分； 按極性分：極性、弱極性、非極性； 按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。 常用溶劑： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元組合溶劑作為

8、流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。3. 3. 流動(dòng)相選擇流動(dòng)相選擇 在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。 采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。 也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。 常用溶劑的極性順序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己烷煤油(最小)4. 4. 選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止

9、微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。（2避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿(mǎn)足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器feature and instrument of HPLC第二節(jié)第二節(jié) 基本原理與主要分離類(lèi)型基本原理與主要分離類(lèi)型basic principle and main separating types第三節(jié)第三節(jié) 固定相與流動(dòng)相固定相與流動(dòng)相stationary phase and mobile phase 第四節(jié)第四節(jié) 影響分離的因素與操作條件選擇影響分離的因素與操作條件選擇factors i