北京大學(xué)《藥物毒理學(xué)》2毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)-藥學(xué)修改后

1、1毒理學(xué)研究設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)The Design of Toxicology Study & Foundations of Toxicology Experiment 2本章的學(xué)習(xí)目的本章的學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)了解毒理學(xué)研究的基礎(chǔ)（方法和手段）n實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)n實(shí)施n觀察n結(jié)果評價(jià)方法科學(xué)手段上的毒理學(xué)： 實(shí)驗(yàn)科學(xué)（以動物實(shí)驗(yàn)為中心）3一.藥物的研發(fā)流程n總的來說新藥的研發(fā)分為兩個(gè)階段：總的來說新藥的研發(fā)分為兩個(gè)階段： 研究和開發(fā)。研究和開發(fā)。 這兩個(gè)階段是相繼發(fā)生有互相聯(lián)系的。區(qū)分這兩個(gè)階段是相繼發(fā)生有互相聯(lián)系的。區(qū)分兩個(gè)階段的標(biāo)志是候選藥物的確定，即在確定兩個(gè)階段的標(biāo)志是候選藥物的確定，即在確定

2、候選藥物之前為研究階段，確定之后的工作為候選藥物之前為研究階段，確定之后的工作為開發(fā)階段。開發(fā)階段。 41.藥物的研究研究階段包括四個(gè)重要環(huán)節(jié)研究階段包括四個(gè)重要環(huán)節(jié) ： （1）靶標(biāo)的確立 （2）模型的確立 （3）先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn) （4）先導(dǎo)化合物的優(yōu)化 52.藥物的開發(fā)開發(fā)階段也包括四個(gè)重要環(huán)節(jié)開發(fā)階段也包括四個(gè)重要環(huán)節(jié) ： （1）臨床前試驗(yàn)：由制藥公司進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室和動物研究，以觀察化合物針對目標(biāo)疾病的生物活性，同時(shí)對化合物進(jìn)行安全性評估。 （2）研發(fā)中新藥申請（Investigational New Application, IND） （3）臨床試驗(yàn)：（ 期、期、期、期 ） （4）新藥申請

3、（New Drug Application, NDA） 6臨床前研究臨床前研究 （1 1） 藥學(xué)研究：藥學(xué)研究： （2 2）藥效學(xué)研究：）藥效學(xué)研究：評價(jià)化學(xué)物質(zhì)的生物活性和確定藥物作用評價(jià)化學(xué)物質(zhì)的生物活性和確定藥物作用機(jī)理。機(jī)理。 （3 3）一般藥理學(xué)研究：指對新藥主要藥效作用以外廣）一般藥理學(xué)研究：指對新藥主要藥效作用以外廣泛藥理作用的研究。主要是藥物作用特征、對機(jī)體重泛藥理作用的研究。主要是藥物作用特征、對機(jī)體重要系統(tǒng)（神經(jīng)、心血管、呼吸系統(tǒng)）的影響。要系統(tǒng)（神經(jīng)、心血管、呼吸系統(tǒng)）的影響。 （4 4）藥代動力學(xué)研究）藥代動力學(xué)研究(ADME)(ADME) （5 5）毒理學(xué)研究）毒理學(xué)

4、研究7二二. .為什么要進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)？為什么要進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)？ 毒理學(xué)試驗(yàn)是對藥物安全性評價(jià)的主要手段，各毒理學(xué)試驗(yàn)是對藥物安全性評價(jià)的主要手段，各國際組織或各國的行政部門所頒布的規(guī)程或指南國際組織或各國的行政部門所頒布的規(guī)程或指南已將毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)列為常規(guī)試驗(yàn)，也稱為法規(guī)已將毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)列為常規(guī)試驗(yàn)，也稱為法規(guī)( (管理管理) )毒理學(xué)試驗(yàn)（毒理學(xué)試驗(yàn)（regulatory toxicology testregulatory toxicology test），），這類毒理學(xué)試驗(yàn)是以篩查和描述藥物的毒性為目這類毒理學(xué)試驗(yàn)是以篩查和描述藥物的毒性為目的，屬于描述毒理學(xué)范疇。的，屬于描述毒理學(xué)范疇。8

5、毒理實(shí)驗(yàn)種類毒理實(shí)驗(yàn)種類1.1.體內(nèi)試驗(yàn)：體內(nèi)試驗(yàn)：2.2.體外試驗(yàn)：體外試驗(yàn)：3.3.人體調(diào)查和流行病學(xué)調(diào)查：人體調(diào)查和流行病學(xué)調(diào)查：9三三. .毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的原則和局限性毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的原則和局限性1.1.基本原則（三個(gè)原則）基本原則（三個(gè)原則）n第一原則：藥物在實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)生的作用，可以外推于人。n第二原則：實(shí)驗(yàn)動物必須暴露于高劑量受試物。n第三原則：選擇成年的健康（雄性和雌性未孕）實(shí)驗(yàn)動物和人可能的暴露途徑。102.2.利用動物實(shí)驗(yàn)的局限性利用動物實(shí)驗(yàn)的局限性不確定性：不確定性：用實(shí)驗(yàn)動物的毒理學(xué)試驗(yàn)資料外推到人群接觸用實(shí)驗(yàn)動物的毒理學(xué)試驗(yàn)資料外推到人群接觸的安全性時(shí)，會有很大的不確定性。的安

6、全性時(shí)，會有很大的不確定性?！敖o人使用時(shí)總給人使用時(shí)總是不可避免地要冒一定的風(fēng)險(xiǎn)。是不可避免地要冒一定的風(fēng)險(xiǎn)?！保ㄒ褐耍ㄒ褐耍┎淮_定性的產(chǎn)生：不確定性的產(chǎn)生：藥物的毒性作用受到許多因素的影響。的毒性作用受到許多因素的影響。 1.1.實(shí)驗(yàn)動物和人對藥物的反應(yīng)敏感性不同，有時(shí)甚至存在著質(zhì)的差實(shí)驗(yàn)動物和人對藥物的反應(yīng)敏感性不同，有時(shí)甚至存在著質(zhì)的差別。（癥狀和體征）別。（癥狀和體征） 2.2.試驗(yàn)中選用較大的染毒劑量，有些藥物在高劑量和低劑量的毒性試驗(yàn)中選用較大的染毒劑量，有些藥物在高劑量和低劑量的毒性作用規(guī)律并不一定一致。作用規(guī)律并不一定一致。 3.3.毒理學(xué)試驗(yàn)所用動物數(shù)量有限，那

7、些發(fā)生率很低的毒性反應(yīng)，在毒理學(xué)試驗(yàn)所用動物數(shù)量有限，那些發(fā)生率很低的毒性反應(yīng)，在少量動物中難以發(fā)現(xiàn)。少量動物中難以發(fā)現(xiàn)。 4.4.實(shí)驗(yàn)動物一般都是實(shí)驗(yàn)室培育的品系，一般選用成年健康動物，實(shí)驗(yàn)動物一般都是實(shí)驗(yàn)室培育的品系，一般選用成年健康動物，反應(yīng)較單一。反應(yīng)較單一。113.3.毒理實(shí)驗(yàn)的重要原則毒理實(shí)驗(yàn)的重要原則（1）貫徹優(yōu)良實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP)（2）尊重動物福利（3R原則）12四四. .毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.2.劑量劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )研究研究3.3.確定毒作用的靶器官確定毒作用的靶器官4.4.

8、確定損害的可逆性確定損害的可逆性5.5.其它其它 （1）毒作用的敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志 （2）毒作用機(jī)制研究 （3）受試物的毒物動力學(xué)和代謝研究 （4）中毒的解救措施13四四. .毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.2.劑量劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )研究研究3.3.確定毒作用的靶器官確定毒作用的靶器官4.4.確定損害的可逆性確定損害的可逆性5.5.其它其它 （1）毒作用的敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志 （2）毒作用機(jī)制研究 （3）受試物的毒物動力學(xué)和代謝研究 （4）中毒的解救措施14劑量劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng))

9、)研究研究n是毒性評價(jià)和安全性評價(jià)的基礎(chǔ)。通過對不同有害作用的劑量是毒性評價(jià)和安全性評價(jià)的基礎(chǔ)。通過對不同有害作用的劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )研究，可以得到該受試物的多種毒性參數(shù)。研究，可以得到該受試物的多種毒性參數(shù)。 急性急性( (致死性致死性) )毒性試驗(yàn)：毒性試驗(yàn)：LDLD5050、LDLD0101和和MTDMTD。 急性非致死性毒性試驗(yàn)中：急性可觀察到有害作用的最低劑量急性非致死性毒性試驗(yàn)中：急性可觀察到有害作用的最低劑量 (LOAEL)(LOAEL)和未觀察到有害作用的劑量和未觀察到有害作用的劑量(NOAEL)(NOAEL)。 亞急性、亞慢性及慢性毒性試驗(yàn)：相應(yīng)的亞急性、

10、亞慢性及慢性毒性試驗(yàn)：相應(yīng)的LOAELLOAEL和和NOAELNOAEL。 致畸試驗(yàn)：致畸試驗(yàn)：LOAELLOAEL和和NOAELNOAEL 致突變、致癌試驗(yàn)：表觀的致突變、致癌試驗(yàn)：表觀的LOAELLOAEL和和NOAELNOAEL。15四四. .毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.2.劑量劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )研究研究3.3.確定毒作用的靶器官確定毒作用的靶器官4.4.確定損害的可逆性確定損害的可逆性5.5.其它其它 （1）毒作用的敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志 （2）毒作用機(jī)制研究 （3）受試物的毒物動力學(xué)和代謝研

11、究 （4）中毒的解救措施16四四. .毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.2.劑量劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )研究研究3.3.確定毒作用的靶器官確定毒作用的靶器官4.4.確定損害的可逆性確定損害的可逆性5.5.其它其它 （1）毒作用的敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志 （2）毒作用機(jī)制研究 （3）受試物的毒物動力學(xué)和代謝研究 （4）中毒的解救措施17四四. .毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的毒性評價(jià)試驗(yàn)的基本目的1.1.藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)藥物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)2.2.劑量劑量- -反應(yīng)反應(yīng)( (效應(yīng)效應(yīng)) )研究研究3.3.確定毒作用的

12、靶器官確定毒作用的靶器官4.4.確定損害的可逆性確定損害的可逆性5.5.其它其它 （1）毒作用的敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志 （2）毒作用機(jī)制研究 （3）受試物的毒物動力學(xué)和代謝研究 （4）中毒的解救措施18五五. .毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)19環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病20五五. .毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)1劑量分組 一般至少要設(shè)3個(gè)劑量組 高劑量組高劑量組 中劑量組 低劑量

13、組低劑量組 希望能得到滿意的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系。(一) 體內(nèi)毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)21未處理對照組（空白對照組）：確定本底值，進(jìn)行質(zhì)量控制（常用于遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)）陰性（溶劑）對照：是染毒組比較的基礎(chǔ)陽性對照：檢測試驗(yàn)體系的有效性歷史性對照：檢測試驗(yàn)體系的穩(wěn)定性對照組問題毒理學(xué)實(shí)踐的基本手段之一就是比較分析。222各組動物數(shù)3試驗(yàn)期限231.測定藥物的溶解性2.試驗(yàn)最高劑量的推薦3.代謝活化4.陽性對照5.重復(fù) （二）體外毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)24環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間

14、/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病25六六. .藥物藥物1.受試樣品的準(zhǔn)備純度及雜質(zhì)成分化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)（揮發(fā)性和溶解性）相似化合物的毒性參考資料同種同一批號成分和配方必須固定穩(wěn)定性受試物應(yīng)一次備齊全部實(shí)驗(yàn)的用量。26受試物的準(zhǔn)備n劑型：水溶液、油溶液或混懸液n對溶劑和助溶劑的要求：無毒，與受試物不起反應(yīng)，穩(wěn)定。n制劑要點(diǎn)n染毒容積：以受試的實(shí)驗(yàn)動物物種或制劑來確定。271.在制備制劑時(shí)加熱受試物不應(yīng)接近或者達(dá)到改變其化學(xué)性質(zhì)或者物理性質(zhì)的溫度2.在評價(jià)固體受試物皮膚毒性時(shí)，應(yīng)保持其形狀和顆粒大小3.多成分的受試物應(yīng)按照配方配制，使染毒制劑準(zhǔn)確反映原混合

15、物4.制劑應(yīng)保持化學(xué)穩(wěn)定性和一致性5.制劑應(yīng)減少總試驗(yàn)容積，利用溶劑或賦形劑的量不應(yīng)過多。6.制劑應(yīng)易于準(zhǔn)確染毒7.制劑的pH應(yīng)為5-9.8.不應(yīng)用酸堿解離受試物，基于保護(hù)動物的原因，并避免改變腸道或者 腎小管內(nèi)的pH值9.非胃腸道染毒，受試物應(yīng)盡可能接近等滲28環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病29藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu) 物理化學(xué)性質(zhì)化學(xué)活性ADME毒動學(xué)靶毒效學(xué)30化學(xué)結(jié)構(gòu)對其毒性的影響

16、n同系物的碳原子數(shù)：烷、醇、酮等碳?xì)浠衔锇赐滴锵啾龋荚訑?shù)愈多，則毒性愈大(甲醇與甲醛除外)。但當(dāng)碳原子數(shù)超過一定限度時(shí)(79個(gè))，毒性反而迅速下降。n取代基團(tuán)：鹵代烷烴、基團(tuán)的位置不同也可能影響毒性n分子中不飽和鍵n構(gòu)型異構(gòu)：順反異構(gòu)和手性異構(gòu) 3132藥物的理化性質(zhì)n溶解度： 水溶性：化學(xué)物在水中的溶解度直接影響其毒性大小，溶解度愈大，毒性愈大。 脂溶性：脂溶性物質(zhì)易在脂肪中蓄積，易侵犯神經(jīng)系統(tǒng)。n揮發(fā)度：n分散度n純度和雜質(zhì)：藥物的純度常常改變其毒性 33北醫(yī)三院眼科用藥34 上海華聯(lián)抗癌藥上海華聯(lián)抗癌藥(甲氨喋呤、阿甲氨喋呤、阿糖胞苷糖胞苷) 致殘致殘130多人多人(其中因廠方其

17、中因廠方瞞報(bào)藥品被污染事實(shí)，導(dǎo)致真相延瞞報(bào)藥品被污染事實(shí)，導(dǎo)致真相延遲揭示，藥害例數(shù)增加數(shù)十人遲揭示，藥害例數(shù)增加數(shù)十人)，癥，癥狀為下肢疼痛乏力、進(jìn)而行走困難狀為下肢疼痛乏力、進(jìn)而行走困難癱瘓等。癱瘓等。調(diào)查調(diào)查存在嚴(yán)重的質(zhì)量管理混存在嚴(yán)重的質(zhì)量管理混亂亂,導(dǎo)致導(dǎo)致5方面違規(guī)生產(chǎn)行為。部分方面違規(guī)生產(chǎn)行為。部分批次產(chǎn)品中混入了批次產(chǎn)品中混入了微量硫酸長春新微量硫酸長春新堿堿另一種不能用于鞘內(nèi)注射的另一種不能用于鞘內(nèi)注射的抗腫瘤藥物（生產(chǎn)尾料未交三廢處抗腫瘤藥物（生產(chǎn)尾料未交三廢處理人員，而由灌裝工收集存放于儲理人員，而由灌裝工收集存放于儲藏室，繼續(xù)用于生產(chǎn)）。藏室，繼續(xù)用于生產(chǎn)）。鞘內(nèi)注射甲

18、氨蝶呤致鞘內(nèi)注射甲氨蝶呤致患者雙腿癱瘓變形患者雙腿癱瘓變形35越戰(zhàn)中美軍使用落葉劑2、4、5-T（橙劑）TCDD36環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病37七七. .實(shí)驗(yàn)動物的選擇和處理實(shí)驗(yàn)動物的選擇和處理n毒理學(xué)的動物試驗(yàn)是以實(shí)驗(yàn)動物作為研究對象的，為獲得可靠的研究結(jié)果，先決條件是正確地選用實(shí)驗(yàn)動物。38(一)實(shí)驗(yàn)動物物種的選擇基本原則對受試物在代謝、生物化學(xué)和毒理學(xué)特 征與人最接近的物種敏感的物

19、種自然壽命不太長的物種易于飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作的物種;經(jīng)濟(jì)并易于獲得的物種39動物物種大鼠小鼠豚鼠兔狗地鼠彌猴小型豬雞等等。40表1 常用實(shí)驗(yàn)動物生物學(xué)和生理學(xué)參數(shù)41 背腫了42（二）實(shí)驗(yàn)動物品系的選擇1.近交系：C57、Balb/c、dba-1；shrn、ZDF大鼠、F344/DuCrlCrlj大鼠2.雜交群動物：3.封閉群：昆明種、ICR小鼠； F344大鼠、SD大鼠、wistar大鼠等43（三）對實(shí)驗(yàn)動物微生物控制的選擇44（四）個(gè)體選擇性別 年齡和體重 生理狀態(tài) 健康狀況45環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮

20、發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病46n皮膚癌：n飲酒： 47環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病48（五）飼養(yǎng)條件合理的全營養(yǎng)飼料水溫度和濕度空氣清潔度人工照明的晝夜周期49（六）國家有關(guān)實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量 監(jiān)督和質(zhì)量合格證制度1998年實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例試驗(yàn)動物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)檢測等級實(shí)驗(yàn)動物哺乳類動物遺傳質(zhì)量控制實(shí)

21、驗(yàn)動物全價(jià)營養(yǎng)飼料實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境及設(shè)施50環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病51八八. .實(shí)驗(yàn)動物的染毒和處置實(shí)驗(yàn)動物的染毒和處置n雌雄分開飼養(yǎng) 57天的檢疫（適應(yīng)環(huán)境） 標(biāo)記和分組。n實(shí)驗(yàn)動物分組的原則 要求所有的動物分配到各劑量組和對照組的機(jī)會均等，避免主觀選擇傾向，減少偏性，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。n正確的分組方法：隨機(jī)分組(一)動物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備52(二)染毒途徑n選擇原則： 應(yīng)盡可能模擬人在接

22、觸該受試物的方式n途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑1.經(jīng)口(胃腸道)染毒：灌胃、喂飼和吞咽膠囊2.經(jīng)呼吸道染毒：吸入染毒（靜式、動式）和氣管內(nèi)注入3.經(jīng)皮膚染毒：備皮4.注射染毒：肌肉、皮下和靜脈滴注（ip）53（1）經(jīng)口(胃腸道)染毒n灌胃、喂飼和吞咽膠囊 喂飼：5%54(二)染毒途徑n選擇原則： 應(yīng)盡可能模擬人在接觸該受試物的方式n途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑1.經(jīng)口(胃腸道)染毒：灌胃、喂飼和吞咽膠囊2.經(jīng)呼吸道染毒：吸入染毒（靜式、動式）和氣管內(nèi)注入3.經(jīng)皮膚染毒：備皮4.注射染毒：肌肉、皮下和靜脈滴注（ip）55（2）經(jīng)呼吸道染毒：56(二)染毒途徑n選擇原則： 應(yīng)盡可能

23、模擬人在接觸該受試物的方式n途徑：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑n經(jīng)口(胃腸道)染毒：n經(jīng)呼吸道染毒：n經(jīng)皮膚染毒：備皮1.注射染毒57環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病58藥物的聯(lián)合作用n一種藥物對機(jī)體的毒性作用，可以由于同時(shí)或先后接觸另一種藥物而使其所表現(xiàn)的聯(lián)合毒性比任一單一藥物的毒性增強(qiáng)或減弱，毒理學(xué)將兩種或兩種以上的藥物對機(jī)體的交互作用稱為聯(lián)合作用(joint action)。59類型n相

24、加作用(additional joint action)n協(xié)同作用(synergistic effect)n加強(qiáng)作用(potentiation joint action)n拮抗作用(antagonistic joint action)n獨(dú)立作用(independent effect ) 60環(huán)境條件環(huán)境條件(氣溫,氣濕等)暴露暴露藥物藥物機(jī)體機(jī)體 毒效應(yīng)毒效應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì) 水溶性 脂/水分 配系數(shù) 揮發(fā)度 氣/血分 配系數(shù)分散度純度/雜質(zhì)途徑時(shí)間/頻率溶劑稀釋度交叉暴露物種,品系個(gè)體因素性別年齡生理狀態(tài)營養(yǎng)/習(xí)慣疾病各種毒性反應(yīng)死亡各種血相、生化、病理改變61(三)實(shí)驗(yàn)動物處死及生物標(biāo)本采集1.實(shí)驗(yàn)動物處死方法2.血液采集3.尿液采集4.病理解剖和標(biāo)本留取5.大體解剖 在實(shí)驗(yàn)動物處死后半小時(shí)內(nèi)進(jìn)行，解剖方法采用胸腔、腹腔臟器聯(lián)合取出法。應(yīng)觀察有關(guān)臟器的外形和表面情況、顏色、邊界和大小、質(zhì)地、切面。對指定的臟器稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)。62病理解剖標(biāo)準(zhǔn)操作程序(大體解剖)動物固定在解剖板上，解剖頸部(頜下腺、腮腺、局部淋巴結(jié)等)取一側(cè)乳腺及腹部皮膚；開腹并擴(kuò)展切口( 胰、脾、生殖器官、腎、腎上腺、直腸、胃、十二指腸、空腸、回腸、腸系膜淋巴結(jié)、肝臟等 )開