菠菜中草酸的提取及含量測(cè)定

1、菠菜中草酸的提取及含量測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)會(huì)沉淀法提取操作，進(jìn)一步熟悉過(guò)濾，離心，提取等操作，掌握均勻沉淀法的原 理。2學(xué)習(xí)文獻(xiàn)資料的查閱方法，學(xué)會(huì)制定實(shí)驗(yàn)方案，綜合運(yùn)用各種分析方法解決實(shí)際問(wèn) 題。3學(xué)習(xí)食品采樣方法，綜合分析菠菜中草酸的含量分布情況。 二、實(shí)驗(yàn)原理草酸是一種二元羧酸, 是植物體內(nèi)普遍存在的一種組分, 在菠菜、莧菜、生菜等許多蔬菜作物體內(nèi)都有較高的含量。從環(huán)境毒理學(xué)和食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)角度看, 草酸在蔬菜作物可食部位的大量累積會(huì)影響到人類的身體健康。本實(shí)驗(yàn)采用靈敏度較高的比色法測(cè)菠菜中草酸含量。采用722型分光光度計(jì)法測(cè)定，F(xiàn)e在pH值 的KCl- HCl緩沖液中與磺基水楊酸（SSAL

2、）和草酸均生成絡(luò)合物，F(xiàn)e3 +和 草酸的絡(luò)合物能使Fe3+與磺基水楊酸的紫色絡(luò)合物顏色變淺,測(cè)定Fe3+的磺基水楊酸絡(luò)合 物的吸光度, 隨著草酸量的增加而降低, 據(jù)此可計(jì)算出樣品中草酸根的含量。三、儀器與試劑儀器部分：榨汁機(jī)，722型分光光度計(jì), 水浴鍋，電子天平, 臺(tái)秤 , 100mL 容量瓶3個(gè) ,250mL容量瓶4個(gè)，200mL燒杯2個(gè)，500mL燒杯2個(gè)，離心機(jī)及離心管， 長(zhǎng)頸漏斗，鐵架臺(tái)， 濾紙。試劑部分：新鮮菠菜，磺基水楊酸（分析純） （s）, FeCl3，草酸鈉（s）, KCl（s）, 12mol/L 濃鹽酸，L稀鹽酸，去離子水，pH試紙。四、實(shí)驗(yàn)步驟 （一）樣品制備1鐵標(biāo)準(zhǔn)液

3、的配制（ mg/ mL ） : 稱取 0 .4 g FeCl3 于 500mL 燒杯中 , 加去 250mL 離子水溶解。2 磺基水楊酸（ SSAL） 的配制 （ 0 .5%） ： 稱取 0 .5 g 磺基水楊酸（ 分析純 ） 于 100 mL 容量瓶中 , 加水稀釋至刻度。3 草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的配制（ 2 mg/ mL ） : 稱取 0 .2 000 g 草酸鈉于200 mL 燒杯中 , 加去離子水 , 稍加熱 , 使其溶解, 移入 100 mL 容量瓶用去離子水定容。4 緩沖液的配制（ pH 值 2） : 稱取 3.7g 左右 KCl 于 500 mL 燒杯中,加去離子水少量, 在水浴鍋上微熱

4、溶解，加12mol/L濃鹽酸用pH試紙使pH值為2移入250 mL容量并S中，用去離 子水稀釋至刻度。5 草酸的待測(cè)液制備：將菠菜在去離子水中洗滌2 次 , 晾干。 稱取菠菜可食部分100 g，加入100 mL水，壓榨23 min,每2g勻漿折算為1 g試樣，稱取1份勻漿50 g,用100 mL水 洗入250 mL容量瓶，加入濃度為 L的HCl溶液，澄清，置于7080 C水浴上加熱30 min, 其間搖動(dòng)數(shù)次,取出冷卻, 加水至刻度,搖勻過(guò)濾。將濾液經(jīng)10000r/min 離心 10min， 得到的即是草酸待測(cè)液。6比色法測(cè)定菠菜中草酸含量的條件研究2該最大吸收波長(zhǎng)即為測(cè)定時(shí)所要選擇的最佳波長(zhǎng)

5、508nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按照以上確定的條件，按下列順序：加液：2mL Fe3+, 20mL緩沖液，mL磺基水楊酸，從容量瓶中依次取出已經(jīng)配制的Na2c2O4溶液體積為：0、0. 2、0.4、0. 8 mL,再用蒸儲(chǔ)水定容至100mL容量瓶中。顯色 30min后，以蒸儲(chǔ)水為參比液，在508nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色測(cè)定。 根據(jù)測(cè)定結(jié)果(見(jiàn)表一)，繪 制草酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)計(jì)算機(jī)擬合，獲得該標(biāo)準(zhǔn)曲線A關(guān)于x的方程。其中式中，x為 顯色體系的草酸的質(zhì)量濃度 (mg/mL), A為吸光度。7.菠菜中的待測(cè)液中草酸含量的測(cè)定：用菠菜待測(cè)液替換草酸根溶液，依次取0, 0. 4, mL用蒸儲(chǔ)水定容至100mL

6、容量瓶中。顯色30min后，以蒸儲(chǔ)水為參比液，在510 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色測(cè)定其余按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線相同 的方法，進(jìn)行顯色反應(yīng)，并測(cè)定其吸光度，填入表二。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算待測(cè)液中草酸 含量。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理FeCl3: 0 .4 g磺基水楊酸：0.5gNa2c2。4： 0.2275gKCl ：Na2c2O4濃度的計(jì)算，以第二份為例：x=0.2275 g X103 /100mL X50mL= X10-3 mg/mL組別Fe3+溶?夜-的體積/(mL)緩沖液的體積/(mL)磺基水楊酸的體積/(mL)Na2c2O4 的濃度 x /(mg/mL)吸光度A2200220X10-3220X10-322

7、0X10-2220X10-2表用origin軟件繪制的草酸含量標(biāo)準(zhǔn)曲線 B吸光度A與草酸的質(zhì)量濃度x(mg/mL)的線性方程A=菠菜草酸代替草酸鈉得到的吸光度；波長(zhǎng)(nm)508508508508菠菜待測(cè)液體積吸光度由人=當(dāng)體積為時(shí),A=#x=mL草酸質(zhì)量 w=x X50mL/ X250mL=實(shí)際取了 25g菠菜，所以100g菠菜含草酸的質(zhì)量m=wX100g/25=1.83g六、誤差分析1.雜質(zhì)過(guò)程中，菠菜未完全榨汁，造成草酸不能盡數(shù)提取，從而造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果比真實(shí)結(jié)果偏低一點(diǎn)。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大影響，而實(shí)驗(yàn)過(guò)程中pH與反應(yīng)的最適pH有一定偏差。3 .在顯色過(guò)程中，未等到顯色完全，就進(jìn)行了比色測(cè)定，

8、導(dǎo)致偏差。4 .移取溶液過(guò)程中由于無(wú)1mL吸量管，造成測(cè)量結(jié)果不夠精確。七、注意事項(xiàng)1 .比色實(shí)驗(yàn)的選擇：在顯色30min后進(jìn)行比色較合適。2 .在比色測(cè)定時(shí),都是要以蒸餾水為參比溶液,注意不能用1 號(hào)溶液作為參比。3 .加液時(shí)要按順序加入，分光分度計(jì)使用之前要預(yù)熱。4 .用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)草酸含量時(shí)注意草酸的濃度要在線性范圍內(nèi)。5 .要使吸光度控制在，這樣才能提高準(zhǔn)確度。6 .為了使草酸提取完全，應(yīng)將菠菜的榨汁在7080c下水浴加熱，并加入適量鹽酸。參考文獻(xiàn)：1 曾芳， 劉忠珍， 許桂芝，王榮輝，歐俊 . 蔬菜中不同形態(tài)草酸的提取測(cè)定 期刊論文 -食品科學(xué)2009(16)2 段立珍 , 汪建飛 , 趙建榮 . 比色法測(cè)定菠菜中草酸含量的條件研究3 NOONAN S C, SAVAGE G P. Oxalate content of foods and its effect on humansJ. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition, 1999, 8(1): 64-74.4 張英鵬 ,