實驗報告-微生物(共4頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上實驗報告王唯一 精94 同組人：劉昕 汪夢婕I 環(huán)境中微生物的監(jiān)測和分離純化一、實驗目的1. 學習并掌握無菌操作技術(shù)原理和方法2. 學習用稀釋涂布法分離微生物3. 認識微生物存在的普遍性，體會無菌操作的原理二、實驗原理 為微生物提供適宜培養(yǎng)它的營養(yǎng)、酸堿度、溫度和氧等條件，使其正常生長。三、實驗材料與試劑1、土樣10g，無菌生理鹽水2、取液器（1000微升 1支），培養(yǎng)箱，培養(yǎng)皿，無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環(huán)，1000微升無菌吸頭若干，記號筆，酒精燈，火柴，試管架四、實驗步驟（一）培養(yǎng)基的制備按以下步驟制備牛肉膏蛋白胨平板培養(yǎng)基，每組1820個平板成分：牛肉

2、膏1.5g，蛋白胨3g, 氯化鈉1.5g, 自來水300ml制法：1. 于500ml三角瓶內(nèi)加入以上成分，混合溶解。2. 調(diào)pH至7.47.63. 加入56g瓊脂4. 0.1Mpa滅菌20分鐘，冷卻到60度左右，采用疊皿法把培養(yǎng)基倒入滅好菌的90mm培養(yǎng)皿中，制作無菌平板，凝固后倒置待用。（二）周圍環(huán)境中微生物的檢測在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)及平板上做如下實驗：1. 取一個培養(yǎng)皿，分區(qū)，做好標記，分別于培養(yǎng)基不同區(qū)內(nèi)接種實驗手套、書、餐卡、手表上的細菌（進行涂抹）2. 取一個培養(yǎng)基，分區(qū)，分別用未細的手指、自來水洗過的手指、洗手液洗過的手指、肥皂洗過的手指涂抹培養(yǎng)基將以上培養(yǎng)基用報紙包好倒置于37度培

3、養(yǎng)箱里培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果 （三）從土壤中分離微生物 1. 采土樣 選擇較肥沃的土壤，鏟去表層土，挖520cm深的土壤數(shù)十克，裝入已滅菌的牛皮紙袋，封好袋口，做好編號記錄，帶回實驗室共分離用。2. 制備土壤稀釋液稱取土樣1g，放入盛99ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，置搖床震蕩5分鐘使土壤均勻分散成為土壤懸液。用1ml的無菌吸頭從中吸取1ml土壤懸液，注入盛有99ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，吹吸三次，震蕩均勻，制成稀釋度為10-4的土壤溶液。逐次取1ml土壤溶液分裝到滅菌后的Eppendorf管中，發(fā)給每個小組備用。3. 涂布用一只新的無菌吸頭，由稀釋好的土壤稀釋液中吸取100微升，較

4、均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用無菌玻璃涂棒涂布均勻，一定要多涂幾遍，從概率角度來說，涂布時間越長越好（12分鐘），使細菌均勻分布，此步是實驗成功的關(guān)鍵。4. 培養(yǎng)將牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板倒置于37度溫箱中培養(yǎng)24小時，統(tǒng)計所長出的菌落數(shù)。5. 菌落計數(shù)培養(yǎng)24小時后，取出培養(yǎng)平板，算出同一小組幾個平板上的菌落的平均數(shù)，換算出土樣中的菌數(shù)。土壤中的細菌含量（個/g土壤）= 菌落平均數(shù)*10*稀釋倍數(shù)有較大片菌苔生長時，棄用，以無大片菌苔生長的培養(yǎng)皿計數(shù)；若成片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半，其余一半分布均勻，將此一半計數(shù)*2五、實驗結(jié)果（試驗品/菌落數(shù)）1. 手套 27 書 4 餐卡

5、 3 手表 222. 未洗的手指 34自來水洗過的手指 33洗手液洗過的手指 1肥皂洗過的手指 10243. 土壤30，18，12（*10*稀釋倍數(shù)=細菌含量）（三個樣本）六、實驗討論1. 無菌操作要在酒精燈旁進行，同時不能離火焰太近；培養(yǎng)皿的蓋要開小一點，以免空氣中雜菌混入；操作要迅速。2. 日常生活中吃剩的食物要盡量密封保存，如加保鮮膜，飯前要洗手3. 在鍋中蓋著鍋蓋可以避免空氣中雜菌的進入，且鍋內(nèi)環(huán)境不適宜細菌生長，因此不易壞，而在碗中食物沒有與空氣隔絕，且開放的環(huán)境與室溫適宜細菌生長，因此易變質(zhì)。4.由于未洗的手與用自來水洗過的手上菌落數(shù)基本相當，且都遠遠小于用肥皂洗過的手上的菌落數(shù)，

6、因此反復洗手對滅菌并無作用。對于實驗結(jié)果：手指的檢測結(jié)果數(shù)據(jù)相差較大，可能由于涂抹時用力不同導致接觸面積不同從而使菌落數(shù)不同，今后實驗時要注意盡量注意控制變量，在其他條件相同的情況下比較結(jié)果才更可靠。II 固定化酵母細胞發(fā)酵啤酒實驗與酸奶制作一、 實驗目的1. 了解固定化細胞技術(shù)的方法和意義2. 了解酵母發(fā)酵產(chǎn)生啤酒的過程3. 學習酸奶制作方法4. 了解純種發(fā)酵和傳統(tǒng)發(fā)酵在無菌操作方面的差別二、 實驗原理1. 固定化技術(shù)固定化技術(shù)就是將生物酶或細胞固定在一定的基質(zhì)上。由于在制定固定化細胞時，細胞和載體不起任何反應，細胞處于最佳生理狀態(tài)；同時固定化細胞有載體作為屏障，可避免外界不利因素的影響，因

7、此能迅速增值；增殖酵母凝集在凝膠表面形成濃厚的菌體層，因此酵母能迅速與基質(zhì)接觸，從而縮短周期，提高啤酒產(chǎn)量。2. 啤酒生產(chǎn)的過程麥芽制造麥芽汁的制造發(fā)酵過濾滅菌 3 常見的乳酸產(chǎn)品 凝固型酸奶 攪拌型酸奶 酸性乳飲料 酸奶功效：利于人體消化吸收，促進胃腸蠕動，乳酸機酸奶中的其他有機酸還能有效的改善腸道菌群，抑制病原菌繁殖； 降血壓、降膽固醇、增強心臟功能； 預防老年性骨質(zhì)疏松和乳腺炎，阻礙鉛吸收，減輕化療副作用，提高人體的免疫功能； 護膚，護發(fā)。三、 實驗材料與試劑1. 無菌滴管、無菌封口膜封好的100ml三角瓶2. 發(fā)酵培養(yǎng)基：100ml 8%10%的麥芽汁裝于250ml三角瓶中3. 2.5

8、%的海藻酸鈉溶液5ml，滅菌4. 1.5%的氯化鈣50ml，滅菌5. 0.9%的無菌生理鹽水，5ml6. 袋裝巴氏消毒的牛奶7. 啤酒菌種：啤酒酵母8. 酸奶菌種：市售酸奶四、 實驗步驟（一） 固定化酵母細胞發(fā)酵啤酒1. 菌體培養(yǎng)：將培養(yǎng)24小時的新鮮斜面菌種接種于三角瓶中培養(yǎng)2. 細胞固定化：在預熱至35度的海藻酸鈉溶液中加入2ml預熱至35度的酵母培養(yǎng)液，混合均勻，以無菌滴管緩慢而穩(wěn)定的滴入氯化鈣溶液中，即可得到直徑約3mm左右的凝膠珠。注意無菌操作。鈣化30分鐘左右。3. 固定化細胞發(fā)酵啤酒：在無菌玻璃棒幫助下倒掉氯化鈣溶液，將生理鹽水倒入制得的固定化好的酵母細胞的瓶子中，洗一次凝膠珠，

9、倒掉生理鹽水。將100ml發(fā)酵培養(yǎng)基倒入制得的固定化小球的瓶子里，用無菌封口膜封號瓶口。2028度靜置培養(yǎng)48小時，注意無菌操作。4. 放置在4度冰箱中24小時后，品嘗啤酒（二） 制作酸奶1. 取1000ml鮮奶攪拌煮沸消毒，加白糖60克攪拌溶解，乘熱分裝到干凈無菌的100ml三角瓶中，用無菌封口膜封號瓶口。讓其自然冷卻。用潔凈的封口膜將三角瓶口蓋住。冷卻至40度時，取市面上未經(jīng)滅菌的原味酸奶按5%比例倒入溶解好糖的牛奶中，搖勻。2. 或把市售經(jīng)巴氏消毒的奶分裝到干凈無菌的100ml三角瓶中，加入6%白糖，搖晃溶解，取市面上銷售的未經(jīng)過滅菌的原味酸奶按5%比例倒入溶解好糖的牛奶中，搖勻。（三角瓶可用一次性紙杯代替，封口膜可用白紙代替）3. 42度下，三角瓶（紙杯）靜置發(fā)酵培養(yǎng)68小時（如用紙杯盛牛奶，白紙封口，由于傳熱慢，需發(fā)酵1012小時）。牛奶變?yōu)椴涣鲃拥乃崮虝r，停止發(fā)酵。4. 置于4度冰箱中24小時以上，待冷卻老熟后便得到酸奶。這樣制備的酸奶在4度冰箱中保存，保質(zhì)期可達57天五、 實驗討論1. 我們釀制的啤酒氣味純正，酸奶味道鮮美，對結(jié)果很滿意。2. 固定