生物多肽工藝流程

1、.生物多肽工藝流程一、固相肽合成(1) 投料：樹(shù)脂加入固相合成儀，加入 DCM溶脹，抽干后加入 DMF洗滌，洗滌結(jié)束抽干備用。(2) 縮合：將氨基酸用一定體積的 DMF溶解，加入縮合劑活化后投入固相合成儀，補(bǔ)充 DMF至反應(yīng)濃度，攪拌反應(yīng)。(3) 脫除保護(hù)基：以 Kaiser 試劑檢測(cè)反應(yīng)程度，反應(yīng)結(jié)束后抽干溶劑，DMF洗滌，加入 PIP/DMF溶液脫除保護(hù)基， 以 Kaiser 試劑檢測(cè)反應(yīng)程度， 反應(yīng)完畢抽干溶劑， DMF洗滌，準(zhǔn)備加入下一個(gè)氨基酸。(4) 縮合循環(huán)：按照樹(shù)脂序列依次連接氨基酸，按照“脫保護(hù)洗滌 活化氨基酸投料縮合洗滌”步驟進(jìn)行縮合循環(huán)操作，按照氨基酸序列完成剩余 n 個(gè)氨

2、基酸的縮合。(5) 出料：合成結(jié)束之后用 IPA 和 DCM交叉洗滌樹(shù)脂，完成樹(shù)脂收縮收縮，出料至不銹鋼托盤(pán)。(6) 樹(shù)脂干燥：樹(shù)脂在真空干燥箱中室溫干燥， 干燥完畢稱重，計(jì)算收率。(7) 有機(jī)廢液回收，集中處理。(8) 清場(chǎng)：操作結(jié)束后操作人員及時(shí)清場(chǎng)。二、樹(shù)脂裂解(1) 配液：按照裂解液成分比例配置裂解液，并提前置冰柜中冷藏保存。(2) 投料：肽樹(shù)脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液，攪拌反應(yīng)。(3) 出料：裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹(shù)脂并以TFA洗滌。(4) 濃縮：裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫濃縮至小體積。.(5) 析出：濃縮后的反應(yīng)液傾入預(yù)冷的甲基叔丁基醚 ( 簡(jiǎn)稱醚 ) 中，攪拌使析出大

3、量固體。(6) 離心：濁液離心，并用預(yù)冷的醚洗滌。(7) 粗肽干燥：滌完成的粗肽轉(zhuǎn)至真空干燥箱中室溫干燥。(8) 有機(jī)廢液回收，集中處理。(9) 清場(chǎng)：操作結(jié)束后操作人員及時(shí)清場(chǎng)。三、多肽 HPLC純化(1) 溶解：操作人員將粗肽溶解，調(diào)節(jié) PH至工藝規(guī)定范圍。(2) 過(guò)濾：濾去粗肽溶液中不溶物，過(guò)濾 ACN和純化水。(3) 配制純化液：根據(jù)工藝內(nèi)容配制 A 相( 乙腈 ) 和 B 相( 水) 。(4) 純化：在制備型液相上進(jìn)行純化，分別接收流份。(5) 檢驗(yàn)及返工：對(duì)制備流份進(jìn)行檢查，合并合格流份，其他部分根據(jù)需要再次純化。(6) 廢棄流動(dòng)相按有機(jī)廢液回收，集中處理。四、濃縮過(guò)濾凍干(1) 濃縮：合并濾液旋蒸除去有機(jī)溶劑，有機(jī)廢液回收，集中處理。(2) 過(guò)濾：濃縮后水相無(wú)菌過(guò)濾。(3) 凍干：濾液置凍干機(jī)中，設(shè)定升溫程序凍干。(4) 出箱：出料、加內(nèi)包。五、質(zhì)量檢查、入庫(kù)工藝流程圖如下所示。.樹(shù)脂溶脹多肽去保護(hù)合成儀氨基酸活化偶聯(lián)裂解樹(shù)脂裂解多肽HPLC純化濃縮過(guò)濾凍干以此三步為一周期按多肽序列重復(fù)直至連接完成沉淀多太粗品離心機(jī)離心/ 過(guò)濾真空干燥干燥粗品粗品溶解制備液相HPLC純化半成品合并合