余甘子葉提取物總黃酮的含量測(cè)定_李舒

1、第13卷 第7期 2011 年 7 月JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)Vol. 13 No. 7 Jul . ，2011余甘子葉提取物總黃酮的含量測(cè)定李舒，鐘振國(guó)，賴進(jìn)科（廣西中醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530001）摘 要：目的：建立余甘子葉提取物中總黃酮含量的測(cè)定方法。方法：以槲皮素為對(duì)照品，利用紫外可見(jiàn)分光光度法通過(guò)測(cè)定吸光度計(jì)算余甘子葉提取物中總黃酮的含量。結(jié)果：槲皮素在2.37538g/mL范圍內(nèi)呈良好的線r=0.9999，測(cè)得余甘子葉提取物中總黃酮平均含量為51.60%。結(jié)論：紫外性關(guān)系，回歸方程為：A=0.0303C-0.01

2、82，可見(jiàn)分光光度法簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確、靈敏，可作為測(cè)定余甘子葉提取物中總黃酮含量的方法。關(guān)鍵詞：余甘子葉；總黃酮；含量測(cè)定(2011) 07- 中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-842X 0109- 02Determination of Total Flavonoids inthe Extracts from Leaves of Phyllanthus Emblica L.LI Shu，ZHONG Zhen-guo，LAI Jin-ke（Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001

3、，Guangxi，China）Objective：Established methods to measure the extract of total flavonoids in leaves of Abstract：Phyllanthus emblica L. Methods：Use Quercetin as the object of reference, applying the ultraviolet-visible spectrophotometry to calculate the extract of total flavonoids in leaves of Phyllant

4、hus emblica L. by measuring the absorbance. Results：Quercetin has a good linear relationship in the range of 2.37538g/mL, the regression equation is：A= 0.0303C-0.0182, r = 0.9999, the average content of total flavonoids in the extract of leaves of Phyllanthus emblica L. is 51.60%. Conclusions：The sp

5、ectrophotometry is simple, fast, accurate, quickly and can be used as a method to determine total flavonoids in the extracts from Leaves of Phyllanthus emblica L.total flavonoids；determinationextracts from leaves of phyllanthus emblica L；Key words：余甘子葉（Phyllanthus emblica L.）系大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠屬（

6、Phyllanthus）落葉小喬木或灌木的葉，余甘子樹在我國(guó)主要分布在福建、廣東、云南、貴州、四川、海南、廣西等省區(qū)，資源豐富。余甘子果自古以來(lái)被我國(guó)人民視為具有保健作用而加以利用，果實(shí)生食酸甜酥脆，初食時(shí)味酸澀，食用后回味甘甜爽口，故名余甘。余甘子味甘、酸、澀、性涼，具有化痰止咳，健胃消食，清熱生津，保肝解毒等功效。主治感冒發(fā)熱、咳嗽、咽喉痛、白喉、煩熱口干、消化不良、腹痛、慢性肝炎、高血壓病、肥胖癥、高脂血癥、濕熱性水腫和尿頻等。全世界約有17個(gè)國(guó)家的傳統(tǒng)藥物體系中使用了余甘子；在我國(guó)約有16個(gè)民族使用該藥，其中以1漢族和藏族等尤為習(xí)用。國(guó)內(nèi)部分省市早已開始了對(duì)余甘子資源的開發(fā)利用，福建、

7、廣東已有大面積經(jīng)濟(jì)栽培。余甘子是一味重要的傳統(tǒng)民族藥，己被載入1995年、2000年和2005年版中華人民共和國(guó)2。余甘子葉提取物是廣西中醫(yī)學(xué)院新近開藥典發(fā)的中藥五類新藥，本文報(bào)道余甘子葉提取物中總黃酮含量的測(cè)定方法。1 儀器與試藥1.1 儀器（美國(guó)安捷倫）。1.2 藥材來(lái)源藥材余甘子葉采自廣西邕寧縣，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院劉壽養(yǎng)教授鑒定。1.3 試劑槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品（含量測(cè)定用，廣西中醫(yī)藥研究院提供）；其余試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 供試品溶液的制備精密稱取余甘子葉提取物25mg，置100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻

8、度，搖勻，制成25g/mL溶液，作供試品溶液備用。2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品3.8mg，置100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得槲皮素對(duì)照品溶液（38g/mL）。2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇METTLER-AE100電子分析天平（瑞士METTLER公司）；Agilent8453紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1mL，分別加入0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色劑1mL，搖勻，放置5min顯色。精密吸取1mL甲醇溶液加入0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色劑1mL，搖勻，收稿日期：2011-01-22基金項(xiàng)目：廣西科學(xué)技術(shù)廳

9、項(xiàng)目（桂科基0639051；桂科攻0718002-2-1）作者簡(jiǎn)介：李舒（1984-），女，山西黎城人，碩士研究生，研究方向：中藥新藥的研究與開發(fā)工作。通訊作者：鐘振國(guó)（1956-），男，廣西陸川人，教授，博士后，研究方向：教學(xué)與中藥新藥的研究與開發(fā)工作。109遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào) 13卷放置5min顯色，作為空白對(duì)照，在200600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在272nm、451nm處均有較大吸收，供試品溶液在273nm處有最大吸收，而457nm處的吸光度較小，如圖1，故選用測(cè)定波長(zhǎng)為272nm。2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別放置0、10、30、60、90、120m

10、in，依2.3項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD為1.3%，表明樣品顯色后120min內(nèi)穩(wěn)定。2.7 重復(fù)性試驗(yàn)分別精密稱取同一批次的余甘子葉提取物樣品6份，依2.1項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并依2.3項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD為1.7%，表明本方法的重現(xiàn)性好。2.8 加樣回收率試驗(yàn)精密量取6份已知總黃酮含量的樣品溶液1.00mL，分別加入標(biāo)準(zhǔn)槲皮素對(duì)照品溶液1.00mL（38g/mL），加入0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色劑2mL，搖勻，顯色反應(yīng)5min，測(cè)定吸光度，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果分別精密加入一定量的槲皮素，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.97%，RSD為2.01。

11、1.槲皮素對(duì)照品，2.樣品。圖1 槲皮素和樣品在200600nm的掃描圖2.9 樣品總黃酮的含量測(cè)定2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液0、0.125、0.25、0.5、1mL，置于5mL容量瓶中，分別加入甲醇稀釋至刻度，搖勻。槲皮素濃度分別為：0、4.75、9.5、19.5、38g/mL。精密吸取其中一個(gè)濃度為4.75g/mL溶液2.5mL置于另一個(gè)5mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，配得對(duì)照品濃度為2.375g/mL。則配得槲皮素對(duì)照品濃度分別為0、2.375、4.75、9.5、19.5、38g/mL，從中各取1mL，分別加入0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色劑1mL，搖

12、勻，顯色反應(yīng)5min。以第一份溶液為空白，在紫外分光光度計(jì)272nm處檢測(cè)吸光度。以對(duì)照品槲皮素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2。得回歸方r=0.9999，線性范圍為程為：A=0.0303C-0.0182，2.37538g/mL。見(jiàn)表1。表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2.375 4.750 9.50019.50038.0000.0540.1230.2670.5661.130取3批余甘子葉提取物供試品溶液（25g/mL）各1mL，分別加入0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色劑1mL，顯色反應(yīng)5min，在272nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，代入回歸方程，得總黃酮平均含量為51.60%

13、，結(jié)果見(jiàn)表2。表2 余甘子葉提取物中總黃酮含量測(cè)定結(jié)果10.37312.9151.6420.37012.8151.243 討 論大多數(shù)黃酮類化合物的紫外吸收光譜由兩個(gè)主要的吸收帶組成，出現(xiàn)在300400nm之間的吸收帶稱為帶I，是由 B環(huán)桂皮酰基系統(tǒng)的電子躍遷引起的吸收，出現(xiàn)在240280nm之間的吸收帶稱為帶，是由A環(huán)苯甲?；到y(tǒng)的電子躍遷引起的吸收3。黃酮類化合加入鋁鹽可使黃酮類化合物與鋁離子形成穩(wěn)定的配合物，使帶I明顯紅移，吸光度明顯增大。而黃酮類化合物分子中的3-羥基、5-羥基或鄰二酚羥基易與金屬鹽試劑反應(yīng)，生成有色的金屬絡(luò)合物，因此可以通過(guò)比色法測(cè)定總黃酮含量4。通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較，發(fā)現(xiàn)0

14、.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色系統(tǒng)顯色靈敏，且吸收值穩(wěn)定，故采用0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液顯色系統(tǒng)。本文采用紫外可見(jiàn)分光光度法，以槲皮素為對(duì)照品，0.1mol/L三氯化鋁甲醇溶液為顯色劑，在200600nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，分別測(cè)定顯色后的槲皮素對(duì)照品及供試品最大吸收波長(zhǎng)，確定總黃酮測(cè)定波長(zhǎng)為272nm。在線性范圍為2.37538g/mL，r=0.9999，測(cè)得余甘子葉提取物總黃酮平均含量為51.60%。本法簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確、靈敏，可作為測(cè)定余甘子葉提取物中總黃酮含量的方法。參考文獻(xiàn) 1 邱德文，周濤.民族藥余甘子的本草藥學(xué)概況 J .貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，24 ( 3 )：3-6. 2 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部） S