平喘方藥作用機(jī)理的研究思路

1、平喘方藥作用機(jī)理的研究思路 08-05-31 16:43:00 作者：李寅超 趙宜紅編輯：studa20【關(guān)鍵詞】 哮喘；,中藥；,研究思路,摘要：探討中藥防治支氣管哮喘的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)。本文從三個(gè)方面論述了進(jìn)行該類方藥的研究思路，即闡明中醫(yī)哮病理論的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，為平喘方藥機(jī)理研究提供理論依據(jù)；結(jié)合當(dāng)前國(guó)內(nèi)外關(guān)于哮喘的研究動(dòng)態(tài)，采用先進(jìn)的科研手段和指標(biāo)進(jìn)行研究；結(jié)合中醫(yī)哮病的臨床特征，選擇合理的動(dòng)物模型和研究方法。闡明中藥防治支氣管哮喘的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，可豐富中藥學(xué)內(nèi)容，促進(jìn)中藥理論的發(fā)展和中藥現(xiàn)代化的進(jìn)程。關(guān)鍵詞：哮喘； 中藥； 研究思路 就作用強(qiáng)度而言，平喘方藥的作用，多數(shù)不

2、及西藥。但必須看到，中藥平喘方藥在支氣管哮喘的治療中，仍具有不可忽視的地位。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，呼吸系統(tǒng)疾病不能局限在呼吸器官的某一組織的研究上，尤其在支氣管哮喘發(fā)病機(jī)理上，一改過(guò)去認(rèn)為的“氣道平滑肌痙攣是哮喘發(fā)作的根本原因”的認(rèn)識(shí)，而把“慢性氣道變應(yīng)性炎癥”確認(rèn)為本病的主要病機(jī)1。因此，研究平喘方藥的藥效及其機(jī)理，除應(yīng)結(jié)合中醫(yī)證型、病因、病機(jī)、證治，按理法方藥四位一體的模式研究外，更應(yīng)針對(duì)證候的現(xiàn)代科學(xué)實(shí)質(zhì)進(jìn)行深入發(fā)掘，如對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)，對(duì)炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子的影響，對(duì)哮喘相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控等，以全面地說(shuō)明本類方藥的治療學(xué)機(jī)理。那么，如何深入開展這方面的研究呢？本人結(jié)合近年來(lái)有關(guān)平喘方藥機(jī)

3、理的研究進(jìn)展，茲管窺如下。1 闡明中醫(yī)哮病理論的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，為平喘方藥機(jī)理研究提供理論依據(jù) 支氣管哮喘屬中醫(yī)“哮病”范疇2。祖國(guó)醫(yī)學(xué)基于數(shù)千年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，強(qiáng)調(diào)“痰”在哮病中的作用，并認(rèn)為：痰的產(chǎn)生，責(zé)之于肺不能布散津液，脾不能運(yùn)輸精微，腎不能氣化水濕，以致津液凝聚成痰，伏藏于肺；或因情志抑郁，肝氣不舒，氣滯而成淤；或因正氣虛損，血行遲澀。氣虛、血淤、伏痰，蘊(yùn)結(jié)肺竅，成為發(fā)病之“夙根”?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)，“非發(fā)作期持續(xù)存在的氣道高反應(yīng)（BHR）和氣道變應(yīng)性炎癥（AAI）”為哮喘的基本病理特征，這應(yīng)為中醫(yī)哮病“宿疾伏痰”病機(jī)的現(xiàn)代科學(xué)解釋。從發(fā)病學(xué)上看，中醫(yī)“新邪感發(fā)引動(dòng)宿疾”而為“哮”，與西醫(yī)的“

4、當(dāng)致敏病人，再次接觸相同抗原而引起伴有哮鳴音的呼氣性呼吸困難”也是一個(gè)意思。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的復(fù)制哮喘豚鼠模型的方法3，先用4卵白蛋白生理鹽水免疫動(dòng)物，使其致敏（宿疾），2周后以相同抗原攻擊（霧化吸入）即可誘發(fā)具備人類哮喘基本特征的動(dòng)物模型。這與中醫(yī)“哮病”的“新邪感發(fā)引動(dòng)宿疾”理論相吻合。在治療學(xué)上，中醫(yī)辨證認(rèn)為哮喘是由肺脾腎正氣之虛導(dǎo)致氣、痰、淤阻滯氣道誘發(fā)。急發(fā)時(shí)祛邪為先，治其標(biāo)，緩解期補(bǔ)虛為要，固其本。治標(biāo)使氣調(diào)淤散痰消喘平，氣道通暢；固本以益養(yǎng)脾肺，滋補(bǔ)腎氣，杜絕病源，以達(dá)防病治病的目的。法以祛邪扶正、調(diào)理臟腑。祛邪有化痰 （溫化、清化）、理氣（理肺氣、調(diào)肝氣）、祛風(fēng)（祛外風(fēng)、息內(nèi)風(fēng)

5、）、活血之分；扶正以益氣養(yǎng)陰為法；調(diào)理臟腑則著重治肺兼治他臟，充分體現(xiàn)中醫(yī)治哮辨治求因，祛邪同時(shí)兼顧正氣的整體治療策略?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療支氣管哮喘主要用支氣管擴(kuò)張劑、抗白三烯藥、肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑、免疫抑制劑、基因療法等以控制癥狀，但其存在許多這樣那樣的問題，如選擇性強(qiáng)，單獨(dú)應(yīng)用難以奏效；長(zhǎng)期應(yīng)用，副作用較大，目前尚不能解決哮喘發(fā)病、發(fā)展等問題。運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)先進(jìn)的技術(shù)手段和方法，對(duì)我國(guó)傳統(tǒng)中藥平喘的作用性質(zhì)及機(jī)理進(jìn)行研究，不僅有助于闡明中醫(yī)哮病理論的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，又可進(jìn)一步促進(jìn)平喘方藥作用機(jī)理研究的深入。2 結(jié)合當(dāng)前國(guó)內(nèi)外關(guān)于哮喘的研究動(dòng)態(tài)，進(jìn)行平喘方藥機(jī)理研究支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)理是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界研

6、究的熱點(diǎn)。隨著現(xiàn)代生理、病理和分子生物學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展，也使人們對(duì)支氣管哮喘的病理本質(zhì)有了更深層次的認(rèn)識(shí)，加之研究手段的先進(jìn)化，更使得研究者易于從微觀水平對(duì)亞細(xì)胞、分子、基因水平進(jìn)行藥理作用的研究。從近幾年的關(guān)于哮喘的研究文獻(xiàn)來(lái)看，國(guó)內(nèi)關(guān)于平喘方藥的研究，與西醫(yī)學(xué)發(fā)展有同步趨勢(shì)。在一些研究熱點(diǎn)問題上，也有我們中醫(yī)藥的一席之地。2.1 關(guān)于哮喘發(fā)病機(jī)制的“TH2優(yōu)勢(shì)飄移”學(xué)說(shuō)及中藥對(duì) TH1/TH2細(xì)胞因子平衡的調(diào)節(jié)現(xiàn)代免疫學(xué)根據(jù) CD4T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同分為兩個(gè)功能亞群 TH1，TH2，TH1細(xì)胞通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫（或可誘發(fā) DTH，介導(dǎo)炎癥和組織損傷），TH2細(xì)胞則

7、通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子介導(dǎo)體液免疫（或可誘發(fā)速發(fā)型超敏反應(yīng)）。其中，TH1分泌的 IFN-等抑制 TH2的分化，TH2分泌的 IL-4，IL-10等抑制 TH1的分化增殖，形成了依賴細(xì)胞因子的、存在于體液和細(xì)胞免疫之間的交互的負(fù)反饋機(jī)制，在機(jī)體的免疫反應(yīng)中起中心調(diào)節(jié)作用。人們近年對(duì)哮喘的研究證實(shí)，在氣道變應(yīng)性炎癥中存在著 TH2優(yōu)勢(shì)的免疫應(yīng)答4。IL-12是促進(jìn) TH1分化的主要細(xì)胞因子。哮喘患者 IL-12相對(duì)減少，TH1/TH2失衡，而向 TH2飄移，TH2亞群數(shù)目增多、功能亢進(jìn)，TH1亞群數(shù)目相對(duì)減少，功能減退，而且 IFN減少，IL4和 IgE生成增多。TH2型細(xì)胞因子如、GMCSF等直

8、接參與調(diào)節(jié)哮喘氣道炎癥反應(yīng)中的嗜酸性粒細(xì)胞 (EOS)的活化與浸潤(rùn)。哮喘患者血清、支氣管肺泡灌洗液 (BALF)、支氣管黏膜中存在以 IL4、IL5升高為主的TH2優(yōu)勢(shì)的免疫應(yīng)答，且IL4/IFN、IL5 水平升高與哮喘嚴(yán)重程度有關(guān)，并隨有效治療下降5，6。因此，調(diào)節(jié) TH1/TH2細(xì)胞因子平衡是控制哮喘發(fā)作的重要環(huán)節(jié)。見圖1。壯健等7通過(guò)實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)中藥消喘膏貼敷后,哮喘豚鼠 BALF中細(xì)胞總數(shù)和 EOS數(shù)量減少, BALF上清液中 IL4水平下降，IL4/IFNC比值也相應(yīng)降低，同時(shí)其引喘潛伏期也有所延長(zhǎng)，說(shuō)明中藥消喘膏貼敷治療哮喘是通過(guò)調(diào)節(jié)TH1/TH2平衡而起作用的。薛漢榮等8用益氣護(hù)

9、衛(wèi)湯（ig）分別對(duì)哮喘豚鼠和哮喘小鼠BALF中 TH1，TH2細(xì)胞因子水平調(diào)節(jié)作用的研究發(fā)現(xiàn)：模型組 IL4水平、IL4/IFN比值明顯高于正常組（P0.01）。與模型組比較，益氣護(hù)衛(wèi)湯組IL-4水平、IL4/IFN比值明顯降低（P0.01），IFN水平明顯升高（P0.05）。結(jié)論：益氣護(hù)衛(wèi)湯通過(guò)促進(jìn)TH1細(xì)胞分泌IFN，抑制 TH2細(xì)胞分泌 IL4，達(dá)到調(diào)節(jié)TH1/TH2平衡，抑制哮喘的目的。2.2 IgE和肥大細(xì)胞依賴的 T淋巴細(xì)胞調(diào)控機(jī)制及中藥對(duì)該機(jī)制的影響變應(yīng)性哮喘從發(fā)作階段上可分為早期相和晚期相反應(yīng)兩類，前者發(fā)作快，消失也快，主要是由 IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞脫顆粒釋放胺類介質(zhì)

10、引發(fā)。后者發(fā)生慢，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，主要是由于早期相反應(yīng)后，需經(jīng)細(xì)胞合成脂類介質(zhì)時(shí)相方可引發(fā)，在該時(shí)相支氣管黏膜出現(xiàn)以 EOS浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)。見圖2。MBP為主要大性蛋白 EPO為嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶PAF為血小板活化因子圖1 細(xì)胞因子參與變應(yīng)性哮喘調(diào)節(jié)示意圖（略）圖2 變應(yīng)性哮喘發(fā)生機(jī)制示意圖（略） 大量的研究證實(shí)，有許多中藥抑制B細(xì)胞活化，降低 IgE的含量，抑制炎癥介質(zhì)釋放等哮喘發(fā)作的多個(gè)環(huán)節(jié)，抑制 AAI和 BHR，達(dá)到控制或減輕速發(fā)型或遲發(fā)型哮喘的目的。沈其昀等9，設(shè)治療組和對(duì)照組，研究雷公藤多苷（GTT）對(duì)人靜脈血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）培養(yǎng)上清液中 SCD23的含量在治療前后的變化

11、，結(jié)果顯示，GTT治療前 PBMC上清液中 SCD23均值顯著高于正常對(duì)照組，提示哮喘患者B細(xì)胞處于激活狀態(tài)。GTT治療后，SCD23含量顯著降低，說(shuō)明 GTT能明顯抑制 B細(xì)胞活化和 IgE的合成。林曉霞等10研究發(fā)現(xiàn)，人工發(fā)酵蟲草菌粉預(yù)先ig給藥，可降低致敏豚鼠抗原攻擊后肺阻力（RL）增高和肺動(dòng)態(tài)順應(yīng)性（Ddyn）。對(duì)致敏大鼠抗原攻擊后的氣道 EOS的聚集反應(yīng)有抑制作用。提示人工蟲菌粉對(duì)豚鼠變態(tài)反應(yīng)性哮喘模型速發(fā)相和大鼠變態(tài)反應(yīng)性哮喘模型的遲發(fā)相有明顯的保護(hù)作用，認(rèn)為，蟲草菌粉可用于哮喘緩解期的治療。2.3 EOS在哮喘發(fā)病中的作用及中藥對(duì)EOS生成活化的影響。EOS在氣道的浸潤(rùn)是支氣管哮

12、喘的基本病理特征，故哮喘又稱為“慢性嗜酸性粒細(xì)胞性支氣管炎”1 IL-5經(jīng)由活化的 EOS分泌產(chǎn)生，反過(guò)來(lái)又特異地控制著 EOS的分化、趨化和激活的過(guò)程。EOS除釋放多種炎癥介質(zhì)外，尚能產(chǎn)生嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白（ECP）等多種毒性蛋白。已知 EOS是所有參與變應(yīng)性炎癥的細(xì)胞中合成 LTS能力最強(qiáng)的細(xì)胞，LTS使平滑肌收縮的能力比組胺強(qiáng)1000倍。PAF具有強(qiáng)烈的趨化 EOS能力。ECP等毒性蛋白可損傷氣道內(nèi)的神經(jīng)末梢，引起氣道神經(jīng)超敏感。因此抑制 EOS生成活化，促進(jìn) EOS亡，對(duì)于治療哮喘有著十分重要的意義。 吳銀根等11通過(guò)對(duì)經(jīng)驗(yàn)方“咳喘落”（附子、麻黃、細(xì)辛、黃芩、虎耳草）治療哮喘模型豚鼠

13、的實(shí)驗(yàn)研究表明，哮喘豚鼠 BALF中 EOS數(shù)和低密度EOS數(shù)及百分比均恢復(fù)到正常水平，血漿 IL5及 ECP水平也降至正常，提示咳喘落在一定環(huán)節(jié)上可抑制 EOS在氣道內(nèi)的聚集，活化，抑制炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕氣道炎癥，發(fā)揮平喘功能。 刑向暉等12通過(guò)對(duì)大鼠造模發(fā)現(xiàn),模型組血和 BALF中 EOS明顯高于正常組(P0.01)；經(jīng)中藥平喘方治療后，治療組與對(duì)照組(氨茶堿組) EOS明顯下降(P0.05)，尤其是 BALF中 EOS數(shù)與正常組比較差異無(wú)顯著性(P0.05)；說(shuō)明中藥平喘方治療的作用之一是通過(guò)減少 EOS來(lái)實(shí)現(xiàn)的。別曉東等13以 EOS凋亡和自由基為指標(biāo)，研究觀察了經(jīng)驗(yàn)方（蟲草、玉

14、竹、鉤藤、地龍、防風(fēng)等組成）對(duì)哮喘豚鼠模型的療效。結(jié)果表明，模型組豚鼠全血 GSHPX及紅細(xì)胞 SOD的含量明顯低于中藥組，而血漿 MDA含量明顯高于中藥組，且中藥組 EOS凋亡百分比均較正常組和模型組顯著增高。可見，該經(jīng)驗(yàn)方具有清除自由基，抑制 EOS凋亡的作用。郭曉明等14，設(shè)哮喘組、雷公藤甲素治療組（處理組）和對(duì)照組，研究雷公藤甲素分別對(duì)哮喘豚鼠外周血和肺細(xì)胞中 IL5，GMCSFmRNA，CD4，CD8表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：哮喘組淋巴細(xì)胞 IL5、GMCSFmRNA的表達(dá)均明顯高于處理組和對(duì)照組（P0.01），而處理組和對(duì)照組間比較無(wú)顯著差異，哮喘組CD4的表達(dá)明顯高于對(duì)照組和處理組（

15、P0.01），CD8的表達(dá)低于對(duì)照組和處理組（P0.05）。結(jié)論：雷公藤甲素是通過(guò)抑制外周血和肺細(xì)胞中CD4、IL5、GMCSFmRNA的表達(dá)，增強(qiáng)CD8表達(dá)，調(diào)節(jié)CD4/CD8的平衡而發(fā)揮平喘作用的。2.4 哮喘肺循環(huán)中“炎細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附瀑布”及中藥對(duì)該機(jī)制的影響支氣管哮喘是一種由多種炎細(xì)胞如 EOS、PMN、M參與的慢性氣道炎癥性疾病，CAMS介導(dǎo)的各種炎細(xì)胞黏附和跨內(nèi)皮遷移（即“炎細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附瀑布”）是引起支氣管哮喘的關(guān)鍵性第一步。其中 Ig超家族的 ICAM1、VCAM1，整合素家族的VLA4（極晚期抗原）和LFA-1（I淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原），選擇素家族的L-選擇素等，在此過(guò)程中發(fā)揮重要作用。ICAM1、LFA1互為配體，介導(dǎo)循環(huán)中各種炎細(xì)胞與血管內(nèi)皮的黏附、遷移。VCAM1、VLA4互為配體，介導(dǎo)循環(huán)中EOS與血管內(nèi)皮的黏附、遷移19。見圖3。圖3 哮喘肺循環(huán)中“炎細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附瀑布”19（略）因此，研究尋求中藥方藥中能夠抑制黏附分子表達(dá)、阻斷“炎細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附瀑布”的有效單體或復(fù)方，有望成為治療哮喘的新途徑。方向明等15，臨床采用體外血栓、血小析兩用儀和白細(xì)胞變形功能測(cè)定儀，測(cè)白細(xì)胞黏附率（LAR）和白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)（LFI），分別作為黏附功能（LAF）和白細(xì)胞變形能力（LD）的指標(biāo)；采用 ELISA法測(cè)定