節(jié)風(fēng)藥材采收部位與最佳采收期的研究

1、節(jié)風(fēng)藥材采收部位與最佳采收期的研究    【摘要】     目的確定腫節(jié)風(fēng)藥材的采收部位與最佳采收期。方法分別將采得的不同季節(jié)腫節(jié)風(fēng)藥材分為根、莖、葉3部分，以60%乙醇為溶劑回流提取。采用高效液相色譜法測定不同季節(jié)腫節(jié)風(fēng)藥材各部位中反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量；以紫外分光光度法測定其總黃酮的含量。結(jié)果腫節(jié)風(fēng)藥材葉中總黃酮含量最高，莖中反丁烯二酸含量最高，根中異嗪皮啶含量最高，綜合考慮3種有效成分，以6月、8月含量最高。結(jié)論6月、8月份為腫節(jié)風(fēng)藥材的最佳采收期，以全株采收為宜。   &#

2、160; 【關(guān)鍵詞】  腫節(jié)風(fēng) 藥效成分 采收期 采收部位    腫節(jié)風(fēng)為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb.) Nakai的干燥全草，又名九節(jié)茶、接骨木等，主要分布于我國華南、華東、西南各省區(qū)，在朝鮮、日本、東南亞和印度也有分布。中國藥典2005 年版（部）中記載其具有清熱涼血、活血消斑、祛風(fēng)通絡(luò)的功效，可用于治療血熱紫斑、紫癜、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷等癥1?，F(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，腫節(jié)風(fēng)具有抗菌消炎、抗腫瘤等作用，已制成各種劑型用于各種炎癥和癌癥的輔助治療。其主要藥效成分為反丁烯二酸、異嗪皮啶和黃酮類化合物2

3、。腫節(jié)風(fēng)中反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量可采用高效液相色譜法進(jìn)行測定3，4，黃酮類化合物可通過紫外分光光度法測定5。本實(shí)驗(yàn)采取3種藥效成分同時(shí)考察的方法，對不同生長季節(jié)的腫節(jié)風(fēng)以及不同部位藥用價(jià)值進(jìn)行評估，為腫節(jié)風(fēng)藥材的采收提供依據(jù)。1   儀器與試藥1.1   儀器 Waters高效液相色譜儀（Waters515泵，Waters 2487紫外檢測器），恒奧HT-230A柱溫箱（天津恒奧公司），YH3000色譜工作站（廣州逸海公司）。TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）。1.2   試藥 反丁烯二酸對照品（批

4、號(hào)：1541-200001），異嗪皮啶對照品（批號(hào)：110837-200304），蘆丁對照品（批號(hào)：100080-200）購于中國藥品生物制品檢定所。乙腈（色譜純，Merck公司），磷酸（色譜純，F(xiàn)luka公司），Mili-Q超純水，其余試劑均為分析純。    腫節(jié)風(fēng)藥材采于廣西東蘭縣腫節(jié)風(fēng)藥材GAP基地，自2007-052007-12每月采全株樣，根、莖、葉分開，60下烘干。2   方法與結(jié)果2.1  對照品溶液的制備2.1.1  總黃酮對照品溶液精確稱取蘆丁對照品20 mg，置于50 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻

5、度，搖勻，制成濃度為0.4 mg/ml蘆丁對照品溶液5。2.1.2  反丁烯二酸與異嗪皮啶對照品溶液精確稱取反丁烯二酸對照品7.5 mg，異嗪皮啶對照品1.8 mg，置25 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成混合對照品溶液( 含反丁烯二酸0.3 mg/ml，異嗪皮啶0.072 mg/ml) 。2.2  供試品溶液的制備準(zhǔn)確稱取干燥，粉碎，過3號(hào)篩的腫節(jié)風(fēng)藥材根、莖、葉粉末各0.5 g，置250 ml燒瓶中，按130的料液比分別加入60%乙醇回流提取1 h，過濾后重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓濃縮至干，以蒸餾水溶解殘物，定容至25 ml，備用。2.3 

6、 總黃酮測定波長的選擇取蘆丁對照品溶液0.5 ml，置10 ml容量瓶中，用30%的乙醇補(bǔ)充至5 ml，加入5%NaNO2溶液0.3 ml，放置5 min，加入10%Al(NO3)3溶液0.3 ml，6 min后加入4%NaOH溶液2.0 ml，此時(shí)溶液顯紅色，混勻后以30%乙醇稀釋至刻度，靜置10 min后于紫外分光光度計(jì)下進(jìn)行全波長光譜掃描，在500 nm處有最大吸收值，因此以500 nm作為總黃酮的檢測波長。2.4  色譜條件色譜柱為Agilent Hypersil ODS C18柱（4.6 mm×250 mm，5 m）；流動(dòng)相A為0.05%磷酸水溶液；流動(dòng)相B為乙腈

7、；檢測波長210 nm；柱溫35。梯度條件08 min流動(dòng)相B 5%；830 min B5%12%；3045 min B12%19%。經(jīng)測試，樣品峰分離度在1.5以上，反丁烯二酸理論塔板數(shù)在5 000以上，異嗪皮啶理論塔板數(shù)在10 000以上。2.5  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.5.1  總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線分別取蘆丁對照品溶液0，0.25，0.5，0.75，1.25，1.5 ml于10 ml的容量瓶中，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，于紫外分光光度計(jì)下測定吸光值，檢測波長500 nm。以標(biāo)樣濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y=9.497 5X+0.0413, r=0.

8、999 9，線性范圍：0.01 0.06 mg/ml。2.5.2  反丁烯二酸與異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)曲線精確吸取體積為0.04，0.2，0.4，2，4，6，8 ml的反丁烯二酸與異嗪皮啶混合對照品溶液于25ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，定容后以0.45 m微孔濾膜過濾，精確吸取20 l，注入高效液相色譜儀測定。以進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得反丁烯二酸和異嗪皮啶的回歸方程為：Y=6 966 848.636 2X+702 737.286 7，r=0.999 6；Y=14 391 526.525 4X+221 002.013 3，r=0.999 8；線性范圍：反丁烯二酸

9、0.024 4.8 g；異嗪皮啶0.0061.152 g。2.6  方法學(xué)考察2.6.1  總黃酮方法學(xué)考察    精密度實(shí)驗(yàn)：取腫節(jié)風(fēng)藥材全株樣品，按“2.2”項(xiàng)下所述方法制備樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法處理并測定500 nm處吸光值，連續(xù)測量5次，以總黃酮含量計(jì)算，RSD為2.49%，表明該法精密度良好。    重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同一批藥材全株樣品6份, 按“2.2”項(xiàng)下所述方法法制備樣品溶液，按“2.4”項(xiàng)下所述方法進(jìn)行測定，以總黃酮含量計(jì)算，RSD =2.53 %，表明方法的重復(fù)性良好。  

10、;  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一批藥材全株樣品，按“2.2”項(xiàng)下所述方法法制備樣品溶液，3 h內(nèi)每隔30 min以“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，其結(jié)果RSD =1.58 %，表明樣品在3 h內(nèi)穩(wěn)定。    加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取已知含量的腫節(jié)風(fēng)樣品，加入一定量對照品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后測定吸光值，得總黃酮的平均回收率為101.8%, RSD=3.44%。2.6.2  反丁烯二酸與異嗪皮啶方法學(xué)考察    精密度實(shí)驗(yàn)：取腫節(jié)風(fēng)藥材全株樣品，按“2.2”項(xiàng)下所述方法制備樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次

11、，記錄峰面積比值，反丁烯二酸和異嗪皮啶的RSD值分別為1.43%和2.35%，表明儀器的精密度好。    重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同一批腫節(jié)風(fēng)藥材樣品 6 份，按“2.2”項(xiàng)下所述方法制備樣品溶液，分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，反丁烯二酸RSD = 4.64 %；異嗪皮啶RSD = 4.13%，表明方法的重復(fù)性較好。    穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取腫節(jié)風(fēng)藥材樣品溶液在0，2，4，8，24，48 h 分別進(jìn)樣分析，反丁烯二酸和異嗪皮啶的RSD分別為1.93%和3.02%，表明樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定。    加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取已

12、知含量的腫節(jié)風(fēng)藥材樣品，加入一定量對照品，按“2.2”項(xiàng)下制備樣品溶液的方法處理，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，測得反丁烯二酸的平均回收率為101.8% , RSD = 3.53 %；異嗪皮啶的平均回收率為99.9%，RSD=3.44%。2.7  樣品中有效成分含量的測定2.7.1  總黃酮含量的測定精確吸取0.5 ml樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法依次進(jìn)行測定。以吸光值代入回歸方程進(jìn)行計(jì)算。 各月份不同部位的總黃酮含量見表1。表1  512月份腫節(jié)風(fēng)藥材不同部位總黃酮含量（略）2.7.2  反丁烯二酸與異嗪皮啶含量的測定精確吸取樣品溶液20 l注入液相色

13、譜儀，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定（對照品與樣品色譜圖見圖12），以峰面積代入回歸方程計(jì)算。各月份不同部位的反丁烯二酸與異嗪皮啶含量見表23。圖1  混合對照品溶液色譜圖（略）圖2  腫節(jié)風(fēng)樣品溶液色譜圖（略）表2  512月份腫節(jié)風(fēng)藥材不同部位反丁烯二酸含量（略）表3  512月份腫節(jié)風(fēng)藥材不同部位異嗪皮啶含量（略）3  討論3.1  腫節(jié)風(fēng)藥材不同部位的有效成分含量對比表13中分別列出了腫節(jié)風(fēng)不同部位總黃酮、反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量。將表中數(shù)據(jù)進(jìn)行橫向?qū)Ρ瓤煽闯觯鞑课坏目傸S酮含量葉根莖，反丁烯二酸含量莖葉根，而異嗪皮啶含量

14、根莖葉。上述3種有效成分分別在葉、莖、根中含量最高，因此為達(dá)到最佳的藥用效果，腫節(jié)風(fēng)的采收應(yīng)以全草采收為宜，部分采收則容易造成某種成分的缺失。3.2  不同采收期腫節(jié)風(fēng)藥材的有效成分含量對比表13中分別列出了腫節(jié)風(fēng)不同部位總黃酮、反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量。將表中數(shù)據(jù)進(jìn)行縱向?qū)Ρ瓤煽闯?，腫節(jié)風(fēng)各個(gè)部位有效成分的含量在不同的生長季節(jié)差異甚大：總黃酮的最高含量出現(xiàn)在8月葉中，反丁烯二酸最高含量出現(xiàn)在10月莖中，異嗪皮啶最高含量則出現(xiàn)在6月根中。各有效成分的含量最高點(diǎn)時(shí)間不同，因此在采收時(shí)需對此進(jìn)行分析，選取3種成分含量均較高的時(shí)間進(jìn)行采收。    根據(jù)“3.

15、1”項(xiàng)下所述，腫節(jié)風(fēng)藥用以全草為宜，若同時(shí)考慮總黃酮、反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量，以6月、8月份腫節(jié)風(fēng)中含量最高。其他生長季節(jié)內(nèi)的腫節(jié)風(fēng)藥材，雖然有某種單一有效成分含量較高的情況，但其他有效成分含量卻偏低。因此，腫節(jié)風(fēng)藥材的最佳采收期為6月和8月。    本實(shí)驗(yàn)以512月份腫節(jié)風(fēng)藥材為材料，對不同生長季節(jié)的腫節(jié)風(fēng)藥材不同部位3種有效成分（總黃酮、反丁烯二酸、異嗪皮啶）含量進(jìn)行了測定。通過各不同生長期的有效成分含量對比可確定，6月、8月為腫節(jié)風(fēng)藥材的最佳采收期，此時(shí)腫節(jié)風(fēng)藥材的總黃酮、反丁烯二酸以及異嗪皮啶含量都很高；通過根、莖、葉3個(gè)部位的有效成分含量對比得出，腫節(jié)風(fēng)根中異嗪皮啶含量最高，莖中反丁烯二酸含量最高，葉中總黃酮含量最高，各有效成分在不同部位的分布均不平衡，因此腫節(jié)風(fēng)的采收應(yīng)以全株采收為宜，這樣可保證采得的藥材中含有全部的有效成分，從而達(dá)到最佳的藥用效果。    【參考文獻(xiàn)】  1 國家藥典委員會(huì). 中國藥典，部. S. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.2