血球計(jì)數(shù)板使用方法

1、血球計(jì)數(shù)板介紹用優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成。每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一支持柱，將特制的專(zhuān)用蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池畫(huà)有長(zhǎng)、寬各3.0mm的方格，分為9個(gè)大方格，每個(gè)大格面積為1.0mm.容積為0.1mm（ul），其中，中央大方格用雙線分成25個(gè)中方格，位于正中及四角5個(gè)中方格是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個(gè)小方格。四角的4個(gè)大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個(gè)中方格。根椐國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定，大方格每邊長(zhǎng)度允許誤差為±1%。計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為16個(gè)大方格（大方格用三線隔開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小方格；

2、另一種是一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成25個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400個(gè)小方格組成。 計(jì)數(shù)區(qū)邊長(zhǎng)為1mm，則計(jì)數(shù)區(qū)的面積為lmm2，每個(gè)小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個(gè)小方格的體積為1/4000mm3。使用方法1視待測(cè)菌懸液濃度，加無(wú)菌水適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄐ泵嬉话阆♂?00倍），以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。2取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。3將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一

3、小滴（不宜過(guò)多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上（不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高），然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。4靜置片刻，使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上，不再隨液體漂移。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。5計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)大方格組成，按對(duì)角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)大方格（即100小格）的菌數(shù)。如果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上

4、述四個(gè)大方格外，還需數(shù)中央1個(gè)大方格的菌數(shù)（即80個(gè)小格）；（或斜對(duì)角線的五個(gè)方格-見(jiàn)圖用紅色框標(biāo)記的中方格）。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記，在計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格，本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中。見(jiàn)右圖：即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個(gè)。6對(duì)于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大，否則應(yīng)重新操作），按公式計(jì)算出每mL（g）菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。7測(cè)數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。計(jì)數(shù)公式1、16格×25格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：細(xì)胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)/100×400×10000×稀釋倍數(shù)1、25格×16