交叉配血知識(shí)

1、12022-3-822022-3-8nRBC表面有豐富唾液酸，在中性環(huán)境中帶負(fù)電荷，互相分離?？赏ㄟ^縮短細(xì)胞間距，以及在致敏細(xì)胞上的抗體之間搭橋使RBC凝集。F凝集一般為二個(gè)步驟 抗體吸附于RBC抗原上成為致敏狀態(tài) 致敏RBC凝集形成塊狀32022-3-8標(biāo)本的采集及要求標(biāo)本的采集及要求一一血型血型二二不規(guī)則抗體的篩選不規(guī)則抗體的篩選 三三交叉配血交叉配血四四一一二三四42022-3-8標(biāo)本的采集與要求標(biāo)本的采集與要求52022-3-81.1.標(biāo)本要新鮮標(biāo)本要新鮮: : F 前三個(gè)月內(nèi)輸血或妊娠:配血試驗(yàn)標(biāo)本抽取48h,避免因回憶反應(yīng)產(chǎn)生的抗體漏檢。F 新近的輸血或妊娠：可引起意外抗體迅速出現(xiàn)

2、,如果對(duì)病人的輸血史或人身史不明,使用的標(biāo)本必須是輸血前48h內(nèi)抽取的。F 血量約為5ml 。2.2.使用右旋糖酐、使用右旋糖酐、pvppvp等：等：F 治療前抽取標(biāo)本備用,防止RBC緡錢狀凝集的干擾標(biāo)本要具有代表性，標(biāo)本要具有代表性，能代表患者目前狀況能代表患者目前狀況62022-3-83.243.24小時(shí)內(nèi)輸了小時(shí)內(nèi)輸了12u12u血血后：F 可輸注未經(jīng)交叉配血的ABO、RH同型的血液,因?yàn)樵冀徊媾溲玫难逡巡荒艽砘颊哐宓那闆r。 4.4.防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生：F 溶血標(biāo)本一般不使用,因?yàn)檠逯杏坞x血紅蛋白可掩蓋在輸血前實(shí)驗(yàn)中抗體反映引起的溶血5 5.

3、 .標(biāo)本標(biāo)識(shí)標(biāo)本標(biāo)識(shí)：唯一性標(biāo)識(shí)無誤、與輸血申請(qǐng)單一致6.6.使用血漿標(biāo)本：使用血漿標(biāo)本：應(yīng)排除纖維蛋白原的干擾7.7.輸血后標(biāo)本保存：輸血后標(biāo)本保存：2-8,至少一周。72022-3-8血血 型型1. 1. 紅細(xì)胞懸液的配制紅細(xì)胞懸液的配制2. 2. 離心力的標(biāo)準(zhǔn)離心力的標(biāo)準(zhǔn)3. 3. 離心后結(jié)果觀察離心后結(jié)果觀察4. 4. 鹽水試驗(yàn)鹽水試驗(yàn)5. 5. 正反定型結(jié)果不一致原因及處理正反定型結(jié)果不一致原因及處理82022-3-81. 1.紅細(xì)胞懸液的配制紅細(xì)胞懸液的配制F 洗滌洗滌 洗滌目的: 去除RBC表面物質(zhì)少量的血漿蛋白已溶解紅細(xì)胞的基質(zhì)（有競(jìng)爭(zhēng)抗體的作用）抗凝劑（有抗補(bǔ)體的作用） 至少

4、要用大量生理鹽水洗一次F 濃度濃度2%：一般用于抗體效價(jià)的測(cè)定5%：一般用于血型鑒定、配血試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)等大多數(shù)血型血清學(xué)試驗(yàn)10%：一般用于測(cè)定抗體的親和力試驗(yàn)92022-3-82. 2. 離心力的標(biāo)準(zhǔn)離心力的標(biāo)準(zhǔn) F 不同規(guī)格離心機(jī)，力矩不同，統(tǒng)一離心轉(zhuǎn)速，但沒有統(tǒng)一離心力。 離心轉(zhuǎn)速換算公式： RCF = 1.118 10-5 (rpm) 2 R (cm)3. 3. 離心后結(jié)果觀察注意事項(xiàng)離心后結(jié)果觀察注意事項(xiàng)F 將試管成30-45角拿在手上，細(xì)胞扣朝上，手腕輕輕用力，用液體去沖細(xì)胞扣。F 切不可用力使勁搖試管，那樣凝集顆粒會(huì)被搖散，弱凝集則會(huì)誤判為陰性。 - 細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試管壁流

5、下+細(xì)胞成塊狀或成齒狀沿試管壁流下102022-3-8常用的記錄符號(hào)及所示的凝集強(qiáng)度4+一個(gè)大的凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞3+數(shù)個(gè)大凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞2+許多小凝集塊,肉眼可見,大小均勻,背景基本透明,有游離細(xì)胞1+很小的凝集塊,肉眼可見,背景不透明,游離細(xì)胞較多,需要用顯微鏡觀察W+ 微小凝集塊,肉眼很難看清,背景混濁,要用顯微鏡觀察O無凝集,無溶血,全部是游離細(xì)胞,要用顯微鏡觀察PH 部分溶血H完全溶血WF 混合外觀112022-3-8 4. 4.鹽水試驗(yàn)鹽水試驗(yàn)F 多采用立即離心法n 正確的操作是：RBC懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)果反應(yīng)時(shí)間過長而延誤離心對(duì)ABO血型系統(tǒng)的

6、抗體檢出影響室溫2分鐘后離心可能使3+4+的凝集減弱凝集減弱為0+ 1+,并有溶血室溫5分鐘后離心原有凝集可能消失凝集可能消失, ,并有溶血并有溶血有的標(biāo)本延遲離心原有凝集會(huì)變?yōu)榧炔荒膊蝗苎炔荒膊蝗苎?難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合。（多發(fā)生在O型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細(xì)胞反應(yīng)的試驗(yàn)中,發(fā)生率為2%-3%.發(fā)生機(jī)制是反應(yīng)強(qiáng)的抗A、抗B和抗原強(qiáng)度強(qiáng)的A、B抗原作用,補(bǔ)體C1在有Ca2+存在的條件下,固定到紅細(xì)胞膜上,妨礙了紅細(xì)胞的凝集,進(jìn)一步可能引起溶血） 解決的方法： A:血清與紅細(xì)胞混合后立即離心。 B:用血漿或滅活的血清做試驗(yàn) C:用EDTA鹽水配制紅細(xì)胞懸液, D:稀釋血清

7、122022-3-8F加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；F抗體和抗原的比例一般為2：1。F必須要做正反定型實(shí)驗(yàn)才能確定血型。F正定型試驗(yàn)有條件可加做抗AB（檢測(cè)弱A、弱B ）F反定型一定要加做O細(xì)胞,（發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體）132022-3-85.5.正反定型結(jié)果不一致正反定型結(jié)果不一致F原因：技術(shù)、受檢紅細(xì)胞或血清本身（1 1）技術(shù)和管理錯(cuò)誤）技術(shù)和管理錯(cuò)誤L器材不潔 假陽L試劑污染或不足 假陽L標(biāo)本和試劑搞錯(cuò) 假陽 、假陰L離心過度或不足 假陽 、假陰L結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤 假陽 、假陰L漏加試劑 假陰L陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別假陰142022-3-8（2 2）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)

8、）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。（3 3）紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)）紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。（4 4）血清異常）血清異常 華通膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定性結(jié)果（5 5）紅細(xì)胞致敏）紅細(xì)胞致敏 在含高蛋白介質(zhì)試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性（6 6）近期曾異型輸血）近期曾異型輸血，病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。 （7 7）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱 某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，檢出困難。（8 8

9、）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象 RBC因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。152022-3-8（9 9） 獲得性類獲得性類B B 由于G-桿菌作用，RBC可獲得“類B”活性（1010）異常血漿蛋白）異常血漿蛋白 病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例異常和高濃度的FIB等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象（1111）近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換血漿置換治療，影響抗體效價(jià)，造成反定型困難。（1212）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生 受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，如自身抗I，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。（1313）低丙種球蛋白血癥）低丙種球蛋白血癥 可能會(huì)因免疫球

10、蛋白水平全面下降使血清定型時(shí)不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)。 （1414）藥物等因素）藥物等因素 藥物、右旋糖酐等靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞聚集而類似凝集。 （1515）年齡因素）年齡因素 如新生兒、老年人等。162022-3-8 正反定型不一致的處理方法正反定型不一致的處理方法F 首先要重做試驗(yàn)一次。 嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察結(jié)果，可解決明顯的問題.F 對(duì)一些疑難問題需進(jìn)一步檢查?？沙醪讲扇∫韵麓胧?)重新抽樣，糾正因污染或搞錯(cuò)標(biāo)本造成的不符。2)將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗A+B做實(shí)驗(yàn)，可得到其他有用信息。有條件加做抗H試驗(yàn) 3)對(duì)受檢者

11、作直接抗人球蛋白試驗(yàn)，看RBC有沒有被致敏4)如疑為A抗原或B抗原減弱，可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗B血清作吸收放散試驗(yàn)。5)如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞成緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。6)做反定型試驗(yàn)時(shí)需要加做O細(xì)胞。172022-3-8F 疑難血型病例疑難血型病例1.白血病血型變異2.血漿蛋白紊亂3. 類B4.多/全凝集5.冷凝集6.ABO亞型182022-3-8三、不規(guī)則抗體的篩選三、不規(guī)則抗體的篩選1.篩選目的篩選目的2.篩選步驟篩選步驟3.不規(guī)則抗體篩選與交叉配血結(jié)果分析不規(guī)則抗體篩選與交叉配血結(jié)果分析192022-3-8F定義定義：抗A、抗B以外的血型抗體，多為抗體。主要是

12、經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生。F血型抗體血型抗體是體內(nèi)免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的針對(duì)血型抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的一類免疫球蛋白類物質(zhì)。人類血清中有5種類型：G、M、A、D、E，其中IgM、G是最重要的2種抗體。F RBCRBC血型抗體分為：血型抗體分為：完全抗體：能在鹽水中凝集相應(yīng)RBC，又稱鹽水抗體。主要是分子量較大的IgM不完全抗體：能結(jié)合RBC上抗原致敏RBC ，但在鹽水中不能使之凝集。主要是分子量小的IgG，需用抗球蛋白202022-3-8 1. 1.篩選目的：篩選目的：F 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，以確保安全有效用血。F 最好獻(xiàn)血者血清也作不規(guī)則抗體的篩選，如有發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，鑒定此抗體，找出能與

13、其相配合的血液，不可隨便用于輸血。F 不規(guī)則抗體多為IgG抗體，鹽水介質(zhì)中不能凝集，只能致敏相應(yīng)抗原的RBC,必須通過特殊介質(zhì)(酶、抗人球蛋白、poly等)才能使致敏RBC出現(xiàn)凝集反應(yīng)，這些方法的選擇可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件來確定。F 臨床上通常所稱的“同型血”是指ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)相同,其它紅細(xì)胞血型系統(tǒng)未必相同。 如果交叉配血不仔細(xì),或只用鹽水介質(zhì)配血,則可能檢查不出ABO血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體,而此抗體與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng),可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。 212022-3-82. 2.篩選細(xì)胞：篩選細(xì)胞： 通常是由2-3個(gè)單人份的O型紅細(xì)胞組成一套篩選細(xì)胞試劑，包

14、括以下常見的抗原：Rh系統(tǒng) 、MNSs系統(tǒng)、P系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)等。3. 3.抗體篩選試驗(yàn)局限性：抗體篩選試驗(yàn)局限性： 不一定能檢出所有有臨床意義的不規(guī)則抗體。一些抗低頻率抗原的抗體則可能漏檢。222022-3-8不規(guī)則抗體篩選的操作步驟被檢血清 + 抗體篩選細(xì)胞 鹽水介質(zhì)或非鹽水介質(zhì)（凝聚胺、抗球蛋白、酶）病人血清病人血清病人血清病人血清病人血清病人血清 病人血清病人血清篩選細(xì)胞篩選細(xì)胞I篩選篩選II篩選篩選III 病人紅細(xì)胞病人紅細(xì)胞血清血清+病人紅細(xì)胞病人紅細(xì)胞血清血清 +篩選細(xì)胞篩選細(xì)胞IPolyGram 100ulLIM600ul血清血清 +篩選細(xì)胞篩選細(xì)胞II血清

15、血清 +篩選細(xì)胞篩選細(xì)胞IIIResuspending 100ul非特異性凝集無凝集則重做特異性凝集低離子介質(zhì)中孵育，促進(jìn)抗體與RBC結(jié)合凝聚胺含多價(jià)陽離子，中和RBC表面負(fù)電荷，減少RBC間距離枸櫞酸鈉重懸液，為負(fù)電荷，中和凝聚胺正電荷，使正常RBC凝集解散1.2.3.4.對(duì)Kell系統(tǒng)抗體不理想，陰性結(jié)果需做抗球。中國人群幾乎100%為kk型，具有K抗原的幾乎為0，至今未發(fā)現(xiàn)Kell系統(tǒng)抗體232022-3-8 抗篩陽性抗篩陽性，交叉配血相容交叉配血相容自身抗-H抗-Lebh抗篩陽性，但獻(xiàn)血者紅細(xì)胞可能正好不含與相應(yīng)的抗原，因此配血可以相合。 抗篩陽性，交叉配血不相容抗篩陽性，交叉配血不相

16、容同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陰性同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陽性冷反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性溫反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性“錢串狀”紅細(xì)胞形成引起非真實(shí)的陽性結(jié)果 抗篩陰性抗篩陰性，酶試驗(yàn)、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相容酶試驗(yàn)、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相容 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DAT試驗(yàn)為陽性受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗(yàn)成陰性抗體與低頻率抗原反應(yīng) 抗篩陰性抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容鹽水直接離心交叉配血不相容獻(xiàn)血者紅細(xì)胞是ABO血型不相容存在在室溫反應(yīng)的同種異體抗體獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞是多凝集紅細(xì)胞4.抗篩和交叉配血結(jié)果分析242022-3-8 輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”血型、抗篩、交叉配

17、血相合%隨機(jī)64ABO99.4Rh99.8抗篩99.94交叉配血99.95自身輸血100252022-3-8F 交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合性，使病人，獻(xiàn)血者血液之間沒有相對(duì)應(yīng)的抗原、抗體成分（如：患者體內(nèi)有抗A抗體，獻(xiàn)血者RBC上就不能有A抗原）F 試驗(yàn)應(yīng)在37下進(jìn)行。 四、交叉配血四、交叉配血262022-3-8 鹽水法F用于IgM抗體的檢出、鹽水配血試驗(yàn)、用鹽水抗體鑒定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系統(tǒng)的抗原。F當(dāng)IgG抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)聚凝胺FPoly是帶高價(jià)陽離子的多聚物，溶解后能產(chǎn)生正電荷，中和RBC表面負(fù)電

18、荷，縮短RBC間距，引起正常RBC可逆非特異性凝集、抗體致敏的紅細(xì)胞則凝集不可逆酶技術(shù)F蛋白水解酶能消化破壞RBC表面唾液酸，減少RBC表面負(fù)電菏，縮短RBC間距，IgG抗體能與有相應(yīng)抗原的RBC產(chǎn)生凝集。u適合：酶法能顯著增強(qiáng)Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，u不適合：蛋白酶破壞M、N、S、s、Fya、Fyb抗原AGT抗人球F又稱Coombs試驗(yàn),是檢查IgG抗體的最有效方法。F除可測(cè)定RBC上IgG抗體外,還可測(cè)定IgM、IgA,、補(bǔ)體C3、C4u直接直接：測(cè)體內(nèi)致敏RBC用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血.u間接間接：測(cè)血清中不完

19、全抗體常用于血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗(yàn)等.272022-3-8酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法一期一期酶法酶法 也稱直接法，菠蘿酶和木瓜酶適用于一期法。操作時(shí)在已標(biāo)記好的試管中加入100ul的血清和50ul的紅細(xì)胞懸液，再加50ul的酶溶液，37孵育15分鐘，1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，輕搖后觀察結(jié)果二期二期酶法酶法 也稱間接法，木瓜酶和無花果酶適用于二期法。二期分兩步，第一步是酶處理紅細(xì)胞：在1份洗滌的壓積紅細(xì)胞中加兩份木瓜酶溶液，37孵育30分鐘，用大量的Ph7。4的PBS洗滌3次，用生理鹽水配成5%的懸液備用。第二步是在已標(biāo)記好的試管中加受檢血清100u

20、l ,再加50ul酶處理過的紅細(xì)胞懸液，37孵育15-30分鐘觀察結(jié)果，凝集和溶血皆屬于陽性反應(yīng)。282022-3-8n 交叉配血試驗(yàn)通常包括：交叉配血試驗(yàn)通常包括：主主 側(cè)側(cè)（受者血清+供者RBC）：測(cè)對(duì)供者RBC反應(yīng)的抗體次次 側(cè)側(cè)（受者RBC+供者血清）：測(cè)對(duì)受者RBC反應(yīng)的抗體自身對(duì)照自身對(duì)照（受者RBC+受者血清）： 顯示自身抗體、DAT陽性、RBC緡錢狀假陽性的存在F 除作鹽水介質(zhì)外，至少還要做聚凝胺法，有條件加做抗球、酶法等。在配血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻(xiàn)血者的血液才能給病人輸注主管主管次管次管自身自身292022-3-8F 實(shí)際當(dāng)中難免有抗篩陰性，但交叉配血不合的情況，應(yīng)依據(jù)實(shí)際情況合理解釋：v 緡錢狀形成：血清在室溫和37中，使RBC假凝集。常見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金病、其他表現(xiàn)為血沉加快的病例。v 交叉配血不相容，顯示有未撿明的同種抗體存在v 室溫反應(yīng)中顯示有自身抗體v AGT 試驗(yàn)中顯示有自身抗體v 抗篩陰性，交叉配血陽性，提示可能有未檢明的抗體存在v 離心力不當(dāng)，造成假陰性v 水浴箱溫度不正確，造成錯(cuò)誤結(jié)果v RBC不正確的洗滌和懸浮，使AGT試驗(yàn)假陰性v 血清中如含有溶血性抗體，則相應(yīng)RBC被溶解而不是凝集，交叉配血應(yīng)為陽性。