中藥制劑分析4含量測定

1、第四章 中藥制劑的含量測定【目的要求】【目的要求】v掌握中藥制劑含量測定的樣品前處理方法及測定方法掌握中藥制劑含量測定的樣品前處理方法及測定方法的效能指標(biāo)。的效能指標(biāo)。v掌握可見掌握可見-紫外分光光度法、紫外分光光度法、TLCS、HPLC、 GC在中在中藥制劑分析中的應(yīng)用。藥制劑分析中的應(yīng)用。v熟悉熒光分光光度法及原子吸收光度法在中藥制劑分熟悉熒光分光光度法及原子吸收光度法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。析中的應(yīng)用。v了解雙波長、三波長、差示、導(dǎo)數(shù)光譜法在中藥制劑了解雙波長、三波長、差示、導(dǎo)數(shù)光譜法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。分析中的應(yīng)用。藥物分析學(xué)科1 樣品的處理樣品處理的主要作用樣品處理的主要作用l釋

2、放被測組分，制成穩(wěn)定試樣釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣l除去雜質(zhì)，純化除去雜質(zhì)，純化l濃縮濃縮l試樣形式符合測定的要求試樣形式符合測定的要求一、樣品的粉碎一、樣品的粉碎目的目的取樣均勻，提取完全取樣均勻，提取完全粉碎設(shè)備粉碎設(shè)備粉碎機、研缽、勻漿機粉碎機、研缽、勻漿機 粒度大小合適，粒度大小合適，全部過篩全部過篩 防止污染或損失防止污染或損失藥物分析學(xué)科1 樣品的處理樣品處理的主要作用樣品處理的主要作用l釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣l除去雜質(zhì)，純化除去雜質(zhì)，純化l濃縮濃縮l試樣形式符合測定的要求試樣形式符合測定的要求一、樣品的粉碎一、樣品的粉碎目的目的取樣均勻，提取完全取樣

3、均勻，提取完全粉碎設(shè)備粉碎設(shè)備粉碎機、研缽、勻漿機粉碎機、研缽、勻漿機 粒度大小合適，粒度大小合適，全部過篩全部過篩 防止污染或損失防止污染或損失藥物分析學(xué)科1 樣品的處理二、樣品的提取二、樣品的提取（一）冷浸法（一）冷浸法操作：操作：樣品樣品精密稱定精密稱定置容器內(nèi)置容器內(nèi)精密加入溶劑精密加入溶劑稱定重量稱定重量 浸泡（浸泡（1224h）稱重稱重補足重量補足重量測定測定測定方法：測定方法：全部測定法：過濾全部測定法：過濾濾液濾液蒸干蒸干定容定容測定測定（低濃）（低濃）部分測定法：過濾部分測定法：過濾濾液濾液取若干體積進行測定取若干體積進行測定（高濃）（高濃）優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍

4、：操作簡便，適用于熱不穩(wěn)定的樣品，提取雜質(zhì)較少，但是費操作簡便，適用于熱不穩(wěn)定的樣品，提取雜質(zhì)較少，但是費時，費溶劑時，費溶劑藥物分析學(xué)科掌握每種提取方法的操掌握每種提取方法的操作、優(yōu)缺點及應(yīng)用范圍作、優(yōu)缺點及應(yīng)用范圍1 樣品的處理二、樣品的提取二、樣品的提?。ǘ┗亓魈崛》ǎǘ┗亓魈崛》ú捎没亓餮b置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱提取采用回流裝置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱提取優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，提取時間短，為提取效率高，提取時間短，為0.52小時；提取小時；提取雜質(zhì)較多雜質(zhì)較多，不適用于熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分不適用于熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分（三）

5、連續(xù)回流提?。ㄈ┻B續(xù)回流提取用索氏提取裝置，少用混合溶劑，其余操作同回流提取法。用索氏提取裝置，少用混合溶劑，其余操作同回流提取法。 優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，所需溶劑少，提取提取效率高，所需溶劑少，提取雜質(zhì)較少雜質(zhì)較少操作簡便；不適用于受熱易分解的成分。操作簡便；不適用于受熱易分解的成分。藥物分析學(xué)科1 樣品的處理二、樣品的提取二、樣品的提?。ㄋ模┏曁崛》ǎㄋ模┏曁崛》悠分萌萜髦校尤胩崛∪軇?，放入超聲振蕩器中進行提取樣品置容器中，加入提取溶劑，放入超聲振蕩器中進行提取 優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，速度快提取效率高，速度快30min；超聲波可

6、引起化學(xué)成分的改變超聲波可引起化學(xué)成分的改變 （五）超臨界流體提取法（五）超臨界流體提取法（SFE）優(yōu)點：優(yōu)點：速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性高、節(jié)省速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性高、節(jié)省溶劑、易于自動化，而且可避免使用易燃，有毒的有機溶劑，溶劑、易于自動化，而且可避免使用易燃，有毒的有機溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用 藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（1）沉淀法）沉淀法樣品樣品+沉淀劑沉淀劑 沉淀沉淀過濾過濾濾液濾液測定測定 沉淀沉淀重量法或溶解后測定重量法或溶解后測定藥物分析學(xué)科處理樣品的處理樣品的核

7、心核心復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測定復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。分有機堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。 1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（2 2）蒸餾法）蒸餾法適用于具揮發(fā)性的待測組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、適用于具揮發(fā)性的待測組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等丹皮酚等最常用的水蒸氣蒸餾法：最常用的水蒸氣蒸餾法：v共水蒸餾法共水蒸餾法v通水蒸氣蒸餾法通水蒸氣蒸餾法v水上蒸餾法水上蒸餾法利用鹽析作用，提

8、高蒸餾效果利用鹽析作用，提高蒸餾效果藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（3 3）液液-液萃取法液萃取法直接萃取法直接萃取法l萃取劑的選擇：萃取劑的選擇：親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚；親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚； 弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、正正丁醇等丁醇等l多次萃取（多次萃?。?-43-4次）次）l調(diào)整水相酸度，提取有機酸、有機堿調(diào)整水相酸度，提取有機酸、有機堿l利用鹽析作用，提高提取率利用鹽析作用，提高提取率藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（3 3）液液-液萃取法液萃取法離子對萃取法離子對萃取法

9、BH+ In- BH+In-（水相）（水相） BH+In-（有機相）（有機相） 適合于高度電離的有機酸、堿化合物的萃適合于高度電離的有機酸、堿化合物的萃l水相酸度的控制水相酸度的控制l離子對試劑的選擇離子對試劑的選擇l有機溶劑的選擇有機溶劑的選擇藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（4 4）色譜法（層析法）色譜法（層析法）v分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜v操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜v裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱v操作程序：操作

10、程序：柱的活化；柱的活化；上樣；上樣；清洗；清洗；洗脫。洗脫。v微柱色譜（固相萃?。┪⒅V（固相萃取）v柱填料：柱填料：硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭、聚酰胺、大孔硅硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭、聚酰胺、大孔硅 藻土、藻土、離子交換樹脂、鍵合相硅膠離子交換樹脂、鍵合相硅膠C C8 8、C C1818等等 藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（4 4）色譜法（層析法）色譜法（層析法）硅膠：酸性吸附劑硅膠：酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，適用于中性或酸性成分的層析，強烈保留堿性化合物強烈保留堿性化合物v洗脫洗脫順序：順序：極性小極性小大大氧化鋁：弱堿性氧化鋁：弱堿

11、性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、酸、內(nèi)，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、酸、內(nèi)酯等類型的化合物分離酯等類型的化合物分離中性氧化鋁、酸性氧化鋁中性氧化鋁、酸性氧化鋁：適用于中性、酸性成分的分離：適用于中性、酸性成分的分離鍵合相硅膠（鍵合相硅膠（C C1818或或ODSODS）：分分開開脂溶性和水溶性成分脂溶性和水溶性成分v洗脫洗脫順序：順序：極性極性大大小小藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（4 4）色譜法（層析法）色譜法（層析法）大孔樹脂大孔樹脂：分為極性（：分為極性（丙烯酰胺聚合物丙烯酰胺聚合物 ）和非極性（）和非極性（苯乙烯和二乙烯苯苯乙烯和

12、二乙烯苯的共聚物的共聚物）型）型非極性型（非極性型（XAD-2XAD-2等）：等）：分分開開脂溶性和水溶性成分脂溶性和水溶性成分 使用前需要用有機溶劑除去雜質(zhì)，有時還需用酸、堿清洗使用前需要用有機溶劑除去雜質(zhì)，有時還需用酸、堿清洗 聚酰胺聚酰胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類藥物樣與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離品液的凈化分離硅藻土、纖維素硅藻土、纖維素：以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機溶劑為流動以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機溶劑為流動相相的分配色譜的分配色譜藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（

13、4 4）色譜法（層析法）色譜法（層析法）離子交換樹脂離子交換樹脂：用于除去樣品中的離子：用于除去樣品中的離子及及萃取可離解化合物萃取可離解化合物( (弱酸、弱酸、弱堿藥物弱堿藥物) )（5 5）固相微萃取（）固相微萃?。⊿PMESPME）集萃取、濃縮、進樣于一集萃取、濃縮、進樣于一體的樣品前處理新方法體的樣品前處理新方法藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（6 6）消化法消化法-測定中藥制劑中的無機元素測定中藥制劑中的無機元素目的：破壞有機物，使無機物游離目的：破壞有機物，使無機物游離F濕法消化：濕法消化：硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法：適用于血，尿、組織等生物樣品和

14、含動植物藥制：適用于血，尿、組織等生物樣品和含動植物藥制劑的破壞，無機金屬離子均為高價態(tài)。劑的破壞，無機金屬離子均為高價態(tài)。 對含氮雜環(huán)類有機物破壞不夠完全。對含氮雜環(huán)類有機物破壞不夠完全。 硝酸硝酸- -硫酸法硫酸法：適用于大多數(shù)有機物的破壞。：適用于大多數(shù)有機物的破壞。 與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測定，不宜采有此法。與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測定，不宜采有此法。 硫酸硫酸- -硫酸鹽法硫酸鹽法：常用于含砷或銻的有機樣品的破壞，破壞后得到：常用于含砷或銻的有機樣品的破壞，破壞后得到三價砷或銻。三價砷或銻。藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化（6 6）

15、消化法消化法-測定中藥制劑中的無機元素測定中藥制劑中的無機元素目的：破壞有機物，使無機物游離目的：破壞有機物，使無機物游離F干法消化：干法消化：供試品供試品 灰分灰分 控制溫度在控制溫度在420420以下以下不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機樣品的破壞。不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機樣品的破壞。如果灰化不完全，可以加入硝酸如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（水（1：3）或稀鹽酸）或稀鹽酸-水（水（1：3）水浴上蒸干后，繼續(xù)小火灰化水浴上蒸干后，繼續(xù)小火灰化藥物分析學(xué)科灼燒灰化(+NaCO3/MgO)2 含量測定方法的驗證需驗證的分析項目需驗證的分析項目1. 鑒別試驗；2. 雜

16、質(zhì)定量或限度檢查；3. 3. 原料或制劑中有效成分含量測定；原料或制劑中有效成分含量測定；4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。藥物分析學(xué)科2 含量測定方法的驗證一、準(zhǔn)確度一、準(zhǔn)確度是指以測得結(jié)果與真實值之間的接近程度。由于真實值是未知是指以測得結(jié)果與真實值之間的接近程度。由于真實值是未知的，故常用回收率試驗來表示。的，故常用回收率試驗來表示。二、精密度二、精密度是指一種均勻樣品經(jīng)多次取樣重復(fù)分析后，各次結(jié)果之間的符是指一種均勻樣品經(jīng)多次取樣重復(fù)分析后，各次結(jié)果之間的符合程度。常用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。重復(fù)性、中間精合程度

17、。常用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性密度及重現(xiàn)性藥物分析學(xué)科2 含量測定方法的驗證1. 重復(fù)性重復(fù)性 在相同條件下在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次；或把被測物濃度當(dāng)作三次；或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測，至少測6次進行評價。次進行評價。2. 中間精密度中間精密度 同一實驗室同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？?/p>

18、察隨機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分果的精密度?？疾祀S機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。析人員、不同設(shè)備。3. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 不同實驗室不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。說明中。藥物分析學(xué)科2 含量測定方法的驗證三、專屬性三、專屬性是指在樣

19、品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確，專一是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確，專一地測定分析物的能力。地測定分析物的能力。四、檢測限四、檢測限檢測限是指在規(guī)定的實驗條件下，分析方法能夠檢測（但不需要檢測限是指在規(guī)定的實驗條件下，分析方法能夠檢測（但不需要定量）樣品中分析物的最低濃度。定量）樣品中分析物的最低濃度。1非儀器分析目視法非儀器分析目視法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2. 信噪比法信噪比法藥物分析學(xué)科2 含量測定方法的驗證五、定量限五、定量限是指在規(guī)定的實驗條件下和具有可接受的精

20、密度和準(zhǔn)確度前提是指在規(guī)定的實驗條件下和具有可接受的精密度和準(zhǔn)確度前提下，分析方法能夠測定樣品中分析物的下，分析方法能夠測定樣品中分析物的最低濃度最低濃度。六、線性六、線性七、范圍七、范圍八耐用性八耐用性是指測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的程度為常規(guī)檢是指測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的程度為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。衡量方法不受參數(shù)微小變差影響的能力。驗提供依據(jù)。衡量方法不受參數(shù)微小變差影響的能力。藥物分析學(xué)科2 含量測定方法的驗證分析方法效能指標(biāo)的要求分析方法效能指標(biāo)的要求1、用于鑒別試驗、用于鑒別試驗：只對：只對專屬性專屬性、耐用性耐用性二項指標(biāo)有所要求，其二項指標(biāo)有所要求，其余

21、余均無須要求均無須要求2、雜質(zhì)測定或制劑中降解物測定、雜質(zhì)測定或制劑中降解物測定：當(dāng)用于定量除：當(dāng)用于定量除檢測限不必要檢測限不必要求求外，其余七項指標(biāo)均應(yīng)有所要求；用于限度檢查只對外，其余七項指標(biāo)均應(yīng)有所要求；用于限度檢查只對專屬性專屬性、檢檢測限測限、和、和耐用性耐用性有要求。有要求。3、用于原料藥中主成分或制劑中、用于原料藥中主成分或制劑中有效成分含量測定有效成分含量測定及溶出度測及溶出度測定，除了定，除了檢測限和定量限外檢測限和定量限外，其余均要求。，其余均要求。藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法一、化學(xué)分析法一、化學(xué)分析法適用于適用于含量較高含量較高的成分及的成分及無機成分無機成分的測

22、定的測定（一）重量分析（一）重量分析揮發(fā)法：如水分測定揮發(fā)法：如水分測定萃取法：如冰片散中冰片的含量測定萃取法：如冰片散中冰片的含量測定沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測定沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測定藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法一、化學(xué)分析法一、化學(xué)分析法（二）滴定分析（二）滴定分析酸堿滴定法酸堿滴定法：測定生物堿、有機酸、內(nèi)酯類：測定生物堿、有機酸、內(nèi)酯類 沉淀滴定法沉淀滴定法銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機鹵化物銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機鹵化物四苯硼鈉法：四苯硼鈉法：+生物堿生物堿白色沉淀白色沉淀配位滴定法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸銨法）：測定鞣質(zhì)、生物堿及法和硫氰酸銨法

23、）：測定鞣質(zhì)、生物堿及Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量等礦物類制劑的含量氧化還原滴定法氧化還原滴定法：酚類、糖類及礦物藥中：酚類、糖類及礦物藥中Fe、As等等藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法二、可見二、可見-紫外分光光度法紫外分光光度法（一）單波長分光光度法（一）單波長分光光度法1、吸收系數(shù)法（、吸收系數(shù)法（CHP最為常用）最為常用）例題左金丸的含測例題左金丸的含測 A=ECL（百分吸收系數(shù)，單位（百分吸收系數(shù)，單位g/100ml）2、對照品比較法、對照品比較法 對照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（對照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（10010）3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法藥

24、物分析學(xué)科3 常用定量分析方法二、可見二、可見-紫外分光光度法紫外分光光度法（二）計算分光光度法（二）計算分光光度法1、雙波長分光光度法法、雙波長分光光度法法系數(shù)倍率法系數(shù)倍率法等吸收點法等吸收點法2、三波長分光光度法、三波長分光光度法3、導(dǎo)數(shù)光譜法、導(dǎo)數(shù)光譜法討論：計算分光光度法在中藥及其制劑中的應(yīng)用前景討論：計算分光光度法在中藥及其制劑中的應(yīng)用前景藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法三、薄層掃描法TLCS（一）薄層吸收掃描法（一）薄層吸收掃描法光源：氘燈光源：氘燈(190-340nm)和和W燈燈(340-900nm 薄層板引起的散射現(xiàn)象（散射系數(shù)薄層板引起的散射現(xiàn)象（散射系數(shù)SX

25、）標(biāo)準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線（Kubella-Munk曲線）彎曲曲線）彎曲校正（曲線校直法和計算機回歸法）校正（曲線校直法和計算機回歸法）（二）薄層熒光掃描法（二）薄層熒光掃描法光源：汞燈光源：汞燈(250-580nm)直線式掃描，無需曲線校直直線式掃描，無需曲線校直藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法三、薄層掃描法TLCS（三）定量分析方法（三）定量分析方法1、方法學(xué)考察、方法學(xué)考察v工作曲線：工作曲線：檢查所選散射參數(shù)檢查所選散射參數(shù)SX是否適宜；是否適宜；考察工作曲線是否過原考察工作曲線是否過原點，以便確定是用外標(biāo)一點法還是二點法測定；點，以便確定是用外標(biāo)一點法還是二點法測定；確定點樣

26、量的線性范圍。確定點樣量的線性范圍。 v分離度：分離度：R1.0v重復(fù)性考察：重復(fù)性考察：RSD3%v準(zhǔn)確度考察：準(zhǔn)確度考察：95%105%2、定量方法、定量方法（討論常用定量方法）（討論常用定量方法）v外標(biāo)法：一點法、兩點法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)法：一點法、兩點法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法v內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法三、薄層掃描法TLCS健脾丸中熊果酸的含量測定健脾丸中熊果酸的含量測定含量測定含量測定 取小蜜丸或重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約取小蜜丸或重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約4g，精密稱定，加，精密稱定，加水水30ml，放置使溶散，濾過，殘渣用水，放置使溶散

27、，濾過，殘渣用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟粉末狀或低洗滌，在室溫干燥至呈松軟粉末狀或低溫干燥后研細，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加溫干燥后研細，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚乙醚適量，加熱回流提取適量，加熱回流提取4小時，小時，提取液回收乙醚至干，殘渣用提取液回收乙醚至干，殘渣用石油醚石油醚（3060）浸泡兩次，每次）浸泡兩次，每次10ml（浸泡約（浸泡約2分分鐘），傾去石油醚，殘渣加適量三氯甲烷鐘），傾去石油醚，殘渣加適量三氯甲烷-無水乙醇無水乙醇（2:3）混合液使溶解，轉(zhuǎn)移至）混合液使溶解，轉(zhuǎn)移至2ml量瓶內(nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品適量，精密量瓶內(nèi)，

28、并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每稱定，加無水乙醇制成每1ml含含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄錄VI B）試驗，精密吸取供試品溶液）試驗，精密吸取供試品溶液4ul與與6ul，對照品溶液，對照品溶液2ul與與4ul，分別交叉點于分別交叉點于同一硅膠同一硅膠G薄層板上薄層板上，以環(huán)已烷，以環(huán)已烷-三氯甲烷三氯甲烷-乙酸乙酯乙酸乙酯-冰醋酸（冰醋酸（20:5:8:0.5）為展開劑，）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑

29、點顯色清晰，取出，加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進行掃描，波長在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進行掃描，波長S=540nm，R=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得。，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得。本品含山楂以熊果酸（本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）計，小蜜丸每）計，小蜜丸每1g不得少于不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于大蜜丸每丸不得少于0.90mg。藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法四、氣相色譜法GC（一）應(yīng)用范圍（一）應(yīng)用范圍v揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分揮

30、發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等v中藥制劑含中藥制劑含水水量、含量、含醇醇量量（二）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗（二）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗v理論塔板數(shù)理論塔板數(shù) n5.54(tR/W1/2)2 最小理論塔板數(shù)，柱長，柱填充、載體性能等有影響最小理論塔板數(shù)，柱長，柱填充、載體性能等有影響v分離度分離度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2) R1.5（兩峰完全分離）（兩峰完全分離）v重復(fù)性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差重復(fù)性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD2.0 (n=5)v拖尾因子拖尾因子T=W0.05h/2d1 (d1峰極大至峰前沿之間的距離峰極大至峰前沿之間的距離) 1.05

31、T0.95藥物分析學(xué)科樣品沸點范圍樣品沸點范圍柱溫柱溫固定相配比固定相配比300400 200250 15% 200300 150180 510% 100200 各組分的平均各組分的平均沸點沸點2/3左右左右 1015% 氣體等低沸點樣品氣體等低沸點樣品 室溫或室溫或50下下 1525% 3 常用定量分析方法四、氣相色譜法四、氣相色譜法GC（三）實驗條件的選擇（三）實驗條件的選擇1、固定相的選擇、固定相的選擇氣固色譜硅膠、石墨、化學(xué)鍵合相、高分子多孔微球等氣固色譜硅膠、石墨、化學(xué)鍵合相、高分子多孔微球等氣液色譜烴類、硅氧烷類、醇類、酯類，特殊固定液（手性）氣液色譜烴類、硅氧烷類、醇類、酯類，特

32、殊固定液（手性）2、柱溫的選擇、柱溫的選擇藥物分析學(xué)科寬沸程樣品：寬沸程樣品：程序升溫法程序升溫法3 常用定量分析方法四、氣相色譜法四、氣相色譜法GC（三）實驗條件的選擇（三）實驗條件的選擇3、載氣的選擇、載氣的選擇H2、He：流速大，柱長，熱導(dǎo)檢測器：流速大，柱長，熱導(dǎo)檢測器N2：流速小，氫焰檢測器，電子捕獲檢測器：流速小，氫焰檢測器，電子捕獲檢測器 流速：流速：2080ml/min4、其它條件的選擇、其它條件的選擇進樣方式：直接進樣、頂空進樣（兼有分離分析作用）進樣方式：直接進樣、頂空進樣（兼有分離分析作用）進樣口（汽化室）溫度：樣品的沸點或稍高于沸點，進樣口（汽化室）溫度：樣品的沸點或稍

33、高于沸點，30/ 50+T柱柱T汽汽 50+T沸點沸點檢測室溫度：檢測室溫度：30+T柱柱T檢檢T汽汽藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法四、氣相色譜法GC（三）實驗條件的選擇（三）實驗條件的選擇4、其它條件的選擇、其它條件的選擇進樣時間：進樣時間：1秒以內(nèi)秒以內(nèi)進樣量：進樣量：理論允許最大進樣量使下降的塔板數(shù)不超過理論允許最大進樣量使下降的塔板數(shù)不超過10。氣體：氣體：0.11ml；液體：；液體：0.1-1l分流器分流進樣：分流器分流進樣：1/101/100檢測器：檢測器：TCD, FID, NPD, ECD藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法四、氣相色譜法GC（四）含量

34、測定方法（四）含量測定方法（例題見（例題見P84）1 1、內(nèi)標(biāo)法加校正因子、內(nèi)標(biāo)法加校正因子 求算校正因子求算校正因子 待測組分含量測定待測組分含量測定2 2、外標(biāo)法、外標(biāo)法3 3、面積歸一化法、面積歸一化法4 4、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法%/%/RRSSSSRRsRCACAAWAWfff%SsXXCAAfCRXRXAACC%100%iiiAAC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法五、高效液相色譜法HPLC（一）特點（一）特點分離效能高、分析速度快及應(yīng)用范圍廣分離效能高、分析速度快及應(yīng)用范圍廣（二）（二）適用范圍適用范圍揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物，如蛋白質(zhì)、氨基酸、生物堿、甾體、類脂、核酸、維生素及無物，如蛋白質(zhì)、氨基酸、生物堿、甾體、類脂、核酸、維生素及無機鹽類機鹽類 （三）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗（三）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法五、高效液相色譜法HPLC（四）實驗條件的選擇（四）實驗條件的選擇色譜柱的選擇（固定相的選擇）色