抗生素效價(jià)測(cè)定操作規(guī)程

1、抗生素效價(jià)測(cè)定操作規(guī)程QCA/QC-SOP-?起草人日期山東良福制藥有限公司審核人日期649296993批準(zhǔn)人日期共 4 頁(yè)實(shí)施日期總頁(yè)數(shù)第五版1.主題內(nèi)容和適用范圍本規(guī)程規(guī)定了公司外購(gòu)原料藥品及生產(chǎn)成品中抗生素的效價(jià)測(cè)定方法及要求。 本規(guī)程適用于公司外購(gòu)原料藥品及生產(chǎn)成品中抗生素的效價(jià)測(cè)定。2.引用標(biāo) 準(zhǔn)中國(guó)藥典 2010 年版二部。3. 術(shù)語(yǔ)抗生素微生物檢定法 : 在適宜的條件下，根據(jù)量反應(yīng)平行原理設(shè)計(jì)，通過(guò)檢測(cè) 抗生素對(duì)微生物的抑制作用，訃算抗生素活性（效價(jià)）方法?？股匚⑸餀z定包括兩種方法，即管碟法和濁度法。本法采用的是管碟法。4. 操作技術(shù)（儀器與用具）4.1操作室：光線明亮，操作

2、間分一般操作間b半無(wú)菌操作間。室溫控制20-25?o 注意抗生素的污染4.2雙蝶：內(nèi)徑90mm高16-17mm.用后經(jīng)高壓滅菌倒出培養(yǎng)基后，置專(zhuān)用洗液或 清潔液中浸泡過(guò)夜，沖洗，瀝干150-160?干熱滅菌2小時(shí)或高壓滅菌121?30min,備用。4.3陶瓦蓋：內(nèi)徑103mm,外經(jīng)108mm,吸水性強(qiáng)，定期清洗、干燥或干熱滅菌。4. 4 鋼管：內(nèi)徑 6. 0?0. 1mm 高 7. 8?0. 1mm 或 8. 0?0. 1mm, 10. 0?0. 1mm重量差 異 不超 ?0. 05g.用后置1:1000苯扎澳鍍?nèi)芤簝?nèi)浸泡2h以上，再滅菌洗滌，先用水洗,超聲波30min 或用去污粉的沙布條串擦

3、內(nèi)外壁，水沖洗,淋干,PW沖洗3次150-160?干熱滅菌2 小時(shí)備用.4. 5鋼管放置器4.6恒溫培養(yǎng)箱：隔水式為宜 35-37?4.7滅菌刻度吸管:用于吸取菌液及培養(yǎng)基（5ml、20ml）,用后立即置5%石碳酸 或 1:1000苯扎澳讓溶液中消毒后再常規(guī)洗滌 .150-160?干熱滅菌 2小時(shí)備用.4. 8玻璃 容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶 . 符合一等品規(guī)定用前用清潔液浸泡，水洗、PW沖3次第1頁(yè)，共 4頁(yè)4. 9稱(chēng)量瓶：具塞，重量在10g以下水沖洗、淋干，置清潔液浸泡2小時(shí)以上，水洗、PW沖3次,置潔凈的大平皿中.120?干熱3h,待冷到70-60?時(shí),取出置干燥器中備用.4

4、. 10毛細(xì)滴管：清潔液浸泡，水洗、PW沖3次.120?干燥3h4. 11天平: 分析天平，感量 0. lmg4. 12 抑菌圈測(cè)量?jī)x（多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀）4. 13 超凈工作臺(tái)5. 菌懸液制備取短小芽抱桿菌丄作用菌種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，加滅菌水廣 2ml 將菌苔洗 下，制成懸液，用吸管將此懸液接種至盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，攤布均 勻，在 35飛 7?培養(yǎng) 7 天。取菌苔少許涂片，革蘭氏染色鏡檢，應(yīng)有芽抱8概以上， 用滅菌水 10ml 將芽抱洗下，制成芽抱懸液，合并至滅菌大試管內(nèi)，在65?水浴中 加熱 30 分鐘將菌體殺死，待冷后置 4?冷藏箱貯藏。此菌液為濃菌液。日常試驗(yàn)用菌

5、液取上述濃菌液，用滅菌水 1?3 稀釋至滅菌試管中，冷藏箱保 存 備用。6. 培養(yǎng)基稱(chēng)取培養(yǎng)基干粉g溶于ml水中，制備好的培養(yǎng)基，在121?蒸汽滅菌30min。制成 的培養(yǎng)基不應(yīng)有沉淀，臨用前應(yīng)置于水浴中或微波爐中融化，避免直火加熱。7. 緩沖溶液制備磷酸鹽緩沖溶液(PH7. 8)稱(chēng)取磷酸氫二鉀5. 59g與磷酸二氫鉀0.41g,加水使 成1000ml,濾過(guò)，在121?蒸汽滅菌30min。8. 滅菌水制備取純化水500ml,在121?蒸汽滅菌30min。9. 樣品及供試品制備 ( 標(biāo)準(zhǔn)品的取用量不得少于 20mg)9. 1 稱(chēng)樣量計(jì)算V XCW 二 P式中 w 為稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品或供試品的重量 (m

6、g)V 為溶解標(biāo)準(zhǔn)品或供試品制成濃溶液時(shí)用容量瓶的體積 (ml)C為標(biāo)準(zhǔn)品或供試品濃溶液的濃度(u/ml或u g/ml)P為標(biāo)準(zhǔn)品的純度或供試品的估計(jì)效價(jià)(u/mg u g/mg)9.2稀釋(每步稀釋?zhuān)咳×坎坏蒙儆?2ml,稀釋步驟一般不超過(guò)3步)第2 頁(yè)，共4頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)品及樣品(以紅霉素為例)乙醇+滅菌水mg (u/mg)PH7. 8磷酸鹽緩沖溶液ml (u/ml)高劑量PH7. 8磷酸鹽緩沖溶液ml (u/ml)低劑量PH7. 8磷酸鹽緩沖溶液ml (u/ml)? ml (u/ml)? ml (u/ml)? ml (u/ml)? ml (u/ml) 10.雙碟制備10.1在半無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)

7、注意微生物及抗生素的污染。10.2底層用滅菌大口 20ml吸管或其他滅菌分裝器，吸取已融化的培養(yǎng)基20ml注入雙碟內(nèi)，使底層攤布均勻，蓋上陶瓦蓋，待凝固。10.3菌層取出實(shí)驗(yàn)用菌懸液，按預(yù)試好的加菌量，用滅菌吸管吸取菌懸液適量，加入已融化并保溫在水浴中的培養(yǎng)基(63?以下)內(nèi)，搖勻，作為菌層培養(yǎng)基。用滅大口 5ml吸管或其他適宜分裝器，吸取菌層培養(yǎng)基 5ml,加于底層培養(yǎng)基上， 使其均勻攤布，放置 20? 30 分鐘，待凝固。10.4 放置鋼管用小眼科銀子夾持鋼管，輕輕地放置在培養(yǎng)基上。相應(yīng)劑量的 鋼 管，對(duì)角放置。鋼管放妥后，應(yīng)使雙碟靜置 510 分鐘，鋼管在瓊脂上沉穩(wěn)后，再開(kāi) 始滴加抗生素

8、溶液 .10. 5 滴加抗生素溶液10. 5. 1每批樣品不少于 6個(gè)雙碟，用滅菌的毛細(xì)滴管滴加，在滴加之前須用 溶液洗 23次。10. 5. 2滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品溶液順序 : SH-TH-TL-SL滴加溶液至鋼管口平滿，注意滴加溶液的間隔不可過(guò)長(zhǎng)，否則因鋼管內(nèi)溶液的 擴(kuò)散時(shí)間不同會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。加液要滿，但不能溢出，同一雙碟內(nèi)4 個(gè)鋼管的加液量要一致。10.5.3每種溶液要各用一支毛細(xì)滴管，每 1 份滴加的溶液為同一單位，但雙 碟 數(shù)不超過(guò)5 個(gè)，如果一份溶液滴加雙碟數(shù)口多，可分次滴加。10. 5.4加完抗生素后，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩(wěn)置于雙碟托盤(pán)內(nèi)，雙碟疊放不可超過(guò) 3層，置入隔水式培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，設(shè)置溫度為 35?, 37?10.