FDA關于ANDA強制降解試驗的觀點

1、強制降解試驗為方法學驗證中的重要內(nèi)容，為了解國外對強制降解試驗的要求，根據(jù)PharmaceuticalTechnology第36卷5期中“FDAPerspectives:ScientificConsiderationsofForcedDegradationStudiesinANDASubmissions”一文（發(fā)布時間為2012年5月2日，作者為RagineMaheswaran）,對FDA關于強制降解試驗的相關要求進行了翻譯整理，具體內(nèi)容如下：|一、強制降解試驗簡介強制降解試驗也稱破壞性試驗，其試驗目的明確。強制降解試驗可預測原料藥的穩(wěn)定性或影響制劑的純度、有效性和安全性的因素。了解不同破壞條

2、件下藥物的降解產(chǎn)物和降解途徑是非常必要的。強制降解試驗可以為分析方法的建立、說明書的制定和處方設計的確定等提供有益的參考。樣品破壞的程度取決于藥物本身的性質(zhì)和產(chǎn)品的劑型。ICHQ1B為光穩(wěn)定性試驗提出了一些建議，在ICH穩(wěn)定性指導原則和驗證指南中，沒有可以參考的關于其他降解條件的建議，對于氧化和水解降解研究也僅有有限的信息。原料藥與輔料分析方面的藥物專著可以為不同原料藥的各降解條件提供參考。|二、仿制藥強制降解試驗研究存在的問題仿制藥申請時提供的強制降解試驗研究數(shù)據(jù)不完整是申報的一大缺陷。美國仿制藥申報常見缺陷解讀（CMC部分）已經(jīng)出版，常見的一些例子說明，強制降解試驗的缺陷包括以下幾個方面：

3、1 .原料藥在各破壞條件下均不產(chǎn)生降解。請重復破壞試驗以獲得足夠的降解產(chǎn)物，若沒有產(chǎn)生降解，請?zhí)峁┮罁?jù)。2 .破壞條件過于劇烈，導致大部分藥物均被降解。請用溫和的破壞條件或減少樣品暴露時間以產(chǎn)生相關的降解產(chǎn)物。3 .請注意即使你已經(jīng)用含量測定的方法對破壞的樣品進行了檢測，為了驗證有關物質(zhì)的檢測方法具有穩(wěn)定性指示功能，破壞的樣品也應用有關物質(zhì)的方法進行測定。4 .請?zhí)峁┧龅尿炞C試驗數(shù)據(jù)，以證明用以檢測未破壞樣品和破壞樣品的方法能夠檢測出所有的降解雜質(zhì)。5 .請對破壞樣品中已知和未知的降解產(chǎn)物進行列表總結。6 .請確定檢測軟件對峰純度檢測的峰高要求。7 .請說明破壞樣品質(zhì)量不守衡的理由。8 .請

4、鑒別原料藥與輔料相互作用產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。9 .光穩(wěn)定性研究表明藥品對光敏感，請解釋這一點是如何在分析方法，生產(chǎn)工藝以及藥品運輸過程反映出來的。在仿制藥申請中，盡量減少以上缺陷，通常會建議在申請過程中報告強制降解試驗的相關信息。強制降解試驗獲取的信息能夠為開發(fā)穩(wěn)定性指示分析方法、生產(chǎn)工藝，產(chǎn)品運輸和儲存條件的確定提供依據(jù)。|三、如何進行強制降解試驗I1、降解條件典型的強制降解主要包括四種機制：高溫、水解、氧化和光降解。選擇適當?shù)钠茐臈l件，如酸堿和氧化劑的濃度、破壞溫度、適宜的破壞時間，以實現(xiàn)樣品最佳降解程度。樣品破壞過度會產(chǎn)生在藥品穩(wěn)定性研究過程中和正常破壞條件下均不會產(chǎn)生的二次降解產(chǎn)物，這并不

5、是降解試驗的目的。因此，控制樣品降解達到預期水平是十分必要的。為了實現(xiàn)有目的的降解，應制定適宜的降解研究方案。同時為加速試驗和長期試驗的放置條件提供依據(jù)。通常認為樣品降解量應在520%之間。對于含量限度為標示量的90%110%的小分子藥物，即使在文獻中有更廣泛的推薦范圍作為參考（例如，1030%）,通常允許10%的降解量。降解試驗破壞條件越劇烈，則越容易產(chǎn)生二級降解產(chǎn)物。|1.1光穩(wěn)定性光穩(wěn)定性試驗是強制降解試驗的重要組成部分，對光敏感藥物尤為重要。ICHQ1B指導原則提出了新原料藥和制劑的光穩(wěn)定性試驗條件。原料藥、固體/液體制劑，應暴露在總照度不低于1.2X106Lux?hr,近紫外能量不低

6、于200w?hr/m2的條件下，相同樣品應同時暴露在日光燈和近紫外燈下。可控制合適的溫度以減少局部溫度變化效應。光破壞樣品要檢查樣品是否有物理性質(zhì)（如外觀、溶液的顏色或澄清度）、含量和降解產(chǎn)物的變化。Q1B中列出的決策樹可以用來確定藥物的光穩(wěn)定性試驗條件。產(chǎn)品標簽應列出產(chǎn)品適宜儲存條件，要注意仿制藥標簽應和參考上市藥物標簽以及美國藥典（USP）相關建議（如適用）保持一致。|1.2熱穩(wěn)定性熱破壞試驗條件（例如：干熱破壞和濕熱破）應比ICHQ1A中推薦的加速試驗條件劇烈。固體原料藥和制劑應同時暴露于干熱和濕熱條件下，而液體制劑可以暴露于干熱條件下。建議破壞溫度應高于加速試驗溫度的10C,相對濕度為

7、75%或者更高。破壞試驗也可以在更高溫度條件下進行短時間破壞。對破壞樣品進行多個時間點檢測，能夠充分提供降解速率、一級與二級降解產(chǎn)物的信息。即使藥物較穩(wěn)定，產(chǎn)生較少降解產(chǎn)物或無降解產(chǎn)物產(chǎn)生，也應確保破壞強度高于在加速條件下（40C）放置6個月的破壞強度。|1.3酸堿水解原料藥與制劑應在常溫或更高溫度條件下，以溶液狀態(tài)進行酸堿水解破壞試驗，酸堿種類和濃度的選擇取決于藥物本身的特點。其中一種酸堿破壞試驗方案為樣品于室溫條件下放置，在不同pH條件下破壞兩周，并且破壞程度建議應不高于15%。酸降解一般采用0.1mol/L-1.0mol/L的鹽酸或硫酸，堿降解采用0.1mol/L-1.0mol/L的氫氧

8、化鈉或氫氧化鉀溶液。對于脂溶性藥物，可選擇惰性溶劑溶解藥物，在選擇助溶劑時，應考慮藥物分子中存在的官能團不與助溶劑發(fā)生反應。了解化合物的相關性質(zhì)對于選擇破壞條件是有用的，例如，一個化合物含有酯基，則它對堿是不穩(wěn)定的，則可選擇較低濃度的堿進行破壞，在不同時間點對樣品進行測定，能夠了解降解速率和區(qū)分一級、二級降解產(chǎn)物。|1.4氧化破壞氧化破壞試驗相對較復雜，過氧化氫應用較廣泛，因為能夠用它來模擬輔料中可能含有的過氧化物，其他氧化劑，如金屬離子，氧氣，以及自由基引發(fā)劑（例如，偶氮二異丁睛，AIBN）也可以應用。氧化劑種類和濃度的選擇取決于藥物本身的性質(zhì)。原料藥在溶液狀態(tài)下，制劑在溶液或固體狀態(tài)下進行

9、氧化破壞。據(jù)報道，樣品放置于室溫，在中性條件下經(jīng)濃度為0.1%到3%的過氧化氫破壞7天，最多能產(chǎn)生20%的降解產(chǎn)物。在不同時間點對樣品進行測定，以選擇所需的降解水平，不同的降解條件會產(chǎn)生相同或不同的降解產(chǎn)物，降解的類型和程度取決于樣品的官能團和降解條件。2、分析方法2.1試驗方法首選檢測方法是反相高效液相色譜法，原因如下：與水和有機溶劑具體良好的相容性，準確度好，靈敏度高，能夠檢測極性化合物。通過選擇合適的色譜柱、柱溫，調(diào)節(jié)流動相的pH值，從而達到各峰的分離。低保留，極性較大的雜質(zhì)會在溶劑峰前出峰。梯度洗脫作為分析方法的一部分，流動相中有機相比例由低到高過度，能夠檢測出低保留極性化合物和高度保

10、留的非極性化合物。也可以用梯度方法對破壞樣品進行檢測，來評估目前的洗脫方法是否能夠對樣品進行有效的檢測，選擇的樣品溶液和流動相應能充分反映和檢測出藥物本身、潛在雜質(zhì)和降解產(chǎn)物。破壞樣品的制備方法應盡可能地模擬分析過程中所用的樣品制備方法。對酸堿破壞樣品溶液進行酸堿中和稀釋是必要的。破壞樣品的圖譜應與空白溶液和未破壞樣品的圖譜進行對比，從而確定各降解產(chǎn)物的降解途徑。計算雜質(zhì)含量時，應扣除空白峰，空白，未破壞樣品和破壞樣品的圖譜均應顯示所有的已知和未知雜質(zhì)的含量。另外，手性化合物應該用手性分析手段來確定手性化合物的純度和穩(wěn)定性。分析方法應有足夠的靈敏度以檢測出較低水平的雜質(zhì)，（例如，應檢測出0.0

11、5%濃度的雜質(zhì)或者更低濃度的雜質(zhì)），并且峰響應值應在線性范圍內(nèi)的峰響應值以下。分析方法應能檢測到穩(wěn)定性研究過程中產(chǎn)生的所有雜質(zhì)（濃度為報告限度濃度或更低），依據(jù)ICH的要求和穩(wěn)定性研究結果，來決定降解產(chǎn)物是否應該被鑒定和界定。常規(guī)檢測方法（例如柱色譜法）或聯(lián)用技術（例如,LCWS,LC-NMR）均可應用于降解產(chǎn)物的鑒別和界定。通過使用這些技術可以更深入的了解雜質(zhì)結構以及了解各雜質(zhì)是否存在基因毒性警示結構，并對這些雜質(zhì)進行嚴格的控制。還應注意的是，對在穩(wěn)定性研究過程中產(chǎn)生的超過界定閾值限度的雜質(zhì)應進行界定?？梢杂貌煌臋z測方法對各破壞樣品進行檢測（例如，紫外和質(zhì)譜），所用的檢測器應具有三維數(shù)據(jù)分

12、析的能力，例如，二極管陣列檢測器或質(zhì)譜分析能夠檢測到光譜的非均勻性。當主峰和雜質(zhì)峰紫外吸收圖譜相似或者系統(tǒng)噪音水平過高從而掩蓋了雜質(zhì)或降解產(chǎn)物時，二極管陣列檢測器可進行多波長檢測。具有相同分子量和官能團的化合物（例如非對映異構體）會呈現(xiàn)出相似的紫外吸收圖譜。這種情況下，需要改變色譜參數(shù)以實現(xiàn)色譜峰的分離。應選定最佳波長來檢測和定量潛在雜質(zhì)和降解雜質(zhì)。如果被分析物、雜質(zhì)和降解產(chǎn)物紫外吸收沒有重疊，則應對樣品進行多波長檢測。在方法開發(fā)時，應對匯總不同檢測波長下雜質(zhì)的信息以發(fā)現(xiàn)峰值分布的異同。|2.2峰純度檢測峰純度是一種方法開發(fā)的輔助工具，當不同化合物共同洗脫時，依據(jù)化合物的光譜特性來反映峰純度指

13、標。未破壞樣品和破壞樣品的峰純度或峰均勻性是根據(jù)二極管陣列檢測器的光譜信息確立的。用于確定峰光譜純度的儀器軟件，相關參數(shù)應按照生產(chǎn)廠商的說明書進行設置，并確定峰純度檢測時對色譜峰峰高的要求。因為吸光度值過大，紫外檢測呈非線性，應同時設置儀器閾值，以確保共洗脫峰均能被檢出，并選擇參比光譜的最佳位置。在梯度洗脫過程中，應驗證軟件自動校正不斷變化的溶劑峰的能力。峰純度檢測不是確定檢測峰是否為純峰的絕對證明，當共洗脫峰光譜相似、樣品濃度低于檢測限濃度、檢測峰沒有發(fā)色團，或者樣品沒有溶解的情況下，峰純度檢測具有一定的局限性。|2.3質(zhì)量守衡盡管不是在所有的情況下，破壞樣品均能達到質(zhì)量平衡，但這種方法能使

14、穩(wěn)定性指示方法更加充分。此法可以通過樣品測量值、所有雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的測量值之和與未破壞樣品初始值接近100%的程度來確定，在計算時適當考慮產(chǎn)生的分析誤差。盡量使所有的破壞樣品均達到質(zhì)量守衡。若樣品質(zhì)量不守衡，則應進行深入研究，并對這種情況給出說明。由于被分析物和雜質(zhì)紫外吸收情況有顯著差異，應用外標法對樣品進行檢測。揮發(fā)性雜質(zhì)的潛在損失、非紫外吸收化合物的形成，不保留雜質(zhì)，強保留雜質(zhì)等情況都應被考慮在內(nèi)。交替檢測技術，例如示差折光檢測器與液質(zhì)聯(lián)用可以用來檢測非紫外吸收的降解產(chǎn)物。|3、研究終點確保樣品在各降解條件下進行充分的暴露后即可終止強制降解試驗，藥物分子典型活化能從12kcal/mol變換

15、到24kcal/mol。一種化合物不一定在每種降解條件下均產(chǎn)生降解，暴露極值的一般準則可參考相關文獻。一些穩(wěn)定藥物在任意降解條件下均不會產(chǎn)生降解，可以通過在藥物中加入已知雜質(zhì)來建立分析方法，同時應保證各峰能夠達到基線分離。另，在使用藥典和USP<621>中概述的限制使用的方法，降解試驗是沒有必要研究的。因為同一藥物的不同晶型可能具有不同的穩(wěn)定性特征，當一個仿制藥產(chǎn)品晶型不同于RLD產(chǎn)品晶型時，原料藥應進行降解試驗來評價多晶性藥物的理化變化。|四、相關說明在QbD理念中，研究關鍵質(zhì)量屬性滿足預定目標的產(chǎn)品，必須運用強制降解試驗中獲得的數(shù)據(jù)信息。在QbD理念中，一個精心設計的強制降解試

16、驗研究對于分析方法的開發(fā)是不可或缺的，它有助于建立一個穩(wěn)定的特異性指示方法和預測在穩(wěn)定性研究中可能形成的潛在降解產(chǎn)物。將所有潛在雜質(zhì)混合進行分析方法的建立，并且通過建立各峰峰純度的理念來幫助避免不必要的方法再開發(fā)和再驗證。藥物在各降解條件下的化學變化，為制劑處方篩選提供有用的信息。輔料相容性試驗的目的是了解藥物研發(fā)過程中，處方中各成分的相互作用，它是藥物研發(fā)過程中不可或缺的一部分。分別對原料藥、制劑與參比制劑進行強制降解試驗和雜質(zhì)分布對比，藥物與輔料相互作用或者復方中藥物和藥物的相互作用而產(chǎn)生的降解雜質(zhì)是可以考察的。從中獲得的藥物相關峰與藥物非相關峰的信息則可應用于更穩(wěn)定的制劑處方的選擇和研究。例如，如果一種藥物對氧敏感，需考慮在處方中加入抗氧劑；如果藥物本身對酸不穩(wěn)定，或者在酸性介質(zhì)中會轉換成其他物質(zhì)，那么將這種藥物做成緩釋制劑可能是必要的。酸堿水解破壞試驗可以為藥品制成液體制劑或混懸溶液制劑提供參考依據(jù)。在強制降解試驗研究中獲得的信息可以促進生產(chǎn)工藝過程的改進，如果光穩(wěn)定性試驗研究顯示藥物對光敏感，那么在藥品生產(chǎn)過程中就應注意這點。原料藥和制劑熱破壞性試驗可以為工藝開發(fā)提供有用的信息（例如，濕法制粒還是干法制粒，以及溫度的選擇）此外，提高降解產(chǎn)物和降解機制的科學認知可能有助于確定導致穩(wěn)定性試