生物化學(xué)技術(shù)習(xí)題冊答案

1、上海交通大學(xué)網(wǎng)絡(luò)教育學(xué)院醫(yī)學(xué)院分院 生物化學(xué)技術(shù) 課程習(xí)題冊答案專業(yè)：檢驗技術(shù) 層次：專升本緒論一、 名詞解釋1. 生物化學(xué)技術(shù)：是研究生物體的化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)、功能以及在生命活動中化學(xué)物質(zhì)的代謝、調(diào)節(jié)控制等的實驗方法。2. 鹽溶：蛋白質(zhì)、酶及其它們與其它物質(zhì)的復(fù)合體在離子強度低的鹽溶液中，其溶解度隨著鹽溶液濃度的升高而增加，此現(xiàn)象稱為“鹽溶”。3. 鹽析：當溶液中鹽濃度不斷上升，達到一定程度，蛋白質(zhì)等的溶解度反而逐漸減小，并先后從溶液中析出，稱為“鹽析”。4. 透析：利用溶液組分能否通過半透膜并由引起膜兩邊溶液的化學(xué)勢能不同，而達到去除溶液中的小分子物質(zhì)。5. 超濾（反向滲透）：利用壓力或離心

2、力，迫使水和其他小的溶質(zhì)分子通過半透膜，而蛋白質(zhì)不能透過半透膜仍留在膜上。6. 凝膠層析法（Gel Chromatography)：利用各種物質(zhì)分子大小不同，在固定相上受到阻滯程度不同而達到分離的一種層析方法。二、 單選題1.凝膠層析不可應(yīng)用于：（ B ）A. 脫鹽 B. 一步分離純化生物大分子物質(zhì) C. 高分子溶液的濃縮D. 測定高分子物質(zhì)的分子量 E分離分子大小不同的物質(zhì)2.核酸在紫外區(qū)有強吸收，其最大吸收值是在波長：（ C ）A206nm B240nm C260nm D280nm E304nm3.對260nm波長的紫外有強吸收主要是因為（ E ）A核糖的環(huán)式結(jié)構(gòu) B.脫氧核糖的環(huán)式結(jié)構(gòu)C

3、嘌呤的雙環(huán)結(jié)構(gòu) D.嘧啶的單環(huán)結(jié)構(gòu) E. 嘌呤和嘧啶環(huán)中的共軛雙鍵4.蛋白質(zhì)在紫外區(qū)有強吸收，其最大吸收值是在波長：（ D ）A206nm B240nm C260nm D280nm E304nm5.用紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)，因為蛋白質(zhì)在紫外區(qū)有個最大吸收峰，其峰值波長是：DA220nm B245nm C260nm D280nm E340nm6.用吸收光譜法測量雙鏈DNA的含量為：（ A ）A.C（ug/ml）=A260×50×稀釋倍數(shù) B.C（ug/ml）=A260×40×稀釋倍數(shù) C.C（ug/ml）=A260×30×稀釋倍數(shù) D

4、.C（ug/ml）=A260×20×稀釋倍數(shù)E.C（ug/ml）=A260×10×稀釋倍數(shù)7.用吸收光譜法測量單鏈DNA的含量為：（ B ）A.C（ug/ml）=A260×50×稀釋倍數(shù) B.C（ug/ml）=A260×40×稀釋倍數(shù) C.C（ug/ml）=A260×30×稀釋倍數(shù) D.C（ug/ml）=A260×20×稀釋倍數(shù)E.C（ug/ml）=A260×10×稀釋倍數(shù)8.用吸收光譜法測量RNA的含量為：（ B ）A.C（ug/ml）=A260

5、5;50×稀釋倍數(shù) B.C（ug/ml）=A260×40×稀釋倍數(shù) C.C（ug/ml）=A260×30×稀釋倍數(shù) D.C（ug/ml）=A260×20×稀釋倍數(shù)E.C（ug/ml）=A260×10×稀釋倍數(shù)9.以下哪一個比值說明DNA純度較高：（ C ）A.A260/A280=1.4 B.A260/A280=1.6 C.A260/A280=1.8 D.A260/A280=2.0E.A260/A280=2.210.以下哪一個比值說明RNA純度較高：（ D ）A.A260/A280=1.4 B.A260/A

6、280=1.6 C.A260/A280=1.8 D.A260/A280=2.0E.A260/A280=2.211.某人提取DNA后，將DNA溶液稀釋20倍，然后經(jīng)紫外分光光度計檢測結(jié)果為A260nm=0.44，A280nm=0.25，比色皿光徑1cm，該DNA樣品的濃度為：（ D ）A. 250g/ml B.264g/mlC.352g/ml D.440g/ml E.220g/ml12.以下哪一種方法不屬于物理破碎細胞法：（ C ）A組織勻漿法 B組織搗碎法 C有機溶劑法 D超聲波法 E反復(fù)凍融法13.以下哪一種方法適用于破碎細菌：（ D ）A組織勻漿法 B組織搗碎法 C有機溶劑法 D超聲波法

7、E反復(fù)凍融法14.鹽析時最常用的鹽是：（ C ）A硫酸鉀 B硫酸鈉 C硫酸銨 D硫酸鎂 E氯化鈉 15.測定蛋白質(zhì)分子量的方法有：（ C ）A.不連續(xù)PAGE、瓊脂糖凝膠電泳、醋纖薄膜電泳B.IEF、聚酰胺薄膜雙向?qū)游?、凝膠過濾 C.超濾、SDS-PAGE、凝膠過濾D.超速離心、透析、超濾 E.SDS-PAGE、PAGE、IEF16.以下哪一種方法根據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小不同來分離：（ D ）A.離子交換層析 B.聚酰胺薄膜雙向?qū)游?C.親和層析 D.凝膠層析 E.薄層層析17.以下哪一種方法根據(jù)蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)差異來分離：（ A ）A.離子交換層析 B.聚酰胺薄膜雙向?qū)游?C.親和層析 D.凝膠

8、層析 E.薄層層析18.要分離血漿蛋白取得某一單獨組分，下列方法不能使用：（ C ）A.色譜法 B.電泳法 C.染料結(jié)合法 D.鹽析法 E.層析法三、問答題1. 什么是生物化學(xué)技術(shù)？答：生物化學(xué)技術(shù)是研究生物體的化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)、功能以及在生命活動中化學(xué)物質(zhì)的代謝、調(diào)節(jié)控制等的實驗方法。2. 生物大分子的一般制備需要哪些步驟？答：選擇材料和預(yù)處理；組織細胞的破碎及細胞器的分離；生物大分子的分離純化；濃縮、干燥和保存。3. 組織細胞破碎的方法有哪些？答：物理方法：勻漿器；研缽；高速組織搗碎器；超聲波；滲透壓法；反復(fù)凍融法等。化學(xué)方法：有機溶劑（破壞細胞膜的脂質(zhì)雙分子層）。酶法：自溶法（蛋白酶、酯酶

9、）；酶解法（溶菌酶破壞微生物細胞壁的b-1，4-糖苷鍵）。4. 請歸納生物大分子分離純化的方法，并簡述方法原理。答：根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同：鹽溶、鹽析；根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同：透析和超濾、凝膠層析；根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性不同：電泳、離子交換層析；根據(jù)蛋白質(zhì)配體特異性：親和層析；根據(jù)蛋白質(zhì)分子密度不同：離心技術(shù)。5. 生物化學(xué)技術(shù)的特點有哪些？答：條件溫和；實驗條件與機體內(nèi)環(huán)境盡量符合。6. 什么是鹽溶和鹽析？答：蛋白質(zhì)、酶及其它們與其它物質(zhì)的復(fù)合體在離子強度低的鹽溶液中，其溶解度隨著鹽溶液濃度的升高而增加，此現(xiàn)象稱為“鹽溶”。當溶液中鹽濃度不斷上升，達到一定程度，蛋白質(zhì)等的溶解度反而逐漸減小，并先后從

10、溶液中析出，稱為“鹽析”。7. 什么是透析和超濾？答：透析：利用溶液組分能否通過半透膜并由引起膜兩邊溶液的化學(xué)勢能不同，而達到去除溶液中的小分子物質(zhì)。超濾（反向滲透）：利用壓力或離心力，迫使水和其他小的溶質(zhì)分子通過半透膜，而蛋白質(zhì)不能透過半透膜仍留在膜上。分光光度法原理一、名詞解釋1.光譜技術(shù)：根據(jù)物質(zhì)具有吸收、發(fā)射或輻射能（散射)的特征而建立起來的一類分析方法.具有靈敏度高、測定簡便、快速、不破壞試樣等優(yōu)點。2.發(fā)射光譜分析法：根據(jù)物質(zhì)受到熱能或電能等物質(zhì)激發(fā)所發(fā)射的特征光譜線進行定性及定量分析的一種方法。3.吸收光譜分析法：根據(jù)溶液能吸收由光源發(fā)出的某些波長光后所形成的光譜,利用這種光譜鑒

11、定物質(zhì)的性質(zhì)和含量的一種方法。4.散射光譜分析法：測定光線通過溶液混懸顆粒后光吸收或光散射程度的一類定量方法。5.吸光系數(shù)：吸光系數(shù)是吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。二、單選題 1.現(xiàn)測得某物質(zhì)的透光度為10%，則其吸光度A為：（ D ）A.0.01B.0.1C.0.1D.1 E.22.現(xiàn)測得某物質(zhì)的透光率為1%，則其吸光度A為：（ E ）A. 0.001 B.0.01 C. 0.2 D.1 E.23.波長200400nm的電磁波為：（ C ）A.紅外光 B.可見光 C.紫外光 D.無線電波 E.遠紅外4.波長400760nm的電磁波為：（ B ）A.紅外光 B.可見光 C.紫外光 D

12、.無線電波 E.遠紅外5.下面關(guān)于吸光度（A）與透光度（T）的關(guān)系的敘述哪條是正確的？（ D ）A吸光度是透光度的倒數(shù) B。吸光度是透光度的對數(shù) C吸光度是透光度平方的對數(shù)D。吸光度是透光度倒數(shù)的對數(shù) E吸光度是（1-T）的負對數(shù)6.用同一個有色溶液，在同一波長處，分別使用光程為2mm、4mm、6mm、8mm的比色皿在同一臺分光光度計上測定其吸光度，問所測結(jié)果將會是：（ C ）A 用各種比色皿測得的吸光度相同 B。它們的吸光度與光程呈對數(shù)關(guān)系C它們的吸光度依次分別為：x、2x、3x、4xD它們的吸光度依次分別為：x、x/2、x/3、x/4 E。它們的吸光度之間沒有一定規(guī)律7.調(diào)節(jié)分光光度計上狹

13、縫的大小對單色光純度的影響是：（ C ）A狹縫愈大光純度愈大 B。狹縫愈小光純度愈小 C。狹縫愈小光純度愈大D狹縫的大小不影響光的純度E。狹縫大小與光純度成正比8.下列兩種方法同屬于吸收光譜的是（ D ）A原子發(fā)射光譜和紫外吸收光譜 B原子發(fā)射光譜和紅外光譜C紅外光譜和熒光分析法D原子吸收光譜和可見光分光光度法E原子吸收光譜和透射比濁法9.輻射能作用于粒子（原子、分子或離子）后, 粒子選擇性地吸收某些頻率的輻射能, 并從低能態(tài)（基態(tài)）躍遷至高能態(tài)（激發(fā)態(tài)）, 這種現(xiàn)象稱為（ C ）A折射 B發(fā)射 C吸收 D散射 E透射10.在檢查一病人血紅蛋白溶液時，在630nm波長處，出現(xiàn)一吸收峰，這表明該

14、病人血液中何種血紅蛋白增高？（ C ）A氧合血紅蛋白 B脫氧血紅蛋白 C高鐵血紅蛋白 D羰氧血紅蛋白 E氰化高鐵血紅蛋白三、問答題1. 什么是物質(zhì)的吸光光譜？答：溶液中的物質(zhì)在光的照射下激發(fā)產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng).物質(zhì)對光的吸收具有選擇性(不同的物質(zhì)具有不同的分子結(jié)構(gòu),不同物質(zhì)對同一波長的單色光可有不同的吸光系數(shù))，各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。吸收光譜是物質(zhì)的特征曲線。一種物質(zhì)在一定條件下（pH、濃度、溫度等）具有一定形狀的吸收光譜曲線，可用于化合物的鑒定和結(jié)構(gòu)分析2. 光吸收的基本原理和基本定律是什么？答：光的吸收和發(fā)射時分子或原子是不連續(xù)的量子化能級,只有當照射光的能量與被照射物質(zhì)粒

15、子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量差相當時才能發(fā)生吸收或發(fā)射.因此由于不同的物質(zhì)具有不同的分子結(jié)構(gòu),不同物質(zhì)電子躍遷時所需的能量差不同,其電子只能吸收與其相同的能量差并躍遷至一定能級,所以物質(zhì)對光的吸收是選擇性吸收。LamberBeer定律是說明吸光物質(zhì)對單色光吸收的強弱與該物質(zhì)的濃度和厚度間關(guān)系的定律,是光吸收的基本定律。3. 吸光度和吸光系數(shù)兩者有何關(guān)系？答：吸光系數(shù)是吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。在給定條件（單色光波長、溶劑、溫度）下，吸光系數(shù)是物質(zhì)的特征性常數(shù)，只與該物質(zhì)分子在基態(tài)和激發(fā)態(tài)之間的躍遷幾率有關(guān),是定性的依據(jù)，其值愈大測定靈敏度愈高。吸光系數(shù)常有兩種表示方法:摩爾吸光系數(shù) 即1

16、摩爾濃度的溶液在厚度為1cm時吸光度.A = cL。百分吸光系數(shù) E1%即濃度為1%（w/v）的溶液在厚度為1cm時的吸光度.A = E1% cL。電泳原理、醋酸纖維簿膜電泳（CAME）、瓊脂糖凝膠電泳（AGE）一、名詞解釋1.電泳：帶電粒子在直流電場中向著電性相反電極移動的現(xiàn)象。2.電泳分析技術(shù)：利用電泳現(xiàn)象對樣品進行分離、鑒定或提純的技術(shù)。3.遷移率(Mobility)：帶電顆粒在單位電場強度下的泳動速度。M=V/E=Q/6r。4.等電點：蛋白質(zhì)為兩性電解質(zhì)，兼有酸性基團(-COOH)及堿性基團(-NH2)。當在特定的pH溶液中所帶的正負電荷數(shù)恰好相等,即分子的凈電荷為零,此時蛋白質(zhì)在電場

17、中不再移動,溶液的這一pH稱為該蛋白質(zhì)的等電點。5.電滲：液體在電場中對于固體支持介質(zhì)的相對移動，稱電滲。6.分子篩：在凝膠電泳中，支持介質(zhì)的篩孔大小對待分離物質(zhì)的電泳遷移速度有明顯的影響，篩孔大泳動速度快；反之，則泳動速度慢。7.凝膠電泳：是由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠或聚丙烯酰胺等物質(zhì)作支持體的電泳。二、單選題1.在血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳中，下列哪種物質(zhì)帶負電荷量最多？（ A ）A.白蛋白 B.1-球蛋白 C.1-球蛋白 D.-球蛋白 E.-球蛋白 2.在血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳中，下列哪種物質(zhì)帶負電荷量最少？（ E ）A.白蛋白 B.1-球蛋白 C.1-球蛋白 D.-球蛋白 E.-球蛋白

18、 3.在血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳中，下列哪種物質(zhì)分子量最大？（ E ）A.白蛋白 B.1-球蛋白 C.1-球蛋白 D.-球蛋白 E.-球蛋白 4.在血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳中，下列哪種物質(zhì)分子量最??？（ A ）A.白蛋白 B.1-球蛋白 C.1-球蛋白 D.-球蛋白 E.-球蛋白 5.在血清脂蛋白瓊脂糖電泳中，下列哪種物質(zhì)帶負電荷量最多？（ A ）A.-脂蛋白 B.前-脂蛋白 C. -脂蛋白 D. 乳糜微粒 6.在血清脂蛋白瓊脂糖電泳中，下列哪種物質(zhì)帶負電荷量最少？（ D ）A.-脂蛋白 B.前-脂蛋白 C. -脂蛋白 D. 乳糜微粒 7.在血清脂蛋白瓊脂糖電泳中，下列哪種物質(zhì)分子量最大？

19、（ D ）A.-脂蛋白 B.前-脂蛋白 C. -脂蛋白 D. 乳糜微粒 8.在血清脂蛋白瓊脂糖電泳中，下列哪種物質(zhì)分子量最小？（ A ）A.-脂蛋白 B.前-脂蛋白 C. -脂蛋白 D. 乳糜微粒 9.有一混合蛋白質(zhì)溶液，各種蛋白質(zhì)的pI為4.6、5.0、5.3、6.7、7.3，電泳時欲使其中四種泳向正極，緩沖液的pH應(yīng)該是（ A ）A. 7.0 B. 6.0 C. 8.6 D. 4.0 E.3.0 10.有一混合蛋白質(zhì)溶液，其中蛋白質(zhì)的pI分別為4.6、5.0，電泳時欲使它們泳向正極，緩沖液的pH應(yīng)該是（ A ）A. 6.0 11.血清蛋白在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳，如其他條件相同，不同

20、的僅是電場強度不同，問在何種情況下蛋白質(zhì)泳動最快？（ B ）A5v/1cm B20 v/1cm C8 v/1cm D15 v/1cm E12 v/1cm12.血紅蛋白在不同離子強度的pH8.6巴比妥緩沖液中電泳，如其他條件相同，在何者中電泳速度最快？（ A ）A0.02M巴比妥緩沖液 B0.03M巴比妥緩沖液 C0.04M巴比妥緩沖液D0.05M巴比妥緩沖液 E0.06M巴比妥緩沖液13.現(xiàn)有一血清清蛋白和血紅蛋白的混合液，欲用電泳法使其分離，問在何種pH值時分離最為有效（血清清蛋白等電點為4.9，血紅蛋白的等電點為6.8）？（ E ）ApH8.6緩沖液 BpH6.5緩沖液 CpH4.9緩沖液

21、 DpH6.8緩沖液 EpH5.85緩沖液三、問答題1什么是電泳？什么是電泳技術(shù)？答：電泳即帶電粒子在直流電場中向著電性相反電極移動的現(xiàn)象。電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下，由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對樣品進行分離、鑒定或提純的技術(shù)。 2按照電泳原理不同可將電泳技術(shù)分哪幾類？答：自由界面電泳：在形管中進行電泳，無支持介質(zhì),分離效果差,現(xiàn)已被淘汰。區(qū)帶電泳：各組分在支持介質(zhì)中被分離成許多條明顯的區(qū)帶，如濾紙電泳、醋纖膜電泳。穩(wěn)態(tài)電泳：電泳遷移在一定時間后達到穩(wěn)態(tài),如等電聚焦和等速電泳。 3電泳的基本原理是什么？什么是電泳的

22、相對遷移率？答：電泳的基本原理是：一個質(zhì)點，如能解離或能吸附帶電顆粒，在電場中便會向電性相反電極移動。不同的質(zhì)點，由于帶電性質(zhì)、帶電量、分子大小及形狀的不同，在一定的電場強度下移動的方向和速度也不同，經(jīng)一定時間電泳后彼此被分開。電泳的相對遷移率即帶電顆粒在單位電場強度下的泳動速度。M=V/E=Q/6r。4影響電泳速度的因素有哪些？答：影響電泳速度的因素有：電場強度；離子強度；緩沖液的pH；電滲；分子篩；待分離物質(zhì)的性質(zhì)。5醋酸纖維薄膜電泳的基本原理是什么？答：CAME是以醋纖膜作支持物的一種區(qū)帶電泳技術(shù)。在pH8.6的緩沖液中電泳時，血清蛋白質(zhì)均帶負電荷移向正極。 由于血清中各蛋白組份的pI

23、不同而致帶電荷量不等, 加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。電泳后,CAM經(jīng)染色和漂洗,可清晰呈現(xiàn)5條區(qū)帶。再經(jīng)脫色、比色即可計算出血清各蛋白組份的相對百分數(shù)。6瓊脂糖凝膠電泳的基本原理是什么？答：血清脂蛋白經(jīng)飽和蘇丹黑B預(yù)染后，以瓊脂糖為載體,在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳,由于各種脂蛋白所帶的電荷及形狀、大小不同而被分離。聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、等電聚焦電泳（IEF）一、名詞解釋1.聚丙烯酰胺凝膠：是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N，N-亞甲基雙丙烯酰胺通過自由基聚合而成的一種多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。2.凝膠總濃度：100ml凝膠溶液中，Acr和Bis的總濃度。凝膠總濃度越

24、大，孔徑越小，適合分離小分子物質(zhì)。3.交聯(lián)度：交聯(lián)劑的百分含量即Bis占Acr與Bis總和的百分比。4.等電聚焦電泳：是一種利用具有pH梯度的支持介質(zhì)來分離等點電不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。二、單選題1.本學(xué)期所學(xué)的電泳中，需進行預(yù)電泳的有：（ C ）A. PAGE B. SDS-PAG C. IEF D. CAME E.AGE2.IEF電泳時（ D ）A.上極槽置酸液，下極槽置堿液 B.酸液置負極槽，堿液置正極槽C.上極槽置堿液，下極槽置酸液 D.堿液置負極槽，酸液置正極槽 3.IEF電泳時（ D ）A.上槽置酸液，下槽置堿液 B.上槽置堿液，下槽置酸液C.負極槽置酸液，正極槽置堿液 D.負極槽

25、置堿液，正極槽置酸液 4.PAGE中，表示凝膠濃度的參數(shù)T值：（ C ）A. T越大，凝膠網(wǎng)孔越大，適用于分離大分子物質(zhì)B. T越小，凝膠網(wǎng)孔越小，適用于分離小分子物質(zhì)C. T越大，凝膠網(wǎng)孔越小，適用于分離小分子物質(zhì)D. T越小，凝膠網(wǎng)孔越小，適用于分離小分子物質(zhì)5.聚丙烯酰胺凝膠電泳比一般電泳的分辨率高，是因為具有一些特殊的效應(yīng)，但除外：（ B ）A. 濃縮效應(yīng) B. 粘度效應(yīng) C. 電荷效應(yīng) D. 分子篩效應(yīng) 6.在PAGE中，TEMED所起的作用為（ A ）A. 加速劑 B. 催化劑 C. 兩者都是 D. 兩者都不是7.聚丙烯酰胺凝膠電泳不具有以下哪個效應(yīng)？（ D ）A.濃縮效應(yīng) B.分

26、子篩效應(yīng) C.電荷效應(yīng) D.粘質(zhì)效應(yīng)8.不連續(xù)與連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳相比，哪種效應(yīng)是其特有？（ A ）A.濃縮效應(yīng) B.分子篩效應(yīng) C.電荷效應(yīng) D.粘質(zhì)效應(yīng)9.在PAGE中，AP所起的作用為（ B ）A. 加速劑 B. 催化劑 C. 兩者都是 D. 兩者都不是10.過硫酸銨-TEMED系統(tǒng)常用于在制備：（ C ）A淀粉凝膠 B瓊脂糖凝膠 C聚丙烯酰胺凝膠 D瓊脂凝膠 E淀粉板11.在制備聚丙烯酰胺凝膠時，其交聯(lián)劑是：（ B ）ATEMED B亞甲雙丙烯酰胺 C丙烯酰胺 D核黃素 E過硫酸銨12.聚丙烯酰胺凝膠的機械性能取決于：（ D ）A成膠后環(huán)境的溫度 B緩沖溶液的pH值 C催化劑的濃度

27、D丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺總的濃度和交聯(lián)度 E亞甲雙丙烯酰胺的濃度13.Ampholine在等電聚焦中的作用是：（ D ）A制備凝膠的催化劑 B蛋白質(zhì)的染料 C蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑D兩性電解質(zhì)載體，在電泳中構(gòu)成pH梯度 E蛋白質(zhì)的變性劑三、問答題1聚丙烯酰胺凝膠是由哪些物質(zhì)如何聚合而成的？答：PAG是由單體丙烯酰胺（acrylamide，Acr）和交聯(lián)劑N，N-亞甲基雙丙烯酰胺（N，N，-methylene bisacrylamide，Bis）通過自由基聚合而成的一種多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。通常采用化學(xué)聚合，催化劑是AP，加速劑是TEMED。2什么是凝膠總濃度和交聯(lián)度？答：凝膠總濃度即100ml凝膠溶液中，

28、Acr和Bis的總濃度。凝膠總濃度越大，孔徑越小，適合分離小分子物質(zhì)。交聯(lián)度即交聯(lián)劑的百分含量即Bis占Acr與Bis總和的百分比。3不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理是什么？答：不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳是由四個不連續(xù)，即凝膠層的不連續(xù)、緩沖液離子成分的不連續(xù)、pH值的不連續(xù)、電位梯度不連續(xù)，當電荷和分子大小不一的血 清蛋白通過凝膠時，不連續(xù)的電泳由于濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)和分 子篩效應(yīng)，各組分被精細的分離開來。4等電聚焦電泳的基本原理是什么？答：在電泳介質(zhì)中加入載體兩性電解質(zhì)，當通入直流電時，兩性電解質(zhì)即形成一個由正極到負極、pH逐漸增加的梯度。蛋白質(zhì)進入這個環(huán)境時，不同的蛋白質(zhì)帶上不同性質(zhì)和數(shù)

29、量的電荷，向著一定的方向移動，當遷移到與其相同的等電點位置時不再移動，即被聚焦于一個狹窄的區(qū)帶中，得以分離。5等電聚焦電泳的關(guān)鍵步驟是什么？答：等電聚焦電泳的關(guān)鍵步驟是是由正極到負極、pH逐漸增加的梯度的形成。層析原理、凝膠層析、親和層析一、名詞解釋1.吸附層析法:固定相是固體吸附劑.利用吸附劑對不同組分吸附能力的不同加以分離的方法。2.分配層析法:固定相是液體.利用各組分在兩液相中分配系數(shù)的差別而分離。3.凝膠層析法:固定相是一種多孔凝膠.利用各組分之間分子大小不同,因而在凝膠上受阻滯的程度也不同而獲得分離。4.親和層析法:利用各種待分離組分生物學(xué)性質(zhì)不同的一種層析,固定相只能與一種待分離組

30、分有高度專一性的親和結(jié)合能力,藉此和沒有親和力的其它組分分離。5.保留值：是表示樣品中各組分在層析柱中停留時間的長短或組分流出時所需流動相體積的大小。6.分配系數(shù)：通常被用來敘述一種化合物在互不相溶的兩個相中分配的狀況。對于層析來說，分配系數(shù)定為分配平衡時該化合物在移動相中的濃度除以固定相中的濃度。7.配基：在親和層析中能被某一生物分子識別和可逆結(jié)合的生物專一性物質(zhì)稱作配基。8.載體：在親和層析中，與配基共價結(jié)合，使配基固相化的物質(zhì)。9.分子篩效應(yīng)：當被分離物質(zhì)流經(jīng)凝膠柱時,因各組分的分子大小不同在凝膠中受到的阻值作用有差異,從而造成各組分在凝膠柱中的遷移速度不同得到分離。10.洗脫體積Ve:

31、指被分離物質(zhì)通過凝膠柱所需洗脫液的體積。二、單選題1.在凝膠層析中，下列哪種說法是錯誤的？（ B ）A. Ve = Vo 故Kd = 0 B. Ve = Vi故Kd = 1C. Ve = Vo + Vi故Kd = 1 D. 0<Kd <1故Ve = Vo + Kd Vi 2.在凝膠層析中，下列哪種說法是正確的？（ D ）A. Kd =1故Ve = Vo B. Kd = 0故Ve = Vi C. Kd =0故Ve = Vo + Vi D. 0<Kd <1故Ve = Vo + Kd Vi 3.Bio-Gel P-100允許進入凝膠內(nèi)部的最大分子量為（ D ）A. 100 B

32、. 1000 C. 10000 D. 1000004.在親和層析中，Kd越大則（ B ）A. KL越大 B. KL 越小 C. KL不變 D. KL不定5.根據(jù)蛋白質(zhì)分子的配基專一性進行分離的是：（ D ）A.離子交換層析法 B.凝膠層析法 C.超速離心法D.親和層析法6.用凝膠層析法分離甲乙兩蛋白，甲蛋白Kd=0.25，乙蛋白Kd=0.75，下列敘述正確的是：AA.甲蛋白分子量大，先被洗脫 B.乙蛋白分子量大，先被洗脫C.甲蛋白的洗脫體積大 D.甲蛋白在凝膠中受到的阻滯作用大7.葡聚糖Sephadex G50每克凝膠吸水量為：（ C ）ml B.0.5ml C.5ml D.50ml8.Sep

33、hadex G75每克干凝膠的吸水量為：（ B ）A. 0.75ml B. 7.5ml C. 7.5L D. 75ml9.凝膠過濾時通過凝膠柱慢的是：（ B ）A. 大的溶質(zhì)分子 B. 小的溶質(zhì)分子C. 形態(tài)不規(guī)則的物質(zhì) D. 帶電荷小的物質(zhì)10.凝膠過濾時通過凝膠柱快的是：（ A ）A.大的溶質(zhì)分子 B.小的溶質(zhì)分子 C.形態(tài)不規(guī)則的物質(zhì) D.帶電荷少的物質(zhì)11.用Sephadex G50分離血紅蛋白和魚精蛋白時，魚精蛋白的Ve減血紅蛋白的Ve得該層析柱的：（ A ）A. 內(nèi)水體積 B.外水體積 C.凝膠總體積 D.凝膠干體積12.以下哪種方法可測定蛋白質(zhì)分子量：（ C ）A.不連續(xù)PAGE

34、 B.IEF C.凝膠層析 D.超速離心13.下面是對親和層析的一些說法，你認為何者是對的？（ C ）A是吸附層析的另一種說法 B只是一種僅適用于蛋白質(zhì)分離的方法C是一種對酶制備極有用的方法 D它對大分子缺少專一性E它的本質(zhì)仍是分配層析14.今將含有X，Y，Z混合物的樣品，上樣在Sephadex G-25凝膠柱，已知其洗脫順序是Y在先而Z最后下來，是否可認為：（ D ）AZ是糖類，親和力大 BZ的溶解度最小 CZ的分子量最大DZ的分子量比X小 EZ的分子量比Y大三、問答題1什么是層析？其兩個基本相分別是什么？答：層析是一種利用混合物中各理化性質(zhì)的不同,而使各組分借以分離的方法。其兩個基本相分別

35、是固定相、流動相。2什么是層析的分配系數(shù)？層析的基本原理是什么？答：分配系數(shù)是在一定條件下,物質(zhì)在固定相和流動相間達到平衡時, 它在固定相和流動相中平均濃度的比值。層析的基本原理：不同物質(zhì)在不同的兩相即固定相和流動相中具有不同的分配系數(shù),當這些物質(zhì)隨著流動相移動時,它們在兩相中反復(fù)多次分配從而使各物質(zhì)得到完全的分離。3什么是凝膠層析的基本原理？答：凝膠層析的基本原理：當被分離物質(zhì)流經(jīng)凝膠柱時,因各組分的分子大小不同在凝膠中受到的阻值作用有差異,從而造成各組分在凝膠柱中的遷移速度不同得到分離。4凝膠層析的分配系數(shù)如何表示？答：Kd =(Ve- V0)/ Vi。5親和層析的基本原理是什么？答：親和

36、層析是利用生物大分子之間有專一的親和力而達到分離純化的層析方法。6什么是配基？什么是載體？答：在親和層析中把能被某一生物大分子識別和可逆結(jié)合的生物專一性物質(zhì)稱為配基。載體是在親和層析中，與配基共價結(jié)合，使配基固相化的物質(zhì)。離子交換層析、雙向?qū)游鲆弧⒚~解釋1.離子交換層析：是以離子交換劑為固定相,以特定的含離子的溶液為流動相,利用離子交換劑對需要分離的各種離子結(jié)合力的差異,而將混合物中不同離子進行分離的層析技術(shù)。2.離子交換劑: 在惰性載體上引入(以共價結(jié)合的方式)帶有電荷的活性基團。3.陽離子交換劑:載體上帶有負電荷的功能基團,能結(jié)合溶液中的正電荷。4.陰離子交換劑:載體上帶有正電荷的功能基

37、團,能結(jié)合溶液中的負電荷。5.目數(shù)：離子交換樹脂的顆粒直徑大小 ，目數(shù)越大，顆粒直徑越小。6.活度：吸附劑的吸附能力常稱為活度，用羅馬數(shù)字、表示。從至，活度逐漸減少，含水量逐漸增大。二、單選題1.用離子交換層析法分離一蛋白質(zhì)混合物，所用陽離子交換劑為Dowex50，洗脫緩沖液pH為6.0，請問第一個被洗脫下來的氨基酸是：（ B ）A.賴氨酸 （pI 9.74） B.天冬氨酸（pI 2.77） C.精氨酸 （pI 10.76） D.纈氨酸 （pI5.96）2.離子交換層析的主要原理是利用物質(zhì)的（ C ）A.在兩相的吸附力不同 B.在兩相的溶解度不同 C.離子交換不同 D.分子大小不同3.在離子交

38、換層析中，分配系數(shù)與溶質(zhì)的關(guān)系是決定于：（ A ）A離解狀態(tài) B極性大小 C溶解度 D分子大小E分子結(jié)構(gòu)4.有一氨基酸混合液，已知含賴氨酸（pI=9.74）苯丙氨酸（pI=5.48），精氨酸（pI=10.76）及谷氨酸（pI=3.22），在陽離子交換柱上層析，以pH5.38緩沖液洗脫，推測其洗脫順序是：（ C ）A精-賴-苯丙-谷 B苯丙-谷-賴-精 C谷-苯丙-賴-精D賴-精-苯丙-谷 E谷-賴-苯丙-精5.氨基酸與茚三酮反應(yīng)的終產(chǎn)物是紫藍色至紫紅色，其最大吸收波長是：（ D ）A420nm B480nm C540nm D570nm M E650nm6.DNS-Cl可與氨基酸的哪個基團結(jié)合成

39、DNS-氨基酸？（ A ）A.-氨基 B.-氨基 C.-氨基 D.-氨基7.下列不同活度的吸附劑中吸附能力最強的是：（ A ）A級 B級 C級 D級8.下列不同活度的吸附劑中吸附能力最弱的是：（ D ）A級 B級 C級 D級三、問答題1什么是離子交換層析？離子交換層析分離氨基酸的基本原理是什么？答：離子交換層析是以離子交換劑為固定相,以特定的含離子的溶液為流動相,利用離子交換劑對需要分離的各種離子結(jié)合力的差異,而將混合物中不同離子進行分離的層析技術(shù)。離子交換層析分離氨基酸的基本原理是依據(jù)離子交換劑對需要分離的各種氨基酸結(jié)合力的差異。2什么是陽離子交換劑？答：離子交換劑即在惰性載體上引入(以共價

40、結(jié)合的方式)帶有電荷的活性基團。陽離子交換劑即載體上帶有負電荷的功能基團,能結(jié)合溶液中的正電荷。3什么是吸附層析，其基本原理是什么？答：以固體吸附劑為固定相,利用各組分在吸附劑表面吸附能力的差異而分離的層析法。吸附層析是利用溶質(zhì)在吸附劑和溶劑中的可逆平衡,以及吸附劑對不同物質(zhì)吸附力的不同而達到分離的目的。4簡述薄層層析概念及原理。答：薄層層析法是在平滑的玻板或在聚酰胺薄膜上將吸附劑鋪在上面成薄層作為固定相,以溶劑(展開劑)作為流動相,把樣品中各組分分離。使用最多的是吸附層析的原理，層析時將樣品點在薄膜上,流動相沿著薄膜一定方向移動,當流經(jīng)樣品點時,待分離組分在兩相間進行分配,由于不同組分有不同

41、的分配系數(shù),在薄膜上移動的速度也不同,一定時間后不同組分移動距離遠近不一,從而得到分離。5DNS-氨基酸的雙向聚酰胺簿膜層析原理是什么？答：二甲氨基萘磺酰氯簡稱DNS-Cl，可與氨基酸的游離氨基結(jié)合成DNS-氨基酸，混合氨基酸隨流動相通過聚酰胺薄膜時,待分離氨基酸與聚酰胺薄膜形成氫鍵.由于各種氨基酸形成氫鍵的能力強弱不同,因此決定了各待分離氨基酸吸附力的差異,吸附力強展層速度較慢,吸附力弱展層速度較快。同時展層溶劑與待分離氨基酸在聚酰胺粒子表面競爭形成氫鍵,選擇適當?shù)恼箤尤軇?就可使待分離氨基酸在溶劑與聚酰胺薄膜表面之間分配系數(shù)產(chǎn)生最大的差異。一般講,易溶于展層溶劑的物質(zhì)所受到的動力作用大,展

42、層速度快,反之速度就慢。這樣通過各物質(zhì)的吸附力和分配系數(shù)不同,使得被分離的物質(zhì)在聚酰胺薄膜層析中的到分離。組織DNA提取、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）一、名詞解釋聚合酶鏈反應(yīng)：聚合酶鏈(PCR)技術(shù)是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法.又稱無細胞克隆技術(shù).不通過活細胞，操作簡便，在數(shù)小時內(nèi)可使幾個拷貝的模板序列甚至一個DNA分子擴增107108倍，大大提高了DNA的得率。二、單選題1.某人提取DNA后，將DNA溶液稀釋10倍，然后經(jīng)紫外分光光度計檢測結(jié)果為A260nm=0.44，A280nm=0.25，比色皿光徑1cm，該DNA樣品的濃度為：（ D ）A. 250g/mlB.132g/

43、mlC.176g/mlD.220g/ml 2.下列幾種DNA分子的堿基組成比例各不相同，哪一種DNA的Tm較低？（ D ）A. DNA中A-T占 15% B. DNA中G-C占 25% C. DNA中G-C占40% D. DNA中A-T占80% 3.PCR反應(yīng)中不需要哪種物質(zhì)？（ C ）AMg2+B.引物 C.RNA酶 D.DNA聚合酶 4. PCR反應(yīng)中需要哪酶？（ D ） A.蛋白酶B.限制性內(nèi)切酶C.溶菌酶D.Taq DNA聚合酶5.為制備完整的人體細胞DNA，處理樣品時不可（ A ）A. 劇烈震蕩 B. 將蛋白質(zhì)除凈 C. 將多糖除凈 D. 加核酸酶抑制劑6.提取DNA的原則除外的是：（ B ）A.保證核酸一級結(jié)構(gòu)完整性 B.保留所有核酸分子C.核酸樣品中不應(yīng)存在有機溶劑和過高濃度的金屬離子D.蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到最低程度7.下列關(guān)于DNA變性的敘述哪一項是正確的？（ D ）A. 升高溫度是變性的唯一原因B. DNA熱變性是一種漸進過程，無明顯分界線C. 核酸變性是DNA的獨有現(xiàn)象，RNA無此現(xiàn)象D. 凡引起DNA兩股互補鏈間氫鍵斷裂的因素，都可使其變性8.組織DNA提取中，苯酚-氯仿抽提離心分三層，DNA位于：（ A ）A.上層 B.中間層 C.下層 D.上下層均有9.組織DNA提取中，苯酚-氯仿抽提離心分三層，變性蛋白質(zhì)位于：（ B ）A.上層 B.