雙縮脲法測定蛋白質(zhì)（教學(xué)課件）

1、2021/4/26專業(yè) 課件12021/4/26專業(yè) 課件2實驗記錄實驗記錄實驗記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過程中積累資料、經(jīng)驗的一項重要工作，每一次實驗過程實驗記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過程中積累資料、經(jīng)驗的一項重要工作，每一次實驗過程中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時做好記錄和總結(jié)。中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時做好記錄和總結(jié)。要求：要求： 真實性真實性 原始性原始性 完整性完整性 條理性條理性實驗報告的書寫實驗報告的書寫實驗結(jié)束后，應(yīng)及時整理和總結(jié)實驗結(jié)果，寫出實驗報告。完整的實驗報告應(yīng)包實驗結(jié)束后，應(yīng)及時整理和總結(jié)實驗結(jié)果，寫出實驗報告。完整的實驗報告應(yīng)包括：實驗題目、實驗?zāi)康睦ǎ簩嶒烆}目、實驗?zāi)康?、實驗

2、日期、操作步驟與條件、實驗結(jié)果、討論和結(jié)、實驗日期、操作步驟與條件、實驗結(jié)果、討論和結(jié)論等項目。論等項目。2021/4/26專業(yè) 課件3實驗室規(guī)則實驗室規(guī)則 上實驗課時不遲到，不早退，自覺遵守課堂紀(jì)律，上課時應(yīng)保持實驗室安靜，不得大上實驗課時不遲到，不早退，自覺遵守課堂紀(jì)律，上課時應(yīng)保持實驗室安靜，不得大聲說笑。進(jìn)入實驗室必須穿實驗工作服。聲說笑。進(jìn)入實驗室必須穿實驗工作服。 實驗課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實驗?zāi)康摹⒁蠛妥⒁馐马?，熟悉實驗?nèi)容和方法實驗課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實驗?zāi)康?、要求和注意事項，熟悉實驗?nèi)容和方法步驟。步驟。 實驗時應(yīng)遵守實驗操作規(guī)程，按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察

3、實驗現(xiàn)象，認(rèn)真記實驗時應(yīng)遵守實驗操作規(guī)程，按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察實驗現(xiàn)象，認(rèn)真記錄實驗數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫出實驗報告。錄實驗數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫出實驗報告。要愛護(hù)公物，小心使用儀器和實驗設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和器材。要愛護(hù)公物，小心使用儀器和實驗設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和器材。所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶中。強酸、強堿必所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶中。強酸、強堿必須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。2021/4/26專業(yè) 課件4實驗室和實驗臺應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢，立即

4、蓋嚴(yán)并還原。實驗完畢，儀器洗實驗室和實驗臺應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢，立即蓋嚴(yán)并還原。實驗完畢，儀器洗凈放好。凈放好。在實驗過程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動亂用。如不會使用，應(yīng)請教指導(dǎo)教在實驗過程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動亂用。如不會使用，應(yīng)請教指導(dǎo)教師。凡因亂動亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠師。凡因亂動亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠償和處理。償和處理。 嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實驗室內(nèi)學(xué)生輪流安排值日，實嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實驗室內(nèi)學(xué)生輪流安排值日，實驗結(jié)束離開實驗室之前，關(guān)好窗戶

5、，切斷電源，水源，確保安全。驗結(jié)束離開實驗室之前，關(guān)好窗戶，切斷電源，水源，確保安全。2021/4/26專業(yè) 課件5試劑使用規(guī)則試劑使用規(guī)則使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實驗所需。使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實驗所需。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原瓶。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原瓶。取標(biāo)準(zhǔn)溶液時，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干試管中，再用干凈吸管吸取標(biāo)準(zhǔn)液，以免取標(biāo)準(zhǔn)溶液時，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干試管中，再用干凈吸管吸取標(biāo)準(zhǔn)液，以免污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。使用滴管時，滴管尖端朝下

6、，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用滴管時，滴管尖端朝下，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用有毒試劑及強酸強堿時，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿使用有毒試劑及強酸強堿時，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。用嘴吸取，以免造成意外。2021/4/26專業(yè) 課件6吸量管的使用吸量管的使用正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上端。端。調(diào)刻度：吸量管與地面保

7、持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體調(diào)刻度：吸量管與地面保持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放開食指，使液體自動流出。吸量管應(yīng)最后靠壁量管仍保持垂直。放開食指，使液體自動流出。吸量管應(yīng)最后靠壁1515秒。秒。2021/4/26專業(yè) 課件7吸量管上端標(biāo)有吸量管上端標(biāo)有“吹吹”字。將所量液體全

8、部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶字。將所量液體全部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶液。此類吸量管為液。此類吸量管為“吹出式吹出式”，未標(biāo)，未標(biāo)“吹吹”字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留液體。液體。(0.5ml(0.5ml以下的都要吹）以下的都要吹）吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管及試劑。及試劑。吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時用自來水沖吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時用自來水沖洗干凈。如果吸取一般試劑

9、的吸量管可不必馬上沖洗，待實驗完畢后，用自來水洗干凈。如果吸取一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，待實驗完畢后，用自來水沖洗干凈，晾干備用。沖洗干凈，晾干備用。 吸量管的使用注意事項吸量管的使用注意事項2021/4/26專業(yè) 課件8玻璃器皿的一般清洗方法玻璃器皿的一般清洗方法一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來水洗刷后，用洗衣粉刷洗，一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自來水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗再用自來水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗2 23 3次。干燥備用。次。干燥備用。容量分析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來水沖洗，待晾干后，再用容量分

10、析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來水沖洗，待晾干后，再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時，然后用自來水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗鉻酸洗液浸泡數(shù)小時，然后用自來水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗2 23 3次，干燥次，干燥備用。備用。比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗。洗不凈時，用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗。洗不凈時，用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用自來水沖洗。避免用堿液或強氧化劑清洗，切忌用試管刷或粗糙布自來水沖洗。避免用堿液或強氧化劑清洗，切忌用試管刷或粗糙布( (紙紙) )擦拭。擦拭。上述所有玻璃器材洗凈上述所有玻璃器材洗凈( (以倒置后器壁不掛水珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn)以倒置后器壁不掛水

11、珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn)) )后，根據(jù)需要晾干后，根據(jù)需要晾干或烘干?；蚝娓伞?2021/4/26專業(yè) 課件9分光光度法分光光度法光是一種電磁波，通常用頻率和波長來描述光。光是一種電磁波，通常用頻率和波長來描述光。人的視覺所能感覺到的光稱為可見光，波長范圍在人的視覺所能感覺到的光稱為可見光，波長范圍在400760nm，人的眼睛感覺不到的，人的眼睛感覺不到的還有紅外光（波長大于還有紅外光（波長大于760-5000000nm）、紫外光（波長）、紫外光（波長200-400nm）、）、X射線等。射線等。在可見光區(qū)，不同波長的光呈不同的顏色，但各種有色光之間并沒有嚴(yán)格的界線，而在可見光區(qū)，不同波長的光呈不同的顏色

12、，但各種有色光之間并沒有嚴(yán)格的界線，而是由一種顏色逐漸過渡到另一種顏色。是由一種顏色逐漸過渡到另一種顏色。溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系一般性實驗一般性實驗-1-12021/4/26專業(yè) 課件10Beer-Lambert定律吸收光譜法基本定律定律吸收光譜法基本定律描述物質(zhì)對單色光吸收強弱與厚度和待測物濃度的關(guān)系。描述物質(zhì)對單色光吸收強弱與厚度和待測物濃度的關(guān)系。含義：一束單色光通過溶液時，光能被吸收的程度與溶液的濃度和液層厚度成正比。含義：一束單色光通過溶液時，光能被吸收的程度與溶液的濃度和液層厚度成正比。AKCL 或或 lgI0/I =KCLA A為溶液對光的吸光度

13、為溶液對光的吸光度，反映了物質(zhì)對光的吸收程度；，反映了物質(zhì)對光的吸收程度；C C為溶液濃度為溶液濃度；L L為溶液厚度為溶液厚度；I I0 0為照射待測物質(zhì)的單色光強度，為照射待測物質(zhì)的單色光強度，I I為透過待測物質(zhì)光線的光強度為透過待測物質(zhì)光線的光強度，透光度，透光度T= I/IT= I/I0 0即溶液透過光的強度與入射光的強度之比；即溶液透過光的強度與入射光的強度之比；K K為吸光系數(shù)，是物質(zhì)在單位濃度和單位厚度的條件下對入射光的吸光度為吸光系數(shù)，是物質(zhì)在單位濃度和單位厚度的條件下對入射光的吸光度。實驗中溶液厚度不變，則實驗中溶液厚度不變，則A AKCKC9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬

14、間被決定。2022-5-22022-5-2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-22022-5-22022-5-25/2/2022 3:24:12 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-22022-5-22022-5-2May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請。2022-5-22022-5-22022-5-2Monday, May 02, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-5-22022-5-22022-5-22022-5-25/2/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日星期一2022

15、-5-22022-5-22022-5-215、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月2022-5-22022-5-22022-5-25/2/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-5-22022-5-2May 2, 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022-5-22022-5-22022-5-22022-5-22021/4/26專業(yè) 課件12光吸收示意圖光吸收示意圖I I0 0I IbC C2021/4/26專業(yè) 課件13吸收光譜和物質(zhì)的定性分析吸收光譜和物質(zhì)的定性分析物質(zhì)的吸收光譜與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。物質(zhì)的吸收光譜與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。吸收光譜曲線是

16、物質(zhì)的特征曲線。用各種不同波長的光線作為入射光測定物質(zhì)的吸光度吸收光譜曲線是物質(zhì)的特征曲線。用各種不同波長的光線作為入射光測定物質(zhì)的吸光度（Absorbance），），然后以波長（然后以波長（）為橫軸，相應(yīng)的吸光度（為橫軸，相應(yīng)的吸光度（A）為縱軸，按結(jié)果作圖，為縱軸，按結(jié)果作圖，可得到該物質(zhì)的吸收光譜曲線，這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對不同波長的光的吸收能力?？傻玫皆撐镔|(zhì)的吸收光譜曲線，這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對不同波長的光的吸收能力。在一定的溫度、在一定的溫度、pH值等條件下吸收光譜的曲線形狀是一定的。在吸收光譜中，往往可值等條件下吸收光譜的曲線形狀是一定的。在吸收光譜中，往往可找到一個或幾個吸收最大值，

17、該處的波長稱為最大吸收波長（找到一個或幾個吸收最大值，該處的波長稱為最大吸收波長（max）。）。物質(zhì)不同，它物質(zhì)不同，它們的最大吸收波長也往往不同。們的最大吸收波長也往往不同。2021/4/26專業(yè) 課件14不同濃度不同濃度的的VitB12溶液對相同波長的光的不同吸收溶液對相同波長的光的不同吸收g/mlA 550nm2021/4/26專業(yè) 課件15原理：根據(jù)物質(zhì)對于入射光的特征吸收，可應(yīng)用于物質(zhì)溶液的定性檢測原理：根據(jù)物質(zhì)對于入射光的特征吸收，可應(yīng)用于物質(zhì)溶液的定性檢測比較吸收光譜曲線：在相同的條件下，吸收光譜曲線不同，表明物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同。比較吸收光譜曲線：在相同的條件下，吸收光譜曲線不同

18、，表明物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同。比較最大吸收波長：不同物質(zhì)的最大吸收波長不同；化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)最大吸收波長比較最大吸收波長：不同物質(zhì)的最大吸收波長不同；化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)最大吸收波長相同，吸收系數(shù)不同。相同，吸收系數(shù)不同。比較吸光度的比值：多用于檢測物質(zhì)的純度（比較吸光度的比值：多用于檢測物質(zhì)的純度（DNA A260/A280=1.8 純度鑒定純度鑒定)物質(zhì)定性分析常用方法物質(zhì)定性分析常用方法2021/4/26專業(yè) 課件16物質(zhì)的定量分析物質(zhì)的定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長的入射光。測定配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。

19、選用合適波長的入射光。測定時先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率時先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%100%，然后分別測定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。以吸光度為縱坐，然后分別測定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過原點的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過原點的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱A-CA-C曲線）。曲線）。標(biāo)準(zhǔn)管法標(biāo)準(zhǔn)管法 對個別樣品進(jìn)行測定，且對個別樣品進(jìn)行測定，且A-CA-C曲線線性良好直接比較測定結(jié)果。曲線線性良好直接比較測定結(jié)果。 A標(biāo)標(biāo) =K標(biāo)標(biāo)c標(biāo)標(biāo)b標(biāo)標(biāo) A測測 =K測測 c測測 b測測 c測測 =A測測 /A標(biāo)標(biāo) c標(biāo)標(biāo)2021/4/26專業(yè) 課件17

20、分光光度計的基本構(gòu)造分光光度計的基本構(gòu)造儀器中光源經(jīng)過單色器中的單色原件（如棱鏡），所得到的單色光（入射光）進(jìn)入儀器中光源經(jīng)過單色器中的單色原件（如棱鏡），所得到的單色光（入射光）進(jìn)入樣品室，透出的光被受光器（光電池或光電色）產(chǎn)生光電流，放大后在測量儀上顯樣品室，透出的光被受光器（光電池或光電色）產(chǎn)生光電流，放大后在測量儀上顯示出吸光度（示出吸光度（A）或透光度（或透光度（T）。光光 源源單色器單色器樣品室樣品室受光器受光器測量器測量器2021/4/26專業(yè) 課件1872722 2分光光度計使用方法分光光度計使用方法接通電源，打開儀器電源開關(guān)，打開樣品室蓋，預(yù)熱接通電源，打開儀器電源開關(guān)，打開

21、樣品室蓋，預(yù)熱10min;將空白液或?qū)φ找杭皽y定液分別裝入比色杯將空白液或?qū)φ找杭皽y定液分別裝入比色杯3/4體積并用擦鏡紙擦凈外壁，放入樣體積并用擦鏡紙擦凈外壁，放入樣品室內(nèi)品室內(nèi), 空白液一般放于最外格，樣品比色杯放入位置與試管位置對應(yīng)空白液一般放于最外格，樣品比色杯放入位置與試管位置對應(yīng);調(diào)好波長調(diào)好波長;調(diào)節(jié)按鈕調(diào)節(jié)按鈕 開蓋時，調(diào)開蓋時，調(diào) T 參數(shù)參數(shù) 調(diào)為調(diào)為 100 合上蓋，調(diào)合上蓋，調(diào) A 參數(shù)參數(shù) 調(diào)為調(diào)為 0;逐步拉出樣品室拉桿（聽到逐步拉出樣品室拉桿（聽到“咔咔”一聲），讀取吸光度值一聲），讀取吸光度值(A）;讀數(shù)完打開樣品室蓋，再將讀數(shù)寫入記錄本。讀數(shù)完打開樣品室蓋，再

22、將讀數(shù)寫入記錄本。 2021/4/26專業(yè) 課件1972722 2分光光度計使用注意事項分光光度計使用注意事項樣品室蓋應(yīng)輕開輕放；樣品室蓋應(yīng)輕開輕放；比色皿拿其磨砂面，液體裝入約比色皿拿其磨砂面，液體裝入約3/43/4高度，并用擦鏡紙擦凈外壁，每次用完后自來水高度，并用擦鏡紙擦凈外壁，每次用完后自來水沖洗干凈，倒置于濾紙上；沖洗干凈，倒置于濾紙上；倒取試劑時不能在儀器表面上方操作，儀器上請勿放任何物品；倒取試劑時不能在儀器表面上方操作，儀器上請勿放任何物品；每調(diào)換一次波長，都應(yīng)將空白溶液的吸光度調(diào)至每調(diào)換一次波長，都應(yīng)將空白溶液的吸光度調(diào)至“0 0”。2021/4/26專業(yè) 課件20雙縮脲法測

23、定蛋白質(zhì)含量雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康牧私夂驼莆针p縮脲測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法了解和掌握雙縮脲測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法。2021/4/26專業(yè) 課件21蛋白質(zhì)在強堿性溶液中與稀硫酸銅溶液作用產(chǎn)生顏色反應(yīng)，生成紫紅色化合物，蛋白質(zhì)在強堿性溶液中與稀硫酸銅溶液作用產(chǎn)生顏色反應(yīng)，生成紫紅色化合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。稱為雙縮脲反應(yīng)。 具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)在堿性溶液中，能具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)在堿性溶液中，能與與CuCu2+2+形成紫紅色絡(luò)合物，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，故可以用來測定蛋白形成紫紅色絡(luò)合物，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度

24、成正比，故可以用來測定蛋白質(zhì)的濃度。質(zhì)的濃度。 在一定的濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。因此可用比色法測在一定的濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。因此可用比色法測定蛋白質(zhì)濃度。定蛋白質(zhì)濃度。NHONHNHONHCCNHONHONHCC加熱180 Co+NH2222223實驗原理實驗原理2021/4/26專業(yè) 課件22紫紅色銅雙縮脲復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)紫紅色銅雙縮脲復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)2021/4/26專業(yè) 課件23在分光光度法中，許多不吸收光的無色物質(zhì)可以用顯色反應(yīng)變成有色物質(zhì)，使之能進(jìn)行比在分光光度法中，許多不吸收光的無色物質(zhì)可以用顯色反應(yīng)變成有色物質(zhì)，使之能進(jìn)行比色測定，并能

25、提高測定的靈敏度和選擇性。在比色分析或分光光度分析中，將待測組分轉(zhuǎn)色測定，并能提高測定的靈敏度和選擇性。在比色分析或分光光度分析中，將待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫做顯色反應(yīng)，與待測組分反應(yīng)生成有色化合物的試劑叫顯色劑。變成有色化合物的反應(yīng)叫做顯色反應(yīng)，與待測組分反應(yīng)生成有色化合物的試劑叫顯色劑。在實際分析中，同一待測組分可與多種顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)，生成不同的有色物質(zhì)。為了在實際分析中，同一待測組分可與多種顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)，生成不同的有色物質(zhì)。為了保證測定的靈敏度和準(zhǔn)確度，在分析時常需對顯色反應(yīng)進(jìn)行選擇，選擇原則如下：保證測定的靈敏度和準(zhǔn)確度，在分析時常需對顯色反應(yīng)進(jìn)行選擇，選擇原則如下：

26、 1. 選擇性好，干擾少或干擾易消除；選擇性好，干擾少或干擾易消除； 2. 靈敏度要高；靈敏度要高； 3. 生成有色化合物的組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定；生成有色化合物的組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定； 4. 生成的有色化合物與顯色劑之間的顏色須有明顯的差別，最大吸收波長之差大于生成的有色化合物與顯色劑之間的顏色須有明顯的差別，最大吸收波長之差大于60nm。顯色劑與顯色反應(yīng)顯色劑與顯色反應(yīng)2021/4/26專業(yè) 課件24 管號管號試劑試劑 0 1 2 3 4 5 6 牛血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（牛血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（ml）2mg/ml 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0 0待測蛋白液（待測蛋白液（ml） 3.0蒸

27、餾水（蒸餾水（ml） 3 2.4 1.8 1.2 0.6 0 0蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（mg/ml） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0未知未知實驗步驟實驗步驟1.1.按下圖表所示加入相應(yīng)的試劑或樣品按下圖表所示加入相應(yīng)的試劑或樣品2021/4/26專業(yè) 課件25各管混勻后加入雙縮脲試劑各管混勻后加入雙縮脲試劑3.0ml，充分混勻；，充分混勻；37度水浴度水浴30min；在在540nm 處以處以0號管調(diào)零點測定各管吸光度；號管調(diào)零點測定各管吸光度；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)；對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，求待測蛋白質(zhì)濃度。對照

28、標(biāo)準(zhǔn)曲線，求待測蛋白質(zhì)濃度。2021/4/26專業(yè) 課件26讀數(shù)時要注意讀的是讀數(shù)時要注意讀的是A的值；的值；注意正確標(biāo)記試管（用記號筆清晰標(biāo)記于試管注意正確標(biāo)記試管（用記號筆清晰標(biāo)記于試管2/3高處）；高處）；準(zhǔn)確記時。準(zhǔn)確記時。注意事項注意事項2021/4/26專業(yè) 課件279、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.222.5.2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/2/2022 3:24:12 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.2*May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請。*Monday, May 02, 202213、

29、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。22.5.222.5.2*May 2, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日星期一*22.5.215、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月*22.5.2*May 2, 202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/2/202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。*22.5.2謝謝大家謝謝大家9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.222.5.2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/2/2022 3:24:13 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.2*May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請。*Monday, May 02, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。22.5.222.5.2*May 2, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日