生物化學(xué)實驗：準(zhǔn)備柱層析_第1頁
生物化學(xué)實驗：準(zhǔn)備柱層析_第2頁
生物化學(xué)實驗：準(zhǔn)備柱層析_第3頁
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文檔簡介

1、DEAE52DEAE52離子交換樹脂層析準(zhǔn)備（制離子交換樹脂層析準(zhǔn)備（制E E3 3）：）： 裝柱：裝柱：先除死體積先除死體積。本實驗使用。本實驗使用DEAE52DEAE52離子交換樹脂，把柱內(nèi)裝離子交換樹脂，把柱內(nèi)裝1/3 1/3 5mmol/L pH6.05mmol/L pH6.0磷酸起始緩沖液，把柱子磷酸起始緩沖液，把柱子垂直垂直固定（調(diào)流固定（調(diào)流速小于速小于2ml/min2ml/min）；（調(diào)流速同時，將）；（調(diào)流速同時，將DEAE52DEAE52離子交換樹脂用離子交換樹脂用起始緩沖液起始緩沖液攪勻后攪勻后連續(xù)連續(xù)加入，柱內(nèi)的加入，柱內(nèi)的DEAE52DEAE52離子交換樹脂應(yīng)非離子交

2、換樹脂應(yīng)非常均勻地分布，防止出現(xiàn)截面和氣泡，床面要平整，常均勻地分布，防止出現(xiàn)截面和氣泡，床面要平整，床高至床高至黑色標(biāo)記處黑色標(biāo)記處；用起始緩沖液洗柱用起始緩沖液洗柱, ,控制好流速?？刂坪昧魉?。平衡：平衡：用用5mmol/L pH6.0的的磷酸起始緩沖液平衡磷酸起始緩沖液平衡( (流速流速1ml/min)1ml/min)，6 6個以上柱體積個以上柱體積( (約約35ml),35ml),連接儀器連接儀器: :連接連接紫外檢測器紫外檢測器( (與柱相連與柱相連) )與記錄儀，并調(diào)試與記錄儀，并調(diào)試 透過率透過率 T為為 095 0.5A 調(diào)吸光度調(diào)吸光度005檢測儀后面調(diào)檢測儀后面調(diào) 280nm 檔位檔位流動相要下進(jìn)上出流動相要下進(jìn)上出三、走紙記錄儀三、走紙記錄儀電源開關(guān)電源開關(guān)走紙速度走紙速度 6cm/h 量程量程 100

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