第十二章生物化學(xué)-肝功能

1、生物化學(xué)檢驗生物化學(xué)檢驗生物化學(xué)檢驗主講：錢靜第第第第第第十二十二十二十二十二十二章章章章章章 肝功能檢驗肝功能檢驗肝功能檢驗肝功能檢驗肝功能檢驗肝功能檢驗第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 第二節(jié)第二節(jié) 某些肝疾病某些肝疾病 的臨床生化的臨床生化第三節(jié)第三節(jié) 肝功能試驗肝功能試驗第四節(jié)第四節(jié) 肝功能試驗肝功能試驗 選擇原則選擇原則掌握掌握 肝功能試驗的意義及評價，肝功能試驗的意義及評價，賴氏法、速率賴氏法、速率法測定法測定ALTALT，改良改良J-GJ-G法和膽紅素氧化酶法測定膽紅法和膽紅素氧化酶法測定膽紅素素的原理、注意事項及主要臨床意義。的原理、注意事項及主要臨床意義。熟悉熟悉 金氏法、速率法測定

2、金氏法、速率法測定ALPALP，GGTGGT測定方法、測定方法、酶比色法測定血清膽汁酸的原理、注意事項及主要酶比色法測定血清膽汁酸的原理、注意事項及主要臨床意義。臨床意義。了解了解 肝臟的結(jié)構(gòu)特點及生物化學(xué)功能，某些肝肝臟的結(jié)構(gòu)特點及生物化學(xué)功能，某些肝病的生物化學(xué)。病的生物化學(xué)。n本章教學(xué)要求：本章教學(xué)要求： 肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟病變會肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟病變會引起多種功能的障礙，臨床上常通過一些試驗來引起多種功能的障礙，臨床上常通過一些試驗來了解肝功能，幫助對肝膽疾病的診斷，預(yù)后判斷了解肝功能，幫助對肝膽疾病的診斷，預(yù)后判斷及療效觀察，這些試驗統(tǒng)稱為肝功能試驗。及療

3、效觀察，這些試驗統(tǒng)稱為肝功能試驗。第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 肝臟是人體最大的實質(zhì)性器官，成人肝臟占肝臟是人體最大的實質(zhì)性器官，成人肝臟占體重的體重的2%，約，約1.21.5kg。它幾乎參與了體內(nèi)各它幾乎參與了體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)，如分泌、排泄、解毒以及各種物質(zhì)種化學(xué)反應(yīng)，如分泌、排泄、解毒以及各種物質(zhì)代謝過程，故肝臟有代謝過程，故肝臟有 “物質(zhì)代謝中樞物質(zhì)代謝中樞”之稱。之稱。一、肝結(jié)構(gòu)的特點一、肝結(jié)構(gòu)的特點 （一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng)（一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng) 即門靜脈和肝動脈。門靜脈是肝的功能即門靜脈和肝動脈。門靜脈是肝的功能性血管，它匯集了胃腸、脾及胰腺的靜脈血性血管，它匯集了胃腸、

4、脾及胰腺的靜脈血流入肝，給肝帶來腸道吸收的大量營養(yǎng)物質(zhì)流入肝，給肝帶來腸道吸收的大量營養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物。門靜脈血占肝總血量的和腐敗物。門靜脈血占肝總血量的75%。肝。肝動脈是肝的營養(yǎng)性血管，給肝帶來大量的氧動脈是肝的營養(yǎng)性血管，給肝帶來大量的氧氣，同時也帶來肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢氣，同時也帶來肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢物，其血流量占肝總血流量的物，其血流量占肝總血流量的25%。 （二）肝具有雙重輸出系統(tǒng)（二）肝具有雙重輸出系統(tǒng) 即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。 血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經(jīng)下血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經(jīng)下腔靜脈與體循環(huán)相通，使經(jīng)肝處理后的代謝腔

5、靜脈與體循環(huán)相通，使經(jīng)肝處理后的代謝物通過腎臟隨尿排出。物通過腎臟隨尿排出。 膽道輸出系統(tǒng)是指肝細(xì)胞分泌的膽汁通膽道輸出系統(tǒng)是指肝細(xì)胞分泌的膽汁通過膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽過膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽和一些代謝產(chǎn)物。和一些代謝產(chǎn)物。（一）肝臟具有雙重的血流輸入系統(tǒng)（一）肝臟具有雙重的血流輸入系統(tǒng)門靜脈門靜脈 (功能性血管功能性血管)肝動脈肝動脈 (營養(yǎng)性血管營養(yǎng)性血管)（二）肝臟具有雙重的輸出系統(tǒng)（二）肝臟具有雙重的輸出系統(tǒng)營養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物營養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物 氧氣和肝外組織代謝廢物氧氣和肝外組織代謝廢物肝靜脈肝靜脈膽道膽道 肝肝 臟臟下腔靜脈下腔靜脈 體循環(huán)體循環(huán) 腸道腸道

6、 肝處理后的代謝物肝處理后的代謝物 腎臟腎臟( (尿尿) )膽汁膽汁酸鹽酸鹽和代謝產(chǎn)物和代謝產(chǎn)物 （三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點 肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富。肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富。 含有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體。含有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體。使肝臟能量供應(yīng)充分，并大量合成蛋白質(zhì)和使肝臟能量供應(yīng)充分，并大量合成蛋白質(zhì)和脂類。脂類。 含有大量的溶酶體和高爾基復(fù)合體。促含有大量的溶酶體和高爾基復(fù)合體。促進對吞噬產(chǎn)物的分解和一些蛋白質(zhì)的加工與進對吞噬產(chǎn)物的分解和一些蛋白質(zhì)的加工與成熟。成熟。 還有過氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生還有過氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生的過氧化氫

7、，減輕活性氧的損傷。的過氧化氫，減輕活性氧的損傷。 （四）肝細(xì)胞的再生（四）肝細(xì)胞的再生 肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實質(zhì)肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實質(zhì)細(xì)胞，而且再生能力很強。新生肝細(xì)胞的來細(xì)胞，而且再生能力很強。新生肝細(xì)胞的來源有兩種：源有兩種： 1.由已分化的肝細(xì)胞增殖而來。由已分化的肝細(xì)胞增殖而來。 2.由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來。而來。 由于肝細(xì)胞有很強的再生能力，所以輕由于肝細(xì)胞有很強的再生能力，所以輕度的損傷，難以通過肝功能試驗檢測出來。度的損傷，難以通過肝功能試驗檢測出來。（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點 （

8、四）肝細(xì)胞的再生（四）肝細(xì)胞的再生新生肝細(xì)胞的來源新生肝細(xì)胞的來源由已分化的肝細(xì)胞增殖而來由已分化的肝細(xì)胞增殖而來由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來細(xì)胞表面有大量的微絨毛細(xì)胞表面有大量的微絨毛細(xì)胞膜具有較高的通透性細(xì)胞膜具有較高的通透性肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富肝細(xì)胞含有豐富的酶系肝細(xì)胞含有豐富的酶系二、肝臟的生物化學(xué)功能二、肝臟的生物化學(xué)功能 （一）排泄功能（一）排泄功能 肝臟能分泌膽汁，很多代肝臟能分泌膽汁，很多代謝物可隨膽汁通過膽道排入腸道而排泄。如膽謝物可隨膽汁通過膽道排入腸道而排泄。如膽汁酸、膽紅素、氨等物質(zhì)。汁酸、膽紅素、氨等

9、物質(zhì)。 1.膽汁酸代謝膽汁酸代謝 （1）膽汁：）膽汁：由肝細(xì)胞分泌的液體，正常人由肝細(xì)胞分泌的液體，正常人每天分泌量每天分泌量5001000ml，稱為肝膽汁。進入膽稱為肝膽汁。進入膽囊后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽囊后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽汁中含有膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、汁中含有膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和無機鹽等物質(zhì)。其中膽汁粘蛋白、酶、尿素和無機鹽等物質(zhì)。其中膽汁酸鹽占固體成分酸鹽占固體成分50%以上。以上。 膽汁既是一種消化液，也是排泄液。膽汁既是一種消化液，也是排泄液。膽固醇膽固醇 7-羥膽固醇羥膽固醇膽酸膽酸鵝脫氧膽酸鵝脫氧膽酸

10、甘氨膽酸甘氨膽酸?；悄懰崤；悄懰岣拾冰Z脫氧膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸腸道腸道復(fù)雜反應(yīng)復(fù)雜反應(yīng)甘氨酸甘氨酸?；撬崤；撬崮懼懼懙滥懙莱跫売坞x膽汁酸初級游離膽汁酸初級結(jié)合膽汁酸初級結(jié)合膽汁酸初級膽汁酸的生成初級膽汁酸的生成 HO OH COOH HO OHCONHCH2COOH HOHO OHCONHCH2CH2SO2H膽膽 酸酸鵝脫氧膽酸鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸甘氨膽酸甘氨膽酸初級膽汁酸初級膽汁酸 HOHO OHCOOH脫氧膽酸脫氧膽酸石膽酸石膽酸次級膽汁酸次級膽汁酸大部分通過主動重大部分通過主動重吸收經(jīng)門靜脈入肝吸收經(jīng)門靜脈入肝腸肝循環(huán)次級膽汁酸的生成與膽汁

11、酸的腸肝循環(huán)次級膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán)甘氨膽酸甘氨膽酸 腸腸?；悄懰崤；悄懰?道道甘氨鵝脫氧膽酸甘氨鵝脫氧膽酸牛磺鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸膽酸膽酸 鵝脫氧膽酸鵝脫氧膽酸腸菌腸菌水解水解腸菌腸菌還原還原一部分通過被動重一部分通過被動重吸收經(jīng)門靜脈入肝吸收經(jīng)門靜脈入肝隨糞便排出隨糞便排出 HOHO OHCOOH HO HO COOH脫氧膽酸脫氧膽酸 HO OH COOH HOCOOH石膽酸石膽酸膽膽 酸酸鵝脫氧膽酸鵝脫氧膽酸次級膽汁酸次級膽汁酸7脫氧脫氧7脫氧脫氧膽膽固固醇醇結(jié)結(jié)合合膽膽汁汁酸酸（合合成成0.40.6g/d代代謝謝池池35g）（肝肝）（大大腸腸）（小小腸腸）（門門靜靜脈脈）

12、（膽膽道道）排排泄泄（0.40.6g/d）水水解解、脫脫羥羥（腸腸菌菌）主主動動重重吸吸收收被被動動重重吸吸收收膽膽汁汁酸酸重重吸吸收收95%膽膽汁汁酸酸的的腸腸肝肝循循環(huán)環(huán) 2. 膽紅素代謝膽紅素代謝 膽色素是鐵卟啉化合物分膽色素是鐵卟啉化合物分解代謝的產(chǎn)物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽解代謝的產(chǎn)物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽素原和膽素，主要隨膽汁排泄。素原和膽素，主要隨膽汁排泄。 （1）膽紅素（）膽紅素（bilirubin）的生成的生成衰老衰老RBC 單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（肝、脾、骨髓）（肝、脾、骨髓）珠蛋白珠蛋白血紅素加氧酶血紅素加氧酶膽綠素還原酶膽綠素還原酶脂溶性，可進入細(xì)胞

13、脂溶性，可進入細(xì)胞產(chǎn)生毒害產(chǎn)生毒害血紅素血紅素血紅蛋白血紅蛋白 膽紅素膽紅素CO Fe膽綠素膽綠素 （2 2）膽紅素在血中的運輸）膽紅素在血中的運輸膽紅素膽紅素血液血液水溶性，不能進入水溶性，不能進入細(xì)胞內(nèi)，也不透過細(xì)胞內(nèi)，也不透過腎小球腎小球未結(jié)合膽紅素未結(jié)合膽紅素間接膽紅素間接膽紅素 膽紅素膽紅素- -清蛋白復(fù)合物清蛋白復(fù)合物清蛋白清蛋白 限制了膽紅素自由通過細(xì)胞膜，免除限制了膽紅素自由通過細(xì)胞膜，免除了對細(xì)胞的毒害作用。了對細(xì)胞的毒害作用。 增加了水溶性，有利于在血液中的運增加了水溶性，有利于在血液中的運輸。輸。（3）肝臟在膽紅素代謝中的作用）肝臟在膽紅素代謝中的作用未結(jié)合膽紅素未結(jié)合膽

14、紅素 Y-蛋白蛋白-膽紅素膽紅素Z-蛋白蛋白-膽紅素膽紅素Y-蛋白蛋白Z-蛋白蛋白葡萄糖醛酸葡萄糖醛酸- -膽紅素膽紅素UDPGA水溶性，不通過水溶性，不通過 細(xì)細(xì)胞膜，可通過腎小球胞膜，可通過腎小球肝細(xì)胞肝細(xì)胞結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素直接膽紅素直接膽紅素隨膽汁排入腸道隨膽汁排入腸道攝取攝取轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化排泄排泄（4）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán)）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán)結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素膽素原膽素原腸道腸道細(xì)菌細(xì)菌 還原還原大部分隨糞便排出大部分隨糞便排出80%90%少部分被重吸收少部分被重吸收10%20%大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán)大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán)少部分進入體循環(huán)通過腎

15、隨尿排出少部分進入體循環(huán)通過腎隨尿排出經(jīng)門靜脈入肝經(jīng)門靜脈入肝0.64mg膽素原膽素原 膽素膽素O2膽素原膽素原 膽素膽素O240280mg 血紅蛋白血紅蛋白 珠蛋白珠蛋白 血紅素血紅素 CO OFe NADPH 膽綠素膽綠素 NADPH 膽紅素膽紅素 膽紅素膽紅素 胞液胞液Y蛋白蛋白 膽紅素膽紅素-Y蛋白蛋白 Z蛋白蛋白 膽紅素膽紅素-Z蛋白蛋白 UDPGA內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng) UDP葡萄糖醛酸膽紅素葡萄糖醛酸膽紅素腎腎小部分小部分 大部分大部分 膽素原膽素原膽紅素清蛋白膽紅素清蛋白復(fù)合物復(fù)合物膽素原膽素原 膽素膽素 尿尿 少量少量 腸道腸道膽素膽素 膽素原膽素原 葡萄糖醛酸膽紅素葡萄糖醛酸膽紅素

16、糞便糞便 膽紅素膽紅素 葡萄糖醛酸葡萄糖醛酸單核吞噬細(xì)胞單核吞噬細(xì)胞肝細(xì)胞肝細(xì)胞血血 液液清蛋白清蛋白 3.血氨代謝血氨代謝 （1）血氨的來源：）血氨的來源：氨基酸的脫氨基作用氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。腸及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。腸道吸收，由未消化的蛋白質(zhì)和未吸收的氨基道吸收，由未消化的蛋白質(zhì)和未吸收的氨基酸腐敗產(chǎn)生。酸腐敗產(chǎn)生。 （2）血氨的去路：）血氨的去路：合成尿素；合成谷合成尿素；合成谷氨酰胺；合成其他含氮化合物。氨酰胺；合成其他含氮化合物。 （3）尿素的合成與排泄：）尿素的合成與排泄：血氨進入肝臟經(jīng)血氨進入肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素，經(jīng)腎臟隨尿排去。鳥

17、氨酸循環(huán)合成尿素，經(jīng)腎臟隨尿排去。 （1 1）在蛋白質(zhì)代謝中的作用：）在蛋白質(zhì)代謝中的作用：是機體合是機體合成蛋白質(zhì)的重要器官。除合成肝臟本身所需成蛋白質(zhì)的重要器官。除合成肝臟本身所需蛋白質(zhì)外，還合成近蛋白質(zhì)外，還合成近100100種血漿蛋白。種血漿蛋白。 （2 2）在氨基酸代謝中的作用：）在氨基酸代謝中的作用：是體內(nèi)氨是體內(nèi)氨基酸分解代謝的主要場所。如脫氨基作用，基酸分解代謝的主要場所。如脫氨基作用，調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。含氮化合物。 （二）物質(zhì)代謝功能（二）物質(zhì)代謝功能 1. 1.營養(yǎng)物質(zhì)代謝營養(yǎng)物質(zhì)代謝維持血糖維持血糖濃度

18、恒定濃度恒定合成肝糖原合成肝糖原肝糖異生肝糖異生血糖血糖高高 （3 3）在糖代謝中的作用：）在糖代謝中的作用：維持血維持血糖濃度的恒定。糖濃度的恒定。血糖血糖低低肝糖原分解肝糖原分解 分泌膽汁酸鹽，促進脂類的消化吸收分泌膽汁酸鹽，促進脂類的消化吸收 。 合成各種脂類，如合成各種脂類，如TG，Ch，PL等。等。 進行脂肪酸的進行脂肪酸的-氧化，產(chǎn)生酮體氧化，產(chǎn)生酮體 。 參與脂蛋白代謝，合成參與脂蛋白代謝，合成HDL、VLDL； （4 4）在脂類代謝中的作用：）在脂類代謝中的作用：對對脂類的脂類的消消化、吸收、分解、合成化、吸收、分解、合成及及運輸運輸?shù)冗^程均起等過程均起有重要作用有重要作用肝功

19、能受損肝功能受損脂肪肝脂肪肝 2.2.激素及維生素代謝激素及維生素代謝 （1 1）在激素代謝中的作用：）在激素代謝中的作用：對對多種激素進多種激素進行行滅活滅活和和排泄排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產(chǎn)物大部分隨腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產(chǎn)物大部分隨尿排出。尿排出。肝功能嚴(yán)重?fù)p害肝功能嚴(yán)重?fù)p害激素調(diào)節(jié)功能紊亂激素調(diào)節(jié)功能紊亂 （2 2）在維生素代謝中的作用）在維生素代謝中的作用 膽汁酸鹽有助于脂溶性膽汁酸鹽有助于脂溶性Vit的的吸收。吸收。 儲存儲存維生素維生素(A,K,D,B12) 。 參與維生素的參與維生素的轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化。二、二、肝臟

20、的生物轉(zhuǎn)化肝臟的生物轉(zhuǎn)化定義：定義： 生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化: : 機體對許多外源性或內(nèi)源性非營養(yǎng)物質(zhì)進行化學(xué)轉(zhuǎn)變，機體對許多外源性或內(nèi)源性非營養(yǎng)物質(zhì)進行化學(xué)轉(zhuǎn)變，增加其水溶性增加其水溶性( (或極性或極性) )，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過程稱，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過程稱生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化(biotransformation)(biotransformation)。 轉(zhuǎn)化對象：轉(zhuǎn)化對象：轉(zhuǎn)化特點：轉(zhuǎn)化特點：生理意義：保護機體生理意義：保護機體 通過滅活對活性物質(zhì)的作用時間和強度進行調(diào)節(jié)通過滅活對活性物質(zhì)的作用時間和強度進行調(diào)節(jié) 利于機體對代謝廢物利于機體對代謝廢物和和進入體內(nèi)的

21、異物的排泄進入體內(nèi)的異物的排泄內(nèi)源性非營養(yǎng)物內(nèi)源性非營養(yǎng)物: :氨、胺、膽色素、激素氨、胺、膽色素、激素 外源性非營養(yǎng)物外源性非營養(yǎng)物: :藥物、毒物、食品防腐劑、色素藥物、毒物、食品防腐劑、色素 連續(xù)性，連續(xù)性，多樣性，多樣性， 失活與活化雙重性失活與活化雙重性 1. 溶血性黃疸（肝前性黃疸）溶血性黃疸（肝前性黃疸） 由于各由于各種原因使紅細(xì)胞大量破壞，以致未結(jié)合膽紅種原因使紅細(xì)胞大量破壞，以致未結(jié)合膽紅素明顯增加，超過肝臟的轉(zhuǎn)化能力，但結(jié)合素明顯增加，超過肝臟的轉(zhuǎn)化能力，但結(jié)合膽紅素正常。新生兒血腦屏障發(fā)育不全，游膽紅素正常。新生兒血腦屏障發(fā)育不全，游離膽紅素易進入腦組織，與腦部基底核的脂

22、離膽紅素易進入腦組織，與腦部基底核的脂類結(jié)合，將神經(jīng)核染成黃色，稱為核黃疸類結(jié)合，將神經(jīng)核染成黃色，稱為核黃疸（膽紅素腦病）。（膽紅素腦?。?。 2. 阻塞性黃疸（肝后性黃疸）阻塞性黃疸（肝后性黃疸） 由于膽由于膽道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內(nèi)，道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內(nèi)，使上端膽管內(nèi)壓力不斷升高，最后使小膽使上端膽管內(nèi)壓力不斷升高，最后使小膽管和毛細(xì)膽管擴張，通透性增加，甚至破管和毛細(xì)膽管擴張，通透性增加，甚至破裂，使膽汁返流入血，血中結(jié)合膽紅素增裂，使膽汁返流入血，血中結(jié)合膽紅素增加。加。 3. 肝細(xì)胞性黃疸（肝源性黃疸）肝細(xì)胞性黃疸（肝源性黃疸） 由于由于肝細(xì)胞病變，肝功能減退

23、，使肝臟對膽紅肝細(xì)胞病變，肝功能減退，使肝臟對膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化和排泄作用發(fā)生障礙。一素的攝取、轉(zhuǎn)化和排泄作用發(fā)生障礙。一方面肝臟不能將未結(jié)合膽紅素轉(zhuǎn)化成結(jié)合方面肝臟不能將未結(jié)合膽紅素轉(zhuǎn)化成結(jié)合膽紅素，使血中未結(jié)合膽紅素增加；另一膽紅素，使血中未結(jié)合膽紅素增加；另一方面，病變區(qū)壓迫毛細(xì)膽管，使結(jié)合膽紅方面，病變區(qū)壓迫毛細(xì)膽管，使結(jié)合膽紅素返流入血，血中結(jié)合膽紅素也增加素返流入血，血中結(jié)合膽紅素也增加。2. 2. 黃疸的生化黃疸的生化檢查檢查（1 1）血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測定）血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測定（2 2）尿三膽的測定）尿三膽的測定: :尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素尿膽紅素、尿膽素

24、原、尿膽素 （3 3）膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗）膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗黃疸類型的鑒別黃疸類型的鑒別肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷 （二）黃疸的生化診斷（二）黃疸的生化診斷 1. 血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測定 用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷。后判斷。 2. 尿三膽的測定尿三膽的測定 尿膽紅素、尿膽素原、尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽素原遇空氣氧化而來，故臨床上一般只測定素原遇空氣氧化而來，故臨床上一般只測定尿膽紅

25、素和尿膽素原。尿膽紅素和尿膽素原。 3. 膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗?zāi)懠t素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗 （1）糖皮質(zhì)激素的誘導(dǎo)試驗：）糖皮質(zhì)激素的誘導(dǎo)試驗：糖皮質(zhì)激糖皮質(zhì)激素能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)素能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，促進未結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)化與排移酶的合成，促進未結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)化與排泄，使血清膽紅素迅速下降。泄，使血清膽紅素迅速下降。 （2）苯巴比妥試驗：）苯巴比妥試驗：苯巴比妥類藥物能苯巴比妥類藥物能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核酸轉(zhuǎn)移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核

26、黃疸的治療。黃疸的治療。二、肝硬化的生化二、肝硬化的生化 是由于多種損傷因素長期或反復(fù)作用是由于多種損傷因素長期或反復(fù)作用于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死，以及于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死，以及肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖維化和結(jié)節(jié)的形成稱為肝硬化。維化和結(jié)節(jié)的形成稱為肝硬化。 （一）肝硬化病因的分類（一）肝硬化病因的分類 1. 確定的病因：確定的病因：乙型、丙型病毒性肝乙型、丙型病毒性肝炎；乙醇中毒；代謝性疾?。貉?、炎；乙醇中毒；代謝性疾?。貉?、Wilson病、半乳糖血癥等；肝內(nèi)、外長期病、半乳糖血癥等；肝內(nèi)、外長期膽汁淤積；門靜脈回流受阻

27、；免疫功能膽汁淤積；門靜脈回流受阻；免疫功能紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨甲蝶呤、異煙肼等。甲蝶呤、異煙肼等。 乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密切關(guān)系，切關(guān)系，飲酒量越高的國家其肝硬化死亡飲酒量越高的國家其肝硬化死亡率也越高率也越高。如飲酒量年人均量在。如飲酒量年人均量在10升以下升以下的瑞典、英國、丹麥等國家，肝硬化死亡的瑞典、英國、丹麥等國家，肝硬化死亡率在率在10/10萬以下；而飲酒量年人均在萬以下；而飲酒量年人均在27升升左右的法國，肝硬化死亡率為左右的法國，肝硬化死亡率為30/10萬以上。萬以上。由于由于長

28、期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇長期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。性肝炎、乙醇性肝硬化。 乙醇在胃和小腸上部迅速被吸收（胃乙醇在胃和小腸上部迅速被吸收（胃30%、小腸上部、小腸上部70%），被吸收的乙醇），被吸收的乙醇90%98%在肝內(nèi)被代謝，其余的隨尿和呼在肝內(nèi)被代謝，其余的隨尿和呼出氣排出。出氣排出。 乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（粒體乙醇氧化體系（microsomal ethanol oxidizing system，MEOS）、）、NADPH

29、氧化氧化酶酶-過氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶過氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過氧化過氧化氫酶體系。前二者最重要。氫酶體系。前二者最重要。 ADH乙醇氧化體系乙醇氧化體系：CH3CH2OH NAD+ CH3CHO NADH H+CH3CHO CH3COOH 乙酰輔酶乙酰輔酶A 三羧酸循環(huán)三羧酸循環(huán) 微粒體乙醇氧化體系（微粒體乙醇氧化體系（MEOS）：）：CH3CH2OH NADPH H+ O2 CH3CHO NADP+ 2H2O NADPH氧化酶氧化酶-過氧化氫酶體系：過氧化氫酶體系：NADPH H+ O2 NADP+ H2O2H2O2CH3CH2OH 2H2O CH3CHOADH乙醛脫氫酶乙醛脫氫

30、酶MEOSNADPH氧化酶氧化酶過氧化氫酶過氧化氫酶 黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系：過氧化氫酶體系： 次黃嘌呤次黃嘌呤 H2O O2 黃嘌呤黃嘌呤 H2O2 H2O2 CH3CH2OH 2H2O CH3CHO 2.可能的原因：可能的原因：營養(yǎng)不良；感營養(yǎng)不良；感染：新生兒梅毒、血吸蟲病蟲卵所致門染：新生兒梅毒、血吸蟲病蟲卵所致門管區(qū)纖維組織增生；隱原性肝硬化；管區(qū)纖維組織增生；隱原性肝硬化；肉芽腫性肝硬化。肉芽腫性肝硬化。黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶過氧化氫酶過氧化氫酶 （二）肝硬化的生物化學(xué)檢查（二）肝硬化的生物化學(xué)檢查 肝硬化肝硬化的早期診斷非常困難。近年來發(fā)展起來的的早期診斷非常

31、困難。近年來發(fā)展起來的幾項生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了幾項生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了重要信息。重要信息。 1.單胺氧化酶（單胺氧化酶（MAO）測定測定 血清血清MAO與肝纖維化程度成正比。與肝纖維化程度成正比。 肝纖維化僅限于門脈區(qū)或中央靜脈周肝纖維化僅限于門脈區(qū)或中央靜脈周圍時，血清圍時，血清MAO幾乎全部正常。幾乎全部正常。 門靜脈纖維增生侵入肝小葉實質(zhì)內(nèi)時，門靜脈纖維增生侵入肝小葉實質(zhì)內(nèi)時，半數(shù)患者血清半數(shù)患者血清MAO活性增高?；钚栽龈?。 門靜脈區(qū)間或門靜脈區(qū)間與中央靜脈門靜脈區(qū)間或門靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結(jié)締組織相連時，之間結(jié)締組織相連時，80%患者血清患者血清MAO活性增

32、高?；钚栽龈?。 當(dāng)有假小葉形成時，則當(dāng)有假小葉形成時，則100%患者血清患者血清MAO活性增高。活性增高。 2.-脯氨酸羥化酶（脯氨酸羥化酶（-PH）測定測定 -PH在膠原合成中起關(guān)鍵作用。當(dāng)肝纖維化時其在膠原合成中起關(guān)鍵作用。當(dāng)肝纖維化時其含 量 和 活 性 明 顯 增 高 。 正 常 人 為含 量 和 活 性 明 顯 增 高 。 正 常 人 為2 9 . 2 5 . 9 n g / m l ， 肝 硬 化 患 者 為肝 硬 化 患 者 為654.990.2ng/ml。 3.血清透明質(zhì)酸（血清透明質(zhì)酸（HA）測定測定 肝纖維化肝纖維化時，門時，門-腔靜脈分流增大，進入肝內(nèi)清除的腔靜脈分流增大

33、，進入肝內(nèi)清除的HA減少，使血清減少，使血清HA明顯增高。明顯增高。 4.血清血清型前膠原肽（型前膠原肽（PP） 是由是由型前膠原經(jīng)內(nèi)切酶作用而產(chǎn)生型前膠原經(jīng)內(nèi)切酶作用而產(chǎn)生的多肽。正常人為的多肽。正常人為7.910.86g/L，肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的敏感性為敏感性為95%，特異性為，特異性為93%。三、肝性腦病的生化機制三、肝性腦病的生化機制 肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴(yán)重肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴(yán)重的肝病所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，的肝病所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，是嚴(yán)重肝病的重危合并癥。目前認(rèn)為是嚴(yán)重肝病的重危合并癥。目前認(rèn)為氨基酸的代謝障礙可能是

34、肝性腦病發(fā)氨基酸的代謝障礙可能是肝性腦病發(fā)生的生化基礎(chǔ)。生的生化基礎(chǔ)。 （一）氨中毒學(xué)說（一）氨中毒學(xué)說 由于肝功能不全，由于肝功能不全，肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血氨易通過血腦屏障，進入腦組織，氨對腦氨易通過血腦屏障，進入腦組織，氨對腦組織有嚴(yán)重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫組織有嚴(yán)重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫氫酶的活性，影響乙酰輔酶氫酶的活性，影響乙酰輔酶A的生成；與的生成；與三羧酸循環(huán)中三羧酸循環(huán)中-酮戊二酸結(jié)合生成谷氨酸，酮戊二酸結(jié)合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循環(huán)中耗竭三羧酸循環(huán)中-酮戊二酸，減少酮戊二酸，減少ATP的生成；與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，

35、增的生成；與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，增加加ATP的消耗。影響腦組織的能量代謝。的消耗。影響腦組織的能量代謝。 （二）假神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說（二）假神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說 在腸道，芳香族在腸道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經(jīng)腸菌的氨基氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經(jīng)腸菌的氨基酸脫羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，在正常酸脫羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，在正常情況下可被肝內(nèi)單胺氧化酶分解而清除，肝情況下可被肝內(nèi)單胺氧化酶分解而清除，肝功能不全時，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺功能不全時，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺進入腦組織，經(jīng)腦組織的非特異性羥和酪胺進入腦組織，經(jīng)腦組織的非特異性羥化酶作用，生成化酶作用，生成苯乙醇胺和苯

36、乙醇胺和-羥酪胺羥酪胺，它們，它們與兒茶酚胺遞質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，但不能傳遞神經(jīng)與兒茶酚胺遞質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，但不能傳遞神經(jīng)沖動，故稱為假神經(jīng)遞質(zhì)。沖動，故稱為假神經(jīng)遞質(zhì)。 假神經(jīng)遞質(zhì)釋放后引起神經(jīng)系統(tǒng)某些假神經(jīng)遞質(zhì)釋放后引起神經(jīng)系統(tǒng)某些部位（如腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激動系統(tǒng)）功部位（如腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激動系統(tǒng)）功能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷。 （三）氨基酸不平衡學(xué)說（三）氨基酸不平衡學(xué)說 嚴(yán)重肝功能嚴(yán)重肝功能損傷和門腔靜脈短路時，血漿支損傷和門腔靜脈短路時，血漿支/芳比明顯芳比明顯降低（正常健康人為降低（正常健康人為4.0，慢性肝功能不全，慢性肝功能不全為為0.9，急

37、性肝功能不全，急性肝功能不全0.8）。）。 由于由于芳香族氨基酸主要在肝內(nèi)分解芳香族氨基酸主要在肝內(nèi)分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內(nèi)代謝發(fā)肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內(nèi)代謝發(fā)生障礙，在血中濃度增高；生障礙，在血中濃度增高；支鏈氨基酸主支鏈氨基酸主要在肌肉組織中代謝要在肌肉組織中代謝，肝功能不全時對胰，肝功能不全時對胰島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進支島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進支鏈氨基酸大量進入肌肉組織被分解，血中鏈氨基酸大量進入肌肉組織被分解，血中濃度降低。濃度降低。 芳香族氨基酸進入腦組織，引起假神芳香族氨基酸進入腦組織，引起假神經(jīng)遞質(zhì)生成增多，經(jīng)遞質(zhì)生成增多，5-羥色胺（抑制

38、性神經(jīng)羥色胺（抑制性神經(jīng)遞質(zhì)）增多，使中樞進入抑制狀態(tài)。遞質(zhì)）增多，使中樞進入抑制狀態(tài)。第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié) 肝功能試驗肝功能試驗肝功能試驗肝功能試驗肝功能試驗肝功能試驗 一、血清（漿）蛋白測定 清蛋白（Alb)是血漿中主要的蛋白質(zhì),合成清蛋白是肝的重要功能之一。同時測定血清中的總蛋白（TP）和清蛋白含量，計算球蛋白（G）量和A/G比值是判定肝功能的重要指標(biāo)。 血清總蛋白測定方法有化學(xué)法、物理法、染料結(jié)合法、電泳法等臨床上常用的是雙縮脲法。清蛋白測定常用方法為染料結(jié)合法，常用的染料有溴甲酚綠和溴甲酚紫。血中蛋白質(zhì)主要由清蛋白和球蛋白組成而其他組分的蛋白含量低所以對同份血清測定的

39、總蛋白、清蛋白結(jié)果可以求出可以求出球蛋白的含量，通過計算求出A/G。血清氨基轉(zhuǎn)移酶測定血清氨基轉(zhuǎn)移酶測定一、氨基轉(zhuǎn)移酶測定方法簡介一、氨基轉(zhuǎn)移酶測定方法簡介丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alaninealanine aminotransferaseaminotransferase，ALT)ALT)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartateaspartate aminotransferaseaminotransferase，AST)AST)酶聯(lián)酶聯(lián)- -紫外連續(xù)監(jiān)測法紫外連續(xù)監(jiān)測法二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法u方法方法:u酶：酶：（一）酶聯(lián)（一）酶聯(lián)- -紫外連續(xù)監(jiān)測法

40、紫外連續(xù)監(jiān)測法ALTALT和和ASTAST測定的參考方法測定的參考方法 NADHNADH在在340nm340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADHNADH消耗引起的消耗引起的340nm340nm吸光吸光度變化度變化, ,根據(jù)根據(jù)340nm340nm處吸光度下降速率（處吸光度下降速率（A/minA/min）計算）計算ALTALT活性活性 原理：原理：1929min/A1 . 02 . 1622010min/AL/UALT6計算：計算：注意事項：注意事項：1 1 .該該ALTALT測定法中存在兩個消耗測定法中存在兩個消耗NADHNADH的副反應(yīng)的副反應(yīng)2 2 .輔酶輔酶P-5

41、-PP-5-P能使血清中的能使血清中的ALTALT顯示最大活性顯示最大活性3 3 .試劑空白測定值的處理試劑空白測定值的處理4 4 .樣本選擇和處理樣本選擇和處理方法評價方法評價 1. 1. 特異性高特異性高2. 2. 準(zhǔn)確性高準(zhǔn)確性高3. 3. 精密度高精密度高參考范圍：參考范圍：5 540U/L40U/L或參考試劑盒提供的參考范圍或參考試劑盒提供的參考范圍 （二）二硝基苯肼比色法（二）二硝基苯肼比色法原理：原理：操作與計算操作與計算 1. ALT1. ALT校準(zhǔn)曲線的繪制校準(zhǔn)曲線的繪制2. 2. 樣本的測定樣本的測定 測定管吸光度減去對照管吸光度的差值為樣本測定管吸光度減去對照管吸光度的差

42、值為樣本的吸光度，用該值在校準(zhǔn)曲線上查得的卡門單位的吸光度，用該值在校準(zhǔn)曲線上查得的卡門單位 3 .3 .計算計算 4 .4 .參考范圍：參考范圍： 5 52525卡門單位卡門單位 注意事項：注意事項： 1. 1. 賴氏法單位定義：賴氏法單位定義： 卡門單位定義：血清卡門單位定義：血清1ml1ml，反應(yīng)液總體積，反應(yīng)液總體積3ml3ml， 25 25，波，波長長340nm340nm，比色杯光徑，比色杯光徑1.0cm1.0cm，每分鐘吸光度下降，每分鐘吸光度下降0.001A0.001A為一為一個單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中個單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中0.16080.1608mol NADHmol

43、NADH被氧化）。被氧化）。 2.2.底物底物-酮戊二酸和酮戊二酸和2 2，4-4-二硝基苯肼濃度不足，以及產(chǎn)物丙二硝基苯肼濃度不足，以及產(chǎn)物丙酮酸的抑制作用：酮酸的抑制作用： 賴氏法的校準(zhǔn)曲線不能延長到賴氏法的校準(zhǔn)曲線不能延長到200200卡門單位。當(dāng)酶活性卡門單位。當(dāng)酶活性超過超過150150卡門單位時，應(yīng)用生理鹽水作卡門單位時，應(yīng)用生理鹽水作5 51010倍稀釋樣本，倍稀釋樣本，測定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)測定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù) uucccuVVttmVCAAU0003. 3. 樣本存放時間樣本存放時間 在室溫（在室溫（2525）可維持）可維持2d2d，在，在44冰箱可維持冰箱可維持1 1周。周。

44、在在2525可維持可維持1 1個月個月 試劑空白試劑空白自身血清的對照管自身血清的對照管樣本對照管樣本對照管 4. 4. 血清對照血清對照 5. 5. 丙酮酸鈉的純度對曲線的影響丙酮酸鈉的純度對曲線的影響6. 6. 加入加入2 2，4-4-二硝基苯肼溶液后，應(yīng)充分混勻，使反應(yīng)完全。二硝基苯肼溶液后，應(yīng)充分混勻，使反應(yīng)完全。加入氫氧化鈉溶液的速度要一致，減少吸光度管間的差異。加入氫氧化鈉溶液的速度要一致，減少吸光度管間的差異。7.7.稱量必須準(zhǔn)確稱量必須準(zhǔn)確 方法評價方法評價 1.1. 重復(fù)性差重復(fù)性差底物底物-酮戊二酸用量不足酮戊二酸用量不足2 2，4-4-二硝基苯肼在堿性條件下也能顯色二硝基

45、苯肼在堿性條件下也能顯色產(chǎn)物旁路效應(yīng)產(chǎn)物旁路效應(yīng)2. 2. 準(zhǔn)確性差準(zhǔn)確性差3. 3. 試劑穩(wěn)定性差試劑穩(wěn)定性差4. 4. 操作簡便操作簡便二、氨基轉(zhuǎn)移酶測定的意義二、氨基轉(zhuǎn)移酶測定的意義 肝細(xì)胞中含量最多，其次是腎臟和心臟，通常只有極肝細(xì)胞中含量最多，其次是腎臟和心臟，通常只有極少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時，細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入織病變時，細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清中該酶活力顯著增高血，使血清中該酶活力顯著增高 1. 1. 血清血清ALTALT活性增高活性增高 肝膽疾病肝

46、膽疾病骨骼肌疾病骨骼肌疾病一些藥物和毒物可引起一些藥物和毒物可引起ALTALT活性升高活性升高2 2血清血清ASTAST活性增高活性增高 心血管疾病心血管疾病各種肝病均可引起血清各種肝病均可引起血清ASTAST的升高的升高第三節(jié)第三節(jié) 血清堿性磷酸酶測定血清堿性磷酸酶測定一、測定方法簡介一、測定方法簡介一組非特異性的在堿性條件下水解磷酸酯的酶類一組非特異性的在堿性條件下水解磷酸酯的酶類 u底物底物: -甘油磷酸鈉甘油磷酸鈉磷酸苯二鈉磷酸苯二鈉對硝基酚磷酸鹽對硝基酚磷酸鹽酸酚酞酸酚酞-萘酚磷酸鹽萘酚磷酸鹽4-4-甲基傘形花內(nèi)酯酰磷酸鹽甲基傘形花內(nèi)酯酰磷酸鹽u堿性磷酸酶堿性磷酸酶:u測定方法測定方

47、法: （一）測定水解釋放的無機磷（一）測定水解釋放的無機磷鮑氏（鮑氏（BodanskyBodansky）法）法 （二）測定底物水解后的羥基化合物（二）測定底物水解后的羥基化合物1. 1. 羥基化合物需與顯色劑作用后比色測定羥基化合物需與顯色劑作用后比色測定 金氏（金氏（KingKing）法）法 2. 2. 羥基化合物在堿性條件下直接顯色測定羥基化合物在堿性條件下直接顯色測定 對硝基酚磷酸鹽（對硝基酚磷酸鹽（p-nitrophenylp-nitrophenyl phosphate, 4-NPP phosphate, 4-NPP）法）法 金氏法測定血清堿性磷酸酶金氏法測定血清堿性磷酸酶 ALPAL

48、P在堿性條件催化在堿性條件催化磷酸苯二鈉磷酸苯二鈉水解，釋放出酚和磷水解，釋放出酚和磷酸，酸，酚酚在堿性溶液中與在堿性溶液中與4-4-氨基安替比林氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色的醌類化合物，根據(jù)紅色的深淺與校準(zhǔn)酚比氧化形成紅色的醌類化合物，根據(jù)紅色的深淺與校準(zhǔn)酚比較，確定較，確定ALPALP的活性。的活性。原理原理:參考范圍參考范圍：單位定義單位定義： 靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡單、快速準(zhǔn)靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡單、快速準(zhǔn)確度和精密度都較低確度和精密度都較低, ,受膽紅素和溶血的干擾受膽紅素和溶血的干擾方法評價方法評價：100ml100m

49、l血清在血清在3737與底物作用與底物作用15min15min，產(chǎn)生，產(chǎn)生1mg1mg酚為酚為1 1個金氏單位個金氏單位成人成人 3 31313金氏單位，兒童金氏單位，兒童 5 52828金氏單位金氏單位速率法測定血清堿性磷酸酶速率法測定血清堿性磷酸酶 原理原理: 以以對對- -硝基苯酚磷酸鈉（硝基苯酚磷酸鈉（4-NPP4-NPP）為底物，為底物， AMPAMP或二或二乙醇胺（乙醇胺（DEADEA）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件下，）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件下，ALPALP催化催化4-NPP4-NPP水解釋放出磷酸基團，生成游離水解釋放出磷酸基團，生成游離對對- -硝基酚硝基酚（p-nitr

50、ophenolp-nitrophenol, 4-NP, 4-NP），4-NP4-NP在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405nm405nm處吸光度增加的速處吸光度增加的速率（率（A/minA/min）推算出清）推算出清ALPALP活性單位?；钚詥挝弧Ｓ嬎悖河嬎悖?2757min/A02. 002. 11850010min/AL/UALP6參考范圍：參考范圍： 4040160 U/L 160 U/L （3737） 靈敏度高、線性范圍寬（靈敏度高、線性范圍寬（500U/L500U/L以上）和精密度高以上）和精密度高 方法評價：方法評價：

51、二、堿性磷酸酶測定的意義二、堿性磷酸酶測定的意義u分布：分布：廣泛存在于各器官組織中，尤以肝臟、骨骼、廣泛存在于各器官組織中，尤以肝臟、骨骼、小腸和腎臟含量較高，血清中小腸和腎臟含量較高，血清中ALP主要來自肝臟和骨骼主要來自肝臟和骨骼 u病理性增高：病理性增高： 肝膽疾?。鹤枞渣S疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌肝膽疾?。鹤枞渣S疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌 骨骼疾?。贺E病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期骨骼疾?。贺E病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期 u生理性增高：生理性增高：妊娠期與兒童生長發(fā)育期妊娠期與兒童生長發(fā)育期 第四節(jié)第四節(jié) 血清血清-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定一

52、、測定方法簡介一、測定方法簡介u-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（-glutamyl transferase，GGT) （一）重氮比色法（一）重氮比色法（二）速率法（二）速率法u測定方法測定方法: 速率法測定血清速率法測定血清-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶谷氨?；D(zhuǎn)移酶 GGTGGT催化催化-谷氨酰基移換反應(yīng)谷氨?；茡Q反應(yīng)。以。以L-L-谷氨酰谷氨酰-3-3-羧羧基基-4-4-硝基苯胺硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w，在為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w，在GGTGGT的催化下，谷氨?；D(zhuǎn)移到雙甘肽分子上，同時釋放出的催化下，谷氨酰基轉(zhuǎn)移到雙甘肽分子上，同時釋放出黃黃色的色的2-2-硝基硝基-5-5-氨

53、基苯甲酸氨基苯甲酸，根據(jù)，根據(jù)405nm405nm處吸光度增加的速處吸光度增加的速率（率（A/minA/min）推算出）推算出GGTGGT活性單位活性單位 原理：原理： 計算：計算： 1159min/A1 . 01 . 1949010min/A)L/U(GGT6參考范圍參考范圍：男性男性 111150U/L 50U/L （3737），女性），女性 7 732U/L32U/L（3737） 方法評價方法評價: 本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（460U/L460U/L）；操作）；操作簡便；但對試劑純度要求高簡便；但對試劑純度要求高重氮比色法測定血清重氮比色法測定血

54、清-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶谷氨?；D(zhuǎn)移酶 以以-谷氨酰谷氨酰-萘胺萘胺作為作為-谷氨?；墓w，雙谷氨?；墓w，雙甘肽作為受體，在甘肽作為受體，在GGTGGT作用下，產(chǎn)生作用下，產(chǎn)生-萘胺萘胺，后者與重，后者與重氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生紅色紅色-萘胺萘胺- -對對- -偶氮苯磺酸偶氮苯磺酸，其色，其色澤的深淺與澤的深淺與GGTGGT活力成正比?；盍Τ烧?。原理：原理： 參考范圍：參考范圍：方法評價：方法評價： 不需去除蛋白質(zhì)，操作簡便，不需去除蛋白質(zhì)，操作簡便， 顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系好，但底物水溶性較差好，但底物水溶性較差 成年男性成年男性 3 317U/L17U/L， 成年

55、女性成年女性 2 213U/L13U/L二、二、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定的意義谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定的意義u分布分布：腎最高，其次是前列腺、胰、肝等器官腎最高，其次是前列腺、胰、肝等器官 u尿中尿中GGT活性：活性： 可能有助于診斷腎疾病可能有助于診斷腎疾病 u血清血清GGT用于診斷肝膽疾病用于診斷肝膽疾病1. 1. 原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌 2. 2. 阻塞性黃疸阻塞性黃疸3. 3. 病毒性肝炎和肝硬病毒性肝炎和肝硬化化4. 4. 乙醇性肝炎乙醇性肝炎血清膽紅素測定血清膽紅素測定 未結(jié)合膽紅素未結(jié)合膽紅素 間接膽紅素間接膽紅素血清膽紅素血清膽紅素 結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素 直接膽紅素直接膽紅素

56、加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，尿素。最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為稱為-膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量很低。很低。 （一）重氮法一）重氮法 對氨基苯磺酸對氨基苯磺酸 亞硝酸鈉亞硝酸鈉 氯化重氮苯磺酸氯化重氮苯磺酸 NaCl 2H2O 膽紅素膽紅素 氯化重氮苯磺酸氯化重氮苯磺酸 紫紅色的偶氮化合物紫紅色的偶氮化合物 =560nm 加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標(biāo)加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標(biāo)本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易分解，

57、故一般在臨用前新鮮配制。分解，故一般在臨用前新鮮配制。HClpH 1-2 （二）改良（二）改良J-G法法 1938年由年由Jendrossik和和Grof建立，幾經(jīng)建立，幾經(jīng)改進成為今天廣泛應(yīng)用的改進成為今天廣泛應(yīng)用的J-G法。法。 加速劑為苯甲酸鈉加速劑為苯甲酸鈉-咖啡因?？Х纫?。 紫紅色的偶氮膽紅素在強堿性酒石酸鈉紫紅色的偶氮膽紅素在強堿性酒石酸鈉和咖啡因存在下，生成藍色的偶氮膽紅素。和咖啡因存在下，生成藍色的偶氮膽紅素。pH13，=660nm 靈敏度高，靈敏度高，7.4104；線性范圍寬，線性范圍寬，02736 mol/L；顯色穩(wěn)定；精確度較好；干顯色穩(wěn)定；精確度較好；干擾少。是我國醫(yī)學(xué)

58、檢驗學(xué)會推薦的方法。擾少。是我國醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)會推薦的方法。 （三）膽紅素氧化酶法（三）膽紅素氧化酶法總膽紅素總膽紅素 1/2O2 膽綠素膽綠素 H2O膽綠素膽綠素 O2 淡紫色化合物淡紫色化合物 膽紅素在膽紅素在460nm波長處，吸光度的下降與波長處，吸光度的下降與濃度成正比。在濃度成正比。在pH8.2時，膽紅素氧化酶可催化時，膽紅素氧化酶可催化結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；在結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；在pH4.5時，時，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。因此，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。因此，調(diào)節(jié)溶液調(diào)節(jié)溶液pH可分別測定總膽紅素和結(jié)合膽紅素?？煞謩e測定總膽紅素和結(jié)合膽紅素。 靈敏度

59、高，干擾少，精確度好，線性范靈敏度高，干擾少，精確度好，線性范圍寬。圍寬。 膽紅素氧化酶膽紅素氧化酶 【參考范圍】【參考范圍】 血清總膽紅素血清總膽紅素 5.117.1mol/L 血清結(jié)合膽紅素血清結(jié)合膽紅素 06mol/L 結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素/總膽紅素總膽紅素 20%35% 【臨床意義】【臨床意義】 診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素17.134.2mol/L為隱性黃疸，為隱性黃疸，34.2mol/L為臨為臨床黃疸，根據(jù)結(jié)合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒床黃疸，根據(jù)結(jié)合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒別黃疸類型。別黃疸類型。 溶血性黃疸溶血性黃疸 結(jié)合膽紅素

60、占總膽紅素的結(jié)合膽紅素占總膽紅素的20%以以下。下。 肝細(xì)胞性黃疸肝細(xì)胞性黃疸 結(jié)合膽紅素占總膽紅素的結(jié)合膽紅素占總膽紅素的35%以上。以上。 阻塞性黃疸阻塞性黃疸 結(jié)合膽紅素占總膽紅素的結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50%以以上。上。 二、血氨測定二、血氨測定 血氨主要來自腸道的吸收及組織中氨基血氨主要來自腸道的吸收及組織中氨基酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經(jīng)鳥酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素。氨酸循環(huán)合成尿素。 血液中的游離氨以兩種形式存在，血液中的游離氨以兩種形式存在，NH4+和和NH3，在生理在生理pH條件下，條件下，NH4+占占98%以上。以上。 血氨測定的方法主要