藥物04藥物的含量測定方法與驗證

1、LOGO藥物分析藥物分析Jiangxi University of Traditional Chinese Medicines第四章第四章 藥物的含量測定方法藥物的含量測定方法主講主講: 曾金祥曾金祥前言前言藥物的含量測定藥物的含量測定是指藥物中所含的主成分的量，是指藥物中所含的主成分的量，是評價藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。是評價藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。定定義義前言前言藥物的含量測定藥物的含量測定化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)、微生物學(xué)方法微生物學(xué)方法基基礎(chǔ)礎(chǔ) 在規(guī)定條件下選用適當(dāng)微生物測定某物質(zhì)含量的方法。被測定的物質(zhì)可以是在規(guī)定條件下選用適當(dāng)微生物測定某物質(zhì)含量的方法。被測定的物質(zhì)可以是某

2、些生物生長所必需的維生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生長的某些生物生長所必需的維生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生長的抗生素、農(nóng)藥等。常使用的有液體稀釋法和固體平板擴(kuò)散法?？股亍⑥r(nóng)藥等。常使用的有液體稀釋法和固體平板擴(kuò)散法。 利用某些生物對某些物質(zhì)如維生利用某些生物對某些物質(zhì)如維生素、氨基酸素、氨基酸)的特殊需要，或?qū)Φ奶厥庑枰?，或?qū)δ承┪镔|(zhì)如激素、抗生素、藥物某些物質(zhì)如激素、抗生素、藥物等等)的特殊反應(yīng)來定性、定量測的特殊反應(yīng)來定性、定量測定這些物質(zhì)的方法。定這些物質(zhì)的方法。 化學(xué)反應(yīng)化學(xué)反應(yīng)如如UV光吸收光吸收特性、濁度特性、濁度前言前言藥物的含量測定藥物的含量測定基于化學(xué)或

3、物理學(xué)基于化學(xué)或物理學(xué)原理的含量測定。原理的含量測定。分分兩兩類類基于生物學(xué)原理的基于生物學(xué)原理的效價測定效價測定。基基礎(chǔ)礎(chǔ)生物檢定法，微生生物檢定法，微生物檢定法，酶法。物檢定法，酶法。目目標(biāo)標(biāo)本章的目標(biāo)：本章的目標(biāo)：含量測定。含量測定。P40：效價測定方法：效價測定方法：凡凡以生物學(xué)方法或者酶學(xué)方以生物學(xué)方法或者酶學(xué)方法對藥品中的特定成分以法對藥品中的特定成分以標(biāo)準(zhǔn)品為對照，作標(biāo)準(zhǔn)品為對照，作量反應(yīng)量反應(yīng)平行線測定方法平行線測定方法進(jìn)行的生進(jìn)行的生物活性（活力）測定物活性（活力）測定量反應(yīng)平行線測定方法：量反應(yīng)平行線測定方法：同同時測定供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的劑時測定供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線，

4、且兩條反應(yīng)線量反應(yīng)曲線，且兩條反應(yīng)線必須具有平行性，即供試品必須具有平行性，即供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的活性只有量的區(qū)和標(biāo)準(zhǔn)品的活性只有量的區(qū)別，并無質(zhì)的區(qū)別別，并無質(zhì)的區(qū)別前言前言藥物的含量測定藥物的含量測定容量分容量分析法析法三種三種分析分析方法方法光譜分光譜分析法析法色譜分色譜分析法析法特點(diǎn)特點(diǎn)操作簡單、結(jié)果操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確，耐用性高，準(zhǔn)確，耐用性高，但專屬性差但專屬性差特點(diǎn)特點(diǎn)特點(diǎn)特點(diǎn)簡便快速、靈敏簡便快速、靈敏度高，有一定的度高，有一定的準(zhǔn)確度，但專屬準(zhǔn)確度，但專屬性稍差性稍差靈敏度與專屬性靈敏度與專屬性都高，有一定的都高，有一定的準(zhǔn)確度，但結(jié)果準(zhǔn)確度，但結(jié)果需要對照品需要對照品適用于準(zhǔn)確度

5、與適用于準(zhǔn)確度與精確度要求較高精確度要求較高的樣品測定的樣品測定適用于靈敏度要適用于靈敏度要求較高，樣本量求較高，樣本量較大的分析項目較大的分析項目適用于專屬性和適用于專屬性和靈敏度要求較高靈敏度要求較高的復(fù)雜樣品的復(fù)雜樣品第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)容量分析法容量分析法定義定義將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄖ甘就ㄟ^適當(dāng)?shù)姆椒ㄖ甘荆?，然后根?jù)滴定液消），然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消

6、耗的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。耗的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。亦稱亦稱滴定法滴定法通過指示劑顏色通過指示劑顏色變化，或者電子變化，或者電子設(shè)備的電位或電設(shè)備的電位或電流突變來指示滴流突變來指示滴定終點(diǎn)定終點(diǎn)滴定終點(diǎn)和計量滴定終點(diǎn)和計量點(diǎn)不一致，就會點(diǎn)不一致，就會引入滴定誤差，引入滴定誤差，應(yīng)該盡量避免。應(yīng)該盡量避免。特點(diǎn)特點(diǎn)適用適用范圍范圍1、方法簡便易行：所用儀器價廉易得，操作簡便快速、方法簡便易行：所用儀器價廉易得，操作簡便快速廣泛應(yīng)用于化學(xué)原料廣泛應(yīng)用于化學(xué)原料的測定，較少應(yīng)用于的測定，較少應(yīng)用于藥物制劑的測定藥物制劑的測定2、方法耐用性高

7、：影響測定的試驗條件與環(huán)境因素少、方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環(huán)境因素少3、測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于、測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%，滿足準(zhǔn)確度高樣品，滿足準(zhǔn)確度高樣品4、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品分析成分含量較高的樣品分析?第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)容量分析法有容量分析法有關(guān)計算關(guān)計算滴定度滴定度每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物質(zhì)量。中國藥典用毫克（mg）表示。例如例如用碘量法測定維生素用碘量法測定維生素C的含量的含量時，時，中國藥典中國藥典規(guī)定：每規(guī)定：每1

8、ml碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于相當(dāng)于8.806mg的維生素的維生素C（C2H8O6）第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)dDcCbBaA被測藥物被測藥物 滴定液滴定液容量分析法有容量分析法有關(guān)計算關(guān)計算滴定度計算滴定度計算用用B來來滴定滴定AWAWBaMAbMB=滴定液反應(yīng)的質(zhì)量滴定液反應(yīng)的質(zhì)量被測藥物反應(yīng)的質(zhì)量被測藥物反應(yīng)的質(zhì)量被測藥物的摩爾質(zhì)量被測藥物的摩爾質(zhì)量滴定液的摩爾質(zhì)量滴定液的摩爾質(zhì)量第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)ABABBAMbanMbMWWABBMbaVm容量分析法有容量分析法有關(guān)計算關(guān)計算滴定度計算

9、滴定度計算用用B來來滴定滴定A滴定液滴定液待測液待測液等于等于1ml濃度乘體濃度乘體積積=nB計算有一個從計算有一個從質(zhì)質(zhì)量量到到物質(zhì)的量物質(zhì)的量，再到再到濃度濃度再到再到滴滴定度定度的轉(zhuǎn)變過程的轉(zhuǎn)變過程濃度濃度mB示例一 計算Vc的滴定度T碘量法測定Vc含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LHI2OHCIOHC6662686Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0511176.13=8.806(mg/ml)Mb=0.05mol/L11MA=176.13示例二 異煙肼的滴定度溴酸鉀法測定異煙肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸鉀溴酸鉀=0.016

10、67mol/LOH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0166732137.14=3.429(mg/ml)ab%100(%)WTV含量含量計算方法直接滴定法直接滴定法間接滴定法間接滴定法直接滴定法直接滴定法在實際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應(yīng)該進(jìn)行校正在實際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應(yīng)該進(jìn)行校正規(guī)定摩爾濃度實際摩爾濃度F規(guī)定摩爾濃度實際摩爾濃度F%100(%)WFTV含量直接滴定法的直接滴定法的含量計算方法含量計算方法直接讀取直接讀取藥典規(guī)定藥典規(guī)定自己標(biāo)定自己標(biāo)定取樣量

11、取樣量間接滴定法間接滴定法不直接對待測物進(jìn)行滴定，不直接對待測物進(jìn)行滴定，而采用間接途徑滴定而采用間接途徑滴定生成物滴定法生成物滴定法剩余量滴定法剩余量滴定法被測藥物與化合物被測藥物與化合物A作用生作用生成成 化合物化合物B，再用滴定液，再用滴定液滴定化合物滴定化合物B也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴與剩余的滴定液定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算%100(%)WFTV含量間接滴定法的間接滴定法的生成物滴定法生成物滴定法注意滴定度注意滴定度T的計算的計算Mbam)ml/mg(T

12、先計算先計算T再計算含量再計算含量請看下例請看下例正確求正確求a和和b示例三 葡萄糖酸銻鈉的含量測定0.3g供試品供試品水水100ml鹽酸鹽酸15ml碘化鉀試液碘化鉀試液10ml密塞，振搖后暗處放置密塞，振搖后暗處放置10min碘量法碘量法2642322235OSI2OS2IISbI2SbSb5+2S2O32-本法先用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應(yīng)生成碘，再用碘與硫代硫酸鈉反應(yīng)生成碘離子，相當(dāng)于本法先用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應(yīng)生成碘，再用碘與硫代硫酸鈉反應(yīng)生成碘離子，相當(dāng)于是用硫代硫酸鈉在滴定葡萄糖酸銻鈉，因此要找出它們兩者的量反應(yīng)關(guān)系，也就是是用硫代硫酸鈉在滴定葡萄糖酸銻鈉，因此要找出它們兩者的量

13、反應(yīng)關(guān)系，也就是a和和b滴定度滴定度T的計的計算示例如下算示例如下%100(%)WFTV含量間接滴定法的間接滴定法的生成物滴定法生成物滴定法注意滴定度注意滴定度T的計算的計算)/(088. 676.121211 . 0)/(mlmgMbammlmgT請讀取請讀取請校正請校正%100)(%)WTFVFVABBAA含量間接滴定法的間接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴與剩余的滴定液定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算計算的關(guān)鍵在于求出滴定液計算的關(guān)鍵在于

14、求出滴定液A應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量間接滴定法的間接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴與剩余的滴定液定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算計算的關(guān)鍵在于求出滴定液計算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操作等步驟，使測定誤差顯著增加作等步驟，使測定誤差顯著增加空白試驗校正空白試驗校正沒有藥物存在時的滴定，方?jīng)]有藥物存在時的滴定，方法步驟與有藥物存

15、在時相同法步驟與有藥物存在時相同計算公式相應(yīng)計算公式相應(yīng)修正如下：修正如下：%100)(%)0WTFVVABSBB含量間接滴定法的間接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴與剩余的滴定液定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算計算的關(guān)鍵在于求出滴定液計算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操作等步驟，使測定誤差顯著增加作等步驟，使測定誤差顯著增加沒有藥物存在時，滴定液沒有

16、藥物存在時，滴定液A全部與滴定液全部與滴定液B反應(yīng)反應(yīng)藥物存在時，剩余滴定液藥物存在時，剩余滴定液A全部與滴定液全部與滴定液B反應(yīng)反應(yīng)濃度校正作用濃度校正作用Example as follows示例四 司可巴比妥鈉的含量測定 取本品約取本品約0.1g，精密稱定精密稱定，置，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，振搖使溶解，精密加溴滴定液精密加溴滴定液( (0.05mol/L) ) 25ml，再加鹽酸，再加鹽酸5ml，立即密塞，并振搖，立即密塞，并振搖1min，在暗，在暗處放置處放置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻

17、后，用立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉滴定液滴定液( (0.1mol/L) )滴定，至終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消滴定，至終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗校正。失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗校正。本法用溴與司可巴比妥鈉反應(yīng)，再用硫代硫酸鈉反滴定溴，屬反滴定法，本法用溴與司可巴比妥鈉反應(yīng)，再用硫代硫酸鈉反滴定溴，屬反滴定法，并用空白試驗校正并用空白試驗校正,滴定液滴定液A為溴，為溴，B為硫代硫酸鈉，含量計算只需先求為硫代硫酸鈉，含量計算只需先求溴滴定度，再求出硫代硫酸鈉空白試驗溴滴定度，再求出硫代硫酸鈉空白試驗V0體積與樣品測定體積體積與樣品

18、測定體積Vs示例四 司可巴比妥鈉的含量測定已知：已知：司可巴比妥鈉司可巴比妥鈉M=260.23;司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)摩爾司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)摩爾=1:1； W=0.1022 g； 硫代硫酸鈉濃度校正因子硫代硫酸鈉濃度校正因子=1.038 ； 供試品滴定供試品滴定Vs=15.73ml ;空白試驗滴定空白試驗滴定V0 =23.21ml;)/(01.1327.2601105. 0)/(mlmgMbammlmgT%100)(%)0WTFVVABSBB含量Its very easy！%100)(%)0WTFVVABSBB含量Notice！本公式適本公式適用于空白用于空白校正情形校正情形%100)(%)W

19、TFVFVABBAA含量本公式適用于沒有做空本公式適用于沒有做空白校正情形白校正情形見上例見上例見下例見下例見見P146習(xí)題一 剩余碘量法測定異煙肼含量 異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液(0.1mol/L)氧氧化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定滴定( (以淀粉為指示劑以淀粉為指示劑) )。NCONHNH2+2I2+5NaHCO3COOH+N2+ 4NaI+ 5CO2+4H2OI2 + 2Na2S2O3+ 2NaINa2S4O6100WT)V-F(V%

20、(mg/ml)858. 614.134210.1T 12: 2322322222IOSNaOSNaIII2FI含量：異煙肼習(xí)題二 非那西丁含量測定 精密稱取本品精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流加稀鹽酸回流1小時后，放冷，小時后，放冷，用亞硝酸鈉液用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。每每1ml1ml亞硝酸鈉液亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于相當(dāng)于17.92mg的的C10H13O2N，請計算非那西丁的含量。，請計算非那西丁的含量。%72.9910010003630.01 .01010.000.2092.17%非那西丁光譜分析法光譜分析法藥典藥典收載收

21、載紫外可見紫外可見分光度法分光度法原子吸收分原子吸收分光光度法光光度法紅外分光紅外分光度法度法熒光分析熒光分析法法火焰光度火焰光度法法本章本章講敘講敘紫外可見紫外可見分光度法分光度法熒光分析熒光分析法法紫外可見紫外可見分光度法分光度法基于物質(zhì)對紫外區(qū)基于物質(zhì)對紫外區(qū)(200400nm)和可見光區(qū)和可見光區(qū)(400760nm)的單色光輻的單色光輻射建立起來的光譜分析法射建立起來的光譜分析法朗伯朗伯-比比爾定律爾定律基基礎(chǔ)礎(chǔ)EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可見紫外可見分光度法分光度法方法特方法特點(diǎn)與適點(diǎn)與適用范圍用范圍1、簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普

22、及、簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及2、靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)、靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)10-710-4g/ml，適用于低濃度試樣分析，適用于低濃度試樣分析3、準(zhǔn)確度較高：本法誤差在、準(zhǔn)確度較高：本法誤差在2%5%之間，適用于對測定結(jié)果的準(zhǔn)確度之間，適用于對測定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品要求較高的樣品4、專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)、專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。物質(zhì)缺乏選擇性。本法比較少應(yīng)用于本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測定，原料藥的含量測定，可用于制劑的含量可用于制劑的含量測定，更多的應(yīng)用測

23、定，更多的應(yīng)用于生物制劑的定量于生物制劑的定量檢查檢查本法紫外區(qū)須選用本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色石英比色皿，比色皿一般為皿一般為1cm，吸，吸光度在光度在0.30.7之之間為宜，選用最大間為宜，選用最大吸收光波長。吸收光波長。紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法4種種方方法法對照品對照品比較法比較法吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法計算光計算光度法度法比色比色法法紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法對照品對照品比較法比較法分別配制供試品溶液和對照品溶液分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液的中所含被測對照品溶液的中所含被測藥物的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定

24、量的藥物的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的10010%,所用所用溶劑量兩者相同溶劑量兩者相同,在規(guī)定的波長下測定吸光度在規(guī)定的波長下測定吸光度.按下式計算結(jié)果按下式計算結(jié)果;,;對應(yīng)吸光度對照品溶液濃度供試品溶液濃度RxRxRRxxAACCACAC1.對照品比較法紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法對照品對照品比較法比較法;:;:;:%100%100(%):供試品的量稀釋體積供試品濃度稱樣量測得量含量對原料藥WDCWDCxxP16:將將Cx用上述公式替代，用上述公式替代，即可通過實驗求出各種含即可通過實驗求出各種含量。見書例。量。見書例。對應(yīng)于稀釋對應(yīng)于稀釋體積濃度體積濃

25、度1.對照品比較法紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法對照品對照品比較法比較法;:);(:%100(%):制劑的標(biāo)示量裝量制劑平均重量標(biāo)示量對于固體制劑BWBWWDCxP16:制劑的標(biāo)示量制劑的標(biāo)示量:系指每系指每一支、片或每一個單位制一支、片或每一個單位制劑中含有主藥的重量劑中含有主藥的重量(或效或效價）或含量或裝量。價）或含量或裝量。P16:將將Cx用上述公式替代，用上述公式替代，即可通過實驗求出各種含即可通過實驗求出各種含量。見書例。量。見書例。紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法:引入吸光系引入吸光系數(shù)的含

26、量計算方法數(shù)的含量計算方法100EAC%1cm1xx紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法%1001001000(%)%11BVEVDAcm標(biāo)示量%1001001000(%)%11BWEWDAcm標(biāo)示量g/mlMg轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化單位化單位請看例題請看例題紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法%1001001000(%)%11BVEVDAcm標(biāo)示量例題例題示例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定：精密量取本品適量（約相示例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定：精密量取本品適量（約相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪當(dāng)于鹽酸氯丙嗪50mg），置），置200ml量瓶中

27、，加鹽酸溶液量瓶中，加鹽酸溶液（91000)稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置，置100ml量瓶中，量瓶中，用鹽酸（用鹽酸（91000)稀釋至刻度，搖勻；在稀釋至刻度，搖勻；在254nm下測定吸光度，下測定吸光度，按鹽酸氯丙嗪的吸收百分系數(shù)計算，即得。按鹽酸氯丙嗪的吸收百分系數(shù)計算，即得。過程推導(dǎo)過程推導(dǎo)注射液，選溶液公式注射液，選溶液公式,如下：如下：紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法D為供試品溶液的稀釋體積：共稀釋了為供試品溶液的稀釋體積：共稀釋了200ml1002=10000ml%1001001000(%)%11BVE

28、VDAcm標(biāo)示量已知已知測量值吸光度已知供試品取樣量已知注射液標(biāo)示量已知是注射液規(guī)格%11:2:cmEAmlVBV2ml ?吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法)(1:100%100100(%)%11%11含量標(biāo)示量的百分比量之后等于實際供試品含再乘液的含量稀釋液體積相當(dāng)于供試取樣的意義標(biāo)示量VBDmlVEAVBDVEAcmcm%1001001000(%)%11BVEVDAcm標(biāo)示量吸收系吸收系數(shù)法數(shù)法)(:100%100100(%)%11%11含量標(biāo)示量的百分比量之后等于實際供試品含再乘試液的含量取樣單位質(zhì)量相當(dāng)于供的意義標(biāo)示量WBDWEAWBDWEAcmcm%1001001000(%)%11BWEWDAc

29、m標(biāo)示量固體試劑公式推導(dǎo)如下：固體試劑公式推導(dǎo)如下：3.計算分光光度法4.比色法（可能有實驗，Its very simple）看書！特點(diǎn)：特點(diǎn)： 靈敏度高，可達(dá)10-1010-12g/ml 要求低濃度下測定 須做空白測定 熒光弱的藥物可衍生化后測定( (二二) )熒光分析法熒光分析法rbrrxbxxCRRRRC( (三三) )色譜分析法色譜分析法1.HPLC1.1 內(nèi)標(biāo)法 RRssC/AC/Af 校正因子As：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高AR: 對照品的峰面積或者峰高Cs: 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度CR：對照品濃度SSxxC/AAf)C(含量As：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高Ax: 供試品的峰面積或者峰高Cs: 內(nèi)標(biāo)

30、物質(zhì)濃度f：校正因子( (三三) )色譜分析法色譜分析法1.HPLC示例一 炔諾酮的含量測定 照高效液相色譜法照高效液相色譜法( (附錄附錄DD測定測定) )色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用用十八烷基硅烷鍵合硅膠十八烷基硅烷鍵合硅膠為為填充劑；以甲醇填充劑；以甲醇- -水水(65:35)(65:35)為流動相，檢測波長為為流動相，檢測波長為244nm244nm。理理論塔板數(shù)論塔板數(shù)按炔諾酮峰計算不低于按炔諾酮峰計算不低于15001500，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的峰的分離度分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度

31、均應(yīng)符合要求。符合要求。內(nèi)標(biāo)溶液的制備內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取黃體酮約取黃體酮約25mg25mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml25ml量瓶量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。測定法測定法 取本品約取本品約25mg25mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml25ml量瓶中，加甲醇溶解并量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml2ml與內(nèi)標(biāo)溶液與內(nèi)標(biāo)溶液3ml3ml，置，置10ml10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20l20l注入液相色譜儀，記注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另

32、取炔諾酮對照品適量，精密稱定，同錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對照品適量，精密稱定，同法測定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，即得。法測定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，即得。對照品對照品樣品測得量WA/A/ArrssA2.GC示例 松節(jié)油的含量測定 照氣相色譜法照氣相色譜法( (附錄附錄 E E測定測定) )色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用聚乙二醇用聚乙二醇(PEG)-20M(PEG)-20M為固定相，為固定相，涂布密度為涂布密度為20%20%；柱溫為；柱溫為9090C。理論塔板數(shù)按。理論塔板數(shù)按-蒎烯峰計算應(yīng)蒎烯峰計算應(yīng)低于低于15001500。校正因子測定校正因子測定 取正丁醇適量，

33、精密稱定，加石油醚取正丁醇適量，精密稱定，加石油醚(30(306060C)C)制成每制成每1ml1ml含含20mg20mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取-蒎烯對照品約蒎烯對照品約30mg30mg，精密稱定，置，精密稱定，置10ml10ml棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml2ml，加，加石油醚石油醚(30(306060C)C)至刻度，搖勻，吸取至刻度，搖勻，吸取1l1l注入氣相色譜儀，計注入氣相色譜儀，計算校正因子。算校正因子。測定法測定法 取本品約取本品約35mg35mg，精密稱定，置，精密稱定，置10ml10ml棕色量瓶中，精密加入棕色量瓶中

34、，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液內(nèi)標(biāo)溶液2ml2ml，用石油醚，用石油醚(30(306060C)C)溶解并稀釋至刻度，搖勻，溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取吸取1l1l注入氣相色譜儀，測定，即得。注入氣相色譜儀，測定，即得。 本品含本品含-蒎烯蒎烯(C(C1010H H1616) )不得少于不得少于70%70%。RRssC/AC/Af 校正因子SSxxC/AAf)C(含量v 外標(biāo)法外標(biāo)法:含量(Cx)=CRAxARv 標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法:AisAx=Cx+ CxCx或Cx= Cx(Ais/Ax) -1不經(jīng)有機(jī)破壞經(jīng)有機(jī)破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定酸水解堿水解經(jīng)還原分解后測定濕法破壞凱氏定氮法

35、干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法( (一一) )、直接測定法、直接測定法 葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 鄰二氮菲鄰二氮菲- -硫酸鈰滴定硫酸鈰滴定 葡萄酸銻鈉葡萄酸銻鈉 間接碘量法間接碘量法( (二二) )、經(jīng)水解后測定法、經(jīng)水解后測定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。1 1、堿水解法、堿水解法344332334)(NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl3223 回回流流三氯叔丁醇銀量法返滴定2 2、酸水解法、

36、酸水解法適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。十一烯酸氯化鋅十一烯酸鋅稀鹽酸EDTA配位滴定( (三三) )、經(jīng)還原分解后測定法、經(jīng)還原分解后測定法適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機(jī)化合物。COOHIIINHCOCH3CH3COHN+11NaOH+COOHNH2H2N+ +2CH3COONa+3Na2ZnO2+NaI+AgNO3AgI3Zn3NaOH3H2O+ NaNO3回流碘他那酸碘他那酸三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機(jī)合成藥物測定的前處理和生物制品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。u H2SO4-HNO3u

37、 H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑凱氏定氮法測定含有氨基和酰胺結(jié)測定含有氨基和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu)( (一一) )濕法破壞濕法破壞原 理 將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被中有機(jī)結(jié)構(gòu)被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，化為無機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，經(jīng)堿化經(jīng)堿化后后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸

38、滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg凱氏燒瓶K2SO4( (提高消解溫度提高消解溫度) )CuSO4( (加快消解速度加快消解速度) )硫酸硫酸堿液堿液硼酸硼酸( (吸收液吸收液) )甲基紅甲基紅- -溴甲酚綠指示劑溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正先用強(qiáng)先用強(qiáng)酸水解酸水解再用含堿硫代硫再用含堿硫代硫酸鈉中和酸鈉中和最后用堿釋放出氨最后用堿釋放出氨氣氣 ，并蒸餾出之，并蒸餾出之( (二二) )干法破壞干法破壞1.高溫灼燒法高溫灼燒法用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。2.氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法 系指將含有待測元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密系指將含有待測元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為分解為COCO2 2和和H H2 2O O，待測元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不，待測元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不同價態(tài)的氧化物，被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù)同價態(tài)的氧化物，被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù)其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)行分析。其性質(zhì)和存在方式