臨檢實驗設(shè)計

1、Hb測定一、技術(shù)背景測定方法有：HiCN測定法SDS-HB測定法HiN3測定法 AHD575 測定法 CTAB測定法WHO推薦參考方法：HiCN測定法原因：操作簡單，反應(yīng)迅速；所用轉(zhuǎn)化液穩(wěn)定易保存；可檢測除SHb外的所有Hb；HiCN參考品可長期保存，便于質(zhì)控。二、實驗原理血液經(jīng)氰化高鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)化液稀釋后，紅細胞被破壞，釋放出血紅蛋白，除SH外，其余血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白（Hi），Hi與CN結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。HiCN在540nm處有吸收峰，用分光光度計測定該處的吸光度，再換算成每升血液中的血紅蛋白濃度，或用HiCN參考液進行比色法測定制作

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線供查閱。三、器材、試劑選擇器材：（1）、采血針、微量吸管、75%乙醇棉球及碘液、乳膠吸頭（2）試劑、試管架（3）5ml吸管、吸耳球（4）分光光度計試劑：（1）HiCN轉(zhuǎn)化液（文齊氏液）：氰化鉀0.050g，高鐵氰化鉀0.20g，無水磷酸二氫鉀0.140g，Triton X-100（非離子表面活性劑）1.0ml，加蒸餾水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.07.4。棕色玻璃瓶試劑避光保存。（2）標(biāo)準(zhǔn)品：100g/l血紅蛋白四、標(biāo)本EDTA-K2抗凝靜脈血或毛細血管血五、實驗步驟直接定量測定法1、 加轉(zhuǎn)化液：用吸管吸取HiCN轉(zhuǎn)化液5ml加入試管內(nèi)。2、采血與轉(zhuǎn)化：采集毛細血管或者靜脈血20u

3、l，加入轉(zhuǎn)化液中，封閉試管口后顛倒混勻，室溫下放置5分鐘，使Hb全部轉(zhuǎn)化為HiCN。3、測定吸光度：在分光光度計上，使用540nm波長，以HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水為空白調(diào)零后，測定標(biāo)本的吸光度值（A）。4、計算 Hb（g/l）=（A測100g/l）/A100A測為540nm處測定的標(biāo)本吸光度，A100為標(biāo)準(zhǔn)品在540nm處測定的吸光度。5、報告方式：XXg/l6、參考區(qū)間 成年：男性120160g/l，女性110150g/l。新生兒：170200g/l。六、臨床意義通過紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定及血細胞比容測定即可確定貧血的存在程度。血紅蛋白增多有以下情況：(1)生理性增多：見于高原居民胎兒和新生

4、兒，劇烈活動、恐懼冷水浴等；(2)病理性增多：見于嚴(yán)重的先天性及后天性心肺疾患和血管畸形如法洛四聯(lián)癥、發(fā)紺型先天性心臟病、阻塞性肺氣腫、肺源性心臟病、肺動脈或肺靜脈瘺及攜氧能力低的異常血紅蛋白病等；也見于某些腫瘤或腎臟疾病，如腎癌肝細胞癌、腎胚胎瘤及腎盂積水、多囊腎等。血紅蛋白減少見于以下情況：(1)生理性減少：3個月的嬰兒至15歲以前的兒童主要因生長發(fā)育迅速而致的造血系統(tǒng)造血的相對不足，一般可較正常人的低10%-20%。妊娠中期和后期由于妊娠血容量增加而使血液被稀釋老年人由于骨髓造血功能逐漸降低，可導(dǎo)致紅細胞和血紅蛋白含量減少。(2)病理性減少：A.骨髓造血功能衰竭如再生障礙性貧血、骨髓纖維

5、化所伴發(fā)的貧血。B.因造血物質(zhì)缺乏或利用障礙所致的貧血如缺鐵性貧血、葉酸及維生素B12缺乏所致的巨幼細胞性貧血。C.因紅細胞膜酶遺傳性的缺陷或外來因素所致紅細胞破壞過多而導(dǎo)致的貧血，如遺傳性球形紅細胞增多癥、海洋性貧血陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、異常血紅蛋白病、免疫性溶血性貧血心臟體外循環(huán)的大手術(shù)或某些生物性和化學(xué)性等因素所致的溶血性貧血以及某些急性或慢性失血所致的貧血。七、質(zhì)控1、標(biāo)本：血紅蛋白檢測原理是比色法，引起血清濁度增大的因素常致血紅蛋白濃度假性增高，如高脂血癥、高球蛋白、高白細胞（WBC30109/L）、HbCO增多及高血小板（Plt700109/L）等。2、器材及試劑：定期校準(zhǔn)分光光

6、度計，分光光度計的波長和光程必須準(zhǔn)確、靈敏度高、線性好、無雜光，否則會影響結(jié)果準(zhǔn)確性。選用合格的微量采血管、刻度吸管及比色杯。保證試劑的質(zhì)量。3、技術(shù)操作：消毒、采血、稀釋、混勻等應(yīng)合格。確保HbCO完全轉(zhuǎn)化，可延長轉(zhuǎn)化時間或加大試劑中高鐵氰化鉀的用量。4、廢棄物處理：HiCN轉(zhuǎn)化液中KCN是劇毒品，配制轉(zhuǎn)化液時要按劇毒品管理程序操作。為防止KCN污染環(huán)境，比色測定后的廢液應(yīng)妥善處理。八、注意事項1、試劑保存：試劑保存于棕色瓶內(nèi)，不得使用塑料試劑瓶。可以冷藏保存，但不能冷凍，防止因丟失CN-而導(dǎo)致血紅蛋白轉(zhuǎn)化不完全。2、做好安全防護3、分光光度計校正4、消除異常標(biāo)本的干擾：白細胞過多引起的渾濁

7、，可離心后取上清液比色。球蛋白異常增高引起的渾濁，可改用高氯化鈉的轉(zhuǎn)化液后重新測定。九、方法學(xué)評價優(yōu)點：操作簡單，反應(yīng)迅速；所用轉(zhuǎn)化液穩(wěn)定易保存；可檢測除SHb外的所有Hb；HiCN參考品可長期保存，便于質(zhì)控。缺點：KCN試劑有劇毒；不能測定SHb；對HbCO反應(yīng)較慢；遇高白細胞和高球蛋白血癥的血標(biāo)本會出現(xiàn)渾濁。 PLT分類計數(shù)1、 混懸液滴入計數(shù)池后應(yīng)靜置15min ,帶血小板完全下沉?xí)r才能計數(shù)，試驗背景分析：1.PLT的產(chǎn)生：骨髓干細胞多功能祖細胞巨核祖細胞幼巨核細胞巨核細胞巨核細胞胞質(zhì)塊脫落血小板；2.PLT的功能：（1）促進止血和加速凝血 （2）維持毛細血管壁完整性；3.目前監(jiān)測血小板

8、的的方法有儀器法和手工法，儀器法有逐漸代替手工法的趨勢，但儀器法有很多干擾因素，導(dǎo)致結(jié)果不可靠，特別是低濃度的血小板，按照復(fù)檢規(guī)則，需用手工法復(fù)檢出報告。本實驗設(shè)計采用手工法進行血小板計數(shù)；二、實驗原理：血液經(jīng)血小板稀釋液稀釋后，紅細胞被溶解，注入計數(shù)池后，在顯微鏡直接計數(shù)（普通光學(xué)顯微鏡計數(shù)法和相差顯微鏡計數(shù)法）計數(shù)血小板。經(jīng)換算求出每升血液中的血小板。三、器材、試劑選擇:1.器材：（1）普通光學(xué)顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、專用血蓋片（2）試管、1.0ml刻度吸管、洗耳球、一次性20微升微量吸管、乳膠吸頭、一次性采血針、（3）醫(yī)用棉簽、優(yōu)質(zhì)衛(wèi)生紙2.試劑選擇：（1）草酸銨稀釋液：常用，破換紅細胞

9、能力強，血小板形態(tài)清晰，血小板常規(guī)計數(shù)法首選稀釋液；（2）復(fù)方尿素稀釋液：稀釋后血小板腫大易辨認，但尿素易分解并且不能完全破壞紅細胞；（3）高鐵氰化鉀稀釋液：試劑穩(wěn)定，易于長期保存，不能完全破壞紅細胞;（4）復(fù)方碘稀釋液：不破壞紅細胞，試劑易長菌，干擾計數(shù)，此法已被淘汰；五、實驗步驟：1.取小試管一支，加入血小板稀釋液0.38ml；2.標(biāo)本采集：嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)采血規(guī)程采集患者肘靜脈血液（EDTA抗凝管或者直接進行指尖采血；3.稀釋血液：用棉球或者衛(wèi)生紙擦去微量吸管管外的余血，將其插入稀釋液底部，緩緩放出血液，在吸取上層稀釋液吸洗微量吸管2-3次，輕輕混勻細胞懸夜約1min，室溫下靜置10min左

10、右；4.充池：輕微振蕩試管，將細胞懸液充分混勻，用微量吸管吸取細胞懸液15微升左右，沖入清潔而干燥的計數(shù)室內(nèi)，靜置10-15min,袋血小板完全下沉到計數(shù)池底面時，于顯微鏡下進行計數(shù)；5.計數(shù)：以低倍物鏡找到計數(shù)板的中央大方格后，改用高倍鏡，在大方格內(nèi)計數(shù)4角和中央五個中方格的血小板數(shù)。六、數(shù)據(jù)記錄： 五個中方格的血小板數(shù)NNNN5N5七、結(jié)果計算：血小板計數(shù)（/L)5個中方格內(nèi)計得的血小板數(shù)（N)5201010610109/La.5表示無個中方格內(nèi)的血小板數(shù)換算成一個大方格（0.1l)稀釋后血液中血小板數(shù)；b.表示0.1l血小板數(shù)換算成1l稀釋后血液中的血小板數(shù)；c.表示血小板的稀釋倍數(shù)d.

11、106表示將微升換算為L的系數(shù)七、結(jié)果報告：血小板：XXX109/L參考區(qū)間：100-300109/L8、 臨床意義：1. 生理性改變：（1）增多：見于午后、冬季、和高原居民、月經(jīng)后、妊娠中晚期運動、飽餐后靜脈血；（2） 減少：見于早晨、春季、平原居民、月經(jīng)前、分娩后、休息后、毛細血管血。2.病理性改變：（1）.血小板減少：急性白血病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，DIC，脾腫大，新生兒血小板減少癥a.20-50109/L，可有輕度出血或手術(shù)出血；b.20109/L，可有較嚴(yán)重的出血；c.5109/L，可導(dǎo)致嚴(yán)重出血；（2）血小板增多：慢性粒細胞白血病，急性化膿性感染，大出血，外科手術(shù)，脾切除等；a.400

12、109/L，為血小板增多；b.1000109/L，常有血栓形成的危險。9、 質(zhì)量控制：（1）稀釋液放室溫使用，但應(yīng)密閉以防灰塵及水分蒸發(fā)，最好放冰箱保存為妥；（2）采血時，如果同時做WBC等，應(yīng)先采血做血小板；（3）懸夜制備，充分混勻，搖動標(biāo)本2min或200次以上;（4）計數(shù)光線不可太強，1h內(nèi)技術(shù)完成，如紅細胞不完全溶解，影響血小板計數(shù)時，可加大稀釋倍數(shù)，或另換稀釋液。10、 注意事項：（1）檢查前，患者應(yīng)避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物;（2）所用全部器材必須校準(zhǔn)、潔凈、干燥;（3）使用符合要求的優(yōu)質(zhì)血小板稀釋液(優(yōu)質(zhì)血小板稀釋液應(yīng)具備以下條件：a.能有效阻止凝血；b.很快將血小板

13、凝固，防止血小板聚集和形態(tài)改變；c.溶血要求紅細胞破壞完全；d.組成簡單，易于保存，不生長細菌；e.血小板稀釋液空白計數(shù)值應(yīng)為零;(4)采血時，刺針深度要足夠，使血液流暢，避免用力擠壓。拭去第一滴血后立即采血采血，以防止血小板聚集和破壞；(5)血液離體后更易發(fā)生聚集，所以各操作步驟均應(yīng)迅速而適度；注意在充池前應(yīng)充分搖勻;（6）血小板小而輕，在液體中下沉很慢，血小板。紅細胞形態(tài)觀察一、實驗原理： 外周血制備血涂片并經(jīng)瑞士染色后，血中各種細胞由于化學(xué)成分和性質(zhì)的不同以及對染料的親和作用和吸附作用的差異，而呈現(xiàn)出不同的形態(tài)和染色特點，紅細胞紅細胞在大小、形態(tài)、染色性和結(jié)構(gòu)等方面均與其他細胞存在差異，

14、同時紅細胞在病理情況下可出現(xiàn)相應(yīng)特征性的異常變化，據(jù)此可在光學(xué)顯微鏡下觀察正常紅細胞形態(tài)，并識別異常紅細胞的形態(tài)變化。二、器材與試劑：1、顯微鏡2、香柏油、二甲苯三、標(biāo)本：制備良好的瑞士染色血涂片四、實驗步驟：1、采靜脈血或指端血一定量2、用取出的一滴新鮮血均勻的涂在玻片上，制成血膜涂片3、對血涂片進行瑞士染色4、低倍鏡觀察：低倍鏡下觀察血涂片中紅細胞染色和分布情況，瀏覽全片看是否存在異常細胞5、低倍鏡下選擇細胞染色良好、分布均勻（紅細胞緊密排列但不重復(fù)）區(qū)域，一般選血涂片體位交界處6、油鏡觀察：在血涂片選定區(qū)域滴加香柏油，油鏡下仔細觀察紅細胞形態(tài)7、觀察完畢后，清潔顯微鏡鏡頭和血涂片8、報告

15、方式：描述標(biāo)本中正常紅細胞形態(tài)特點和異常紅細胞形態(tài)變化。異常紅細胞形態(tài)變化主要包括大小異常、形態(tài)異常、血紅蛋白含量異常、排列和結(jié)構(gòu)異常等五、參考區(qū)間正常成熟紅細胞呈雙凹圓盤狀，細胞間形態(tài)相似，大小均一性好，瑞士染色呈淡紅色，中央1/3為生理性淡染區(qū)，胞內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。偶見變形或破碎細胞，分布極為局限六、質(zhì)量控制1、有合格的血液細胞形態(tài)檢驗人員2、選擇細胞分布均勻區(qū)域進行鏡檢3、注意完整規(guī)范的檢查順序：應(yīng)先在低倍鏡下檢查血涂片，觀察細胞分布和染色情況，再用油鏡觀察血膜體位交界處的細胞形態(tài)，同時瀏覽是否存在其他異常細胞。4、減少人為因素影響：抗凝劑濃度過高或血標(biāo)本久置 載玻片上有脂類物質(zhì) 血涂片制備

16、不當(dāng) 血涂片干燥過度或固定液中混油水分 染色不當(dāng) 七、臨床意義：1、小紅細胞：r10m，染多色性或含有嗜堿性點彩，巨幼貧，溶血性貧血，惡性貧血。3、巨紅細胞：r15m,缺乏葉酸幾維生素B12巨幼貧。4、紅細胞大小不均：直徑相差一倍以上，嚴(yán)重的增生性貧血，巨幼貧最為明顯5、正色素性紅細胞：淡紅色圓盤狀，中央有生理性淡染區(qū)。正常人、急性失血、再障、白血病。6、高色素性紅細胞：巨幼貧7、低色素性細胞：缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血8、多色性紅細胞：溶血性貧血、失血性貧血9、血細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)異常：嗜堿性點彩紅細胞見于部分金屬中毒；豪焦小體見于巨幼性貧血、紅白血病等八、注意事項1、標(biāo)本制備：在制片過程的人

17、為因素可造成紅細胞形態(tài)變化，如涂片不當(dāng)，玻片不符合要求，抗凝劑濃度過高，長時間放置血液，涂片干燥過慢，染色液濃度、染色時間不當(dāng)。2、選擇觀察區(qū)域：應(yīng)首先在低倍鏡下觀察細胞的分布和染色情況，選擇紅細胞緊密排列但不重復(fù)的區(qū)域進行形態(tài)觀察。3、瀏覽全片：異常細胞和成分常集中在血涂片的邊緣，容易漏檢，因此要瀏覽全片注意觀察有無其他異常細胞九、方法學(xué)評價1、顯微鏡分析法：采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察，是儀器法校準(zhǔn)的參考方法和檢測的復(fù)核方法2、計算機圖像分析：建立統(tǒng)計模型，以正常紅細胞形態(tài)為參比、作出分析，可用于與紅細胞形態(tài)變化疾病的輔助診斷。3、血液分析儀法：提供紅細胞數(shù)量及其他相關(guān)參數(shù)，對異常結(jié)果報

18、警，但不能提供確切信息，需用鏡檢血涂片核實。WBC形態(tài)觀察和分類計數(shù)一、 技術(shù)背景臨床上用于白細胞分類計數(shù)的方法有顯微鏡法和血液分析儀法兩種，（1） 血液分析儀法 優(yōu)點：操作簡單，檢測速度快，重復(fù)性好，易于標(biāo)準(zhǔn)化，有異常結(jié)果報警提示，報告形式多樣，可與全自動推片機鏈接 缺點：用于篩檢不能取代顯微鏡白細胞分類計數(shù)法，確認白細胞的病理改變必須做顯微鏡復(fù)查（2） 顯微鏡計數(shù)法 優(yōu)點：不需要特殊儀器，設(shè)備簡單，費用低廉，能夠準(zhǔn)確的根據(jù)細胞的染色及其大小、核質(zhì)的特點等形態(tài)學(xué)綜合分析，可以及時發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)、染色有無明顯異常 缺點:操作費時，準(zhǔn)確性和重復(fù)性很大程度上取決于操作者對細胞的識別能力，不適用于大量

19、健康人群篩檢 二、 實驗原理將血液制備成細胞分布均勻的血涂片經(jīng)Wright染色后在油鏡下觀察，根據(jù)白細胞形態(tài)學(xué)特點與染色差異進行分類計數(shù)，通常分類計數(shù)100-200個白細胞，得到白細胞的相對比值或所占百分率，根據(jù)白細胞計數(shù)結(jié)果，算出每升中各種白細胞的絕對值。（絕對值=白細胞計數(shù)值該種白細胞計數(shù)的百分率）三、 器材試劑選擇（1） 普通光學(xué)顯微鏡、白細胞分類計數(shù)器（2） 血涂片制備與染色所用器材（3） 香柏油、擦鏡紙（30%無水乙醇、70%乙醚混合液或二甲苯）四、 標(biāo)本EDTA鹽抗凝靜脈血或末梢血五、 試驗步驟（1） 血涂片的制備及瑞氏染色或瑞-吉復(fù)合染色：具體操作見第一章實驗五。（2） 先在低倍

20、鏡下瀏覽全片，了解染色好壞和細胞分布情況，觀察有無異常細胞。（3） 選擇細胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，一般在體尾交界處，滴加香柏油一滴，轉(zhuǎn)油鏡（100倍物鏡）下進行分類計數(shù)。分類計數(shù)時要按照一定的順序例如“弓”字形進行，避免重復(fù)計數(shù)或人為主觀地選擇視野。（4） 白細胞分類計數(shù)的同時也要觀察紅細胞有無大小、形態(tài)、染色和有無異常結(jié)構(gòu)的變化，觀察血小板形態(tài)和分布有無異常，同時還應(yīng)注意有無異常細胞或寄生蟲（如瘧原蟲等）。（5） 結(jié)合白細胞技術(shù)結(jié)果，可間接計算出每升血液中各種白細胞的數(shù)量即各種白細胞的絕對值。（6） 結(jié)果報告 直接報告各類白細胞所占的比值或百分率，用X.XX或X%表示。 通過計算報告各類

21、白細胞的絕對值，用X.XX109/L表示。計算方法：各類白細胞絕對值=每種白細胞所占百分率白細胞總數(shù)計數(shù) 幼稚或異常白細胞：如發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細胞，應(yīng)進行分類報告，并包括在白細胞分類比值或百分率中。 有核紅細胞：血涂片中如見到有核紅細胞，要逐個計數(shù)，但不列入白細胞分類計數(shù)總數(shù)之內(nèi)，報告方式為分類計數(shù)100個白細胞的同時見到的有核紅細胞數(shù)。 紅細胞、血小板的形態(tài)：如有異常改變應(yīng)在結(jié)果中描述。 發(fā)現(xiàn)其他異常如見到寄生蟲均應(yīng)在報告中描述。 八、血涂片中各種正常白細胞形態(tài)中性粒細胞（Sg5070% St 05%）：形態(tài)圓形，直徑1013um，核為深紫紅色，染色質(zhì)緊密成塊狀，分為桿狀核和分葉核，以23葉

22、者多，胞漿內(nèi)含有紫紅色細小顆粒，胞漿呈淡紅色。 嗜酸性粒細胞 （ 0.55% ）：形態(tài)圓形，直徑1015m，核為2葉，呈眼鏡狀，深紫色，胞漿淡紅色，充滿粗大、均勻而圓的鮮紅色顆粒 。嗜堿性粒細胞：（01%）：核呈深紫色或不明顯，分23葉，多不明顯，胞漿呈紫紅色，有大小不均的紫黑色顆粒 。淋巴細胞：（2040%）：大淋巴細胞直徑：1018m，小淋巴細胞69m，胞核圓形、橢圓形，深紫色，染色質(zhì)粗密成塊，胞漿：大淋巴細胞呈蔚藍色，有少量顆粒，小淋巴細胞呈深藍色，一般無顆粒。 異型淋巴細胞：正常人異型淋巴細胞在0.5%以下，常見有三型。 型（空泡型）最多見，胞體大，圓形，核呈圓形、腎形、橢圓形，胞漿豐

23、富，深藍色，含有空泡，或多數(shù)小空泡而呈泡沫狀。型（不規(guī)則型）胞體大，似單核細胞，外形不規(guī)則，核呈圓形或不規(guī)則形，胞漿豐富，淺藍色、藍色，有透明或邊緣著色深，無空泡，有少量嗜苯胺藍顆粒。 型（幼稚型）胞體大，核圓形、橢圓形，染色質(zhì)呈細致網(wǎng)點狀，12核仁，胞漿深藍色，有時見少量空泡。 單核細胞：（310% ）：胞體大，直徑1420m，胞核不規(guī)則，呈腎形、S形、馬蹄形，淡紫紅色，排列較疏松呈網(wǎng)狀，胞漿較多，淡灰色，含較多的細小紫紅色顆粒 。九、參考范圍： 見表ll1。 表111 白細胞分類計數(shù)參考值細胞類別 成人中性粒細胞桿狀核 0.01-0.05(1%-5%)分葉核 0.50-0.70(5070)

24、嗜酸性粒細胞 0.005-0.05(055)嗜堿性粒細胞 0-0.01 (01)淋巴細胞 0.20-0.40(20%40%)單核細胞 0.03-0.10 (310)十、 臨床意義白細胞是周圍血的有核細胞,其數(shù)量顯著少于紅細胞,占0.1%0.2%。根據(jù)其形態(tài)特征可以分為粒細胞、淋巴細胞和單核細胞，其中粒細胞還可以分為中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞。白細胞的檢查對臨床診斷有重要的意義。 通常白細胞計數(shù)波動在30%以下，在臨床診斷上無意義，只有通過定時和反復(fù)觀察才有意義。 白細胞總數(shù)受多種因素的影響： 1、年齡：成人的白細胞總數(shù)為（410）109，新生兒為（1520）109，6月2歲為（11

25、20）109， 2、日間變化；午后高于清晨：一日之內(nèi)最高和最低可相差一倍。 3、安靜松弛時稍低，活動和進餐后稍高， 4、運動、疼痛、和情緒的影響。 5、妊娠和分娩常常升高，尤其是最后一個月。如果檢查出有以下改變的就有明顯的病理意義。1、核左移:周圍血中桿狀核細胞增多，甚至出現(xiàn)晚幼粒、中幼粒等細胞。常見于急性化膿性感染、白血病、急性中毒、急性溶血。2、核右移：正常人周圍血中的中性粒細胞核以2-3分葉為主，若5分葉核以上超過3%時叫核右移。常伴白細胞總數(shù)減少，為造血功能衰退的表現(xiàn)。主要見于營養(yǎng)性巨幼細胞性貧血和其他惡性貧血。3、中性粒細胞增多常見于： a. 急性感染：白細胞增高的程度與感染灶的范圍

26、感染的嚴(yán)重性及機體的反應(yīng)性有關(guān)。 b. 急性中毒：如急性化學(xué)藥物中毒，白細胞升高，可達20109/L以上，以中性分葉核為主。 c. 急性大出血：白細胞升高程度與機體的應(yīng)激狀態(tài)，出血造成的一過性缺氧有關(guān)。 d. 嚴(yán)重組織損傷：較大手術(shù)后12-36小時，白細胞常在10109/L以上。 e. 白血病或惡性腫瘤：如急慢性粒細胞性白血病和其他腫瘤等。4、中性粒細胞減少常見于： a. 某些感染：如某些革蘭氏陰性菌的感染，如傷寒副傷寒；病毒感染和原蟲感染（如瘧原蟲感染）。 b. 某些血液?。喝缭偕系K性貧血。 c.慢性理化損傷：長期化療和放療的病人，骨髓造血功能會明顯受到抑制而導(dǎo)致白細胞減少。 d.自身免疫

27、性疾?。喝缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡等，由于自身免疫性抗核抗體導(dǎo)致白細胞減少。 e.脾功能亢進。5、 淋巴細胞增多 a. 某些病毒感染：如風(fēng)疹病毒、流行性腮腺炎病毒等 b. 某些慢性感染：如結(jié)核的恢復(fù)期。 c. 淋巴細胞白血病、淋巴瘤細胞白血病。6.淋巴細胞減少：如接觸放射線或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素治療會導(dǎo)致淋巴細胞減少。7、嗜酸性粒細胞計數(shù)的臨床意義生理變化，勞動、寒冷、精神刺激等使嗜酸性粒細胞降低，白天低，夜晚高，上午波動較大，下午比較恒定。 其病理變化為： a、增多：如過敏性疾病、寄生蟲病、某些傳染病、皮膚病、某些惡性腫瘤、某些血液病； b、減少： 如長期使用腎上腺皮質(zhì)激素，某些傳染病早期。8、嗜堿性粒

28、細胞記數(shù)的臨床意義： a. 嗜堿性粒細胞增多：如慢性粒細胞白血病（嗜酸性粒細胞也可增多），嗜堿粒細胞白血?。ㄉ僖姡?，某些轉(zhuǎn)移癌及骨髓纖維化。 b. 嗜堿性粒細胞減少的意義不大。九、 質(zhì)量控制白細胞總數(shù)與分類白細胞數(shù)量的關(guān)系白細胞總數(shù)（）應(yīng)分類白細胞總數(shù)量（個）315100（1張血涂片）15200（1張血涂片）350100（2張血涂片）白細胞分類計數(shù)的要求與評價項目要求評價血涂片制備血膜為楔形，表面光滑，厚薄適宜，頭體尾分明，細胞分布均勻血膜過厚，則細胞重疊，細胞縮小血膜太薄，白細胞多集中于邊緣血膜，在載玻片的兩側(cè)如不留余地，則影響某些異常細胞的觀察血涂片染色細胞色彩鮮明，能體現(xiàn)出各種細胞特有色

29、彩和特點，胞核結(jié)構(gòu)和胞質(zhì)顆粒清楚染色偏堿或偏酸，均可使細胞形態(tài)或染色反應(yīng)異常觀察部位血涂片頭部至尾部的區(qū)域，該區(qū)域細胞分布比較均勻，分類計數(shù)時最好選擇體尾交界處白細胞在血涂片中分布：體積較小的淋巴細胞在頭，體部分較多體積較大的中性粒細胞和單核細胞在尾部和兩側(cè)分布較多異常大的細胞常出現(xiàn)在血涂片尾部觀察順序按照一定的順序“弓”字形或“城垛式”進行分類計數(shù)，有規(guī)律得移動視野，逐個分類計數(shù)白細胞切忌操作者任意取舍隨機視野內(nèi)的白細胞，以免重復(fù)計數(shù)或漏計，減少由于細胞分布不均所造成的誤差十、 注意事項 1選擇體、尾交界處進行分類計數(shù)。 2分類時要有秩序地、循一定方向順序地連續(xù)進行，既不重復(fù)亦不遺漏，避免主

30、觀選擇視野。 3白細胞總數(shù)在（3.015.0）109/L之間者，分類計數(shù)100個細胞?？倲?shù)在15.0109/L以上時，應(yīng)計數(shù)200個白細胞，而總數(shù)低于3.0109/L時，則應(yīng)選用2張血涂片計數(shù)50100個白細胞。4分類中如見血涂片上有幼紅細胞，應(yīng)逐個計數(shù)但不計入100個白細胞內(nèi)，以分類100個白細胞過程中見到幼紅細胞個數(shù)來報告，并應(yīng)注明其所屬階段。分類中還應(yīng)注意觀察成熟紅細胞、血小板的形態(tài)、染色及其分布情況，注意有無寄生蟲（如瘧原蟲）及其它異常所見5白細胞形態(tài)變化較大，應(yīng)經(jīng)常由高年資檢驗人員進行核實，以減少誤差。6禁止在計數(shù)池內(nèi)或涂片下用高倍鏡作白細胞分類。白細胞計數(shù)1、 技術(shù)背景顯微鏡計數(shù)法

31、：不需特殊儀器，設(shè)備簡單，費用低廉，適用于基層醫(yī)療單位。在嚴(yán)格規(guī)范條件下，可用于校準(zhǔn)血液分析儀及其計數(shù)結(jié)果異常的復(fù)查。2、 標(biāo)本標(biāo)本種類：EDTA鹽抗凝靜脈血或末梢血容器要求：清潔干燥、無菌標(biāo)本處理：采集后盡快送檢，如不能及時送檢，一般需置于2-6冰箱內(nèi)保存。3、 檢測原理血液用白細胞稀釋液稀釋一定倍數(shù)并破壞成熟紅細胞，混勻后充入改良牛鮑血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的白細胞數(shù)，通過換算可得到單位體積即每升血液中的白細胞總數(shù)。4、 器材及試劑器材：光學(xué)顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板及專用血蓋片試管、1ml刻度吸管、吸耳球、一次性20ul微量吸管、乳膠吸頭、一次性采血針醫(yī)院棉簽及碘酒、75%乙醇

32、酒精試劑：白細胞稀釋液（冰乙酸2ml、嗜堿性染料10g/l 3滴、蒸餾水加至100ml。 冰乙酸可溶解破壞紅細胞，嗜堿性染料可使白細胞核略微著色，易于辨認，并區(qū)別與紅細胞稀釋液。試劑配置后混勻過濾，密封室溫保存。五、操作步驟1、加稀釋液用吸管吸取白細胞稀釋液0.38ml于小試管中。2、吸取血液用微量吸管吸取新鮮全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細胞稀釋液清洗吸管2-3次。3、混勻?qū)⒃嚬苤醒号c稀釋液混勻，待細胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?、充池再次將小試管中的細胞懸液混勻。用微量吸管吸取細胞懸液15ul左右，充入改良Neubaue

33、r計數(shù)板的計數(shù)池中，室溫靜置2-3min，待白細胞完全下沉。5、計數(shù)在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)，對壓線細胞按“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”。6、計算 白細胞數(shù)（/L）=（N/4）1020106=(N/20)109N：4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)；4為每個大方格（即0.1ul）內(nèi)白細胞平均數(shù)；10為將容積為0.1ul（1個大方格）白細胞數(shù)換算成1.0ul細胞懸液內(nèi)白細胞數(shù)的系數(shù)；20為血液稀釋倍數(shù)；106為由1ul換算成1l的系數(shù)。7、 結(jié)果報告：WBC：XX109/L8、 參考范圍：成人（4-10）109/L，新生兒（15-20）109/L， 6月-2歲（11-12）109/L。六、質(zhì)量保證1、 計數(shù)誤差（1）、技術(shù)誤差：可以通過試劑的標(biāo)準(zhǔn)化，儀器的校準(zhǔn)，規(guī)范熟練的操作等避免或消除技術(shù)誤差。標(biāo)本：要盡快測定 ，從標(biāo)本采集都檢測不應(yīng)超過4個小時，室溫