臨檢實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1、Hb測(cè)定一、技術(shù)背景測(cè)定方法有：HiCN測(cè)定法SDS-HB測(cè)定法HiN3測(cè)定法 AHD575 測(cè)定法 CTAB測(cè)定法WHO推薦參考方法：HiCN測(cè)定法原因：操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)迅速；所用轉(zhuǎn)化液穩(wěn)定易保存；可檢測(cè)除SHb外的所有Hb；HiCN參考品可長(zhǎng)期保存，便于質(zhì)控。二、實(shí)驗(yàn)原理血液經(jīng)氰化高鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)化液稀釋后，紅細(xì)胞被破壞，釋放出血紅蛋白，除SH外，其余血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白（Hi），Hi與CN結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。HiCN在540nm處有吸收峰，用分光光度計(jì)測(cè)定該處的吸光度，再換算成每升血液中的血紅蛋白濃度，或用HiCN參考液進(jìn)行比色法測(cè)定制作

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線供查閱。三、器材、試劑選擇器材：（1）、采血針、微量吸管、75%乙醇棉球及碘液、乳膠吸頭（2）試劑、試管架（3）5ml吸管、吸耳球（4）分光光度計(jì)試劑：（1）HiCN轉(zhuǎn)化液（文齊氏液）：氰化鉀0.050g，高鐵氰化鉀0.20g，無(wú)水磷酸二氫鉀0.140g，Triton X-100（非離子表面活性劑）1.0ml，加蒸餾水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.07.4。棕色玻璃瓶試劑避光保存。（2）標(biāo)準(zhǔn)品：100g/l血紅蛋白四、標(biāo)本EDTA-K2抗凝靜脈血或毛細(xì)血管血五、實(shí)驗(yàn)步驟直接定量測(cè)定法1、 加轉(zhuǎn)化液：用吸管吸取HiCN轉(zhuǎn)化液5ml加入試管內(nèi)。2、采血與轉(zhuǎn)化：采集毛細(xì)血管或者靜脈血20u

3、l，加入轉(zhuǎn)化液中，封閉試管口后顛倒混勻，室溫下放置5分鐘，使Hb全部轉(zhuǎn)化為HiCN。3、測(cè)定吸光度：在分光光度計(jì)上，使用540nm波長(zhǎng)，以HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水為空白調(diào)零后，測(cè)定標(biāo)本的吸光度值（A）。4、計(jì)算 Hb（g/l）=（A測(cè)100g/l）/A100A測(cè)為540nm處測(cè)定的標(biāo)本吸光度，A100為標(biāo)準(zhǔn)品在540nm處測(cè)定的吸光度。5、報(bào)告方式：XXg/l6、參考區(qū)間 成年：男性120160g/l，女性110150g/l。新生兒：170200g/l。六、臨床意義通過(guò)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定及血細(xì)胞比容測(cè)定即可確定貧血的存在程度。血紅蛋白增多有以下情況：(1)生理性增多：見(jiàn)于高原居民胎兒和新生

4、兒，劇烈活動(dòng)、恐懼冷水浴等；(2)病理性增多：見(jiàn)于嚴(yán)重的先天性及后天性心肺疾患和血管畸形如法洛四聯(lián)癥、發(fā)紺型先天性心臟病、阻塞性肺氣腫、肺源性心臟病、肺動(dòng)脈或肺靜脈瘺及攜氧能力低的異常血紅蛋白病等；也見(jiàn)于某些腫瘤或腎臟疾病，如腎癌肝細(xì)胞癌、腎胚胎瘤及腎盂積水、多囊腎等。血紅蛋白減少見(jiàn)于以下情況：(1)生理性減少：3個(gè)月的嬰兒至15歲以前的兒童主要因生長(zhǎng)發(fā)育迅速而致的造血系統(tǒng)造血的相對(duì)不足，一般可較正常人的低10%-20%。妊娠中期和后期由于妊娠血容量增加而使血液被稀釋老年人由于骨髓造血功能逐漸降低，可導(dǎo)致紅細(xì)胞和血紅蛋白含量減少。(2)病理性減少：A.骨髓造血功能衰竭如再生障礙性貧血、骨髓纖維

5、化所伴發(fā)的貧血。B.因造血物質(zhì)缺乏或利用障礙所致的貧血如缺鐵性貧血、葉酸及維生素B12缺乏所致的巨幼細(xì)胞性貧血。C.因紅細(xì)胞膜酶遺傳性的缺陷或外來(lái)因素所致紅細(xì)胞破壞過(guò)多而導(dǎo)致的貧血，如遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、海洋性貧血陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、異常血紅蛋白病、免疫性溶血性貧血心臟體外循環(huán)的大手術(shù)或某些生物性和化學(xué)性等因素所致的溶血性貧血以及某些急性或慢性失血所致的貧血。七、質(zhì)控1、標(biāo)本：血紅蛋白檢測(cè)原理是比色法，引起血清濁度增大的因素常致血紅蛋白濃度假性增高，如高脂血癥、高球蛋白、高白細(xì)胞（WBC30109/L）、HbCO增多及高血小板（Plt700109/L）等。2、器材及試劑：定期校準(zhǔn)分光光

6、度計(jì)，分光光度計(jì)的波長(zhǎng)和光程必須準(zhǔn)確、靈敏度高、線性好、無(wú)雜光，否則會(huì)影響結(jié)果準(zhǔn)確性。選用合格的微量采血管、刻度吸管及比色杯。保證試劑的質(zhì)量。3、技術(shù)操作：消毒、采血、稀釋、混勻等應(yīng)合格。確保HbCO完全轉(zhuǎn)化，可延長(zhǎng)轉(zhuǎn)化時(shí)間或加大試劑中高鐵氰化鉀的用量。4、廢棄物處理：HiCN轉(zhuǎn)化液中KCN是劇毒品，配制轉(zhuǎn)化液時(shí)要按劇毒品管理程序操作。為防止KCN污染環(huán)境，比色測(cè)定后的廢液應(yīng)妥善處理。八、注意事項(xiàng)1、試劑保存：試劑保存于棕色瓶?jī)?nèi)，不得使用塑料試劑瓶?？梢岳洳乇４?，但不能冷凍，防止因丟失CN-而導(dǎo)致血紅蛋白轉(zhuǎn)化不完全。2、做好安全防護(hù)3、分光光度計(jì)校正4、消除異常標(biāo)本的干擾：白細(xì)胞過(guò)多引起的渾濁

7、，可離心后取上清液比色。球蛋白異常增高引起的渾濁，可改用高氯化鈉的轉(zhuǎn)化液后重新測(cè)定。九、方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)迅速；所用轉(zhuǎn)化液穩(wěn)定易保存；可檢測(cè)除SHb外的所有Hb；HiCN參考品可長(zhǎng)期保存，便于質(zhì)控。缺點(diǎn)：KCN試劑有劇毒；不能測(cè)定SHb；對(duì)HbCO反應(yīng)較慢；遇高白細(xì)胞和高球蛋白血癥的血標(biāo)本會(huì)出現(xiàn)渾濁。 PLT分類計(jì)數(shù)1、 混懸液滴入計(jì)數(shù)池后應(yīng)靜置15min ,帶血小板完全下沉?xí)r才能計(jì)數(shù)，試驗(yàn)背景分析：1.PLT的產(chǎn)生：骨髓干細(xì)胞多功能祖細(xì)胞巨核祖細(xì)胞幼巨核細(xì)胞巨核細(xì)胞巨核細(xì)胞胞質(zhì)塊脫落血小板；2.PLT的功能：（1）促進(jìn)止血和加速凝血 （2）維持毛細(xì)血管壁完整性；3.目前監(jiān)測(cè)血小板

8、的的方法有儀器法和手工法，儀器法有逐漸代替手工法的趨勢(shì)，但儀器法有很多干擾因素，導(dǎo)致結(jié)果不可靠，特別是低濃度的血小板，按照復(fù)檢規(guī)則，需用手工法復(fù)檢出報(bào)告。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用手工法進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)；二、實(shí)驗(yàn)原理：血液經(jīng)血小板稀釋液稀釋后，紅細(xì)胞被溶解，注入計(jì)數(shù)池后，在顯微鏡直接計(jì)數(shù)（普通光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)法和相差顯微鏡計(jì)數(shù)法）計(jì)數(shù)血小板。經(jīng)換算求出每升血液中的血小板。三、器材、試劑選擇:1.器材：（1）普通光學(xué)顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、專用血蓋片（2）試管、1.0ml刻度吸管、洗耳球、一次性20微升微量吸管、乳膠吸頭、一次性采血針、（3）醫(yī)用棉簽、優(yōu)質(zhì)衛(wèi)生紙2.試劑選擇：（1）草酸銨稀釋液：常用，破換紅細(xì)胞

9、能力強(qiáng)，血小板形態(tài)清晰，血小板常規(guī)計(jì)數(shù)法首選稀釋液；（2）復(fù)方尿素稀釋液：稀釋后血小板腫大易辨認(rèn)，但尿素易分解并且不能完全破壞紅細(xì)胞；（3）高鐵氰化鉀稀釋液：試劑穩(wěn)定，易于長(zhǎng)期保存，不能完全破壞紅細(xì)胞;（4）復(fù)方碘稀釋液：不破壞紅細(xì)胞，試劑易長(zhǎng)菌，干擾計(jì)數(shù)，此法已被淘汰；五、實(shí)驗(yàn)步驟：1.取小試管一支，加入血小板稀釋液0.38ml；2.標(biāo)本采集：嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)采血規(guī)程采集患者肘靜脈血液（EDTA抗凝管或者直接進(jìn)行指尖采血；3.稀釋血液：用棉球或者衛(wèi)生紙擦去微量吸管管外的余血，將其插入稀釋液底部，緩緩放出血液，在吸取上層稀釋液吸洗微量吸管2-3次，輕輕混勻細(xì)胞懸夜約1min，室溫下靜置10min左

10、右；4.充池：輕微振蕩試管，將細(xì)胞懸液充分混勻，用微量吸管吸取細(xì)胞懸液15微升左右，沖入清潔而干燥的計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置10-15min,袋血小板完全下沉到計(jì)數(shù)池底面時(shí)，于顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)；5.計(jì)數(shù)：以低倍物鏡找到計(jì)數(shù)板的中央大方格后，改用高倍鏡，在大方格內(nèi)計(jì)數(shù)4角和中央五個(gè)中方格的血小板數(shù)。六、數(shù)據(jù)記錄： 五個(gè)中方格的血小板數(shù)NNNN5N5七、結(jié)果計(jì)算：血小板計(jì)數(shù)（/L)5個(gè)中方格內(nèi)計(jì)得的血小板數(shù)（N)5201010610109/La.5表示無(wú)個(gè)中方格內(nèi)的血小板數(shù)換算成一個(gè)大方格（0.1l)稀釋后血液中血小板數(shù)；b.表示0.1l血小板數(shù)換算成1l稀釋后血液中的血小板數(shù)；c.表示血小板的稀釋倍數(shù)d.

11、106表示將微升換算為L(zhǎng)的系數(shù)七、結(jié)果報(bào)告：血小板：XXX109/L參考區(qū)間：100-300109/L8、 臨床意義：1. 生理性改變：（1）增多：見(jiàn)于午后、冬季、和高原居民、月經(jīng)后、妊娠中晚期運(yùn)動(dòng)、飽餐后靜脈血；（2） 減少：見(jiàn)于早晨、春季、平原居民、月經(jīng)前、分娩后、休息后、毛細(xì)血管血。2.病理性改變：（1）.血小板減少：急性白血病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，DIC，脾腫大，新生兒血小板減少癥a.20-50109/L，可有輕度出血或手術(shù)出血；b.20109/L，可有較嚴(yán)重的出血；c.5109/L，可導(dǎo)致嚴(yán)重出血；（2）血小板增多：慢性粒細(xì)胞白血病，急性化膿性感染，大出血，外科手術(shù)，脾切除等；a.400

12、109/L，為血小板增多；b.1000109/L，常有血栓形成的危險(xiǎn)。9、 質(zhì)量控制：（1）稀釋液放室溫使用，但應(yīng)密閉以防灰塵及水分蒸發(fā)，最好放冰箱保存為妥；（2）采血時(shí)，如果同時(shí)做WBC等，應(yīng)先采血做血小板；（3）懸夜制備，充分混勻，搖動(dòng)標(biāo)本2min或200次以上;（4）計(jì)數(shù)光線不可太強(qiáng)，1h內(nèi)技術(shù)完成，如紅細(xì)胞不完全溶解，影響血小板計(jì)數(shù)時(shí)，可加大稀釋倍數(shù)，或另?yè)Q稀釋液。10、 注意事項(xiàng)：（1）檢查前，患者應(yīng)避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物;（2）所用全部器材必須校準(zhǔn)、潔凈、干燥;（3）使用符合要求的優(yōu)質(zhì)血小板稀釋液(優(yōu)質(zhì)血小板稀釋液應(yīng)具備以下條件：a.能有效阻止凝血；b.很快將血小板

13、凝固，防止血小板聚集和形態(tài)改變；c.溶血要求紅細(xì)胞破壞完全；d.組成簡(jiǎn)單，易于保存，不生長(zhǎng)細(xì)菌；e.血小板稀釋液空白計(jì)數(shù)值應(yīng)為零;(4)采血時(shí)，刺針深度要足夠，使血液流暢，避免用力擠壓。拭去第一滴血后立即采血采血，以防止血小板聚集和破壞；(5)血液離體后更易發(fā)生聚集，所以各操作步驟均應(yīng)迅速而適度；注意在充池前應(yīng)充分搖勻;（6）血小板小而輕，在液體中下沉很慢，血小板。紅細(xì)胞形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)原理： 外周血制備血涂片并經(jīng)瑞士染色后，血中各種細(xì)胞由于化學(xué)成分和性質(zhì)的不同以及對(duì)染料的親和作用和吸附作用的差異，而呈現(xiàn)出不同的形態(tài)和染色特點(diǎn)，紅細(xì)胞紅細(xì)胞在大小、形態(tài)、染色性和結(jié)構(gòu)等方面均與其他細(xì)胞存在差異，

14、同時(shí)紅細(xì)胞在病理情況下可出現(xiàn)相應(yīng)特征性的異常變化，據(jù)此可在光學(xué)顯微鏡下觀察正常紅細(xì)胞形態(tài)，并識(shí)別異常紅細(xì)胞的形態(tài)變化。二、器材與試劑：1、顯微鏡2、香柏油、二甲苯三、標(biāo)本：制備良好的瑞士染色血涂片四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采靜脈血或指端血一定量2、用取出的一滴新鮮血均勻的涂在玻片上，制成血膜涂片3、對(duì)血涂片進(jìn)行瑞士染色4、低倍鏡觀察：低倍鏡下觀察血涂片中紅細(xì)胞染色和分布情況，瀏覽全片看是否存在異常細(xì)胞5、低倍鏡下選擇細(xì)胞染色良好、分布均勻（紅細(xì)胞緊密排列但不重復(fù)）區(qū)域，一般選血涂片體位交界處6、油鏡觀察：在血涂片選定區(qū)域滴加香柏油，油鏡下仔細(xì)觀察紅細(xì)胞形態(tài)7、觀察完畢后，清潔顯微鏡鏡頭和血涂片8、報(bào)告

15、方式：描述標(biāo)本中正常紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)和異常紅細(xì)胞形態(tài)變化。異常紅細(xì)胞形態(tài)變化主要包括大小異常、形態(tài)異常、血紅蛋白含量異常、排列和結(jié)構(gòu)異常等五、參考區(qū)間正常成熟紅細(xì)胞呈雙凹圓盤狀，細(xì)胞間形態(tài)相似，大小均一性好，瑞士染色呈淡紅色，中央1/3為生理性淡染區(qū)，胞內(nèi)無(wú)異常結(jié)構(gòu)。偶見(jiàn)變形或破碎細(xì)胞，分布極為局限六、質(zhì)量控制1、有合格的血液細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)人員2、選擇細(xì)胞分布均勻區(qū)域進(jìn)行鏡檢3、注意完整規(guī)范的檢查順序：應(yīng)先在低倍鏡下檢查血涂片，觀察細(xì)胞分布和染色情況，再用油鏡觀察血膜體位交界處的細(xì)胞形態(tài)，同時(shí)瀏覽是否存在其他異常細(xì)胞。4、減少人為因素影響：抗凝劑濃度過(guò)高或血標(biāo)本久置 載玻片上有脂類物質(zhì) 血涂片制備

16、不當(dāng) 血涂片干燥過(guò)度或固定液中混油水分 染色不當(dāng) 七、臨床意義：1、小紅細(xì)胞：r10m，染多色性或含有嗜堿性點(diǎn)彩，巨幼貧，溶血性貧血，惡性貧血。3、巨紅細(xì)胞：r15m,缺乏葉酸幾維生素B12巨幼貧。4、紅細(xì)胞大小不均：直徑相差一倍以上，嚴(yán)重的增生性貧血，巨幼貧最為明顯5、正色素性紅細(xì)胞：淡紅色圓盤狀，中央有生理性淡染區(qū)。正常人、急性失血、再障、白血病。6、高色素性紅細(xì)胞：巨幼貧7、低色素性細(xì)胞：缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血8、多色性紅細(xì)胞：溶血性貧血、失血性貧血9、血細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)異常：嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞見(jiàn)于部分金屬中毒；豪焦小體見(jiàn)于巨幼性貧血、紅白血病等八、注意事項(xiàng)1、標(biāo)本制備：在制片過(guò)程的人

17、為因素可造成紅細(xì)胞形態(tài)變化，如涂片不當(dāng)，玻片不符合要求，抗凝劑濃度過(guò)高，長(zhǎng)時(shí)間放置血液，涂片干燥過(guò)慢，染色液濃度、染色時(shí)間不當(dāng)。2、選擇觀察區(qū)域：應(yīng)首先在低倍鏡下觀察細(xì)胞的分布和染色情況，選擇紅細(xì)胞緊密排列但不重復(fù)的區(qū)域進(jìn)行形態(tài)觀察。3、瀏覽全片：異常細(xì)胞和成分常集中在血涂片的邊緣，容易漏檢，因此要瀏覽全片注意觀察有無(wú)其他異常細(xì)胞九、方法學(xué)評(píng)價(jià)1、顯微鏡分析法：采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察，是儀器法校準(zhǔn)的參考方法和檢測(cè)的復(fù)核方法2、計(jì)算機(jī)圖像分析：建立統(tǒng)計(jì)模型，以正常紅細(xì)胞形態(tài)為參比、作出分析，可用于與紅細(xì)胞形態(tài)變化疾病的輔助診斷。3、血液分析儀法：提供紅細(xì)胞數(shù)量及其他相關(guān)參數(shù)，對(duì)異常結(jié)果報(bào)

18、警，但不能提供確切信息，需用鏡檢血涂片核實(shí)。WBC形態(tài)觀察和分類計(jì)數(shù)一、 技術(shù)背景臨床上用于白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法有顯微鏡法和血液分析儀法兩種，（1） 血液分析儀法 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，重復(fù)性好，易于標(biāo)準(zhǔn)化，有異常結(jié)果報(bào)警提示，報(bào)告形式多樣，可與全自動(dòng)推片機(jī)鏈接 缺點(diǎn)：用于篩檢不能取代顯微鏡白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)法，確認(rèn)白細(xì)胞的病理改變必須做顯微鏡復(fù)查（2） 顯微鏡計(jì)數(shù)法 優(yōu)點(diǎn)：不需要特殊儀器，設(shè)備簡(jiǎn)單，費(fèi)用低廉，能夠準(zhǔn)確的根據(jù)細(xì)胞的染色及其大小、核質(zhì)的特點(diǎn)等形態(tài)學(xué)綜合分析，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)、染色有無(wú)明顯異常 缺點(diǎn):操作費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性和重復(fù)性很大程度上取決于操作者對(duì)細(xì)胞的識(shí)別能力，不適用于大量

19、健康人群篩檢 二、 實(shí)驗(yàn)原理將血液制備成細(xì)胞分布均勻的血涂片經(jīng)Wright染色后在油鏡下觀察，根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)與染色差異進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，通常分類計(jì)數(shù)100-200個(gè)白細(xì)胞，得到白細(xì)胞的相對(duì)比值或所占百分率，根據(jù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果，算出每升中各種白細(xì)胞的絕對(duì)值。（絕對(duì)值=白細(xì)胞計(jì)數(shù)值該種白細(xì)胞計(jì)數(shù)的百分率）三、 器材試劑選擇（1） 普通光學(xué)顯微鏡、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器（2） 血涂片制備與染色所用器材（3） 香柏油、擦鏡紙（30%無(wú)水乙醇、70%乙醚混合液或二甲苯）四、 標(biāo)本EDTA鹽抗凝靜脈血或末梢血五、 試驗(yàn)步驟（1） 血涂片的制備及瑞氏染色或瑞-吉復(fù)合染色：具體操作見(jiàn)第一章實(shí)驗(yàn)五。（2） 先在低倍

20、鏡下瀏覽全片，了解染色好壞和細(xì)胞分布情況，觀察有無(wú)異常細(xì)胞。（3） 選擇細(xì)胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，一般在體尾交界處，滴加香柏油一滴，轉(zhuǎn)油鏡（100倍物鏡）下進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。分類計(jì)數(shù)時(shí)要按照一定的順序例如“弓”字形進(jìn)行，避免重復(fù)計(jì)數(shù)或人為主觀地選擇視野。（4） 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的同時(shí)也要觀察紅細(xì)胞有無(wú)大小、形態(tài)、染色和有無(wú)異常結(jié)構(gòu)的變化，觀察血小板形態(tài)和分布有無(wú)異常，同時(shí)還應(yīng)注意有無(wú)異常細(xì)胞或寄生蟲（如瘧原蟲等）。（5） 結(jié)合白細(xì)胞技術(shù)結(jié)果，可間接計(jì)算出每升血液中各種白細(xì)胞的數(shù)量即各種白細(xì)胞的絕對(duì)值。（6） 結(jié)果報(bào)告 直接報(bào)告各類白細(xì)胞所占的比值或百分率，用X.XX或X%表示。 通過(guò)計(jì)算報(bào)告各類

21、白細(xì)胞的絕對(duì)值，用X.XX109/L表示。計(jì)算方法：各類白細(xì)胞絕對(duì)值=每種白細(xì)胞所占百分率白細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù) 幼稚或異常白細(xì)胞：如發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細(xì)胞，應(yīng)進(jìn)行分類報(bào)告，并包括在白細(xì)胞分類比值或百分率中。 有核紅細(xì)胞：血涂片中如見(jiàn)到有核紅細(xì)胞，要逐個(gè)計(jì)數(shù)，但不列入白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)總數(shù)之內(nèi)，報(bào)告方式為分類計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)見(jiàn)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。 紅細(xì)胞、血小板的形態(tài)：如有異常改變應(yīng)在結(jié)果中描述。 發(fā)現(xiàn)其他異常如見(jiàn)到寄生蟲均應(yīng)在報(bào)告中描述。 八、血涂片中各種正常白細(xì)胞形態(tài)中性粒細(xì)胞（Sg5070% St 05%）：形態(tài)圓形，直徑1013um，核為深紫紅色，染色質(zhì)緊密成塊狀，分為桿狀核和分葉核，以23葉

22、者多，胞漿內(nèi)含有紫紅色細(xì)小顆粒，胞漿呈淡紅色。 嗜酸性粒細(xì)胞 （ 0.55% ）：形態(tài)圓形，直徑1015m，核為2葉，呈眼鏡狀，深紫色，胞漿淡紅色，充滿粗大、均勻而圓的鮮紅色顆粒 。嗜堿性粒細(xì)胞：（01%）：核呈深紫色或不明顯，分23葉，多不明顯，胞漿呈紫紅色，有大小不均的紫黑色顆粒 。淋巴細(xì)胞：（2040%）：大淋巴細(xì)胞直徑：1018m，小淋巴細(xì)胞69m，胞核圓形、橢圓形，深紫色，染色質(zhì)粗密成塊，胞漿：大淋巴細(xì)胞呈蔚藍(lán)色，有少量顆粒，小淋巴細(xì)胞呈深藍(lán)色，一般無(wú)顆粒。 異型淋巴細(xì)胞：正常人異型淋巴細(xì)胞在0.5%以下，常見(jiàn)有三型。 型（空泡型）最多見(jiàn)，胞體大，圓形，核呈圓形、腎形、橢圓形，胞漿豐

23、富，深藍(lán)色，含有空泡，或多數(shù)小空泡而呈泡沫狀。型（不規(guī)則型）胞體大，似單核細(xì)胞，外形不規(guī)則，核呈圓形或不規(guī)則形，胞漿豐富，淺藍(lán)色、藍(lán)色，有透明或邊緣著色深，無(wú)空泡，有少量嗜苯胺藍(lán)顆粒。 型（幼稚型）胞體大，核圓形、橢圓形，染色質(zhì)呈細(xì)致網(wǎng)點(diǎn)狀，12核仁，胞漿深藍(lán)色，有時(shí)見(jiàn)少量空泡。 單核細(xì)胞：（310% ）：胞體大，直徑1420m，胞核不規(guī)則，呈腎形、S形、馬蹄形，淡紫紅色，排列較疏松呈網(wǎng)狀，胞漿較多，淡灰色，含較多的細(xì)小紫紅色顆粒 。九、參考范圍： 見(jiàn)表ll1。 表111 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考值細(xì)胞類別 成人中性粒細(xì)胞桿狀核 0.01-0.05(1%-5%)分葉核 0.50-0.70(5070)

24、嗜酸性粒細(xì)胞 0.005-0.05(055)嗜堿性粒細(xì)胞 0-0.01 (01)淋巴細(xì)胞 0.20-0.40(20%40%)單核細(xì)胞 0.03-0.10 (310)十、 臨床意義白細(xì)胞是周圍血的有核細(xì)胞,其數(shù)量顯著少于紅細(xì)胞,占0.1%0.2%。根據(jù)其形態(tài)特征可以分為粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其中粒細(xì)胞還可以分為中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。白細(xì)胞的檢查對(duì)臨床診斷有重要的意義。 通常白細(xì)胞計(jì)數(shù)波動(dòng)在30%以下，在臨床診斷上無(wú)意義，只有通過(guò)定時(shí)和反復(fù)觀察才有意義。 白細(xì)胞總數(shù)受多種因素的影響： 1、年齡：成人的白細(xì)胞總數(shù)為（410）109，新生兒為（1520）109，6月2歲為（11

25、20）109， 2、日間變化；午后高于清晨：一日之內(nèi)最高和最低可相差一倍。 3、安靜松弛時(shí)稍低，活動(dòng)和進(jìn)餐后稍高， 4、運(yùn)動(dòng)、疼痛、和情緒的影響。 5、妊娠和分娩常常升高，尤其是最后一個(gè)月。如果檢查出有以下改變的就有明顯的病理意義。1、核左移:周圍血中桿狀核細(xì)胞增多，甚至出現(xiàn)晚幼粒、中幼粒等細(xì)胞。常見(jiàn)于急性化膿性感染、白血病、急性中毒、急性溶血。2、核右移：正常人周圍血中的中性粒細(xì)胞核以2-3分葉為主，若5分葉核以上超過(guò)3%時(shí)叫核右移。常伴白細(xì)胞總數(shù)減少，為造血功能衰退的表現(xiàn)。主要見(jiàn)于營(yíng)養(yǎng)性巨幼細(xì)胞性貧血和其他惡性貧血。3、中性粒細(xì)胞增多常見(jiàn)于： a. 急性感染：白細(xì)胞增高的程度與感染灶的范圍

26、感染的嚴(yán)重性及機(jī)體的反應(yīng)性有關(guān)。 b. 急性中毒：如急性化學(xué)藥物中毒，白細(xì)胞升高，可達(dá)20109/L以上，以中性分葉核為主。 c. 急性大出血：白細(xì)胞升高程度與機(jī)體的應(yīng)激狀態(tài)，出血造成的一過(guò)性缺氧有關(guān)。 d. 嚴(yán)重組織損傷：較大手術(shù)后12-36小時(shí)，白細(xì)胞常在10109/L以上。 e. 白血病或惡性腫瘤：如急慢性粒細(xì)胞性白血病和其他腫瘤等。4、中性粒細(xì)胞減少常見(jiàn)于： a. 某些感染：如某些革蘭氏陰性菌的感染，如傷寒副傷寒；病毒感染和原蟲感染（如瘧原蟲感染）。 b. 某些血液?。喝缭偕系K性貧血。 c.慢性理化損傷：長(zhǎng)期化療和放療的病人，骨髓造血功能會(huì)明顯受到抑制而導(dǎo)致白細(xì)胞減少。 d.自身免疫

27、性疾病：如系統(tǒng)性紅斑狼瘡等，由于自身免疫性抗核抗體導(dǎo)致白細(xì)胞減少。 e.脾功能亢進(jìn)。5、 淋巴細(xì)胞增多 a. 某些病毒感染：如風(fēng)疹病毒、流行性腮腺炎病毒等 b. 某些慢性感染：如結(jié)核的恢復(fù)期。 c. 淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤細(xì)胞白血病。6.淋巴細(xì)胞減少：如接觸放射線或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素治療會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少。7、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義生理變化，勞動(dòng)、寒冷、精神刺激等使嗜酸性粒細(xì)胞降低，白天低，夜晚高，上午波動(dòng)較大，下午比較恒定。 其病理變化為： a、增多：如過(guò)敏性疾病、寄生蟲病、某些傳染病、皮膚病、某些惡性腫瘤、某些血液?。?b、減少： 如長(zhǎng)期使用腎上腺皮質(zhì)激素，某些傳染病早期。8、嗜堿性粒

28、細(xì)胞記數(shù)的臨床意義： a. 嗜堿性粒細(xì)胞增多：如慢性粒細(xì)胞白血病（嗜酸性粒細(xì)胞也可增多），嗜堿粒細(xì)胞白血?。ㄉ僖?jiàn)），某些轉(zhuǎn)移癌及骨髓纖維化。 b. 嗜堿性粒細(xì)胞減少的意義不大。九、 質(zhì)量控制白細(xì)胞總數(shù)與分類白細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系白細(xì)胞總數(shù)（）應(yīng)分類白細(xì)胞總數(shù)量（個(gè)）315100（1張血涂片）15200（1張血涂片）350100（2張血涂片）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的要求與評(píng)價(jià)項(xiàng)目要求評(píng)價(jià)血涂片制備血膜為楔形，表面光滑，厚薄適宜，頭體尾分明，細(xì)胞分布均勻血膜過(guò)厚，則細(xì)胞重疊，細(xì)胞縮小血膜太薄，白細(xì)胞多集中于邊緣血膜，在載玻片的兩側(cè)如不留余地，則影響某些異常細(xì)胞的觀察血涂片染色細(xì)胞色彩鮮明，能體現(xiàn)出各種細(xì)胞特有色

29、彩和特點(diǎn)，胞核結(jié)構(gòu)和胞質(zhì)顆粒清楚染色偏堿或偏酸，均可使細(xì)胞形態(tài)或染色反應(yīng)異常觀察部位血涂片頭部至尾部的區(qū)域，該區(qū)域細(xì)胞分布比較均勻，分類計(jì)數(shù)時(shí)最好選擇體尾交界處白細(xì)胞在血涂片中分布：體積較小的淋巴細(xì)胞在頭，體部分較多體積較大的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞在尾部和兩側(cè)分布較多異常大的細(xì)胞常出現(xiàn)在血涂片尾部觀察順序按照一定的順序“弓”字形或“城垛式”進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，有規(guī)律得移動(dòng)視野，逐個(gè)分類計(jì)數(shù)白細(xì)胞切忌操作者任意取舍隨機(jī)視野內(nèi)的白細(xì)胞，以免重復(fù)計(jì)數(shù)或漏計(jì)，減少由于細(xì)胞分布不均所造成的誤差十、 注意事項(xiàng) 1選擇體、尾交界處進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。 2分類時(shí)要有秩序地、循一定方向順序地連續(xù)進(jìn)行，既不重復(fù)亦不遺漏，避免主

30、觀選擇視野。 3白細(xì)胞總數(shù)在（3.015.0）109/L之間者，分類計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞?？倲?shù)在15.0109/L以上時(shí)，應(yīng)計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞，而總數(shù)低于3.0109/L時(shí)，則應(yīng)選用2張血涂片計(jì)數(shù)50100個(gè)白細(xì)胞。4分類中如見(jiàn)血涂片上有幼紅細(xì)胞，應(yīng)逐個(gè)計(jì)數(shù)但不計(jì)入100個(gè)白細(xì)胞內(nèi)，以分類100個(gè)白細(xì)胞過(guò)程中見(jiàn)到幼紅細(xì)胞個(gè)數(shù)來(lái)報(bào)告，并應(yīng)注明其所屬階段。分類中還應(yīng)注意觀察成熟紅細(xì)胞、血小板的形態(tài)、染色及其分布情況，注意有無(wú)寄生蟲（如瘧原蟲）及其它異常所見(jiàn)5白細(xì)胞形態(tài)變化較大，應(yīng)經(jīng)常由高年資檢驗(yàn)人員進(jìn)行核實(shí)，以減少誤差。6禁止在計(jì)數(shù)池內(nèi)或涂片下用高倍鏡作白細(xì)胞分類。白細(xì)胞計(jì)數(shù)1、 技術(shù)背景顯微鏡計(jì)數(shù)法

31、：不需特殊儀器，設(shè)備簡(jiǎn)單，費(fèi)用低廉，適用于基層醫(yī)療單位。在嚴(yán)格規(guī)范條件下，可用于校準(zhǔn)血液分析儀及其計(jì)數(shù)結(jié)果異常的復(fù)查。2、 標(biāo)本標(biāo)本種類：EDTA鹽抗凝靜脈血或末梢血容器要求：清潔干燥、無(wú)菌標(biāo)本處理：采集后盡快送檢，如不能及時(shí)送檢，一般需置于2-6冰箱內(nèi)保存。3、 檢測(cè)原理血液用白細(xì)胞稀釋液稀釋一定倍數(shù)并破壞成熟紅細(xì)胞，混勻后充入改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，通過(guò)換算可得到單位體積即每升血液中的白細(xì)胞總數(shù)。4、 器材及試劑器材：光學(xué)顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板及專用血蓋片試管、1ml刻度吸管、吸耳球、一次性20ul微量吸管、乳膠吸頭、一次性采血針醫(yī)院棉簽及碘酒、75%乙醇

32、酒精試劑：白細(xì)胞稀釋液（冰乙酸2ml、嗜堿性染料10g/l 3滴、蒸餾水加至100ml。 冰乙酸可溶解破壞紅細(xì)胞，嗜堿性染料可使白細(xì)胞核略微著色，易于辨認(rèn)，并區(qū)別與紅細(xì)胞稀釋液。試劑配置后混勻過(guò)濾，密封室溫保存。五、操作步驟1、加稀釋液用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。2、吸取血液用微量吸管吸取新鮮全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管2-3次。3、混勻?qū)⒃嚬苤醒号c稀釋液混勻，待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?、充池再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用微量吸管吸取細(xì)胞懸液15ul左右，充入改良Neubaue

33、r計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中，室溫靜置2-3min，待白細(xì)胞完全下沉。5、計(jì)數(shù)在低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，對(duì)壓線細(xì)胞按“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”。6、計(jì)算 白細(xì)胞數(shù)（/L）=（N/4）1020106=(N/20)109N：4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)；4為每個(gè)大方格（即0.1ul）內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)；10為將容積為0.1ul（1個(gè)大方格）白細(xì)胞數(shù)換算成1.0ul細(xì)胞懸液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)的系數(shù)；20為血液稀釋倍數(shù)；106為由1ul換算成1l的系數(shù)。7、 結(jié)果報(bào)告：WBC：XX109/L8、 參考范圍：成人（4-10）109/L，新生兒（15-20）109/L， 6月-2歲（11-12）109/L。六、質(zhì)量保證1、 計(jì)數(shù)誤差（1）、技術(shù)誤差：可以通過(guò)試劑的標(biāo)準(zhǔn)化，儀器的校準(zhǔn)，規(guī)范熟練的操作等避免或消除技術(shù)誤差。標(biāo)本：要盡快測(cè)定 ，從標(biāo)本采集都檢測(cè)不應(yīng)超過(guò)4個(gè)小時(shí)，室溫