土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(已用)PPT課件[通用]

1、課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用一、課題背景1、尿素的利用 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因 土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2脲酶+ H2O+ CO22NH33、本課題目的從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌1、實(shí)例：?jiǎn)⑹荆簩ふ夷康木N時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因?yàn)闊崛獪囟?0800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有耐熱的Taq細(xì)菌被篩選出來(lái)。 DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)是一種在體外將少量D

2、NA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。一、研究思路 篩選菌株 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 設(shè)置對(duì)照 要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營(yíng)養(yǎng)、生理、生長(zhǎng)條件等；方法： 抑制大多數(shù)微生物的生長(zhǎng) 造成有利于該菌生長(zhǎng)的環(huán)境結(jié)果：培養(yǎng)一定時(shí)間后，該菌數(shù)量上升，再通過(guò)平板劃線法或稀釋涂布平板法等方法對(duì)它進(jìn)行純化培養(yǎng)分離。2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理： 人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖

3、0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素思考1從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基，是由于加入了凝固劑 。從功能上看屬于 培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基的 只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，此培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。思考2該培養(yǎng)基對(duì)微生物 （具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是 。具有 只有能夠以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)選擇固體瓊脂選擇氮源思考315.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNa

4、H2PO41.4gKH2PO4 培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。4、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4活學(xué)活用1.在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。利用上述選擇培養(yǎng)基依次能從混雜的微生物群體中分離出()A.乳酸菌、金黃色葡萄球

5、菌、放線菌B.固氮細(xì)菌、大腸桿菌、放線菌C.固氮細(xì)菌、霉菌、放線菌D.固氮細(xì)菌、金黃色葡萄球菌、放線菌C（1）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。（2）常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)(CV)M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：1.活菌計(jì)數(shù)法（3）計(jì)算公式：（間接計(jì)數(shù)法）想一想，如何根據(jù)平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出

6、平板上的菌落數(shù)的平均值，然后按以下公式進(jìn)行計(jì)算。旁欄思考題每克樣品中的菌落數(shù)(CV)M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。實(shí)例分析P22 第二位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果更接近真實(shí)值。因?yàn)榈谝晃煌瑢W(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說(shuō)服力。 你認(rèn)為哪個(gè)同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？ 都需要。第一位同學(xué)在該濃度下可以多涂布幾個(gè)平板；第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題，涂布了三個(gè)平板，但是其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另外2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將

7、3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值，可以在該濃度下重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度涂布三個(gè)或三個(gè)以上的平板，培養(yǎng)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，計(jì)算出菌落平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵，一般以三個(gè)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右時(shí)為最好。2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)： 利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。（二）.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目： 不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)； 需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度； 個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點(diǎn) 將含已知數(shù)目的紅細(xì)

8、胞液體與待測(cè)的菌液按1：1均勻混合，在顯微鏡下數(shù)出各自的數(shù)目，然后求菌液中的細(xì)胞數(shù)目。（比例計(jì)數(shù)法，類似與標(biāo)志重捕法）待測(cè)樣品等量的已知含量的紅細(xì)胞 混勻涂抹測(cè)定： 紅細(xì)胞數(shù)目細(xì)菌數(shù)目計(jì)算單位體積內(nèi)的細(xì)菌數(shù)目細(xì)菌紅細(xì)胞【補(bǔ)充】顯微鏡直接計(jì)數(shù)是測(cè)定微生物的方法。舉例：已知紅細(xì)胞濃度為M個(gè)/mL，從體積為N mL的大腸桿菌培養(yǎng)液中取出大桿菌液與紅細(xì)胞液等量均勻混合后，涂片，染色，鏡檢。在同一視野中發(fā)出有紅細(xì)胞W個(gè)，大腸桿菌Y個(gè)，求NmL大腸桿培養(yǎng)液中大腸桿菌的個(gè)數(shù)X是多少？XNM YW(個(gè))觀察到的紅細(xì)胞平均數(shù)/觀察到的細(xì)菌平均數(shù)紅細(xì)胞含量/細(xì)菌含量 （類似于標(biāo)志重捕法）公 式 W / Y M /

9、 X(每mL中） NmL大腸桿培養(yǎng)液中大腸桿菌的個(gè)數(shù)X為：2.用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。在某稀釋濃度下某同學(xué)做了若干個(gè)平板并統(tǒng)計(jì)每個(gè)平板的菌落數(shù)，最接近樣品中菌體數(shù)真實(shí)值的是()A.菌落數(shù)量最多的平板B.菌落數(shù)量最少的平板C.菌落數(shù)量適中的平板D.取若干個(gè)平板菌落數(shù)量的平均值D活學(xué)活用 設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。（三）設(shè)置對(duì)照：設(shè)置對(duì)照的方法：空白對(duì)照：不給對(duì)照組任何處理因素；條件對(duì)照： 給對(duì)照組施以部分實(shí)驗(yàn)因素，但不是所要研究的處理因素；自身對(duì)照： 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組都在同一研究對(duì)象上進(jìn)行；相互對(duì)照： 不單設(shè)對(duì)照組，而是幾個(gè)實(shí)

10、驗(yàn)組相互對(duì)照。教材提供的案例中A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種： 一是由于土樣不同； 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)確定原因？方案一： 其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A同學(xué)操作無(wú)誤； 如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。實(shí)例：教材P23教材提供的案例中A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種： 一是由于土樣不同； 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)確定原因？方案二： 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。 實(shí)例：教材P23小結(jié)：通過(guò)這個(gè)

11、事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置是必不可少的。9實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括對(duì)實(shí)驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實(shí)施步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。二實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作下面是土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，請(qǐng)結(jié)合教材提供的資料，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并寫出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案：菌落計(jì)數(shù)配制土壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)方案：（一）土壤取樣（三）樣品的稀釋（四）取樣涂布（五）微生物的培養(yǎng)與觀察并計(jì)數(shù)（六）鑒定 實(shí)驗(yàn)的具體操作 （二）制備培養(yǎng)基：應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行分離不同的微生物采用不同的稀釋度。原因：不同微生

12、物在土壤中含量不同。目的：保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。（三）樣品的稀釋特別注意的幾個(gè)具體操作 為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。 測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？ 為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。旁欄思考題微生物細(xì)菌放線菌真菌稀釋度104、105、106103、104、105102、103、104保證獲得菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。稀釋度（四）取樣涂布實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀

13、釋度、培養(yǎng)物等。 如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。特別注意的幾個(gè)具體操作 3.下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板。B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上。C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)。D.確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)?；顚W(xué)活用D4.測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用10

14、4、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，而測(cè)定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是()A.細(xì)菌個(gè)體小，真菌個(gè)體大B.細(xì)菌易稀釋，真菌不易稀釋C.細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多D.隨機(jī)的，沒有原因C活學(xué)活用（五）微生物的培養(yǎng)與觀察并計(jì)數(shù) 在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。 選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。 細(xì)菌：3037培養(yǎng)12d 放線菌：2528培養(yǎng)57d 霉菌：2528的溫度下培養(yǎng)34d。 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)

15、行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。 特別注意的幾個(gè)具體操作 微生物的培養(yǎng)與觀察 關(guān)注菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。 注意研究未知的微生物，一定要注意進(jìn)行規(guī)范的無(wú)菌操作，以防被致病的微生物感染，實(shí)驗(yàn)后，一定要洗手。（六）鑒定：篩選后必鑒定 鑒定（鑒別）培養(yǎng)基：加入某種指示劑或化學(xué)藥品，不影響微生物的生存。1、酚紅培養(yǎng)基：鑒定分解尿素的細(xì)菌是否存在 2、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基：鑒定大腸桿菌是否存在特別注意的幾個(gè)具體操作 1、酚紅培養(yǎng)基： 鑒定分解尿素的細(xì)菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨培養(yǎng)基堿性增強(qiáng) 酚紅變紅脲酶陽(yáng)性2、伊紅美

16、藍(lán)培養(yǎng)基： 鑒定大腸桿菌。 原理：代謝產(chǎn)物與伊紅美藍(lán)結(jié)合 菌落呈深紫色并帶有金屬光澤。鑒定（鑒別）培養(yǎng)基的實(shí)例：1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作提示步驟實(shí)驗(yàn)操作操作提示土壤取樣從酸堿度接近 潮濕的土壤中取樣。先鏟去表層土_左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。取樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封都要經(jīng)過(guò)_制備培養(yǎng)基分別配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和 為唯一氮源的 培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為 ，用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了 作用3 cm選擇滅菌選擇中性尿素對(duì)照填一填樣品的稀釋和涂布稱取 g土樣加到盛有 mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻；吸取上清液 mL，轉(zhuǎn)移至盛有 mL的無(wú)菌水的無(wú)菌大試管中，按照上圖流程進(jìn)行樣品

17、的稀釋；按照由107103稀釋度的順序分別吸取 mL進(jìn)行 操作。按照濃度 到 的順序涂布平板，不必更換移液管應(yīng)在 旁稱取土樣；由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍 _倍的稀釋液；實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)所用的平板、試管作好 。如培養(yǎng)皿要注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、 、培養(yǎng)物等高稀釋度1090190.1平板涂布低火焰103107標(biāo)記培養(yǎng)將涂布好的培養(yǎng)皿放在_ 溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)有不同的菌落產(chǎn)生。比較牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯_ 選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，才說(shuō)明選擇培養(yǎng)基有_作用3037 選擇多于

18、計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目_ 時(shí)，選取菌落數(shù)在_ 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì) _個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出_ ，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目如果得到了_菌落數(shù)目符合要求的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功；如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明實(shí)驗(yàn)不精確，需要_ ；在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24 h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目平均值重新實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定3030032個(gè)或2個(gè)以上三、操作提示 無(wú)菌操作 做好標(biāo)記 制定計(jì)劃 四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià) （一）如何判斷培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？ 對(duì)照的培養(yǎng)皿在培

19、養(yǎng)過(guò)程中沒有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。 牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。（二）如何判斷樣品的稀釋操作是否成功？ 如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要進(jìn)一步分析產(chǎn)生差異的原因。 （三）重復(fù)組的結(jié)果是否一致的判定方法：四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 課題小結(jié)稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法目的菌株1.對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是（ ） A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B.至少接種一種細(xì)菌 C.接種一個(gè)細(xì)菌 D.及時(shí)補(bǔ)充消耗的

20、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.培養(yǎng)細(xì)菌 B.培養(yǎng)真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素課堂訓(xùn)練A CD4.下列說(shuō)法不正確的是（ ） A.科學(xué)家從7080度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶 B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值 C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 D.同其他生物環(huán)境相比，土

21、壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（） A.較多的氮源物質(zhì) B.較多的碳源物質(zhì) C.青霉素類藥物 D.高濃度食鹽BC（寧夏，15分）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 （2）在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_。 （3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所

22、得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的_。 （4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的_。 （5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是_。 （6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)_處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。溫度 酸堿度易培養(yǎng)生活周期短滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)比例合適鑒定(或分類) 將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。滅菌8當(dāng)堂檢測(cè)1.通常用來(lái)作為菌種鑒定的重要依據(jù)是() A.菌落 B.細(xì)菌形態(tài) C.細(xì)菌體積 D.

23、細(xì)菌結(jié)構(gòu)A2.從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，下列實(shí)驗(yàn)操作不正確的是() A.將土壤用無(wú)菌水稀釋，制備103106土壤稀釋液 B.將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上 C.用加入剛果紅指示劑的選擇培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌 D.從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌脲酶的菌株C3.請(qǐng)選出下列正確的操作步驟()土壤取樣稱取10 g土壤，取出加入盛有90 mL無(wú)菌水的錐形瓶中吸取0.1 mL土壤溶液進(jìn)行平板涂布依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A. B.C. D.C4.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑的目的是() A.篩選出能分解尿素的細(xì)菌 B.對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步鑒定 C.作細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)成分 D.如指示劑變藍(lán)就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素B5. 甘蔗是南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗榨汁(蔗糖)酵母菌發(fā)