微生物在藥學(xué)中的應(yīng)用(2)

1、 第四篇微生物在藥學(xué)中的應(yīng)用精選ppt抗生素（antibiotics）原始含義：由微生物產(chǎn)生的、能抑制其它微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)。現(xiàn)指：生物（包括微生物、植物和動(dòng)物）在其生命活動(dòng)過程中產(chǎn)生的（或由其它方法獲得的）、能在低微濃度下有選擇性地抑制或影響它種生物機(jī)能的有機(jī)物質(zhì)。分類（1）按化學(xué)結(jié)構(gòu) -內(nèi)酰胺類青霉素、頭孢菌素等 四環(huán)類四環(huán)素、土霉素、金霉素 氨基糖苷類鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素 大環(huán)內(nèi)酯類紅霉素、螺旋霉素、麥迪霉素 多肽類多黏菌素、桿菌肽等 多烯類制霉菌素、兩性霉素B、萬古霉素苯羥基胺類氯霉素蒽環(huán)類柔紅霉素、阿霉素環(huán)橋類利福霉素其他（2）按作用對(duì)象抗G+青霉素等 （抑制細(xì)胞壁合成）抗G-鏈

2、霉素等（干擾蛋白質(zhì)合成） 廣譜四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素（干擾蛋白質(zhì)合成）等。 抗真菌兩性霉素B（改變了細(xì)胞膜的通透性）、制霉菌素、灰黃霉素等。 抗腫瘤阿霉素、絲裂霉素、柔紅霉素等（抑制核酸合成）。醫(yī)療用抗生素的特點(diǎn)差異毒力大生物活性強(qiáng)、有不同抗菌譜不易使病原菌產(chǎn)生耐藥性毒副作用小，不易引起超敏反應(yīng)半衰期長(zhǎng)，生物利用度高抗生素傳統(tǒng)分離方法土壤標(biāo)本涂布于平板培養(yǎng)基培養(yǎng)無菌水稀釋挑取單菌落擴(kuò)培培養(yǎng)觀察抑菌圈鑒定精制臨床研究濾紙片法篩選抗生素生產(chǎn)的工藝過程1.菌種2.孢子制備3.種子制備4.發(fā)酵5.發(fā)酵液預(yù)處理6.提取及精制7.成品檢驗(yàn)和包裝1、 菌種 保藏的品種經(jīng)復(fù)壯后備用2 、孢子制備固體培養(yǎng)基上

3、大量培養(yǎng)孢子3 、種子制備獲得菌絲供發(fā)酵之用。4 、發(fā)酵（1）接種量10% 左右，周期4-5天；（2）培養(yǎng)基糖類，淀粉，花生餅粉，黃豆餅粉，玉米漿，蛋白胨；（3）補(bǔ)料工藝延長(zhǎng)抗生素分泌期，增加產(chǎn)量；（4）前體如Pen發(fā)酵的前體為苯乙酸或苯乙胺等；（5）pH（6）溫度：夾套或蛇管冷卻水散熱（滲漏時(shí)易導(dǎo)致染菌，噴淋冷卻也一樣）（7）通氣攪拌： 機(jī)械攪拌 ；擋板防渦流（8）消泡沫：玉米油、豆油、泡敵聚氧乙烯氧丙烯甘油0.01-0.02%（9）消毒滅菌，防止雜菌污染 菌種、空氣、培養(yǎng)基、管道設(shè)備、防噬菌體。（10）放罐時(shí)間：菌絲濃度、形態(tài)、殘?zhí)恰被?、pO2 、pH、效價(jià)。5 、發(fā)酵液的預(yù)處理（1）

4、發(fā)酵液中含Ca 2+ 、 Mg 2+ 、 Fe 3+ 、Protein等雜質(zhì)；（2）Ca 2+ + 草酸 草酸鈣（還可促進(jìn)蛋白質(zhì)沉淀）（3）磷酸鹽除Mg 2+（4）黃血鹽除Fe 3+（5）ZnSO4與黃血鹽形成復(fù)鹽吸附蛋白質(zhì)（6）過濾6 、抗生素提取和精制（1）溶媒萃取法Pen（2）離子交換法氨基糖苷類抗生素（3）吸附法（活性炭、大孔吸附樹脂）頭孢菌素（4）沉淀法四環(huán)素7 、成品檢定和包裝抗藥性 （drug resistance）p305定義在微生物或腫瘤細(xì)胞多次與藥物接觸發(fā)生敏感性降低的現(xiàn)象，是微生物對(duì)藥物所具有的相對(duì)抗性。獲得抗藥性:對(duì)原來敏感的抗生素通過遺傳性的改變而獲得了抗藥性多重抗藥

5、性：同時(shí)對(duì)兩種以上作用機(jī)制不同的藥物產(chǎn)生的抗藥性交叉抗藥性：對(duì)作用機(jī)制類似或作用機(jī)制類似的抗生素均有抗藥性賴藥性：不僅對(duì)該藥物具有抗性，而且需要該藥物作為特殊的營養(yǎng)因素耐受性：該菌在最低抑菌濃度時(shí)仍受到抑制，但最低殺菌濃度提高抗菌藥物的發(fā)展史也就是細(xì)菌對(duì)其耐藥性的發(fā)展史（1）抗菌藥物只要使用了足夠時(shí)間，就會(huì)出現(xiàn)細(xì)菌耐藥性，如使用青霉素25年后出現(xiàn)耐青霉素肺炎球菌、氟喹諾酮使用10年后出現(xiàn)了腸桿菌耐藥；（2）耐藥性是不斷進(jìn)化的，隨著抗菌藥物的應(yīng)用，耐藥也從低度耐藥向中度、高度耐藥轉(zhuǎn)化；（3）對(duì)一種抗菌藥物耐藥的微生物可能對(duì)其他抗菌藥物也耐藥；（4）細(xì)菌耐藥性的消亡很慢；（5）使用抗菌藥物治療后，

6、患者容易攜帶耐藥菌。 （一）、抗藥性產(chǎn)生的遺傳機(jī)制1 、自發(fā)突變與藥物選擇（1）由敏感菌的遺傳物質(zhì)自發(fā)突變產(chǎn)生。（2）藥物選擇的結(jié)果是殺死敏感菌，耐藥菌富集。2 、 細(xì)胞間抗藥性的基因轉(zhuǎn)移染色體上的耐藥基因通過接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)座子而轉(zhuǎn)移。質(zhì)粒上的耐藥基因自行復(fù)制，代代相傳，并在不同種屬間轉(zhuǎn)移（性菌毛的接合作用）（二）、抗藥性產(chǎn)生的生化機(jī)制1、 合成了修飾抗生素的酶 例：-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶 2、 使藥物作用靶位失活 例：磺胺類抗藥菌合成另一種對(duì)磺胺不敏感的酶 3、 細(xì)胞質(zhì)膜透性改變 例：抗四環(huán)素細(xì)菌膜孔蛋白結(jié)構(gòu)改變，降低細(xì)胞膜通透性耐藥性和青霉素酶的測(cè)定1 、耐藥性藥敏試紙2 、

7、青霉素酶耐藥菌接平板培養(yǎng) 加含青霉素的淀粉 加I2出現(xiàn)透明圈（eg.金葡菌產(chǎn)酶株）。 抗生素的效價(jià)單位及效價(jià)測(cè)定法 p308一、抗生素的效價(jià)單位效價(jià)（potency）在同一條件下比較抗生素檢品和標(biāo)準(zhǔn)品的抗菌活性，從而得出檢品的效價(jià)。單位（unit,u）是衡量抗生素有效成分的具體尺度。效價(jià)100抗生素效價(jià)檢品的抗菌活性標(biāo)準(zhǔn)品的抗菌活性100%效價(jià) =檢品的實(shí)際單位數(shù)檢品的標(biāo)示量100%=抗生素效價(jià)單位重量單位（生物活性部分重量）：1g 1U類似重量單位（特定抗生素鹽純品重量） 1g 1U重量折算單位（原始活性單位相當(dāng)?shù)募兤分亓繛?U） ex:Pen 0.5988g 1U, 1mg 1670U特定

8、單位（特定樣品的某一重量為一定單位）例: 一批特定桿菌肽1mg 55U二、抗生素的效價(jià)測(cè)定管碟法原理：抗生素在瓊脂平板培養(yǎng)基中的擴(kuò)散滲透作用抗生素在一定濃度范圍內(nèi)，其濃度的對(duì)數(shù)和抑菌圈直徑成直線關(guān)系y=a+bx y：抑菌圈直徑，x抗生素濃度的對(duì)數(shù)常用二劑量法W=(SH+UH)-(SL+UL) V=(UH+UL)-(SH+SL)供試品與標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)比=D*antilg(IV/W)D一般為1，I一般為lg2第二十章 藥物的體外抗菌試驗(yàn)抗生素的體外抑菌實(shí)驗(yàn)MIC最低抑菌濃度 MBC最低殺菌濃度 藥物體外抗菌試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散法濾紙片法打洞法（挖孔法）管碟法挖溝法連續(xù)稀釋法液體稀釋法斜面稀釋法平板稀釋法第二十

9、一章 藥物制劑的微生物學(xué)檢查 滅菌制劑： 注射劑 眼科制劑 手術(shù)用品（敷料、縫合線、無菌器具等）第一節(jié) 滅菌制劑的無菌檢查一般藥品的無菌檢查直接接種法需氧菌、厭氧菌、霉菌的檢查需氧菌：3035，7天 厭氧菌：3035，7天 霉 菌：2025，7天 觀察培養(yǎng)液是否混濁或涂片染色鏡檢 陽性對(duì)照（24 h有菌生長(zhǎng)）金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003 生孢梭狀芽胞桿菌CMCC（B）64941 白色念珠菌CMCC（F）98001二、特殊藥品的無菌檢查法1 、油類藥物用吐溫培養(yǎng)基2、抗菌藥物或含防腐劑藥物適宜的培養(yǎng)基青霉素加入青霉素酶 磺胺藥對(duì)氨基苯甲酸培養(yǎng)基（可使菌合成葉酸，不被干擾）培養(yǎng)基稀釋藥品

10、至不抑制微生物生長(zhǎng)薄膜過濾法結(jié)果判定： 陽性對(duì)照長(zhǎng)菌 陰性對(duì)照不長(zhǎng)菌 樣品不長(zhǎng)菌無菌檢查合格第二節(jié) 非滅菌制劑的微生物限度檢查適用于非滅菌制劑（口服及外用藥）及其原輔料，檢測(cè)項(xiàng)目：1.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定2.霉菌（酵母）總數(shù)測(cè)定3.控制菌的檢查4.活螨的檢查一、細(xì)菌總數(shù)測(cè)定(瓊脂傾注平皿計(jì)數(shù))1 陰性平板不長(zhǎng)菌2 細(xì)菌37培養(yǎng)2448 h3 細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告方式（1）高、低稀釋度菌落數(shù)在30300以內(nèi)，計(jì)算比值；（2）比值2，以高稀釋度平均值為準(zhǔn)；（3）比值2，以低稀釋度為準(zhǔn)。二、霉菌（酵母）總數(shù)測(cè)定虎紅培養(yǎng)基， 2528，4872 h，550個(gè)菌落 三、控制菌（質(zhì)控菌）的檢查1 口服藥不能檢出沙門氏菌、大腸桿菌2 外用藥、眼科制劑不能檢出金葡菌、綠膿桿菌、破傷風(fēng)梭菌。質(zhì)控菌檢測(cè)方法 藥物預(yù)處理 增菌液增菌培養(yǎng) 分離、純培養(yǎng)