粉塵螨過(guò)敏患者Derf1、Derf2特異性IgE的檢測(cè)分析

1、粉塵螨過(guò)敏患者Der f 1、Der f 2 特異性IgE的檢測(cè)分析董勁春，程 浩* （浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院，浙江 杭州 310016）摘要：為了解我國(guó)粉塵螨過(guò)敏患者對(duì)粉塵螨單組分過(guò)敏原Der f 1、Der f 2特異性IgE的水平情況，收集了80例疑似塵螨過(guò)敏患者樣本，對(duì)ImmunoCAP和浙大迪迅粉塵螨檢測(cè)試劑盒檢測(cè)粉塵螨特異性IgE陽(yáng)性的樣本，進(jìn)一步檢測(cè)其粉塵螨單組分過(guò)敏原Der f 1和Der f 2特異性IgE水平。80例樣本兩種方法檢測(cè)粉塵螨均為陽(yáng)性65例，陽(yáng)性率為81.3%。65例粉塵螨陽(yáng)性樣本中，Der f 1陽(yáng)性率87.7%，Der f 2陽(yáng)性率90.8%，二者至少

2、一個(gè)為陽(yáng)性的達(dá)到97%，Der f 2特異性IgE水平顯著高于Der f 1者。兒童的粉塵螨及其兩種單組分過(guò)敏原Der f 1、Der f 2特異性IgE水平顯著高于成人。推測(cè)Der f 1和Der f 2兩組份過(guò)敏原在我國(guó)粉塵螨患者中占據(jù)了主導(dǎo)地位，說(shuō)明Der f 1和Der f 2在我國(guó)粉塵螨患者中是主要過(guò)敏原。Der f 1、Der f 2特異性IgE水平存在顯著差異，后者高于前者。兒童對(duì)Der f 1和Der f 2的敏感性顯著高于成人。關(guān)鍵詞：粉塵螨過(guò)敏；過(guò)敏原；Der f 1；Der f 2中圖分類號(hào): R392.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 在過(guò)去幾十年，過(guò)敏性疾病發(fā)病率迅速增長(zhǎng)，嚴(yán)重影

3、響了患者的健康1。吸入性過(guò)敏原在此類疾病中扮演著重要的角色，其中塵螨是導(dǎo)致過(guò)敏性疾病最重要的過(guò)敏原2，主要會(huì)引起哮喘、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎。螨蟲(chóng)廣泛存在于熱帶和亞熱帶地區(qū)的房屋中，屋塵螨主要包括戶塵螨（Dermatophagoides pteronyssinus）和粉塵螨（Dermatophagoides farinae）。大量研究表明，屋塵螨類過(guò)敏原（Der p 1/Der f 1）和類過(guò)敏原（Der p 2/Der f 2）在誘發(fā)過(guò)敏性疾病中起著主要作用3-4。過(guò)敏原分型診斷的概念于1999年提出5，其主要采用重組表達(dá)或天然純化的單一過(guò)敏原，來(lái)查明誘發(fā)患者過(guò)敏的具體成分。這有利于明確患者

4、病因并進(jìn)行有針對(duì)的免疫治療。分型診斷在對(duì)花生、小麥、蕎麥過(guò)敏的研究中應(yīng)用較多，但在對(duì)塵螨過(guò)敏的研究中少見(jiàn)。在皮試實(shí)驗(yàn)中，特異性IgE與屋塵螨類、類過(guò)敏原具有顯著反應(yīng)，提示在屋塵螨過(guò)敏中也可開(kāi)展分型診斷研究6。本研究收集了浙江地區(qū)80例塵螨過(guò)敏患者，主要包括過(guò)敏性鼻炎、過(guò)敏性哮喘、和過(guò)敏性皮炎。對(duì)其血清中粉塵螨單組分過(guò)敏原Der f 1、Der f 2特異性IgE抗體進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討粉塵螨過(guò)敏患者與粉塵螨單組分過(guò)敏原Der f 1、Der f 2的相關(guān)性，以及對(duì)不同性別、年齡組的發(fā)病率進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)規(guī)律，為患者疾病的診治提供臨床數(shù)據(jù)。1 材料與方法1.1臨床資料研究對(duì)象為浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸

5、夫醫(yī)院收集的臨床疑似塵螨過(guò)敏患者標(biāo)本80例，其中男46例，女34例，年齡在3-78歲之間，平均年齡22.4歲。包括29名兒童（年齡3-14歲）和51名成人（15-78歲）。納入患者主要表現(xiàn)出過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、哮喘等臨床癥狀，且均為進(jìn)行免疫治療。所有患者經(jīng)過(guò)醫(yī)生面對(duì)面的評(píng)估，填寫(xiě)相應(yīng)的問(wèn)卷調(diào)查。通過(guò)這份調(diào)查來(lái)評(píng)估過(guò)敏性鼻炎的四個(gè)主要癥狀：癢，打噴嚏，流鼻涕和鼻噻。哮喘主要通過(guò)呼吸困難史、喘息、咳嗽并進(jìn)行陽(yáng)性氣道可逆性測(cè)試來(lái)確診。特應(yīng)性皮炎的診斷為皮膚瘙癢、典型性形態(tài)特征分布、典型的慢性復(fù)發(fā)過(guò)程。1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 粉塵螨過(guò)敏原蛋白、粉塵螨I類過(guò)敏原Der f 1 和II類過(guò)敏原Der f 2

6、 免疫印跡法檢測(cè)試劑均購(gòu)自浙大迪迅生物基因工程有限公司。PhadiaImmunoCAP屋塵螨試劑購(gòu)自Thermo Fisher Scientific公司。1.3 實(shí)驗(yàn)方法將收集的血清標(biāo)本采用ImmunoCAP熒光系統(tǒng)和浙大迪迅生物基因工程有限公司生產(chǎn)的塵螨檢測(cè)試劑盒（免疫印跡法）進(jìn)行檢測(cè)。比較兩種方法檢測(cè)結(jié)果的符合率。之后采用浙大迪迅生產(chǎn)的粉塵螨類、類過(guò)敏原Der f 1、Der f 2檢測(cè)試劑盒（免疫印跡法）進(jìn)行檢測(cè)。浙大迪迅生物基因工程有限公司的試劑盒均采用其生產(chǎn)的全自動(dòng)免疫印跡儀（DX-Blot 45）進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果讀取。檢測(cè)結(jié)果為半定量結(jié)果，通過(guò)判讀軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀處理。每個(gè)標(biāo)本重復(fù)

7、3次。1.4統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，粉塵螨IgE和特異性IgE水平用平均值標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩種檢測(cè)方法的比較采用配對(duì)四格表，并進(jìn)行McNemar檢驗(yàn)和一致性檢測(cè)。Der f 1和Der f 2的致敏性通過(guò)McNemars test 進(jìn)行比較，不同組間的比較采用卡方檢驗(yàn)，p0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果與分析2.1 塵螨過(guò)敏患者血清檢測(cè)80例標(biāo)本經(jīng)ImmnuCAP 粉塵螨過(guò)敏原檢測(cè)和浙大迪迅粉塵螨檢測(cè)試劑盒（免疫印跡法）檢測(cè)后結(jié)果見(jiàn)表1。兩種方法的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率分別為95.6%，100%，96.3%。粉塵螨試劑盒與ImmnuCAP 檢測(cè)結(jié)果McNe

8、mar統(tǒng)計(jì)量比較顯示兩者陽(yáng)性檢出率無(wú)顯著性差異（p=0.250）。一致性檢測(cè)的Kappa值為0.867，p0.001，說(shuō)明兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果一致性很高。表1 兩種方法測(cè)定粉塵螨過(guò)敏原特異性抗體IgE的定性結(jié)果比較Tab.1 Comparison of two methods for qualitative detection of dust mite-allergen specific IgE antibodies粉塵螨ImmunoCAP 100總計(jì)陽(yáng)性陰性浙大迪迅免疫印跡法陽(yáng)性65065陰性31215總計(jì)681280注：陽(yáng)性符合率=65/(65+3)100%=95.6%；陰性符合率=12/(

9、0+12) 100%=100%；總符合率=(65+12)/80100%=96.3%。兩種方法檢測(cè)粉塵螨均為陽(yáng)性的標(biāo)本65例，對(duì)這65例標(biāo)本進(jìn)行粉塵螨單組分Der f 1和Der f 2過(guò)敏原特異性IgE檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。65例粉塵螨陽(yáng)性標(biāo)本中，97%的患者Der f 1和/或Der f 2特異性IgE陽(yáng)性（0.35IU），87.7%的患者Der f 1陽(yáng)性，90.8%的患者Der f 2陽(yáng)性。Der f 1和Der f 2均為陰性的僅2例。其中，Der f 1和Der f 2在30例兒童標(biāo)本中的陽(yáng)性率分別為93.3%和96.7%，在35例成人標(biāo)本中分別為82.9%和85.7%。另外，Der

10、 f 1和Der f 2在34例男性標(biāo)本中的均為94.1%，在31例女性標(biāo)本中分別為80.6%和87.1%。表2 粉塵螨過(guò)敏患者Der f 1、Der f 2特異性IgE檢測(cè)結(jié)果Tab.2 Detection results of Der f 1 and Der f 2 specific IgE antibodies for dust mite-allergic patients分類組數(shù)量平均年齡（范圍）/歲陽(yáng)性數(shù)目（比例/%）Der f 1+Der f 2+年齡兒童309.4 (414)28 (93.3)29 (96.7)成年人3528.9 (1578)29 (82.9)30 (85.7)性

11、別男性3419.0 (678)32 (94.1)32 (94.1)女性3120.9 (458)25 (80.6)27 (87.1)總體6519.9 (378)57 (87.7)59 (90.8)2.2粉塵螨與Der f 1、Der f 2特異性IgE之間的關(guān)系 粉塵螨單組分Der f 1和Der f 2特異性IgE檢測(cè)水平具有顯著性差異（9.014.8 kU/L，39.336.7 kU/L，p0.001）后者高于前者。分析每份標(biāo)本粉塵螨單組分Der f 1和Der f 2特異性IgE半定量檢測(cè)結(jié)果之和（Der f 1 + Der f 2特異性IgE）與粉塵螨特異性IgE的相關(guān)性，如圖1所示，兩

12、者具有高度相關(guān)性（R=0.93，p0.05）。圖1 粉塵螨特異性IgE與Der f 1、Der f 2特異性IgE的相關(guān)性Fig.1 Correlation between dust mite specific IgE and Der f 1 and Der f 2 specific IgE2.3粉塵螨、Der f 1及Der f 2特異性IgE與年齡的關(guān)系粉塵螨及其單組分過(guò)敏原Der f 1、Der f 2特異性IgE隨著年齡增長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)（R= -0.18, -0.15, -0.12，圖2），且存在顯著差異。兒童粉塵螨和Der f 1和Der f 2特異性IgE高于成人（p0.001，圖

13、3）；無(wú)論兒童還是成人，Der f 2特異性IgE水平顯著高于Der f 1特異性IgE水平（p0.05，圖3）。三種過(guò)敏原特異性IgE在不同性別間均無(wú)顯著差異（p=0.143, 0.186, 0.231）。 圖2 粉塵螨、Der f 1、Der f 2特異性IgE與年齡的相關(guān)性Fig.2 Correlation between dust mite, Der f 1 and Der f 2 specific IgE and age *p0.05，*p0.001。圖3 兒童和成人粉塵螨、Der f 1、Der f 2特異性IgE比較Fig.3 Comparison between dust mi

14、te, Der f 1 and Der f 2 specific IgE antibody levels in children and adults3討 論塵螨是引起呼吸道過(guò)敏的最主要的原因，目前已經(jīng)從塵螨中分離鑒定并正式命名了24組過(guò)敏原組分7。其中，塵螨第一組和第二組過(guò)敏原（Der p 1/Der f 1和Der p 2/Der f 2）是目前公認(rèn)的最主要的過(guò)敏原成分8。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)戶塵螨Der p 1和Der p 2的研究報(bào)道較多，粉塵螨主要過(guò)敏原Der f 1和Der f 2的致敏性研究則鮮有報(bào)道。本研究對(duì)80例塵螨過(guò)敏的患者進(jìn)行檢測(cè)，其中65例對(duì)粉塵螨過(guò)敏，陽(yáng)性率為81%。65例

15、粉塵螨陽(yáng)性患者Der f 1和Der f 2的發(fā)病率占據(jù)了主要的作用，分別為87.7%和90.8%，二者至少一個(gè)為陽(yáng)性的達(dá)到97%。該結(jié)果比韓國(guó)的一項(xiàng)對(duì)粉塵螨各組分過(guò)敏原研究的報(bào)道值（Der f 1 79.1%；Der f 2 79.1%）要高9，這種差異可能與地域氣候以及方法學(xué)的差異有關(guān)。同時(shí)，Der f 1和Der f 2特異性IgE與粉塵螨特異性IgE的緊密相關(guān)性進(jìn)一步支持了這兩種過(guò)敏原的重要性。塵螨陽(yáng)性患者中，Der f 2特異性IgE水平（39.336.7kU/L）顯著高于Der f 1特異性IgE水平（9.014.8kU/L），該結(jié)果與Jeong等9和Suzaki等10的研究結(jié)果相

16、一致。另一項(xiàng)研究也發(fā)現(xiàn)在塵螨過(guò)敏患者中，Der p 2和Der f 2皮試陽(yáng)性檢出率最高11。Der f 1屬于木瓜蛋白酶半胱氨酸蛋白酶家族，具有半胱氨酸蛋白酶活性，其蛋白水解特性使得其可以破壞黏膜屏障，從而誘發(fā)初始過(guò)敏反應(yīng)，特別在兒童中，但在后續(xù)的步驟中缺乏更多的功能12。Der f 2屬于脂質(zhì)結(jié)合蛋白，能夠激活轉(zhuǎn)錄因子-2，隨后誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞磷脂酶D1的激活以及IL-13的表達(dá)13-14。同時(shí)，脂質(zhì)結(jié)合特性通過(guò)活化CD1+樹(shù)突狀細(xì)胞和限制T淋巴細(xì)胞，對(duì)誘發(fā)免疫系統(tǒng)反應(yīng)起著重要的作用15。我們發(fā)現(xiàn)粉塵螨、Der f 1和Der f 2與特異性IgE的反應(yīng)在年輕患者中更為強(qiáng)烈。目前，對(duì)于

17、Der f 1和Der f 2的研究報(bào)道較少，但歐洲的一項(xiàng)針對(duì)1966-2010年發(fā)表的有關(guān)年齡和過(guò)敏性疾病關(guān)系系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)的研究，其發(fā)現(xiàn)年齡大的人群中過(guò)敏性疾病的發(fā)生率更低16。Wang等17對(duì)浙江地區(qū)塵螨患者Der p 1和Der p 2的研究發(fā)現(xiàn)與本研究趨勢(shì)一致。根據(jù)歐洲研究報(bào)道，這可能的解釋是兒童具有對(duì)塵螨過(guò)敏原更強(qiáng)的IgE反應(yīng)18。然而，兒童這種強(qiáng)的IgE反應(yīng)可能的解釋是由于隨著年齡的增長(zhǎng)免疫系統(tǒng)反應(yīng)降低。人在衰老的過(guò)程中，人的器官和系統(tǒng)的功能會(huì)逐漸下降，其免疫調(diào)節(jié)功能也會(huì)受損。但是否是由于這種原因還需要更進(jìn)一步的研究?？傊?，本研究發(fā)現(xiàn)Der f 1和Der f 2在我國(guó)粉塵螨患者中占主

18、要地位，說(shuō)明Der f 1和Der f 2在我國(guó)粉塵螨患者中也是主要過(guò)敏原。而且，我們發(fā)現(xiàn)Der f 2特異性IgE水平顯著高于Der f 1，且兒童對(duì)Der f 1和Der f 2的敏感性顯著高于成人。參考文獻(xiàn)：1 Janson C, Anto J, Burney P, et al. The European Community Respiratory Health Survey: what are the main results so far? European Community Respiratory Health Survey IIJ. Eur Respir J, 2001, 18

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