人α葡萄糖苷酶αglucosidase酶聯(lián)免疫分析

1、人口葡萄糖甘酶(-glucosidase)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T7U/L-200U/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中a葡萄糖昔酶(a-glucosidase)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人a葡萄糖昔酶(a-glucosidase)水平。用純化的人“葡萄糖昔酶(a-glucosidase)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入a葡萄糖甘酶(a-glucosidase),再與HRP標(biāo)記的a葡萄糖甘酶(a-glucosidase)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TM

2、B顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的a葡萄糖甘酶(a-glucosidase)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人a葡萄糖昔酶(a-glucosidase)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlx1瓶2酶標(biāo)試劑6mlX1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(400U/L)X1瓶3酶標(biāo)包被板12孔X8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液X1瓶4樣品稀釋液6mlx1瓶10說明書1份5顯色劑A液6mlx1瓶11封板膜張6顯色劑B液6mlx1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后

3、應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。200U/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100U/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50U/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25U/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液U/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣

4、品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50小待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40M,然后再加待測(cè)樣品10d(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。.溫育:用封板膜封板后置37c溫育30分鐘。.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水30倍稀釋后備用.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 TOC o 1-5 h z 重復(fù)5次，拍干。/.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑504，空白孔除外。、.溫育:操作同3。/.洗滌：操作同5。/.顯色：每孔先加入顯色劑A50U,再加入顯色劑B50M,輕輕震蕩混

5、勻，37c避光顯色15分鐘.終止:產(chǎn)每孔加終止液50人終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)必加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37T：反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37X2反應(yīng)H0分鐘洗板5次，加入雙色液A.B,37t顯色10分鐘計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

6、即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng).試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 TOC o 1-5 h z .請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）o.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。.底物請(qǐng)避光保存。.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須