多酚穩(wěn)定性檢測

1、:間財驅當 :腳衡者 敵工醐：磚耕 燮敵工廓市：燮瑪部蛔 :腳間案器報風我洱嵬謎偃多闡番碧爪睡部番弱爪：目碰本勰本硬亦甫1山楂果皮和山楂果肉多酚熱穩(wěn)定性的研究（生物工程）摘要多酚的抗氧化功能對許多慢性病起到預防作用，本實驗利用75 %甲醇， 25%丙酮提取山楂果肉和山楂果皮里多酚，利用福林肖卡比色法測定總酚的含 量，考察提取液中的多酚在30C、45*C、60C、75C的熱穩(wěn)定性。結果表明： 溫度的變化對山楂果皮和山楂果肉中多酚熱穩(wěn)定性影響很大，其中用75%的甲 醇作為山楂果肉中多酚的提取劑，提取出來的多酚在75C下的含量最高，含量 為3.278mg/l，低于此溫度，多酚含量隨溫度的變化很大，且

2、提取出來的多酚熱 穩(wěn)定性最差；用25%丙酮作為山楂果皮中多酚的提取劑，提取出的多酚在30 下的含量最低，多酚含量為9. 279mg/l，低于或高于此溫度，多酚的含量都會升 高，且提取出來的多酚熱穩(wěn)定性最好。關鍵詞：山楂，多酚，熱穩(wěn)定性THE RESEARCH OF HAWTHORN PELL ANDHAWTHORN PULP POLYPHENOLS THERMAI STABILITYChang Linjie(Bioengineering,Class081)AbstractPolyphenols antioxidant function could protect many chronic di

3、seases, this experiment of Polyphenols extract in Hawthorn peel and hawthorn pulp by using 75% methanol and25%acetone , it used Flint shaw card colorimetric method to determine the content of total phenol, Examineing the thermal stability of polyphenols extract in 30 C, 45 C,60C and 75C. The results

4、 showed that: The impaction ofpolyphenols thermal stability was relevant to the change of the temperature of hawthorn peel and hawthorn pulp, With 75% methanol as the extraction agent of polyphenols in hawthorn pulp, the highest concentrations of polyphenols extracted at 75 C, the content of 3.278mg

5、/l, below this temperature, the polyphenol contented variation with temperaturepolyphenol thermal stability, and extracted from the worst; with 25% acetone as the extraction of polyphenols in hawthorn peel agent extracted polyphenol contented at 30 C, the lowest polyphenol content of 9.279mg / l, lo

6、wat or above this temperature, the polyphenol content were increased, and the extracted polyphenols thermal stability of the best.:hawthorn, polyphenols, thermal stability TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark17 o Current Document 引言11材料與方法21.1材料2 HYPERLINK l bookmark11 o Current Document 1.2藥品與試劑2 HYP

7、ERLINK l bookmark14 o Current Document 1.3儀器設備21.4實驗方法21.4.1山楂果肉和山楂果皮酚類物質的提取2 HYPERLINK l bookmark24 o Current Document 1.4.2總酚含量的測定方法3 HYPERLINK l bookmark27 o Current Document 1.4.2.1標準曲線的繪制3 HYPERLINK l bookmark30 o Current Document 1.4.2.2山楂果皮和果肉提取液中總酚含量的測定3 HYPERLINK l bookmark33 o Current Docu

8、ment 1.5山楂果皮和果肉多酚熱穩(wěn)定性實驗3 HYPERLINK l bookmark36 o Current Document 1.6數(shù)據(jù)處理42結果與分析42.1標準曲線的繪制4 HYPERLINK l bookmark43 o Current Document 2.2山楂果皮和果肉提取的總酚52.3山楂果皮和果肉多酚熱穩(wěn)定性實驗62.4利用方差分析結果6 HYPERLINK l bookmark46 o Current Document 3結果9 HYPERLINK l bookmark49 o Current Document 參考文獻9 HYPERLINK l bookmark5

9、7 o Current Document 致謝10引言山楂是薔薇科植物山里紅(Crataegus p innatifidaBge. var. major N. E. Br.)或山楂C. p innatifida Bge.的成熟干燥果實，為傳統(tǒng)中藥材，能開胃消食、 化滯消積、活血化淤、收斂止痢。山楂又是水果,生熟食用均可。近年臨床常以 生山楂治療高血脂、高血壓、冠心病等,民間還用以食療養(yǎng)生、保健益壽【1】。山 楂果實中含有多種化學成分，其中黃酮是山楂中的一大類化合物，是治療心血管 疾病和抗腫瘤的活性成分，能夠降血壓，降低膽固醇和血脂在血管壁上的沉積，增 加皮下毛細血管的通透性，對心腦血管系統(tǒng)疾病

10、有明顯的療效。山楂果總黃酮對 正常細胞的生長無明顯影響，但對腫瘤細胞的生長卻有顯著抑制作用。作為盛產(chǎn) 山楂的國家，我國山楂來源尤為充足,成本低，因而充分利用山楂這一可再生的資 源去開發(fā)生產(chǎn)新藥,其前景廣闊。山楂的主要成分是黃酮類物質，對心血管系統(tǒng) 有明顯的藥理作用。目前，從山楂中分離的黃酮成分有30余種，主要有含碳鍵 的黃酮苷類、黃酮醇及其苷類、雙氧黃酮苷類、聚合黃酮類。另一類較為重要的 成分是三萜類物質，有強心、增加冠脈血流、改善血流循環(huán)等重要作用。此外， 山楂中含有機酸如氯原酸、咖啡酸及鞣質、鞣酐、表兒茶酚、膽堿、乙酰膽堿、 0谷甾醇、胡蘿卜素及大量Vit C等。藥用價值：山楂有重要的藥用

11、價值，自古 以來，就成為健脾開胃、消食化滯、活血化痰的良藥。山楂以果實作藥用， 性微溫，味酸甘，入脾、胃、肝經(jīng)，有消食健胃、活血化淤、收斂止痢之功能。 對肉積痰飲、痞滿吞酸、瀉痢腸風、腰痛疝氣、產(chǎn)后兒枕痛、惡露不盡、小兒乳 食停滯等，均有療效。中國古代醫(yī)學家早已重視山楂的軟堅消積作用。煮老雞硬 肉時，加幾顆山楂即易爛，說明它有消積肉食的作用。中醫(yī)成藥焦三仙、保 和丸、山楂丸等均以山楂為其主要成分；山楂還有散淤、止血、防暑、提神等作 用。它的藥用功能主要有：1、強心、降血脂、降血壓：山楂中的總黃酮有擴 張血管和持久降壓的作用。臨床研究證實，山楂能顯著降低血清膽固醇及甘油三 酯，有效防治動脈粥樣硬

12、化；山楂還能通過增強心肌收縮力、增加心輸出量、擴 張冠狀動脈血管、增加冠脈血流量、降低心肌耗氧量等起到強心和預防心絞痛的 作用。2.防癌、抗癌：近年研究發(fā)現(xiàn)，山楂中含有一種叫牡荊素的化合物，具 有抗癌的作用。亞硝胺、黃曲霉素均可誘發(fā)消化道癌癥的發(fā)生或加重，而實驗研 究表明，山楂提取液不僅能阻斷亞硝胺的合成，還可抑制黃曲霉素的致癌作用。 所以，消化道癌癥的高危人群應經(jīng)常食用山楂，對于已經(jīng)患有癌癥的患者，若出 現(xiàn)消化不良時也可用山楂、大米一起煮粥食用，這樣既可助消化，又可起到輔助 抗癌的作用。3.治療痛經(jīng)、月經(jīng)不調：中醫(yī)認為山楂具有活血化淤的作用，是 血淤型痛經(jīng)患者的食療佳品。血淤型痛經(jīng)患者常表現(xiàn)

13、為行經(jīng)第12天或經(jīng)前12天發(fā)生小腹疼痛，待經(jīng)血排出流暢時，疼痛逐漸減輕或消失，且經(jīng)血顏色暗，伴 有血塊?；颊呖扇⊥暾麕Ш缩r山楂1000克，洗凈后加入適量水，文火熬煮至山楂 爛熟，加入紅糖250克，再熬煮10分鐘，待其成為稀糊狀即可。經(jīng)前35天開始 服用，每日早晚各食山楂泥30毫升，直至經(jīng)后3天停止服用，此為1個療程，連服 3個療程即可見效。此法也適合月經(jīng)不調、中醫(yī)辨證為血淤者。4、開胃消食、消 肉食積滯：很多助消化的藥中都采用了山楂，由于山楂含山楂酸等多種有機酸， 味酸甘，并含解脂酶，入胃后，能增強酶的作用，促進肉食消化，有助于膽固醇 轉化，所以，對于吃肉或油膩物后感到飽脹的人，吃些山楂、山楂

14、片、山楂水或 山楂丸等，均可消食，為老年人的保鍵食品，山楂還可利膽汁，促進胃液分泌【4-6】。 影響多酚穩(wěn)定性的因素有很多，例如光照的強弱、光照時間的長短、提取時所加 入的金屬離子的種類的濃度、提取中處理溫度的高低等等，利用不同的方法 和技術可以優(yōu)化山楂多酚提取的工藝技術，推進山楂多酚在醫(yī)療和食品等工業(yè)方 面的步伐。1材料與方法1.1材料山楂（山里紅），市售。1.2藥品與試劑福林一肖卡甲醇丙酮其它試劑為分析純1.3儀器與設備TU-1201紫外可見分光光度計制冰機A1003型電子分析天平搖床101.2AB型電熱鼓風干燥箱水浴鍋USC一202超聲波清洗器1.4實驗方法購置于sigma公司天津科密歐

15、化學試劑有限公司天津科密歐化學試劑有限公司北京普析通用儀器有限責任公司 美國WATER公司德國梅特勒公司北京醫(yī)療設備總廠BS 200S 天津市泰斯特儀器有限公司 北京醫(yī)療設備總廠BS 200S 上海波龍電子設備有限公司1.4.1山楂果肉和山楂果皮酚類物質的提取在低溫環(huán)境下用刀把山楂肉和山楂皮分開，然后在打碎機上分別打碎，用真 空袋子將山楂果肉和山楂果皮分別包起來，在冰箱等低溫下冷凍保存，以備用。 注意冷凍時一定要把袋子封閉好，以免里面結冰影響實驗的準確性。準確稱取2.0g山楂果皮粉碎物和山楂果肉粉碎物，分別用兩支離心管裝，共 四支。然后用75%的甲醇和25%的丙酮作為提取劑。山楂果皮：甲醇用5

16、ml，丙 酮用5ml；山楂肉：甲醇用5ml，丙酮用10ml。分別用皮甲、皮丙、肉甲、肉丙標 記。將裝好在離心管中的藥品在搖床上室溫搖床30min,每個樣品重復提取3次。1.4.2總酚含量的測定方法總酚含量的測定一般采用福林肖卡比色法，原理是應用酚羥基的還原性、酚 羥基數(shù)目與氧化試劑所形成的有色化學物質的量在一定范圍內成線性。參考回瑞 華等【7】的方法并有改進。1.4.2.1標準曲線的繪制準確稱取2.5 g沒食子酸溶于甲醇中，然后定容至100 ml。再取此原液1 ml 稀釋至100 ml,即為標準溶液(2.5x10-4 g/ ml )。準確量取0.1 ml、0.2 ml、 0.3 ml、0.5

17、ml、1.0 ml于10 ml容量瓶中，各加6 ml蒸餾水，搖勻，再加0.5 ml 福林消卡試劑充分搖勻，1 min后，加入20% ( w/v ) Na2CO3 1.5 ml搖勻，再用蒸 餾水定容，混合液于75C恒溫水浴10 min后，立即冰浴5 min,于760 nm波長下， 1頃比色杯比色，空白用甲醇代替，每個濃度做3個平行試驗，取平均值，繪制 標準曲線。1.4.2.2山楂果皮和果肉提取液中總酚含量的測定分別取山楂果皮和山楂果肉的75%甲醇提取液0.5ml和0.1ml,另外再分別取 山楂果皮和山楂果肉的25%丙酮提取液0.5m l和0.4ml,將其分別置于10 ml刻度 管中，加入6 ml

18、蒸餾水，再加0.5 ml福林肖卡試劑，充分混勻，1 min后，加入 20%(w/v)碳酸鈉溶液1.5 ml混勻，用蒸餾水定容至10 ml。每組做三個平行。利 用可見分光光度計在760 nm波長下，測吸光值并由標準曲線將吸光值轉換成濃 度，繪制曲線。空白分別用75%甲醇和25%丙酮代替樣品。1.5山楂果皮和果肉多酚熱穩(wěn)定性實驗分別取山楂果皮和山楂果肉的甲醇提取液、山楂果皮和山楂果肉的丙酮提取 液，將提取液分別于30C、45C、60C、75C恒溫水浴3h。實驗組處理過 程如下：山楂果皮：(75%甲醇)提取液取0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml碳酸鈉溶液，然后75C水浴1

19、0min,冰浴5min,在760波長下測吸光 值對照組：取提取劑（75%甲醇）0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸鈉溶液，然后75C水浴10min，冰浴5min，在760波長下測吸光值山楂果皮：（25%丙酮）提取液取0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡， 1.5ml碳酸鈉溶液，然后75C水浴10min,冰浴5min,在760波長下測吸光 值對照組：取提取劑（25%丙酮）0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸鈉溶液，然后75C水浴10min，冰浴5min，在760波長下測吸光值山楂果肉：（75%甲醇）取提取液0.1ml依

20、次加入7.9ml水，0.5ml福林肖卡， 1.5ml碳酸鈉溶液，然后75C水浴10min,冰浴5min,在760波長下測吸光 值對照組：取提取劑（75%甲醇）0.1ml依次加入7.9ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸鈉溶液，然后75C水浴10min，冰浴5min，在760波長下測吸光值 山楂果肉：（25%）丙酮）取提取液0.4ml依次加入7.6ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml碳酸鈉溶液，然后75C水浴10min,冰浴5min,在760波長下測吸光 值對照組：取提取劑（25%丙酮）0.4ml依次加入7.6ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸鈉溶1.6數(shù)據(jù)處理利用微軟200

21、3版excel將實驗組進行熱穩(wěn)定性的方差分析2結果與分析2.1標準曲線的繪制以沒食子酸為標準，吸光值為橫坐標X,沒食子酸濃度為縱坐標Y,線性回 歸后得沒食子酸濃度Y與吸光值X的關系：由圖1可知，決定系數(shù)R2=0.9956，說明測得的沒食子酸濃度Y與吸光值乂線性 相關性良好，可以用于多酚含量測定的定量。2.2山楂果皮和果肉提取的總酚以樣品種類為橫坐標，多酚的含量為縱坐標建立坐標系，坐標系顯示樣品經(jīng) 過25%丙酮和75%甲醇后處理后提取出來的多酚的含量：口系列1whJ里含酚多圖2總酚含量圖由圖2可知：用75 %的甲醇提取山楂果皮和山楂果肉中的多酚的含量分別 是7.91176mg/l和0.24275

22、mg/l;用25 %的丙酮提取山楂果皮和山楂果肉中的多 酚的含量分別是10.40511mg/l和3.2378mg/l;在山楂果皮中提取出的多酚的含 量比山楂果肉中的多；在山楂果肉中用丙酮作為提取液提取出來的多酚含量是甲 醇作為山楂果肉多酚的提取液提取出來的多酚含量的13倍；在山楂果皮中，用丙酮提取出來的多酚是甲醇提取出來的多酚含量的1.3倍。2.3山楂果皮和果肉多酚熱穩(wěn)定性實驗重含酚多圖3實驗組多酚含量圖由圖3可以知1、用75%的甲醇作為山楂果皮中多酚的提取劑，提取出來的多 酚在75C下的含量最高，含量為8.573mg/l,低于此溫度，多酚含量隨溫度的升高 而升高；2、用75%的甲醇作為山楂果

23、肉中多酚的提取劑，提取出來的多酚在60C 下多酚的含量最高，多酚含量為3.278 mg/l,低于或者高于此溫度，多酚的含量 都會減少；3、用25%丙酮作為山楂果皮中多酚的提取劑，提取出的多酚在30C 下的含量最低，多酚含量為9.279 mg/l,高于或低于此溫度，多酚含量均升高; 4、用25%丙酮作為山楂果肉中多酚的提取劑，提取出的多酚在75C下的含量最 高，多酚含量為6.893 mg/l,低于此溫度，多酚的含量都會減少。2.4利用方差分析結果表1皮甲方差分析結果SUMMARY組觀測數(shù)求和平均方差皮甲對照32.37352770.79117590.000779023皮甲（30C）64.40.73

24、333330.000435467皮甲（45C）64.550.75833332.38667E-05皮甲（60C）64.8510.80850.0013163皮甲（75C）64.8730.81216670.000536967方差分析差異源SSdfMSFF0.05F 0.01組間組內0.027333940.013121054 0.006833522 0.000596411.457674582.8167084.313429總計0.0404549926由于FF0.01F0.05,故差異性極顯著，說明這四個溫度梯度之間存在著極 顯著的差異。說明用甲醇作為山楂果皮里面多酚的提取劑熱穩(wěn)定性極不好，由于 溫度的變

25、化而使山楂果皮里多酚的含量發(fā)生顯著的變化，從而能夠確定山楂果皮 里多酚的穩(wěn)定性隨時間的變化較大，熱穩(wěn)定性不好。表2皮丙方差分析結果方差分析：單因素方差分析SUMMARY組觀測數(shù)求和平均方差皮丙對照33.1215341.0405110.00100430C65.1750.86250.01251845C65.3890.8981670.01648560C65.8290.97150.00877675C65.8550.9758330.002227方差分析差異源SSdfMSFF0.05F 0.01組間0.09049940.0226252.4636472.8167084.313429組內0.202035220

26、.009183總計0.29253426由于F檢驗結果表明，F(xiàn)F0.01F0.05，故差異性極顯著，說明這四個溫度梯度之間存在著極 顯著的差異。說明用甲醇作為山楂果肉里面多酚的提取劑熱穩(wěn)定性極不好，由于 溫度的變化而使山楂果肉里多酚的含量發(fā)生顯著的變化，從而能夠確定山楂果肉 里多酚的穩(wěn)定性隨時間的變化較大，熱穩(wěn)定性不好。表4肉丙方差分析結果SUMMARY組觀測數(shù)求和平均方差肉丙對照30.971170.3237230.02266730C63.0080.5013330.00975445C63.0280.5046670.00805460C63.4010.5668330.00086175C63.6150.60250.022249方差分析差異源SSdfMSFF0.05F0.01組間0.17306240.0432653.8085492.8167084.313429組內0.249922220.01136總計0.42298426由于F0.05 F F0.01，故差異性顯著，同時也可判斷這種差異不是由取樣 誤差引起的，而是存在本質差異。表明用丙酮作為山楂肉里面多酚的提取劑熱穩(wěn) 定性不好。3結果通過實驗可以知道：1、山楂果皮中，用25%的丙酮作為多酚的提取劑，提 取出來的多酚比用75%的甲醇作為多酚的提取劑提取出來的多酚的熱穩(wěn)定性好； 2、山楂果肉中，用25%的丙酮