槐花藥材的含量測(cè)定及方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)報(bào)告(共7頁(yè))

1、槐花藥材的含量(hnling)測(cè)定及方法學(xué)驗(yàn)證姓名(xngmng)：廖卓* 學(xué)號(hào):11071105一、實(shí)驗(yàn)(shyn)目的1、掌握比色法測(cè)定槐花藥材中總黃酮含量的方法及原理。2、熟悉槐花藥材的含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證。二、實(shí)驗(yàn)原理槐花為豆科植物SophorajaponicaL的干燥花及花蕾1。夏季花開放或花蕾形成時(shí)采收，及時(shí)干燥，除去枝，梗及雜質(zhì)。前者習(xí)稱“槐花”，后者習(xí)稱“槐米”?；被ㄋ幉牡闹饕行С煞菔屈S酮類化合物，其中蘆丁的含量最高，所以槐花藥材的鑒別及含量測(cè)定均以蘆丁為指標(biāo)成分。 蘆?。–27H30O16,610.51） 黃酮類化合物在堿性條件下與鋁鹽發(fā)生配位反應(yīng)，生成紅色的配位化合物，使

2、得最大吸收波長(zhǎng)紅移至可見光區(qū)，且具有較高的吸收系數(shù)。黃酮類與鋁鹽的配位反應(yīng)是定量完成的，因此可采用比色法測(cè)定槐花藥材中總黃酮的含量，避免其他非黃酮成分對(duì)測(cè)定準(zhǔn)確度的影響2。三、儀器與試藥儀器：紫外可見分光光度計(jì),100ml容量瓶，25ml容量瓶、10ml移液管，超聲波清洗器、漏斗、玻璃棒試劑：槐花藥材，蘆丁對(duì)照品，5%亞硝酸鈉溶液，10%硝酸鋁溶液，氫氧化鈉試液，乙醇。 四、實(shí)驗(yàn)步驟總黃酮含量(hnling)測(cè)定（1）對(duì)照品溶液(rngy)的制備：取蘆丁對(duì)照(duzho)品50mg，精密稱定，置于25ml量瓶中，加60%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻。精密量取10

3、ml,置于100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得濃度為0.2mg/ml的蘆丁對(duì)照品溶液。（2）檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：取A對(duì)照品溶液，在400600nm波長(zhǎng)進(jìn)行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)光譜圖最大吸收，選定波長(zhǎng)說(shuō)明：一般選擇待測(cè)樣品化合物吸收度最大，即吸收曲線最高點(diǎn)為測(cè)定波長(zhǎng)?；衔锏淖畲笪辗錷ax或該化合物經(jīng)顯色后的最大吸收峰，通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行掃描后確定或通過(guò)二極管陣列檢測(cè)來(lái)確定，并與該化合物文獻(xiàn)值相比較應(yīng)一致。在最大吸收峰處測(cè)定時(shí)靈敏度高，誤差小。因此一般情況下選擇最大吸收波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制不同濃度的A對(duì)照品溶液，考察線進(jìn)樣量與峰面積的性關(guān)系、線性范圍、相關(guān)系數(shù)等。以進(jìn)樣量為橫

4、坐標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備步驟：精密量取對(duì)照品溶液1ml,2ml,3ml,4ml,5ml與6ml，分別置于6個(gè)25ml量瓶中，各加水使成6.0ml，精密加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，再加10%硝酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，不加對(duì)照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分光光度法，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度C（mg/ml） 0.000 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048吸光度A（4）、供試品溶

5、液(rngy)的制備：將槐花(hui hu)研碎，取粗粉約1g，精密(jngm)稱定，置于具塞錐形瓶中，加60%乙醇120ml，60C超聲30分鐘，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。（5）、測(cè)定法：精密量取供試品溶液3ml，置25ml量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“加水使成6.0ml”起同法測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含蘆丁的重量。槐花按干燥品計(jì)算，含總黃酮以蘆丁（C27H30O16）計(jì)，槐花不得少于8.0%，槐米不得少于20.0%。樣品濃度C（mg/ml） 1 2 3 平均值吸光度A 濃度C（mg/ml） 百分含量（%）

6、五、方法學(xué)考察1、加樣回收試驗(yàn)：一般回收率要求在95.0105.0。詳解(xin ji)：加樣回收試驗(yàn)即于已知被測(cè)成分含量的成藥中再精密加入一定量的被測(cè)成分純品，依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與原樣品中含測(cè)成分之差，除以加入純品量計(jì)算回收率。此法不用制備空白對(duì)照，模擬真實(shí)性好。加樣回收試驗(yàn)(shyn)操作方法：取樣品(yngpn)6份精密稱定每份0.5g，精密加入蘆丁對(duì)照品適，同按照供試品溶液的制備法和測(cè)定法步驟在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各濃度的吸光度，計(jì)算含量。注意事項(xiàng)：（1）、純品的加人量與取樣量中被測(cè)成分之和必須在標(biāo)淮曲線線性關(guān)系范圍之內(nèi)；（2）、外加純品的量要適當(dāng)，過(guò)小則引起較大的相對(duì)誤差，過(guò)大則干擾

7、成分相對(duì)減少，真實(shí)性差。（3）、一般加入量與所取樣品含量之比控制在1：1左右。（4）、做加樣試驗(yàn)時(shí)，有人將對(duì)照品加至制備好的供試品溶液中，這是不對(duì)的，這樣不能考察提取、純化過(guò)程中被測(cè)成分是否損失，不能代表含量測(cè)定方法的回收率。因此要在稱樣開始時(shí)就加入對(duì)照品！分組 吸光度 加入對(duì)照品 實(shí)驗(yàn)前樣 實(shí)驗(yàn)測(cè)得樣 回收率% 平均回收率%（A） 含量/mg 品含量/mg 品含量/mg123456 2、精密度試驗(yàn)(shyn)：是指用相同(xin tn)方法對(duì)同一樣品溶液進(jìn)行多次測(cè)定，考察各測(cè)定值彼此接近的程度。具體如下：取同一樣品，連續(xù)測(cè)定五次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD不得大于3.0。具體(jt)如下：精密度試驗(yàn)

8、操作方法：取同一槐花樣品溶液5 ml ，在500 nm處測(cè)吸光度，重復(fù)測(cè)定5次，算出RSD測(cè)試次數(shù) 1 2 3 4 5吸光度A3、重復(fù)性試驗(yàn)：是指在同一條件下對(duì)同一批樣品，從樣品供試品液制備始，制備多份供試品溶液。每份供試品液再分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算其含量的平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）。具體如下：同一批號(hào)樣品，分別取低、中、高三個(gè)樣品量，每個(gè)樣品量3份，按樣品測(cè)定方法操作?；蛟谝?guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD不得大于2.0。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)操作方法： 精密稱取藥材樣品1g，精密稱定，共6份，按供試品制備方法制成供試品溶液按測(cè)定

9、法分別在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液的吸光度。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含蘆丁的重量（ug）并求RSD值。樣品 1 2 3 4 5 6吸光度A含量（ug）4、穩(wěn)定性試驗(yàn)(shyn)：考察不同時(shí)間(shjin)點(diǎn)是否對(duì)測(cè)定方法和測(cè)定結(jié)果有影響，用同一被測(cè)樣品的供試液在不同間隔時(shí)間用同一測(cè)定方法所得到的測(cè)定結(jié)果。一般考察36小時(shí)，這里(zhl)考察60min計(jì)算RSD%不得大于3.0。對(duì)照和樣品均要做.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)操作方法：取蘆丁對(duì)照品和樣品溶液5ml，于0，15，30，45，60 min，測(cè)定吸光值，計(jì)算吸光度平均值，求出RSD，判斷樣品的穩(wěn)定性。時(shí)間（min） 0 15 30 45 60 平均值

10、吸光度A六、總結(jié)七、注意事項(xiàng)(1)比色法中顯色反應(yīng)及條件對(duì)形成的穩(wěn)定配位化合物有一定影響，因此實(shí)驗(yàn)中需要遵守平行操作原則：如配置標(biāo)準(zhǔn)系列溶液時(shí)，空白與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中加入各種反應(yīng)試劑的量、順序、反應(yīng)時(shí)間與溫度等操作步驟均應(yīng)保證平行；所有加入的反應(yīng)試劑均應(yīng)使用刻度吸量管精密量取，準(zhǔn)確加入。(2)注意吸收池（比色皿）的配比使用。八、附錄1.實(shí)驗(yàn)試劑配制5%亞硝酸鈉溶液:取2.5g亞硝酸鈉，加水溶解成50ml,搖勻即得。10硝酸鋁溶液：取5.0g硝酸鋁，加水溶解成50ml,搖勻即得。氫氧化鈉(qn yn hu n)試液：取氫氧化鈉8.6g，加水溶成200ml，即得。參考文獻(xiàn)1中國(guó)(zhn u)藥典.一部s.2010:333.2范國(guó)榮，槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量(zhling)分析.藥物分析實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)2011.11 內(nèi)容總結(jié)（1）槐花藥材的含量測(cè)定及方法學(xué)驗(yàn)證姓名