HLC活性成分教學(xué)教材

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。HLC活性成分-一、HLC活性成分墨旱蓮是菊科鱧腸屬植物鱧腸的干燥地上部分，具有滋補(bǔ)肝腎，涼血止血的功能，研究證明墨旱蓮含有三萜皂苷類、黃酮類、揮發(fā)油、噻吩類、香豆草醚類及甾體類等化學(xué)成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明墨旱蓮具有止血、保肝、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，黃酮類成分也被認(rèn)為是墨旱蓮止血、調(diào)節(jié)免疫的藥效物質(zhì)。三萜皂苷墨旱蓮中三萜皂苷分別為齊墩果烷型和蒲公英賽烷型兩種類型。三萜皂苷類成分主要有eclalbasaponins(-、),旱蓮皂苷A、旱蓮皂苷B、旱蓮皂苷C、旱蓮皂苷D、刺囊酸、齊墩果酸、熊果酸等。趙越平

2、等1研究中藥墨旱蓮EcliptaprostrataL.中的三萜皂苷化合物,分離并鑒定了5個(gè)三萜皂苷,其中1,2,3為已知化合物eclalbasaponinsII,I和III2，4和5為新化合物，結(jié)構(gòu)分別為:3-O-D-吡喃葡糖(12)-D-吡喃葡糖-16-乙氧基-齊墩果酸-28-O-D-吡喃葡糖苷(4)和3-O-(2-O-硫?；?D-吡喃葡糖)(12)-D-吡喃葡糖-刺囊酸-28-O-D-吡喃葡糖苷(5)。且經(jīng)稻瘟霉生物活性測(cè)試模型跟蹤篩選表明,皂苷1和5具有誘導(dǎo)稻瘟霉菌絲變形活性,其最小變形濃度分別為197mol/L和30mol/L，結(jié)構(gòu)如圖1。提取溶劑選擇苷元為三萜類的皂苷稱為三萜皂苷，主

3、要存在于五加科、豆科、遠(yuǎn)志科及葫蘆科等，其種類比甾體皂苷多，分布也更為廣泛。組成皂苷的糖常見(jiàn)的有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸等。苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，由于苷元具有不同程度的親脂性，糖鏈具有較強(qiáng)的親水性，使皂苷成為一種表面活性劑，水溶液振搖后能產(chǎn)生持久性的肥皂樣泡沫。三萜皂苷多具有羧基，因此大多呈酸性，少數(shù)呈中性。由于糖分子的引入，皂苷的極性基團(tuán)明顯增多，致使極性增強(qiáng)，故具有較大的極性而易溶于醇類溶劑、含水醇及水。皂苷在提取的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生次級(jí)苷，水溶性下降，溶于中等極性有機(jī)溶劑（醇，乙酸乙酯）。因此可以判斷，HLC三萜皂苷主要存在于醇提物中，水提物中也存在一部分。生物

4、活性張?jiān)品宓?006在綜合許多文獻(xiàn)研究的基礎(chǔ)上，總結(jié)出了三萜皂苷類物質(zhì)的生物活性：（1）抗癌活性：三萜皂苷對(duì)多種癌細(xì)胞系有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖；（2）降血糖、降血脂：齊墩果酸型三萜皂苷對(duì)糖尿病小鼠可產(chǎn)生明顯的降糖作用，從構(gòu)效關(guān)系看，齊墩果酸的3位單糖氧苷是降血糖的基本結(jié)構(gòu)；（3）保肝作用：三萜皂苷能顯著降低CCl4所致的肝損傷，抑制天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，減輕肝臟組織脂肪變性程度，對(duì)酒精引起的肝損傷具有干預(yù)、保護(hù)作用；（4）抗病毒作用：三萜皂苷可通過(guò)抑制病毒吸附、復(fù)制及酶活等途徑，達(dá)到抑制或殺傷病毒之功效；（5）保護(hù)心腦血管系統(tǒng)：三萜皂苷可以抑制血小板聚集，抗血栓

5、形成，改善神經(jīng)功能癥狀，保護(hù)腦損傷，抗心肌缺血，防止心肌損傷；（6）抗炎、抗過(guò)敏作用：三萜皂苷具有良好的消炎活性，豆科植物中的三萜皂苷還可抑制組織中白三烯（LT）C4的釋放，從而抑制皮膚過(guò)敏反應(yīng)。有資料顯示：齊墩果酸具有抗炎、鎮(zhèn)靜、防腫瘤等作用，是治療急性黃膽性肝炎和慢性遷延性肝炎的有效藥物。熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)?、降低血糖等多種生物學(xué)效應(yīng)。其生物活性還有待研究與證實(shí)。齊墩果酸熊果酸含量測(cè)定中藥中三萜類成分的測(cè)定一般采用分光廣度法，該方法結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高。但需針對(duì)不同的樣品進(jìn)行顯色條件優(yōu)化。羅漢果中三萜皂苷的比色測(cè)定方法：用香草醛-高氯酸為顯色劑，最佳條件為:

6、加入待測(cè)試樣后,加熱揮去溶劑,再加入0.2mL新制的5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8mL高氯酸試劑,在60恒溫水浴加熱15min,冷卻,搖勻,在波長(zhǎng)為595nm處測(cè)定。2.黃酮類文獻(xiàn)報(bào)道墨旱蓮黃酮類成分主要有芹菜素,木犀草素、槲皮素以及芹菜素-7-氧-葡萄糖苷,木犀草素-7-氧-葡萄糖苷等。劉翔等2007試驗(yàn)測(cè)定了不同產(chǎn)地墨旱蓮中的總黃酮含量，總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.780%-2.469%之間，差別較大。2.1提取溶劑選擇王雪梅等2009采用85乙醇提取旱蓮草中黃酮類物質(zhì)，樣品中總黃酮得率為3.96%，并通過(guò)體外抗氧化活性研究，證實(shí)旱蓮草中黃酮類物質(zhì)有很好的清除氧自由基作用,并且能有效抑制MDA生

7、成,具有很好的抗脂質(zhì)過(guò)氧化及保護(hù)DNA免受自由基氧化損傷的能力。林朝朋等2004采用水提法對(duì)墨旱蓮的莖部和葉中黃酮類化合物的提取率進(jìn)行了對(duì)比，證明墨旱蓮葉的黃酮類化合物提取率高于莖部的黃酮類化合物提取率，并通過(guò)正交試驗(yàn)，獲得一次提取墨旱蓮全草黃酮類物質(zhì)的最佳水提工藝條件：提取溫度：90；提取時(shí)間：2.5h：料液比：1:30，在此水平下，墨旱蓮黃酮類化合物提取率為3.08。林朝朋等2005考察各種提取條件對(duì)墨旱蓮總黃酮乙醇提取和水提取結(jié)果的影響，并通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化工藝條件，得到最佳醇提工藝條件是：提取溫度80、提取時(shí)間3h、乙醇濃度70；最佳水提工藝條件是：提取溫度90、提取時(shí)間2.5h、料液比

8、1：30。在此條件下，得到的墨旱蓮總黃酮的乙醇提取得率是2.97，稍高于水提取得率2.87。證明：墨旱蓮總黃酮可以用乙醇提取，也可以用水提取。2.2生物活性張梅等1997考察了木樨草素和槲皮素對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響及對(duì)白介素I(IL一2)生成的影響，發(fā)現(xiàn)木樨草素和槲皮素在0.010.0001ugmL濃度范圍內(nèi)，可顯著促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化并增強(qiáng)IL一2的產(chǎn)生，結(jié)果提示:旱蓮草具有免疫調(diào)節(jié)作用的分子基礎(chǔ)是早蓮草中的黃酮成分一木樨草素和槲皮素。林朝朋等2005通過(guò)測(cè)定小鼠血清SOD、GSH-Px活性和MDA含量的變化,發(fā)現(xiàn)墨旱蓮黃酮類提取物可顯著增強(qiáng)小鼠血清SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量;

9、并可有效地清除羥自由基和超氧自由基，具有明顯的抗自由基作用及體內(nèi)抗氧化功能。含量測(cè)定準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.0132g,用70%的乙醇溶解轉(zhuǎn)移至50ml的容量瓶(濃度為0.264mg/ml),精密量取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0ml置于25ml比色管中,用30%乙醇溶液補(bǔ)充至10ml加入5%亞硝酸鈉溶液0.7ml搖勻,放置5min后,加入10%硝酸鋁溶液0.7ml搖勻,5min后再加入1mol/L氫氧化鈉溶液5ml搖勻,用30%乙醇溶液稀釋至刻度,10min后在510nm處測(cè)定吸光度,以蒸餾水為空白參比。以蘆丁濃度對(duì)吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算回歸方程。吸取2ml旱

10、蓮草提取液于25ml比色管中,按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作方法測(cè)定吸光度Y值,并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程換算成濃度X(mg/ml)。香豆草醚類從旱蓮草中已分離得到蟛蜞菊內(nèi)酯,去甲蟛蜞菊內(nèi)酯,異去甲蟛蜞菊內(nèi)酯,去甲蟛蜞菊內(nèi)酯葡萄糖苷及coumestan。噻吩類成分此類成分為墨旱蓮中的脂溶性成分,分為噻吩、二聯(lián)噻吩和三聯(lián)噻吩化合物,主要有5-(丁烯-3-炔-1-基)2,2-二聯(lián)噻吩5-(3-buten-1-ynyl)-2,2-bithienyl、-三聯(lián)噻吩(-terthienyl)、-醛基三聚噻吩(-formylterthienyl)等。揮發(fā)油類成分營(yíng)大禮，2008揮發(fā)油類成分主要類型為單萜及倍半萜,其主要

11、成分是:1,5,5,8-四甲基-12-氧雙環(huán)9,1,0十五炭-3,7-雙烯,6,10,14-三甲基-2-十五酮,-愈創(chuàng)木烯,新二氫香芹醇,3,7,11,15-四甲基-2-十六烯-1-醇,十六烷酸,環(huán)氧石竹烯及十七烷。甾體類成分和其他此外墨旱蓮中還含有胡蘿卜苷、豆甾醇-3-氧葡萄糖苷O和-谷甾醇等甾體化合物,還有鞣質(zhì)、維生素A等。多糖許小華等2010研究墨旱蓮多糖的最佳水提工藝，以多糖含量及提取率為指標(biāo)，最佳工藝參數(shù)為：料水比1:10,提取3次,每次3.5h,提取溫度100。在此條件下,測(cè)得墨旱蓮多糖提取率為11.39%,多糖含量為18.43%。許瑞波等2011在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，優(yōu)化的提取墨

12、旱蓮多糖的適宜工藝條件為：料液比1:15、提取溫度90、提取時(shí)間1h、提取3次;并且對(duì)墨旱蓮多糖(PEA)與墨旱蓮黃酮類化合物(FEA)的抗氧化活性進(jìn)行比較，結(jié)果表明PEA、FEA對(duì)兩種自由基都具有良好的清除能力,而且對(duì)-OH的清除能力大于對(duì)O-2.的清除能力。參考文獻(xiàn)趙越平,湯海峰,蔣永培,王忠壯,易楊華,雷其云.中藥墨旱蓮中的三萜皂苷J(rèn).藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,09:660-663營(yíng)大禮.墨旱蓮化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展J.中國(guó)藥房,2008,19(26):2876-2877.劉翔,陳曉風(fēng),欒雨.不同產(chǎn)地墨旱蓮中總黃酮含量測(cè)定比較J.江蘇中藥,2007,10:65-66.張?jiān)品?魏東,鄧雁如,郭祀遠(yuǎn),陳峰.三萜皂苷的生物活性研究新進(jìn)展J.中成藥,2006,09:1349-1353.張梅,邸曉輝,劉梅.旱蓮草中黃酮類成分的免疫調(diào)節(jié)作用J.中草藥,1997,10:615.王雪梅,張建勝,戴云,高云濤.旱蓮草總黃酮的提取及其體外抗氧化活性研究J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,02:356-358.林朝朋,芮漢明,許曉春.墨旱蓮總黃酮提取工藝的研究J.中國(guó)食品添加劑,2005,01:25-28+32.林朝朋,芮漢明,潘艷麗.墨旱蓮黃酮類化合物的水提取研究J.廣州食品工業(yè)科技,2004,03: