hbv基因與耐藥檢測檢驗科版課件

1、產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇HBV分型和耐藥突變基因檢測產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇第1頁，共21頁。一、基因芯片原理及特點二、HBV分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介三、亞能HBV分型與耐藥突變基因檢測的運用及臨床意義四、亞能HBV分型與耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢第2頁，共21頁。一、基因芯片原理及特點第3頁，共21頁。基因芯片(gene chip)：是多種特定的寡核苷酸序列為探針，固定于支持物表面上而成的二維DNA陣列?；驹恚豪脡A基互補配對原則，通過目的DNA與探針特異結(jié)合來判斷目的DNA的序列信息。 PCR+反向點雜交（RDB）基因芯片原理第4頁，共21頁?；蛐酒夹g(shù)特點 高靈敏度PCR 高特異性-核酸分子雜交

2、高通量-膜芯片上排列多種探針 結(jié)果易判讀-化學顯色 第5頁，共21頁。二、HBV分型與耐藥突變基因檢測產(chǎn)品簡介第6頁，共21頁。乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測試劑盒 （PCR-反向點雜交法）注冊號：國食藥監(jiān)械（準）字2011第3401177號專利號：ZL200710073933.3國內(nèi)首個全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑第7頁，共21頁。 PCR擴增：在S基因和P基因重疊區(qū)段設(shè)計PCR引物，PCR擴增片段既包含耐藥突變位點又能進行基因分型。P基因：耐藥突變檢測編碼DNA合成酶（包含逆轉(zhuǎn)錄酶rt），抗病毒藥物作用靶區(qū)，耐藥基因突變熱點區(qū)S基因：分型檢測技術(shù)原理第8頁，共21頁。采集

3、樣本雜交顯色結(jié)果判讀0.5小時3小時1.5小時提取DNAPCR擴增操作流程全程僅需6小時第9頁，共21頁。儀器名稱參數(shù)及要求臺式高速離心機轉(zhuǎn)速13000rpm，轉(zhuǎn)子規(guī)格：1.5mL冰箱雙溫區(qū)：4/-18；雙門 移液器1-10L,10-100L, 100-1000L干式恒溫器孔徑：1.5 mL；控溫范圍：室溫+5-100PCR儀0.2 mL，48或96孔分子雜交儀控溫范圍：環(huán)境溫度+5-100，可調(diào)；精度：0.1檢測儀器第10頁，共21頁。試劑盒性能指標準確性：檢測105例臨床慢性HBV感染陽性樣本，結(jié)果與測序比較顯示為相同的 基因型和耐藥突變類型，準確率為100%。特異性：檢測50例臨床HBV

4、陰性樣本結(jié)果全部為陰性；檢測非HBV感染性病原體DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）和HIV，結(jié)果均為陰性。靈敏度：能檢測血清HBV的最低檢出限為1.0103IU/mL。精密度：檢測2.0103IU/mL的血清HBV，批內(nèi)和批間的一致性好。穩(wěn)定性：產(chǎn)品有效期為6個月，在有效期內(nèi)產(chǎn)品性能穩(wěn)定。第11頁，共21頁。本產(chǎn)品檢測的樣本為血清或血漿；要求待檢樣本的HBV DNA載量1.0103copies/mL。樣本要求樣本保存為了避免DNA降解，制備好的血清或血漿，避免長時間室溫放置；28保存不超過48小時；-18以下保存不超過半年，避免反復(fù)凍融。注意事項第12頁，共21頁。三、亞能HBV分型與耐藥突變

5、基因檢測的運用及臨床意義第13頁，共21頁。亞能HBV產(chǎn)品應(yīng)用抗病毒治療前、治療中HBV的基因分型和耐藥突變基因檢測 區(qū)分我國常見的HBV-B、C、D基因型 涵蓋我國4種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、阿德福韋酯、 替比夫定、恩替卡韋）7個耐藥位點的16種突變：rtL180M、rtM204V/I、rtA181V/T、rtN236T、rtM250I/L/V、rtS202G/I、rtT184I/S/A/F/L。第14頁，共21頁。HBV基因型檢測臨床意義 HBeAg陽性患者中，B基因型對IFN-治療的應(yīng)答率高于C基因 型，A基因型高于D基因型。 與C基因型感染者相比，B基因型感染者較早出現(xiàn)HBeA

6、g血清學 轉(zhuǎn)換，較少進展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細胞癌；預(yù)測干擾素應(yīng)答和疾病進展情況慢性乙型肝炎防治指南（2010年）第15頁，共21頁。HBV耐藥檢測臨床意義抗病毒治療前，預(yù)存耐藥檢測 協(xié)助臨床選擇合理抗病毒藥物，實現(xiàn)個體化抗病毒治療、提高抗病毒療效、降低耐藥發(fā)生率。 抗病毒治療中，全程耐藥監(jiān)測 全程監(jiān)測耐藥，利于早期挽救治療，為調(diào)整治療方案提供理論支持。全程監(jiān)測耐藥，為調(diào)整治療方案提供理論依據(jù)第16頁，共21頁。四、亞能HBV分型耐藥突變檢測產(chǎn)品優(yōu)勢第17頁，共21頁。全基因序列測定法限制性片段長度多態(tài)性分析法（RFLP）實時熒光PCR法亞能HBV 基因芯片靈敏度靈敏度低，最低檢測限為

7、20%；靈敏，最低檢測限為5%；靈敏，最低檢測限為5%；靈敏，最低檢測限為5%；檢測位點所有突變位點已知耐藥位點僅能檢測rt204位點我國4種核苷類藥物7個耐藥位點的16種突變評價1、測序試劑大多未獲得SFDA批準；2、操作繁瑣、技術(shù)難度大、儀器要求高、不易在臨床開展。1、需針對每一個待測突變位點，分別設(shè)計特異性內(nèi)切酶反應(yīng)體系；2、一些突變可能生成新的酶切位點，或破壞原有酶切位點，必須謹慎看待檢測結(jié)果。結(jié)果僅提示拉米夫定耐藥。1、是首個獲得SFDA批準的，同時進行HBV分型、耐藥檢測的試劑盒；2、準確性好、6小時出結(jié)果、結(jié)果肉眼可見。儀器要求低，操作便捷、易于臨床使用。HBV耐藥檢測產(chǎn)品比較第18頁，共21頁。亞能HBV分型與耐藥突變檢測優(yōu)勢 高 效：SFDA批準，國內(nèi)首個HBV分型與耐藥突變基因同時檢測的試劑盒； 檢測位點廣：能檢測我國 4種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、 阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋）7個耐藥位點的16種突變； 靈敏度高： 1.0103IU/mL，最低檢測限為5%； 快 速：6小時即可完成檢測； 易 用：操作簡易、結(jié)果可直接讀取，設(shè)備要求低，易于臨床使用。 第19頁，共21頁。國內(nèi)首個全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑；6h全面呈現(xiàn)：4種核苷（酸）相關(guān)的7個耐藥位點16種突變，區(qū)分HBV- B、C、D三種基因型