安捷倫液相基本操作教學(xué)課件

1、安捷倫液相的基本操作目錄一.色譜基礎(chǔ)知識(shí)二.Agilent液相色譜儀基本操作三.常見(jiàn)色譜故障一.色譜基礎(chǔ)知識(shí)1.色譜法的分離原理 溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。2. HPLC的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn) 高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1

2、小時(shí)。高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在L數(shù)量級(jí)。應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。二.Agilent液相色譜儀基本操作流動(dòng)相瓶排氣閥電源開(kāi)關(guān)二元泵自動(dòng)進(jìn)樣器柱溫箱檢測(cè)器進(jìn)入工作站主界面編輯完整方法儀器方法設(shè)置方法信息儀器/采集數(shù)據(jù)分析運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表儀器方法設(shè)置儀器方法設(shè)置儀器方法設(shè)置儀器方法設(shè)置單次樣品：樣品命名工作站使用序列樣品：命名與序列表設(shè)置工作站使用打開(kāi)儀器1脫機(jī)數(shù)據(jù)文件夾序列樣

3、品數(shù)據(jù)單次樣品數(shù)據(jù)色譜圖樣品數(shù)據(jù)色譜圖編輯色譜峰數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析調(diào)節(jié)積分參數(shù)數(shù)據(jù)分析報(bào)告打印報(bào)告三.常見(jiàn)色譜故障常見(jiàn)色譜故障-基線噪音可能原因:a、檢測(cè)池臟 b、檢測(cè)池?zé)裟芰肯陆?c、由泵引起的脈沖 d、檢測(cè)器上的溫度效應(yīng) e、檢測(cè)其中有氣泡通過(guò)常見(jiàn)色譜故障-基線漂移可能原因:a、梯度洗脫所用溶劑有吸收 b、流動(dòng)相臟 c、色譜柱沒(méi)有用流動(dòng)相平衡 d、系統(tǒng)中污染物溢出 e、實(shí)驗(yàn)溫度不穩(wěn)定常見(jiàn)色譜故障-拖尾峰 可能原因： a、柱效降低或有柱塌陷 b、進(jìn)樣體積過(guò)大 c、柱外擴(kuò)散效應(yīng) d、堿性基質(zhì)與硅羥基作用 e、重金屬反應(yīng)常見(jiàn)色譜故障-前伸峰可能原因： a、色譜柱過(guò)載 b、進(jìn)樣體積過(guò)大

4、c、大峰之前有未徹底分離 的小峰常見(jiàn)色譜故障-負(fù)峰可能原因： a、樣品吸收比流動(dòng)相吸收小 b、溶解樣品的溶劑通過(guò)色譜柱平衡被破壞 c、示差檢測(cè)器中最常見(jiàn)，溶質(zhì)的折光指數(shù)小 于溶劑的折光指數(shù)。 常見(jiàn)色譜故障-鬼峰 常見(jiàn)原因是流動(dòng)相臟，尤其是水相。要求使用超純水，最多兩天就換 常見(jiàn)色譜故障-雙峰 可能原因：a、柱頭塌陷或柱床運(yùn)動(dòng) b、柱前濾芯堵塞 c、組分共流出 d、樣品量過(guò)大 f、進(jìn)樣器的進(jìn)樣流路存在分叉流路 常見(jiàn)色譜故障-峰擴(kuò)展 可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷 b、進(jìn)樣體積過(guò)大 c、流動(dòng)相粘度大 常見(jiàn)色譜故障-壓力過(guò)高 可能原因： a、色譜柱進(jìn)樣口過(guò)濾芯被污染 b、沖洗閥過(guò)濾芯被污染 c、色譜柱被污染 d、連接管路的毛細(xì)管堵塞 e、進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子上凹槽被堵塞 f、進(jìn)樣針或針座被阻塞 常見(jiàn)色譜故障-壓力過(guò)低 可能原因： a、溶劑進(jìn)樣口過(guò)濾芯堵塞 b、連接管路泄漏 c、溶劑或流速改變 d、主動(dòng)閥失靈、四元比例閥失靈或單向閥失靈 e、色譜柱失效（固定相流失） 謝謝！人有了知識(shí)，就會(huì)具備各種分析能力，明辨是非的能力。所以我們要勤懇讀書(shū)，廣泛閱讀，古人說(shuō)“書(shū)中自有黃金屋?！蓖ㄟ^(guò)閱讀科技書(shū)籍，我們能豐富知識(shí)，培養(yǎng)邏輯思維能力；通過(guò)閱讀文學(xué)作品，我們能