細胞檢測的研究

1、細胞檢測方案匯報1HIV-抗體檢測方法 （一）酶聯(lián)免疫吸附測定法 采用雙抗原夾心ELISA方法檢測血清或血漿標本中人類免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗體，預(yù)包被高純度基因重組HIV（1+2）型抗原，可與標本中的抗-HIV抗體反應(yīng)，加入HRP標記HIV（1+2）型抗體抗原結(jié)合，形成抗原抗體酶標抗原復(fù)合物，然后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。通過酶標儀檢測吸光度（OD值），根據(jù)OD值判斷HIV抗體的存在與否。 2配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水25倍稀釋至1000ml備用。編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板設(shè)陰性對照2孔、陽性對照3孔，空白對照2孔。加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標本、陰性、陽

2、性對照100l，用封板膜封板后置37溫育60min。洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇5次程序，洗板后在干凈紗布上拍干。加酶：每孔加酶結(jié)合物100l（空白對照孔除外），充分混勻，用封板膜封板后置37溫育30min。洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇5次程序，洗板后在干凈紗布上拍干。顯色：每孔加入底物緩沖液50l，TMB 50l，輕輕振蕩混勻，封板后置37避光顯色10min。測定：每孔加終止液50l，輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標儀波長為450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630 nm），空白調(diào)零，讀取各孔OD值。3人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體診斷試劑盒試劑盒組成：、HIV酶標

3、板；、HIV酶標試劑；、HIV（1+2）型陽性及陰性對照血清；、顯色劑A液和B液；、此外還有濃縮洗滌液、終止液、自封袋、封板膜、說明書等。4HIV-抗體檢測方法（二）金標法檢測 原理 利用雙抗原夾心法檢測HIV抗體。標本加入反應(yīng)板，若標本中含有HIV抗體時，先與金標抗原反應(yīng)，形成抗體-金標抗體復(fù)合物，在虹吸作用下向前移動，遇到包被抗原形成抗原-抗體-金標抗原復(fù)合物，并出現(xiàn)紅色沉淀線。包被膜上同時帶有一條質(zhì)控包被線作為對照，所以當(dāng)出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線和一條（或兩條）紅色反應(yīng)線時判斷為陽性。當(dāng)待測標本中無HIV抗體時，只出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線則判斷為陰性。作為質(zhì)控，不管結(jié)果為陽性或陰性，都會出現(xiàn)一條紅色

4、質(zhì)控線。如無紅色質(zhì)控線（或只有反應(yīng)線）出現(xiàn)，則實驗無效。 5（1）、撕開包裝有HIV-1+2抗體檢測板的袋，取出檢測板水平放置于實驗臺上。（2）、用塑料吸管吸2-3滴血清標本（70-100微升）加入標本孔中。（3）、15-30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。10、結(jié)果判斷（1）、陽性：出現(xiàn)兩條或三條紅線均為陽性反應(yīng)。（2）、陰性：僅出現(xiàn)質(zhì)控一條紅線，則實驗結(jié)果為陰性。（3）、無效：如無紅線（或只有反應(yīng)線）出現(xiàn)，表明實驗無效，須重新檢測。質(zhì)量控制：陰性對照顯示為陰性；陽性對照顯示為陽性。6HBV-DNA熒光定量PCR檢測采用PCR方法結(jié)合熒光探針的體外擴增和檢測技術(shù)，適用于檢測人臨床血清或血漿樣本中的乙型肝炎病

5、毒DNA 儀器：Fluo Cycle型核酸擴增熒光檢測儀為上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。HBV-DNA熒光定量試劑盒采用上?？迫A生物工程股份有限公司產(chǎn)品。 熒光探針實時檢測定量PCR方法。從血清中提取HBV-DNA將其加入反應(yīng)管，放入擴增儀進行擴增，反應(yīng)結(jié)束后由電腦自動分析結(jié)果。7EBV-DNA熒光定量PCR檢測 簡單介紹 EB病毒（EBV）是在研究非洲兒童淋巴瘤（BL）時，從瘤細胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)的一種病毒，時傳染性單核細胞增多癥的病源，并與BL和鼻咽癌有關(guān)。儀器試劑： EBV-DNA 熒光檢測試劑盒 Fluo Cycle型核酸擴增熒光檢測儀EBV-DNA 熒光檢測試劑盒8CMV的檢測方法 巨細胞

6、病毒感染是先天性感染疾病的最常見的病因，能引起胎兒、嬰兒嚴重損害，甚至死亡。尤其重要的是導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的后遺癥 常用方法有：（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測孕婦血清巨細胞病毒IgG、IgM；（2）孕婦宮頸脫落細胞或尿液涂片行Giemsa染色后，（3）DNA分子雜交技術(shù)檢測巨細胞病毒DNA， （4）PCR技術(shù)擴增巨細胞病毒DNA，短時間內(nèi)獲滿意結(jié)果。 9血清巨細胞病毒IgG、IgM 采用酶聯(lián)免疫間接法原理定性檢測人血清中的人類巨細胞病毒IgG抗體（HCMV-IgG），以純化人類巨細胞病毒抗原包被酶聯(lián)板。待檢血清中的人類巨細胞病毒與包被抗原反應(yīng)，再與酶標記抗人IgG抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗體復(fù)

7、合物。加底物TMB顯色，在酶標儀上比色后根據(jù)吸光度（A值）判定有無人類巨細胞病毒IgG抗體的存在?；緝x器：酶標儀 洗板機10上?？迫A酶標儀11上?？迫A洗板機12乙肝表面抗原定量（HBSAg）酶聯(lián)免疫吸附實驗 設(shè)備和材料 酶標儀: KHB ST-360 洗板機: KHB ST-36W 精確移液器:單通道可調(diào)移液器40-200ul一支 高品質(zhì)蒸餾水乙型肝炎病毒抗原（HBSAg）診斷試劑盒 13乙型肝炎病毒抗原（HBSAg）診斷試劑盒14（三）.操作流程1.每孔加入待測標本50ul，設(shè)陰陽性對照各兩孔，每孔加入陰性對照（或陽性對照）各1滴，并設(shè)空白對照1孔，質(zhì)控1孔2.每孔加入酶結(jié)合物1滴（空白對

8、照孔除外），充分混勻,置37孵育30分鐘，洗板機洗板后扣干。3.每孔加顯色劑A液B液各1滴，充分混勻，置37孵育15分鐘。4.每孔加入終止液1滴，充分混勻。5.用酶標儀讀數(shù)，取波長450/630nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。（四）結(jié)果判定 樣品OD值陰性對照平均OD值2.1 判斷為陽性,否則為陰性陰性對照OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實際OD值計算 15乙肝核心抗體定性（HBcAb）酶聯(lián)免疫吸附實驗 方法原理 采用ELISA競爭法，反應(yīng)板的瓊脂微孔包被基因工程重組HBcAb，加入待測血液，同時單克隆抗-HBc-HRP，與抗原形成競爭結(jié)合，如待測標本中抗-HBc含量

9、高，則抗-HBc-HRP與HBcAg結(jié)合少，加入底物TMB時顯色淡，反之則顯色深。 16乙肝表面抗體定性（HBsAb）酶聯(lián)免疫吸附實驗方法原理 采用ELISA雙抗原夾心法，反應(yīng)板的瓊脂微孔包被純化HBsAg,待測血液中抗HBs抗體與之反應(yīng)，再加HRP標記HBsAg形成HBsAg-抗HBs抗體-HRP標記HBsAg復(fù)合物，最后加底物TMB顯色。17乙型肝炎e 抗體定性檢測 采用ELISA競爭法，反應(yīng)板的瓊脂微孔包被基因工程重組HBeAg，加入待測血液，同時單克隆抗-HBe-HRP，與抗原形成競爭結(jié)合，如待測標本中抗-HBe含量高，則抗-HBe-HRP與HBeAg結(jié)合少，加入底物TMB時顯色淡，反

10、之則顯色深。1、分析儀器：為美國BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶標儀，儀器校準請參見儀器操作規(guī)程。 2、分析試劑：為上海科華公司提供的配套的HBsAb試劑盒，規(guī)格為96test/盒，2-8貯存，有效期12個月；在效期內(nèi)使用試劑。 3、質(zhì)控試劑：為上海公司提供的配套的HBsAb試劑盒中所附帶的陰、陽性對照，2-8貯存，有效期12個月每月一次質(zhì)控小結(jié)，失控要有記錄及糾正的結(jié)果。18操作方法 1、每孔加入待測標本50微升。2、每孔加入酶結(jié)合物1滴，充分混勻，封板，置37孵育30分鐘。3、手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗

11、板后拍干。4、每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37孵育才1分鐘。5每孔加入終止液1滴，混勻。 6、用酶標儀讀數(shù)，數(shù)值取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm），先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。19乙型肝炎e抗原定性檢測 方法原理采用ELISA雙抗體夾心法，反應(yīng)板的瓊脂微孔包被抗HBe抗體,待測血液中乙型肝炎病毒e抗原與之反應(yīng)，再加HRP標記HBeAb 形成抗HBe抗體-HBeAg- HRP標記HBeAb復(fù)合物，最后加底物TMB顯色。20血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶的測定儀器 ：VITROS950全自動生化分析儀， TORBOS特定蛋白分析儀。試劑： ALT和Ch

12、E測定采用原裝試劑 PA測定采用PA測定試劑盒。方法 ：嚴格按照儀器和試劑規(guī)定要求保養(yǎng)儀器和設(shè)定測定參數(shù)。測定標本時，每批同時測定質(zhì)控品，按Westgard質(zhì)控評價方法評價質(zhì)控結(jié)果，質(zhì)控結(jié)果在控，測定批測定結(jié)果有效。21血清總蛋白的測定試驗方法：雙縮脲法儀器 ： 全自動生化儀;半自動生化儀;加樣移液器試劑 ：（1） 6mol/L NaOH溶液和6mol/L KOH溶液按常規(guī)方法配制。（2）雙縮脲試劑 按Doumas配方 稱取未失結(jié)晶水的硫酸銅（CuSO 4 5H 2 O）3.0g，溶于500m1新鮮蒸餾水中，加酒石酸鉀鈉（NaKC 4 H 4 O 6 4H 2 O）9.0g，碘化鉀（KI）5.

13、0g，待安全溶解后，加入6mol/L氫氧化鈉溶液100ml，最后加蒸餾水至1L。室溫貯存在密閉的聚乙烯瓶里，約穩(wěn)定6個月。（3）雙縮脲空白試劑 除不含硫酸銅外，其余成分與雙縮 脲試劑相同。22（4） 改良雙縮脲雙試劑 R1:取10ml6mol/L KOH溶液，加水稀釋至100ml，另加表面活性劑-聚乙二醇基苯基醚（Trition X-100）50l。R2:濃縮5倍的雙縮脲試劑。即稱取CuSO 4 5H 2 O3g溶于新鮮制備的蒸餾水中，加入酒石酸鉀鈉9g和KI5g，待完全溶解后，在攪拌下加入6mol/L KOH溶液20ml，并用蒸餾水稀釋至200ml。雙縮脲法手工標化測定 ： 測定管（M）、標

14、準管（S）、試劑空白管（RB），分別加入血清、蛋白標準、蒸餾水各50l加雙縮脲試劑5.00ml;另取標本空白管（B）加入雙縮脲空白試劑及血清50l，混勻置（251）30min，之后各管加3.00ml乙醚抽提，在波長546nm處比色，用蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度。計算:血清總蛋白（g/L）=AM-ARB-AB/AS-ARB-AB標準濃度23溴甲酚紫法測定血清白蛋白1.1 儀器與試劑 BECKMAN CX5型全自動生化分析儀、美國BECKMAN ALB試劑（批號442765）;ALB標準品采用英國RANDOX Calibrator（批號CAL2350）;質(zhì)控品采用英國RANDOX（批號226UE）和

15、BECKMAN Decision Level3（批號008003）。 全自動生化分析儀24 1.2 原理 在pH4.9醋酸鹽緩沖液中，溴甲酚紫與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物，在600nm波長處的吸光度與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標準比較，可計算樣品血清中的白蛋白濃度。1.3 方法 取RANDOX Calibrator的中間水平42g/L作標準，以兩管去離子水作為0g/L的標準對CX5進行假三點定標，隨后測定83g/L、72.63g/L、62.25g/L、55.33g/L、42g/L、28g/L、21g/L、14g/L、10.5g/L、5.0g/L共10個濃度的ALB標準溶液及其吸光度，制

16、作標準曲線;收集30ml新鮮混合血清用CX5進行批內(nèi)和批間精密度試驗。另收集100份門診就診者血清，用System Calibrator對CX5的ALB進行定標后，生化分析儀進行ALB檢測。 25血清總膽紅素(T-Bil)試劑盒檢驗儀器：半自動生化分析儀（SECOMAM公司生產(chǎn)，型號：BASIC）；試劑：總膽紅素測定試劑盒；總膽紅素標準液；多項液體生化質(zhì)控血清等。實驗原理重氮法：總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下，在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經(jīng)過同樣處理的標準液比較，即可計算出樣品中膽紅素的含量。26甲型肝炎病毒IgM抗體(HAV-IgM) 采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（EL

17、ISA）測定標本中人甲型肝炎病毒IgM抗體(HAV-IgM)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中甲型肝炎病毒IgM抗體(HAV-IgM)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人甲型肝炎病毒IgM抗體(HAV-IgM)的存在與否。27樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。

18、仔細收集上清，保存過如中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，

19、以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物

20、酶的（HRP）活性。28 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。 4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔

21、除外。 7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50l，再加入顯色劑B 50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘10. 終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以 29結(jié)果判定： 試驗有效性：陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.10 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品OD值 臨界值（CUT OFF）者為甲型肝炎病毒IgM抗體(HAV-IgM)陰性 陽性判定：樣品OD值 臨界值（CUT

22、OFF）者為甲型肝炎病毒IgM抗體(HAV-IgM)陽性30注意事項1操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請避光保存。6試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm7所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。31丙型肝炎病毒IgM抗體(HCV-IgM)一.目的：用于HCV抗體酶聯(lián)

23、的測定。二.適用范圍：適用于HCV酶聯(lián)免疫檢測法，手工操作。三.支持性文件：酶聯(lián)免疫檢測法試劑盒操作說明書。四.原理：酶聯(lián)免疫（ELISA）法。五.儀器：伯樂550酶標儀，伯樂ELX-50洗板機。六.試劑：購買英科新創(chuàng)試劑。規(guī)格為1*96Test。試劑文號：（93）衛(wèi)藥試字（廈新創(chuàng)）S-01 號。32梅毒檢測梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗 實驗原理采用性病實驗室玻片試驗抗原（VDRL抗原），重懸于特制的甲苯胺紅溶液中，當(dāng)待測血清中存在反應(yīng)素時。能與VDRL抗原發(fā)生凝集反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的粉紅色凝塊。33解脲支原體檢測Uu 的檢測方法主要有：培養(yǎng)法：原理是Uu能分解尿素產(chǎn)氨，使含酚紅指示劑的Uu液體

24、培養(yǎng)液pH值上升，顏色由黃色變?yōu)榧t色。再將液體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種到Uu固體培養(yǎng)基上，能生長成具特征性油煎蛋樣集落。接種標本后，經(jīng)孵育，若培養(yǎng)基發(fā)生由黃變紅的顏色變化，透明無混濁（有別于某些細菌及真菌生長）則可初步判斷為有Uu生長。大多數(shù)Uu在培養(yǎng)24h內(nèi)可獲得陽性結(jié)果。如果培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化，但液體又有混濁，可用0.45m濾膜過濾后，作再接種觀察。進一步診斷需將液體培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基上培養(yǎng), 經(jīng)Dienes法染色后在低倍顯微鏡下觀察集落形態(tài)。陰性結(jié)果最好觀察天。UU在固體培養(yǎng)基上集落核心呈粗顆粒狀,具極窄的邊，有時呈油煎蛋樣。如用 Dienes 法染色，集落為特異的藍色。一般細菌的菌落不著色，容易

25、鑒別。 ) 34未污染的細胞支原體污染的細胞電鏡檢測35丙肝RNA的檢測定性HCV RNA檢測。采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)定量目標基因擴增法，包括PCR定時檢查和信號擴增法，商品化的試劑盒Roche檢測法是標準化的PCR定量檢測，能檢測的HCV最小數(shù)量為每毫升小于1000個拷貝。同一個標本進行重復(fù)檢測時，標準差為0311，可信度為95。可以進行HCV基因型的檢查。其準確性和精確程度遠遠優(yōu)于HCVRNA定性檢測。36單純皰疹病毒型IgM抗體檢測（酶聯(lián)免疫法）【試驗原理】本試劑盒采用捕獲法原理檢測人血清或血漿樣品中風(fēng)疹病毒IgM抗體（RV-IgM），微孔中預(yù)包被抗人-IgM（U-鏈），首先加入待測標本的

26、血清或血漿樣品后，樣品中的IgM抗體都可被捕獲，未結(jié)合的其他成分（包括特異的IgG抗體）被洗滌除去，第二步，加入RV抗原酶標記物，被捕獲的IgM中的RV-IgM會與來更過氧化物酶標記的RV重組抗原特異性的結(jié)合，洗去其它未結(jié)合物，做好用TMB底物顯色。通過酶標儀檢測吸光度（A值）從而判定樣品中的RV-IgM抗體的存在與否。37【試劑盒儲存條件】 于2-8避光保存，防止冷凍；請將拆封后未用完全的包被板放入自封袋內(nèi)封緊保存于2-8。 有效期：自檢定合格之日起在2-8條件下有效期12個月；打開包裝后包被板載2-8條件下有效期30天?！臼褂脙x器及所需材料】 蒸餾水或去離子水 一次性手套和定時器 吸水紙

27、25ml、100ml、1000ml可度量筒 酶免自動儀器或者手持單道/多道移液器 適用于盛放污物的容器 溫箱或水浴箱 手用于混合微孔內(nèi)液體的震蕩器 全自動、半自動或手工洗板系統(tǒng) 酶標儀，單波長450nm或雙波長450nm和630nm38內(nèi)毒素檢測（動態(tài)濁度法）【檢驗原理】利用鱟試劑凝固酶原被微量細菌內(nèi)毒素激活產(chǎn)生濁度或凝膠反應(yīng)的機理，以反應(yīng)物濁度達到某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間，分別對細菌內(nèi)毒素濃度和反應(yīng)時間取對數(shù)，用最小二乘法做線性回歸（Lgt=a+blgc）得到反應(yīng)曲線，計算反應(yīng)物中的內(nèi)毒素含量，實現(xiàn)對樣本溶液的細菌內(nèi)毒素定量檢測。39結(jié)果判斷上圖：陽性下圖：陰性40【適用儀器】B

28、ET-24A型細菌內(nèi)毒素測定儀?！緲藴是€】使用試劑盒時，如反應(yīng)主劑鱟試劑的批號改變，應(yīng)向供應(yīng)商索取該批號反應(yīng)主劑的標準曲線IC卡；或用細菌內(nèi)毒素標準品制作標準曲線，標準曲線制作方法（略）?！緲颖疽蟆?.建議空腹采集血液樣本。 2.采集血液樣本時，應(yīng)避免在輸、注藥液的同部位采血?！緳z驗方法】見產(chǎn)品使用說明書?！井a(chǎn)品性能指標】檢測范圍：0.005 EU/ml100EU/ml；相關(guān)系數(shù)： r 0.98；批內(nèi)精密度：變異系數(shù)15%。 【參考文獻】中國藥典附錄細菌內(nèi)毒素檢查法（光度法）41鱟試劑檢測試劑盒42細菌及真菌的檢測直接接種法薄膜過濾法43細菌及真菌的檢測培養(yǎng)基： 檢查需氧性和厭氧性雜菌應(yīng)采用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。 檢查霉菌和腐生菌應(yīng)采用改良馬丁培養(yǎng)基。 檢查混濁制品可采用不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。檢查活菌苗時可加大瓊脂含量，做成斜面。檢查支原體應(yīng)采用豬胃消化液半固體或牛心消化液半固體培