醫(yī)學(xué)地衣共生菌藻的分離

1、地衣共生菌藻的分離、培養(yǎng)和人工重建地衣是否能分為單個生物不同有機(jī)組織的相互關(guān)系更多的了解地衣的生理、形態(tài)、發(fā)育和分子生物學(xué)方面的問題次生代謝物的研究一、共生真菌的分離和培養(yǎng)1、地衣型真菌常用的培養(yǎng)基2、子囊孢子釋放法3、組織培養(yǎng)法4、培養(yǎng)共生菌的保存1、地衣型真菌常用的培養(yǎng)基WA4培養(yǎng)基含4%蒸餾水的瓊脂培養(yǎng)基 瓊脂 4g 蒸餾水補(bǔ)足100ml MY培養(yǎng)基麥芽酵母提取物培養(yǎng)基 麥芽提取物 20g / 酵母提取物 2g / 瓊脂20g / 蒸餾水補(bǔ)足1000ml LB培養(yǎng)基Lilly and Barnett s培養(yǎng)基 葡萄糖10g / 天冬酰胺酸2g / KH2PO4 1g / MgSO47H2

2、O 0.5g / Fe(NO3)39H2O 0.2 mg / ZnSO47H2O 0.2mg / MnSO44H2O 0.1mg / 維生素B1 0.1mg / 維生素H 5ug / 蒸餾水補(bǔ)足100ml 可以在以上組分上加入1520g的瓊脂，并補(bǔ)足 1000ml，并制成固體培養(yǎng)基。LBG 培養(yǎng)基Lilly and barnett gelrite 培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基中以1%的Gelrite 代替瓊脂。 注意：在利用和倒入皮氏培養(yǎng)皿（5mm）或試管（5ml）之前應(yīng)將所有培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。 2、子囊孢子釋放法3、組織培養(yǎng)法4、培養(yǎng)共生菌的保存共生菌可以存放很長時間 （大約一年左右）。 通常共生菌在1

3、520時表現(xiàn)出最大生長率。每種均有其最適生長PH值，通常PH范圍為56。太高或太低的PH均會阻礙其生長。在共生菌群體保存培養(yǎng)中，光并不是必須的。地衣共生菌可以在液氮中保存很長時間，仍能保持活性。 二、共生藻及藍(lán)細(xì)菌的分離和培養(yǎng)1、培養(yǎng)基2、培養(yǎng)前處理3、共生藻的培養(yǎng)4、無菌培養(yǎng)群體的分離5、共生藻培養(yǎng)的保存 1、培養(yǎng)基BBM培養(yǎng)基Bolds Basal Medium 3 N BBM培養(yǎng)基Trebouxia培養(yǎng)基MDM培養(yǎng)基2、培養(yǎng)前處理1）清洗對于大型地衣（葉狀和枝狀）：從地衣體頂端切下約12，然后放在自來水中浸泡510分鐘，用畫筆刷在流動的自來水中清理地衣體表面，然后用無菌水沖洗。對于小型地

4、衣：如果地衣體較小（多殼狀地衣），可將其放入裝有12 ml的無菌水和一滴Tween20的小試管中。超聲波粉碎約3分鐘。離心去除地衣體表面的附屬物。 2）地衣體勻漿液的制備大型地衣（枝狀或葉狀）：（1）清洗之后，將地衣體放在一個無菌的載玻片上。（2）在解剖鏡下，利用針銼平的小刀仔細(xì)刮去地衣皮層。（3）在顯微鏡下，取下藻層并轉(zhuǎn)移到一個新的無菌的玻片上。（4）在無菌玻片上滴一滴無菌水，用另一個玻片把切取的的共生藻層蓋上，輕輕壓玻片，將地衣體磨成較小碎片。這樣，盡管仍有一些菌絲存在，但實際上共生藻就機(jī)械地同共生菌分離了。兩種共生體均懸浮在液體中。較小地衣體： 清洗之后，將小部分地衣體放在無菌的載玻片之

5、間，輕輕磨動玻片。不像大型地衣的處理，由于小型地衣沒有去除表皮，故應(yīng)需較大的壓力。這樣會得到含有菌藻的懸濁液。也可以采用攪拌器或研缽弄碎較大片地衣。但是，攪拌器會使脆弱的細(xì)胞受到破壞，因此，應(yīng)采用較溫和的方法處理，如在兩玻片間輕輕磨動。3、共生藻的培養(yǎng)含共生藻的懸濁液 15天培養(yǎng)：1520 共生藻群（1個月左右）要注意藻的污染4、無菌培養(yǎng)群體的分離直接挑選法：體視顯微鏡噴霧法微量吸管吸法離心法利用噴射法對共生藻進(jìn)行分離的方法 利用微量錫罐分離單個細(xì)胞的共生藻 5、共生藻培養(yǎng)的保存在低光照的條件下，可以培養(yǎng)很長一段時間 （約1年） 。最好每23個月傳代一次。大多數(shù)的地衣共生藻的最佳生長溫度為15

6、20。其生長的最佳pH范圍是47。（1）用解剖刀將帶有瓊脂培養(yǎng)基的共生藻群體分為幾部分（約mm2），將群體放在有合適培養(yǎng)基的皮氏培養(yǎng)皿中培養(yǎng)2-3個月.（2） 每2-3個月將生長的群體轉(zhuǎn)移到相同成分的新鮮培養(yǎng)基上，在相同的條件下培養(yǎng)。地衣共生藻也可以在液氮下冷凍保藏相當(dāng)長的時間仍保持活性。 三、地衣菌、藻共生的人工重建Stocker-Wrgtter（1994）地衣體人工重建的基本操作步驟如下：（1）收集你想重建的地衣（如Peltigera aphthosa）基物處的土壤。（2）用篩孔約12mm的篩子將500g土壤過篩，然后在其中加入100ml的二次蒸餾水。（3）將濕的土壤放入10015mm的玻

7、璃皮氏皿中，填充高度為8mm。對其進(jìn)行高壓滅菌后放置24小時，然后再次高壓滅菌。（4）用無菌培養(yǎng)的共生綠藻和藍(lán)細(xì)菌對土壤進(jìn)行接種，然后在以上所描述的培養(yǎng)條件下對其進(jìn)行培養(yǎng)。（5）準(zhǔn)備好用于人工重建的分離的共生真菌，并將其轉(zhuǎn)移到無糖的液體培養(yǎng)基上（如BBM），然后培養(yǎng)約1個月。（6）將勻漿所得的菌絲體覆蓋到綠藻或藍(lán)細(xì)菌群體上。（7）將重建群體在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)室條件應(yīng)同他們共生藻的生長條件一致。 思考題：1地衣共生菌分離方法有哪些？并簡述孢子釋放法步驟。2共生藻的分離培養(yǎng)方法喲哪些？3簡要說明地衣人工重建的研究進(jìn)展。THANKS思考題：1衣共生菌的分離方法有哪些？并簡述孢子釋放法步驟。2共生藻

8、的分離培養(yǎng)方法有哪些？3簡要說明地衣人工重建的研究進(jìn)展。 1、病毒性肝炎：由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分為甲、乙、丙、丁、戊和庚共六種類型病毒性肝炎。能引起肝臟細(xì)胞腫脹，是世界上流傳廣泛，危害很大的傳染病之一。 1908年，才發(fā)現(xiàn)病毒也是肝炎的致病因素之一。1947年，將原來的傳染性肝炎（infectious hepatitis）稱為甲型肝炎（Hepatitis A, HA）；血清性肝炎（serum hepatitis）稱為乙型肝炎（Hepatitis B, HB）。1965年人類首次檢測到乙型肝炎的表面抗原。 我國經(jīng)濟(jì)和科學(xué)技術(shù)日益發(fā)展，學(xué)術(shù)文化領(lǐng)域百家爭鳴，（df高血壓958心臟病9

9、83u6糖尿病87fr）特別是思想家的革新精神，為中醫(yī)學(xué)理論的創(chuàng)新和突破性進(jìn)展，提供了有利的文化背景。宋代陳無擇著三因極一病證方論一書，（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）提出三因?qū)W說；并產(chǎn)生了最具盛名四大學(xué)派，劉完素倡導(dǎo)火熱論；張從正力倡“攻邪論”；李杲提出“內(nèi)傷脾胃，百病由生”的理論；朱震亨創(chuàng)造性地闡明了相火的演變規(guī)律。編輯本段明清時期（df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2）是中醫(yī)學(xué)理論綜合匯編、深化發(fā)展，臨床各科辨證體系豐富、提高階段。如明代樓英的醫(yī)學(xué)綱目和王肯堂的證治準(zhǔn)繩，清代吳謙等編著的醫(yī)宗金鑒和陳夢雷主編的古今圖書集成醫(yī)部全

10、錄等。王清任著醫(yī)林改錯，注重實證研究，（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）糾正了古醫(yī)籍中關(guān)于解剖知識的某些錯誤，肯定了“腦主思維”，發(fā)展了瘀血理論。溫病學(xué)說的形成和發(fā)展，標(biāo)志著中醫(yī)理論的創(chuàng)新與突破，吳有性著溫疫論，葉天士著溫?zé)岵∑?，吳鞠通著溫病條辨等，在藥物學(xué)研究方面，（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）李時珍著的本草綱目，總結(jié)了16世紀(jì)以前我國藥物學(xué)研究的成就。醫(yī)的診察疾病能參考現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的微觀分析，將辨證與辨病相結(jié)合，實現(xiàn)宏觀與微觀的統(tǒng)一，使中醫(yī)診斷客觀化，即把分析與綜合相結(jié)合的方法引入中醫(yī)理、法、方、藥的研究，使二者有機(jī)結(jié)合，互相借鑒、補(bǔ)充，避免各自的

11、片面性、局限性，這將有利于中西醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢互補(bǔ)，“和而不同”，多元發(fā)展。近年來，中醫(yī)藥在防治非典、禽流感和艾滋病方面發(fā)揮的獨特作用也證實了二者的有機(jī)結(jié)合，具有肯定的臨床療效。編輯本段東西方醫(yī)學(xué)交融不管是中醫(yī)學(xué)還是西醫(yī)學(xué)，從二者現(xiàn)有的思維方式的發(fā)展趨勢來看，均是走向現(xiàn)代系統(tǒng)論思維，中醫(yī)藥學(xué)理論與現(xiàn)代科學(xué)體系之間具有系統(tǒng)同型性，屬于本質(zhì)相同而描述表達(dá)方式不同的兩種科學(xué)形式?？赏诂F(xiàn)代系統(tǒng)論思維上實現(xiàn)交融或統(tǒng)一，成為中西醫(yī)在新的發(fā)展水平上實現(xiàn)交融或統(tǒng)一的支撐點，希冀籍此能給中醫(yī)學(xué)以至生命科學(xué)帶來良好的發(fā)展機(jī)遇，進(jìn)而對醫(yī)學(xué)理論帶來新的革命。編輯本段現(xiàn)代中醫(yī)史上個世紀(jì)末,本世紀(jì)初，1996年,清華學(xué)界對中

12、醫(yī)氣本質(zhì)，經(jīng)絡(luò)實質(zhì)，陰陽，五行，藏象，中醫(yī)哲學(xué)觀等都有了新的全面整體創(chuàng)造性的認(rèn)識和解說。如，鄧宇等發(fā)現(xiàn)的:氣是流動著的信息能量物質(zhì)的混合統(tǒng)一體；分形分維的經(jīng)絡(luò)解剖結(jié)構(gòu)；數(shù)理陰陽；中醫(yī)分形集：分形陰陽集陰陽集的分形分維數(shù)，五行分形集五行集的分維數(shù)；分形藏象五系統(tǒng)暨心系統(tǒng)、肝系統(tǒng)、脾系統(tǒng)、肺系統(tǒng)、腎系統(tǒng)；中醫(yī)三個哲學(xué)觀新提出的第三哲學(xué)觀：相似觀分形論等。 還包括近代針灸經(jīng)絡(luò)的發(fā)展史,近代中醫(yī)氣的進(jìn)展簡史,中西醫(yī)結(jié)合史,中醫(yī)中藥史等.六種類型的病毒性肝炎遺傳因子不同，除乙型肝炎遺傳因子是DNA外，其余幾型肝炎遺傳因子均為RNA。其中甲型肝炎的傳播途徑是糞口傳播，乙型肝炎的傳播途徑是血液傳播、性傳播和母嬰傳播。疫苗。 2、酒精性肝炎：酒精性肝炎早期可無明顯癥狀，但肝臟已有病理改變，發(fā)病前往往有短期內(nèi)大量飲酒史，有明顯體重減輕，食欲不振，惡心，嘔吐，全身倦怠乏力，發(fā)熱，腹痛及腹瀉，上消化道出血及精神癥狀。體征有黃疸，肝腫大和壓痛，同時有脾腫大，面色發(fā)灰，腹水浮腫及蜘蛛痣，食管靜脈曲張。從實驗室檢查看，有貧血和中性白細(xì)胞增多，紅細(xì)胞容積測定（MCV）大于95FL,血清膽紅素增高，可達(dá)17.1moL/L或以上，轉(zhuǎn)氨酶中度升高，常大于2.0，測定線粒體AST（mAST）及其與總AST（tAST）的比值